美洲南瓜远缘杂交亲和性研究

选取南瓜属3个主要栽培种29个材料并选配了大量杂交组合,结果表明:美洲南瓜与中国南瓜或印度南瓜进行种间杂交,美洲南瓜只适合作为父本;中国南瓜或印度南瓜的不同试材作为母本与美洲南瓜杂交,存在亲和性差异,表现在坐果率、单果种子数、种子发育程度以及有胚果实率等方面的不同;美洲南瓜种内变种间不存在生殖隔离,可通过相互杂交融合目标性状。试验总结出杂交授粉时间在上午6:30至8:30,采用全程防虫网覆盖、吊蔓栽培技术,可提高坐果率并延长种胚发育时间,改善南瓜属远缘杂交亲和性。     

美洲南瓜（Cucurbita pepo）种皮苯丙氨酸解氨酶基因克隆与表达分析

【目的】克隆有壳美洲南瓜种皮PAL基因（CP-PAL）,研究PAL基因在有壳和裸仁美洲南瓜种皮发育过程中的表达特性,为揭示美洲南瓜种皮发育机理及木质素积累在南瓜种皮发育中的作用等方面提供理论依据。【方法】利用RT-PCR,结合RACE技术克隆CP-PAL的全长序列并进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR技术,采用2-△△Ct方法对种皮发育过程中PAL基因的表达进行分析。【结果】CP-PAL序列全长为1 720 bp,含有一个1 359 bp的ORF,114 bp 5′端非翻译区、236 bp 3′端非翻译区及11 bp polyA结构,可编码452个氨基酸,分子量为48.86 kD,等电点为6.55,原子总数为6 885个,分子式为C2158H3449N607O657S14。通过BLASTX比对表明CP-PAL核苷酸序列及其氨基酸序列与黄瓜PAL核苷酸及其氨基酸序列的相似性最高。CP-PAL包含PAL-HAL、PLN02457及phe_am_lyase 3个结构域及酶活性中心序列（GTITASGDLVPLSYIA）,属于Lyase_I_Like超家族。CP-PAL不具有导肽及信号肽,为非跨膜蛋白,可能定位于细胞质及内质网上,属可溶性蛋白。CP-PAL蛋白含有4个酪蛋白激酶Ⅱ识别位点、6个蛋白激酶C识别位点、12个豆蔻酰化位点及2个糖基化位点。此外,分析可知CP-PAL有18个丝氨酸磷酸化位点、6个苏氨酸磷酸化位点及5个酪氨酸磷酸化位点。无规则卷曲是CP-PAL蛋白二级结构中最大量的结构元件,α-螺旋和延伸链分散于整个蛋白质中,且N-末端以无规则卷曲形式存在,C-末端以延伸链形式存在。CP-PAL氨基酸序列同挑选的其他14种植物的PAL氨基酸序列进行多重序列比较,发现功能区域的氨基酸序列较为保守,N-端的差异最大。系统进化树分析表明CP-PAL和黄瓜PAL蛋白的亲缘关系最近。CP-PAL蛋白三级结构以α-螺旋为主要结构元件,β-转角和无规则卷曲较少。实时荧光定量PCR分析表明PAL基因在有壳和裸仁美洲南瓜种皮发育中呈现反向对应的变化趋势：有壳美洲南瓜种皮PAL基因在自交授粉20 d后表达量增加,而裸仁美洲南瓜种皮PAL基因在20 d后表达量下降。整个种皮发育过程中,PAL基因在裸仁美洲南瓜中的表达量低于其在有壳美洲南瓜中的表达量。【结论】从有壳美洲南瓜种皮中克隆得到与木质素合成相关的PAL基因,该基因可能通过参与调控种皮木质素的合成从而影响美洲南瓜裸粒品种的种皮发育。     

裸仁美洲南瓜ISSR-PCR反应体系的正交优化

利用正交试验设计L16(44)对美洲南瓜ISSR-PCR反应体系的4因素(Mg2+,dNTPs,引物,Taq酶)在4个水平上进行优化试验,PCR结果用SPSS16.0统计软件分析,结果表明,各因素的不同水平对PCR反应结果都有显著影响,其中引物浓度的影响最大;本研究还筛选出各反应因素的最佳水平,建立美洲南瓜IS-SR-PCR反应的最佳体系(25μL)为:0.75 U Taq酶,2.0 mmol.L-1Mg2+,300μmol.L-1dNTPs,10μmol.L-1引物和DNA模板30 ng,2.5μL 10×buffer。     

美洲南瓜种质资源遗传多样性的ISSR分析

【目的】解决武威地区美洲南瓜品种归类不明确的问题.【方法】利用ISSR标记对28份美洲南瓜材料进行了遗传多样性的研究.【结果】从48条ISSR引物中共筛选出7条重复性高和扩增条带清晰的引物,PCR扩增共获得56条条带,平均每条引物扩增条带数为8条,多态性条带54条,多态性比率为96.43%,材料间遗传相似系数为0.60~0.93,表现出丰富的遗传多样性,并通过UPGMA分子系统聚类法,将28份美洲南瓜材料分为5个大类群.【结论】本研究为拓展美洲南瓜种质资源和发掘新种质提供了理论基础.     

美洲南瓜裸仁基因的AFLP和SCAR分子标记分析

以美洲南瓜有壳品系“金辉二号-2”和无壳品系“0516-2”进行杂交,获得193个F2单株作为作图群体,利用AFLP分子标记技术和集群分析法(BSA)对与美洲南瓜裸仁基因连锁的分子标记进行研究.结果表明,找到了与裸仁基因n连锁的4个AFLP标记:E19M60-C、E22M48-B、E13M60-A和E25M51-D,连...     

美洲南瓜抗白粉品种筛选及其与生理指标的相关性

【目的】建立美洲南瓜抗白粉病评价指标,筛选抗性较强的品种。【方法】试验以14个美洲南瓜品种为试材,基于病情指数、抗性划分标准和生理指标测定了不同南瓜品种对白粉病的抗性效果,并筛选出抗病品种。【结果】筛选出抗病品种1个、中抗品种5个、感病品种6个和极感品种2个。抗病品种叶片中脯氨酸（Pro）含量、苯丙氨酸解氨酶（PAL）含量、丙二醛（MDA）含量、蜡质含量均高于感病品种,可溶性蛋白（SP）含量低于感病品种,其中蜡质含量、MDA含量、Pro含量、PAL含量与病情指数呈负相关关系,SP含量与病情指数呈正相关关系。【结论】蜡质含量、SP含量、Pro含量、PAL含量、MDA含量均可作为美洲南瓜白粉病抗性品种抗性评价指标。根据病情指数和生理生化指标,JPG2015-44和JPG2015-12为美洲南瓜白粉病抗病品种。     

外源激素处理对美洲南瓜植株生长的影响

为探究激素对南瓜植株生长的影响,试验采用不同浓度GA3、IAA、6-BA和BR处理短蔓美洲南瓜自交系X10和长蔓美洲南瓜自交系JIN234幼苗。结果表明,外源喷施GA3显著增加南瓜植株主蔓和第一节间长度,50 mg·L-1GA3使短蔓X10主蔓长度与长蔓JIN234达相同水平,外源喷施IAA、6-BA和BR均未增加南瓜植株主蔓长度,推测短蔓自交系X10属于GA激素敏感型。外源喷施IAA显著增加南瓜植株下胚轴粗度,对植株叶片和叶柄生长无影响;外源喷施6-BA抑制南瓜植株下胚轴伸长,低浓度(1 mg·L~(-1))6-BA增加叶片长度,降低叶片宽度,而高浓度(30 mg·L-1)6-BA抑制叶柄伸长;外源喷施BR对南瓜植株生长影响较小。内源激素检测发现X10体内有生物活性的GA3和GA4含量显著低于JIN234,无活性的GA34含量显著高于JIN234,推测自交系X10矮化与植物体内GA活性相关。     

飞碟瓜露地栽培高产高效技术

飞碟瓜属南瓜属,是美洲南瓜种中的一个品种,也称元宝瓜、荷花瓜。是近几年从美国、韩国引进的一个新型瓜菜品种。植株贴地生长,生长势强,掌状叶,8～10片时即可见瓜,瓜成熟后有绿、白、黄三种颜色。肉厚且质密,口感细腻,优于西葫芦.果实碟形,既可盆栽观赏又可食用,不但能炒、炝、做汤做馅,而且还适合生食凉拌、蘸酱。     

一株拮抗美洲南瓜枯萎病菌的内生真菌N-1的鉴定及其生物学特性

为明确内生真菌N-1菌株对美洲南瓜枯萎病菌的抑制作用及其分类地位,探索其防治植物病害的潜能,采用平板五点对峙培养法、生长速率法和防效盆栽试验测定N-1菌株对美洲南瓜枯萎病菌的抑制作用;结合形态学特征和rDNA-ITS序列分析对N-1菌株进行鉴定,并研究其生物学特性。结果表明,内生真菌N-1菌株对美洲南瓜枯萎病菌具有较强的抑制作用,对峙培养5 d菌株N-1对美洲南瓜枯萎病菌的抑制率为75.93%,发酵液原液对该病菌菌丝生长和分生孢子萌发的抑制率分别为70.94%和82.87%,室内盆栽相对防效为76.41%。通过形态学和rDNA ITS序列分析,将菌株N-1鉴定为烟曲霉(Aspergillus fumigatus)。该菌株最佳生长培养基为SDAY培养基,最适生长温度为35℃,最适生长pH为7,可利用的最佳碳源和最佳氮源分别为葡萄糖和酪氨酸。研究表明,内生真菌N-1菌株具有潜在的生防价值,可为美洲南瓜枯萎病生防菌剂的研发提供新的菌种资源。     

玉米花粉总RNA提取方法的比较和分析

以玉米花粉为材料,借鉴其他植物RNA的提取方法,比较了利用Trizol法、酸性酚—异硫氰酸胍法和CTAB改进法提取玉米花粉RNA的效果,利用普通琼脂糖凝胶代替甲醛变性胶电泳分析3种不同方法所提取的RNA的完整性,并用紫外分光光度计分析RNA的纯度。结果表明,CTAB改进法为其中最好的方法。     

野葛块根总RNA的不同提取方法比较研究

以块根膨大与块根不膨大突变型的野葛块根为材料,比较Trizol、CTAB、SDS及改良SDS法提取野葛块根总RNA的效果,通过RNA产量、纯度及电泳图谱分析等,初步确立了一种有效提取野葛块根总RNA的改良SDS法。该方法提取的RNA OD260/OD280值介于1.7～1.9,电泳图谱清晰完整,产量高,成本低,完全适用于RT-PCR、cDNA-AFLP及Northern杂交等分子生物学后续试验。     

三七根部总 RNA 不同提取方法的比较

为探明三七根部总 RNA 的最佳提取方法,获取高质量 RNA,选取三七根部为材料,比较 Tr-izol 试剂法、CTAB 法、改良 Trizol 法和试剂盒法提取三七根部总 RNA 的质量。结果表明：4种方法提取三七根部 RNA 效果不同,其中以改良 Trizol 法提取 RNA 的质量最高,其 RNA 的 OD260／OD280为2．00, OD260／OD230为1．90,28S∶18S 为1．9,RIN 值为7．4,质量浓度为386μg／μL。而另外3种方法易出现样品降解、盐离子残留。结论：改良 Trizol 法适用于三七根部总 RNA 的提取。     

烟草叶片总RNA提取方法的比较

[目的]研究提取烟草叶片总RNA的最佳方法。[方法]利用CTAB法、酚-SDS法和Trizol法等从烟草叶片中提取总RNA。[结果]通过紫外分光光度法和凝胶电泳检测,结果表明,CTAB法、Trizol法、RNAiso法均能得到质量较高的RNA。RNAiso法提取RNA操作步骤简单,所提取的RNA纯度好、质量高且无污染,可以进行下一步的分子生物学研究。[结论]RNAiso法最适用于烟草叶片总RNA的提取。     

玫瑰花柱总RNA提取方法的比较研究

为获得一种玫瑰(Rosa rugosa)花柱总RNA提取的理想方法,为后续相关基因工程研究奠定基础。以玫瑰花柱为材料,用核酸蛋白仪和凝胶电泳法比较了改良CTAB 法、Trizol 法以及EASY spin Plus 植物RNA提取试剂盒法提取的玫瑰花柱总RNA的纯度、浓度及完整性,利用RT-PCR反应检测了其反转录产物用于基因扩增的有效性。结果表明：改良CTAB法提取的总RNA纯度、浓度较高,但存在严重降解现象;Trizol 法提取的总RNA纯度和浓度极低;EASY spin Plus 植物RNA提取试剂盒法提取的总RNA纯度和浓度较高,条带清晰,且28S 条带亮度是18S 条带亮度的2 倍,将其反转录获得的cDNA用于RT-PCR,能够扩增出清晰的特异性条带。综上所述：EASY spin Plus 植物RNA提取试剂盒法从玫瑰花柱中提取的RNA质量最好,完全能够满足后续的玫瑰分子生物学研究要求。     

杜仲树皮总RNA提取方法的比较

[目的]从杜仲树皮中获得高质量的总RNA。为开展杜仲后续mRNA分离、杜仲抗真菌蛋白基因克隆、及杜仲树皮cDNA文库构建等研究奠定基础。[方法]以杜仲树皮为材料,分别采用改良CTAB-LiCl法、RNApure Plant Kit法和RNAiso Plus法进行总RNA提取,用琼脂糖甲醛变性凝胶电泳检测总RNA的完整性,用紫外分光光度计检测总RNA的纯度和得率。[结果]改良CTAB-LiCl法和RNA-pure PlantKit法提取的杜仲树皮总RNA纯度和完整性较高,A260/A280值均在1.800~2.000,28和18 SrRNA条带清晰,RNA得率较高;而RNAiso Plus法提取的杜仲树皮总RNA的纯度和完整性较低,A260/A280值为1.652,28S和18S rRNA条带存在降解和弥散现象,RNA得率低。[结论]改良CTAB-LiCl法和RNApure Plant Kit法抽提获得的杜仲树皮总RNA质量较高,能满足后续RT-PCR和RACE等试验的要求,这为成功克隆杜仲相关基因奠定了基础。关键词杜仲树皮;RNA提取;方法;比较     

不同方法对石榴果皮总RNA提取效果的影响

比较了3种RNA提取方法提取石榴果皮RNA的效果。结果表明:改良CTAB法提取的总RNAOD值在1.91左右,得率为48μg/g;Trizol法提取总RNAOD值在1.15左右,得率为86μg/g;试剂盒提取得到的总RNAOD值在1.24左右,得率为124μg/g。分别反转录为cDNA,根据不同植物花青素合成关键酶基因保守序列,设计简并引物进行RT-PCR,其中只有改良CTAB法得到的cDNA有扩增条带。表明改良CTAB法比较适合富含多糖和酚类物质石榴果皮总RNA的提取。     

三七种子总RNA提取方法的比较

从三七种子中提取高质量的RNA。采用CTAB法、天根试剂盒法、普通Trizol法、改良Trizol法对三七种子总RNA进行提取比较。结果表明,改良Trizol法提取的三七种子RNA纯度好、浓度高、无DNA污染,且成本低廉、操作简单,质量符合后续的基因克隆、cDNA文库构建、基因表达等分子生物学研究的要求。     

鱼腥草叶片总RNA提取方法研究

[目的]筛选出适合鱼腥草（Houttuynia cordata）叶片RNA提取的方法。[方法]以鱼腥草叶片为材料,比较了经典RNA提取试剂盒、Trizol试剂盒A、Trizol试剂盒B以及富含多糖类材料RNA提取试剂盒提取鱼腥草RNA的效果。[结果]Trizol试剂盒A、Trizol试剂盒B和经典RNA提取试剂盒难以提取出高质量的RNA,而富含多糖类材料RNA提取试剂盒提出的RNA质量高,完整性好,可以满足进一步分子生物学研究的要求。[结论]普通RNA提取试剂盒难以提取出鱼腥草叶片的RNA。     

大麦不同器官总RNA提取方法研究

[目的]探索出一套较好的大麦总RNA提取方法。[方法]以大麦的叶片、茎秆和子粒为试验材料,探索各器官总RNA提取方法。[结果]所得产物的检验结果表明,总RNA具有整齐且清晰的28S rRNA、18S rRNA条带,A260/A280均介于1.8~2.0。将提取的叶片总RNA反转录成c DNA,RT-PCR检测PCR产物在1 500 bp处。[结论]用此方法提取的大麦各器官总RNA质量较好,纯度较高,完整性较好,可用于进一步的分子生物学研究。