韩国土壤中苏云金芽孢杆菌菌株的分离和鉴定

从韩国不同地区采集的６２０个土壤样品中分离出６７株苏云金芽孢杆菌,分属于１０种不同的血清型,毒力测定结果表明,在６７株分离株中,３５．８２％的菌株对鳞翅目昆虫具有生物活性,２２．３９％的菌株对双翅目昆虫有毒,３２．８４％的菌株对鳞翅目和双翅目昆虫都具有杀虫活性,８．９５％的菌株为没有杀虫活性的无毒菌株,其中对鳞翅目昆虫有毒的菌株产生典型双金字塔形伴孢晶体对双翅目昆虫有毒的菌株和无毒菌株都产生球形伴     

韩国土壤中苏云金芽孢杆菌菌株的分离和鉴定

从韩国不同地区采集的620个土壤样品中分离出67株苏云金芽孢杆菌,分属于10种不同的血清型.毒力测定结果表明,在67株分离株中,35.82%的菌株对鳞翅目昆虫具有生物活性,22. 39%的菌株对双翅目昆虫有毒,32.84%的菌株对鳞翅目和双翅目昆虫都具有杀虫活性,8.95% 的菌株为没有杀虫活性的无毒菌株.其中对鳞翅目昆虫有毒的菌株产生典型的双金字塔形伴孢晶体,对双翅目昆虫有毒的菌株和无毒菌株都产生球形伴孢晶体,而对鳞翅目和双翅目都有毒的菌株产生双金字塔形或球形伴孢晶体.用对cryⅠ,cryⅡ,cryⅢ,cryⅣ和cryⅤ基因特异性引物作PCR分析的结果表明,cryⅠ C基因占优势,其次为cryⅠ A(b)和cry Ⅱ A基因,但无cryⅠ G,cry Ⅲ,cry ⅣC和cryⅤ基因.     

苏云金芽孢杆菌的分离及快速鉴定

从土壤样品中分离出57株疑似苏云金芽孢杆菌的菌株，采用地高辛标记CryIAb基因5’端的726bp EcoR I片段灰探针，进行菌株质粒DNA斑点杂交，筛选出25株阳性菌株。其生理生化特征与伯杰氏细菌鉴定手册第八版的描述相符，确认为苏云金芽孢杆菌菌株。     

4株降解低温粪污水芽孢杆菌的分离·鉴定及其降解效率研究

[目的]获得可在低温环境下高效降解粪污水的芽孢杆菌。[方法]从大型养殖场及活性污泥、下水道等低温环境下采集样品,分离并筛选耐冷菌株,通过扫描电镜观察获得菌株的形态特征,分析其16S rRNA基因测序,构建系统发育树,初步确定菌株的菌属;对其进行鉴定后将其添加到污水生物反应器中对猪场粪污水进行净化,分析粪污水中化学需氧量(COD)、生物需氧量(BOD)及溶解氧(DO)变化情况。[结果]这4株菌均为蜡样芽孢杆菌;在粪污水里添加这4株菌的复合菌液后,粪污水的COD值从5 585.40 mg/L降至1 093.97 mg/L,去除率达80.40%;BOD值从680.00 mg/L降至600.00 mg/L,去除率为11.76%;DO值大幅度上升,增加率为75.00%。[结论]复合菌在粪污水处理方面表现出了较高的降解能力,可为污染物生物修复提供优良的菌种资源,具有广阔的应用前景。     

苏云金芽孢杆菌的分离与鉴定

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)自1901年被日本学者发现以来,由于在生物防治中的突出作用,受到世界各国的极大关注。作为基础性研究,Bt的分离与鉴定在发现新型cry蛋白基因与应用方面起着举足轻重的作用。各国对Bt的研究从最初的被感染宿主体内分离到土壤资源的发掘,从生物测定到血清型、基因型的划分,以及转基因产品的问世,均体现出全球农业对高毒力、新型广谱抗虫Bt的需求。综述了Bt的分离与鉴定方法。     

天津地区土壤中苏云金芽孢杆菌调查

在从天津市采集的227个土样中共分离出128株Bt菌株,出菌率为56.37%。在所分离的土样中,采自北部林区土壤的出菌率最高,高于其它土壤的出菌率,达到86.2%;东部地区的出菌率最低。室内生物测定试验结果表明,林区土壤分离菌株的毒力特性也是最好的。试验还表明,土壤和环境对苏云金杆菌的杀虫特性有明显的影响。     

纳豆芽孢杆菌的分离纯化及鉴定

根据纳豆芽孢杆菌耐热耐盐的特征分离纳豆芽孢杆菌菌株.由纳豆粉中分离纯化出1株纳豆菌株,由家庭自制纳豆中分离纯化出5株纳豆菌株,并对这6株纳豆芽孢杆菌的细胞、菌落形态及生理特性进行研究.结果表明,这6株纳豆菌均属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).     

牦牛源地衣芽孢杆菌的分离鉴定

为分离西藏牦牛源地衣芽孢杆菌并研究其生物学特性,为今后开发相关益生菌及其制剂奠定基础,采集西藏牦牛粪便,从粪便中分离培养、纯化病原菌,通过染色镜检、生化试验、16S rRNA PCR扩增、同源性分析、进化树构建等对分离株进行鉴定且对分离株进行耐药性试验。结果从样品中分离到3株地衣芽孢杆菌,革兰氏阳性杆菌,分别命名为XZ-1,XZ-2,XZ-3。3株分离株生化检测结果一致：可分解甘露醇、淀粉、阿拉伯糖,可还原硝酸盐,V-P试验呈阳性,不能水解明胶,不能产生红色吲哚。分离株16S rRNA PCR扩增产物电泳结果与预期结果一致,长度为1 500 bp左右。3株分离株之间同源性为96.0%～99.9%,与地衣芽孢杆菌分离株的同源性为98.3%～100%;3株分离株与地衣芽孢杆菌处于同一支,而与链球菌其他种属芽孢杆菌处于不同分支。分离株XZ-1对青霉素、氨苄西林耐药,对林可霉素中度敏感,对头孢曲松、四环素、红霉素、恩诺沙星、氯霉素、环丙沙星、阿莫西林敏感;分离株XZ-2对青霉素、氨苄西林、四环素、林可霉素耐药,对氯霉素中度敏感,对头孢曲松、红霉素、恩诺沙星、环丙沙星、阿莫西林敏感;分离株XZ-...     

产角蛋白酶芽孢杆菌的分离筛选与鉴定

从长期堆积腐烂羽毛的土壤中分离出一株能降解羽毛角蛋白的细菌,经形态学观察和生理生化试验,初步鉴定为短小芽孢杆菌,且命名为短小芽孢杆菌B-15。     

啤酒废水污泥培养苏云金芽胞杆菌

以啤酒厂不同处理工段废水、污泥为原料培养苏云金芽胞杆菌(Bt),并与城市污水做比较,研究啤酒废水、污泥的化学耗氧量(COD)、pH、发酵情况及其毒力.结果表明,以啤酒厂混合池原废水和酸化池废水为原料培养Bt,活芽胞数可达109cfu·mL-1级,与城市污水相比(D595nm=0.202),能产较高的晶体蛋白(D595n...     

源自动物粪便苏云金芽胞杆菌的cry基因型鉴定

从5种草食性哺乳动物的粪便中筛选获得8株苏云金芽胞杆菌(Bt);并用聚合酶链式反应—限制性酶切片段长度多态性(PCR-RFLP)鉴定体系鉴定各菌株的cry基因型.结果表明:BRC-WCB1、BRC-WCB2、BRC-WCB3、BRC-WCB8同时含有cry1和cry2基因;BRC-WCB6仅含有cry1I基因;BRC-WCB5含有cry3基因,但未出现预知的酶切条带;而BRC-WCB4无任何PCR扩增产物.     

苏云金芽孢杆菌几丁质酶基因chiA在枯草芽孢杆菌中的分泌表达

[目的]研究来源于苏云金芽孢杆菌的几丁质酶基因chiA在枯草芽孢杆菌中的表达情况。[方法]以苏云金芽孢杆菌染色体DNA为模板,PCR扩增获取几丁质酶基因chiA,将其与枯草芽孢杆菌表达载体pHSG连接,构建重组菌,经IPTG诱导后,检测培养液中的几丁质酶活性。[结果]扩增得到几丁质酶基因chiA大小为2.5 kb。构建的重组菌对底物[4-MU-(GlcNAc)3]显示出一定的水解活性,培养液酶活约为2.8 U/ml,而pHSG空质粒转化子在同样条件下其培养液没有明显酶活。该重组酶的最适pH值为6.5,最适反应温度为50℃,与苏云金芽孢杆菌自身产生的几丁质酶性质一致。[结论]几丁质酶基因chiA能在枯草芽孢杆菌中成功表达,表达产物可成功分泌到细胞外。     

苏云金芽胞杆菌不同分化发育时期总RNA的有效分离

将苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis,简称Bt）8010在LB液体培养基30℃、230r／min下振荡培养,通过生长曲线测定（OD600）和显微镜观察,分别在8、30、39、42h和46h取样得到营养生长期、孢子囊期和裂解期样品来提取总RNA。通过对试剂提取方法的改进,找到一种方法可以很有效的提取Bt3个不同分化发育时期（营养生长期、孢子囊期和裂解期）的总RNA。提取的总RNA质量很好,可以进行cDNA合成、RT-PCR和转录组学研究等下游实验。     

苏云金芽孢杆菌WB9菌株的分离、生化特性及培养基优化

对来自武夷山自然保护区非耕作区的200个土壤样品进行了苏云金芽孢杆菌的分离,获得12株菌株,分离频率为6.0%.室内感染力测定结果表明WB9菌株对小菜蛾具有高感染力、对甜菜夜蛾具有较高的感染力.生理生化指标测定结果显示WB9与库斯塔克亚种8010的反应表现型相同,仅在个别反应上有强弱差异,由此推测WB9可能属库斯塔克亚种.此外,通过正交试验设计和室内摇瓶培养,获得了优化的WB9工业培养基组合,即30.0 g.L-1玉米淀粉、20.0 g.L-1黄豆饼粉、15.0 g.L-1玉米粉、10.0 g.L-1酵母粉、2.0 g.L-1蛋白胨、15.0 g.L-1玉米浆、5.0 g.L-1CaCO3、0.3 g.L-1MgSO4.7H2O、1.0 g.L-1KH2PO4和0.02 g.L-1ZnSO4.7H2O.     

苏云金芽胞杆菌肠毒素基因克隆与序列分析

根据蜡质芽孢杆菌(Bc)肠毒素基因序列,设计特异PCR引物,对本实验室保存的 16个苏云金芽孢杆菌 (Bt)菌株进行检测.结果显示, 15个菌株含有肠毒素基因片段.克隆了Bt8010肠毒素entS基因的编码框 (ORF)序列, 将该序列测序,用在线的BLAST软件与DNASIS软件进行同源性分析.结果表明,该基因与已知的Bc和炭疽芽孢杆菌肠毒素基因有很高的同源性,但该基因有 12个核苷酸缺失,不能表达完整多肽.     

苏云金芽孢杆菌新菌株GGD-4杀虫晶体蛋白基因分析

利用稀释平板培养法从连云港地区的土壤中分离了一株苏云金芽孢杆菌新菌株GGD-4,通过PCR-RFLP鉴定体系和SDS-PAGE方法分析了此菌株中cry基因类型和表达蛋白。结果表明:该菌株中含有cry1Aa基因型,同时表达130~140kD的蛋白;但EcoRⅠ和PstⅠ酶切结果不同于正常的cry1Aa基因,实验中利用生物信息学方法设计的cry1Aa基因特异引物对扩增后也证明含有cry1Aa基因。室内生测结果显示,该菌株对重要的农业害虫甜菜夜蛾、菜青虫等均有较高的杀虫毒力。     

狗牙根根际胶质芽孢杆菌的分离及鉴定

从狗牙根(Cynodon dactylon L.)根际土壤中筛选到5株胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus),对其形态学和生理生化特性、耐盐性、耐酸碱性、温度敏感性等特性进行了测定。结果表明,供试菌株均为革兰氏阴性杆菌,产生圆形芽孢和丰厚的荚膜;过氧化氢酶、溶菌酶试验阳性,能水解淀粉,V.P反应、卵磷脂酶均为阴性,不产生吲哚。供试菌株在NaCl质量分数为1%~2%的硅酸盐培养基上能够生长;在25~30°C均能良好生长。     

蜡状芽孢杆菌的分离培养与鉴定

从牛奶中分离到1株蜡状芽孢杆菌CO4-1,经生长特性培养、生化试验、灌服动物试验,证明该菌株具有营养要求低,生长快,合成蛋白能力强,耐高温,耐酸碱等特点;菌体及其产物对动物均安全,无任何不良反应;对肠道病原菌具有一定的抑制作用。     

苏云金芽孢杆菌的生物活性物质及其蛋白基因

苏云金芽孢杆菌 (Bt)研究的热点正逐步转向新资源的收集和开发 .本文就其杀虫、抑菌、抑癌细胞等 6种主要生物活性物质、蛋白及其编码基因作一回顾与展望