茶树CsH1基因结构及其内含子信息分析

利用cDNA-AFLP方法对低温胁迫下茶树基因表达差异进行了分析,获得1个低温特异表达的cDNA片段。为了获取该片段所代表基因的结构信息,在成功克隆其基因全长cDNA序列(GenBank登录号:EU716314)的基础上,设计引物,从茶树品种‘龙井43’的叶片中克隆获得了该基因全长DNA序列,命名为茶树CsH1基因(JF836005)。基因结构分析表明:CsH1基因包含2个外显子和1个内含子,外显子和内含子的剪接符合GT-AG原则,其中2个外显子的碱基序列长度分别为236 bp和608 bp,内含子为388 bp。经序列分析发现该内含子具有启动子及激素调控元件,可能对CsH1基因的特异性表达有调控作用。茶树CsH1基因的结构及其内含子信息为茶树低温特异基因的表达和抗寒途径分子调控提供了序列信息。     

黄瓜CSHSP70基因内含子结构分析

 【目的】探明黄瓜CSHSP70基因的内含子数目及其结构特点。【方法】根据黄瓜CSHSP70基因cDNA序列设计引物，应用PCR技术从gDNA中克隆CSHSP70基因，采用RT-PCR技术验证内含子的存在。【结果】经测序与拼接，得到长度为4 056 bp的黄瓜CSHSP70基因，它包含7个内含子。经分析发现这些内含子富含A•T，具有类似启动子和HSE核心结构的序列存在。对黄瓜、甜瓜和丝瓜CSHSP70基因部分序列的比较分析表明，该基因在这3个葫芦科作物中具有很强的保守性。【结论】内含子存在的特殊结构表明其可能对该基因表达具有调控作用。     

香猪PIT-1基因内含子多态性的研究

采用PCR和DNA测序方法,对香猪及对照猪种(上海白猪、大约克夏猪)的PIT-1基因进行了单核苷酸多态性(SNP)分析,并采用RT-PCR方法对3个猪种PIT-1基因的表达水平进行了半定量分析。结果显示:香猪在DNA序列的963位(位于第4内含子)和1429位(位于第5内含子)分别发生G→A突变,而对照猪种在这2个位置未发生突变;香猪PIT-1基因表达水平显著低于上海白猪和大约克夏猪(P<0.05)。结论:香猪第4和第5内含子的两处突变可能会造成PIT-1基因表达量下降,最终可能导致香猪的生长受到影响。     

南江黄羊FSH β亚基基因内含子1序列的测定

利用牛、绵羊等动物FSHβ亚基基因序列设计引物,采用PCR法扩增并测定出南江黄羊FSHβ亚基基因内含子1全序列(GenBank登录号:AY838283)。山羊FSHβ基因内含子1全序列长641bp,A、C、G、T 4种碱基分别占35.73%,13.88%,17.47%,32.92%;A T(68.65%)的含量远高于G C(31.35%)的含量。所测定7个个体的碱基序列完全一致,表明FSHβ基因内含子1的保守性较强。     

鸡lmbr1基因内含子多态与趾型的关联

 【目的】多趾是丝羽乌骨鸡的品种特征之一，但其多趾发生的分子机制尚未知。Lmbr1基因是人和鼠轴前多趾的关键候选基因，其同源基因是否是鸡多趾表型的关键候选基因值得研究。【方法】本研究以多趾的丝羽乌骨鸡和四趾的白洛克肉鸡杂交建立的资源家系为研究素材，采用直接测序和PCR-SSCP相结合的方法进行了鸡lmbr1基因内含子13的克隆、多态分析及其在不同物种的序列保守性比较、单体型分析及单核苷酸多态与趾型的关联分析。【结果】从内含子13检测到4个SNPs，发现这些单核苷酸多态构成的单体型在丝羽乌骨鸡和白洛克肉鸡间的分布呈现明显的差异，PCR-SSCP基因型在资源家系亲代和F2代均呈现与趾型的显著关联。【结论】 鸡lmbr1基因内含子13变异与调控鸡多趾表型的特异性位点紧密连锁，鸡lmbr1基因应是鸡多趾表型的重要候选基因，今后应进一步加大鸡lmbr1基因全基因组水平和其临近区域基因的检测。     

烟草NtNAC-R1基因内含子鉴定与瞬时表达分析

克隆烟草NtNAC-R1基因,并进行瞬时表达分析,探讨其是否含有内含子及其在烟碱生物合成中的调控作用.以烟草基因组DNA为模板克隆得到NAC转录因子NtNAC-R1,鉴定结果表明,该基因含有2个内含子.通过构建真核表达载体,建立瞬时表达分析体系,RT-PCR检测结果显示NtNAC-R1基因过表达,烟碱生物合成关键基因PMT表达量升高,JA信号途径标记基因PDF1.2和IAA响应基因IAA13表达量降低.瞬时表达分析表明,该基因受JA信号和IAA信号途径的交互对话影响,进而调控烟碱的生物合成.     

棉花GhFAD2-1基因5’UTR内含子的克隆与序列分析

【目的】对棉花~(Δ12)-油酸去饱和酶基因Gh FAD2-1 5'UTR区的内含子进行克隆和序列分析,为研究Gh FAD2-1的表达调控奠定基础。【方法】利用5'RACE技术,克隆Gh FAD2-1的5'UTR序列,结合棉花基因组序列,克隆Gh FAD2-1 5'UTR内含子,并利用PLACE等生物信息学软件对其顺式作用原件进行分析。【结果】棉花A、D基因组的Gh FAD2-1 5'UTR中各含一内含子序列,全长分别为1 103 bp、1 111 bp;Gh FAD2-1成熟mRNA的5'UTR为77bp,转录的起点碱基为T;5'UTR内含子两个剪切位点分别AA-GG、CA-GC。该内含子包括一些典型的与光响应相关的作用元件,以及与激素和胁迫因素相关的应答元件等。【结论】克隆获得了棉花A、D基因组的Gh FAD2-1基因5'UTR内含子序列;明确其转录的起点碱基及5'UTR内含子的剪切位点,为进一步在分子水平上研究Gh FAD2-1功能及其表达调控规律,为植物的遗传改良奠定了基础。     

猪IGF-2基因内含子3突变检测及其多态性分布

采用错配PCR-RFLP法,检测8个品种314头猪IGF-2基因内含子3的3072位点多态性及其在群体中的分布.结果表明:引入错配碱基构造出新的酶切位点,在很大程度上降低了试验成本且不影响基因型判定结果.IGF-2基因内含子3的3072位点(G→A)变异多态在猪群中分布差异极显著.国外品种猪中等位基因A的频率高于我国地方品种猪,我国地方品种猪(二花脸猪、梅山猪、五指山猪、淮猪)群体中绝大多数为GG基因型;而国外品种猪(长白猪、大约克猪、杜洛克猪)群体中GA和AA基因型频率分别为60%～70%和20%～30%.由杜洛克猪与二花脸猪、梅山猪杂交育成的苏太猪,其群体中GA基因型频率接近78%,大大超过地方品种猪.     

拟南芥DWF4基因的内含子影响自身表达

为了进一步确定DWF4 基因的内含子是否影响自身表达,构建了35S启动子驱动的带内含子和不带内含子的DWF4基因表达载体,分别转入拟南芥DWF4基因的弱突变体psc1。对T2代幼苗进行表型分析发现,转入带内含子的DWF4基因的转基因株系TgD4能完全恢复突变体的表型,而转入不带内含子的DWF4基因的转基因株系TcD4只能部分恢复突变体的表型。RT–PCR分析显示,TgD4 的DWF4表达水平明显增加,说明内含子对DWF4基因的表达有增强作用。     

大口黑鲈IGF-I基因内含子1、3和4序列多态性研究

根据大口黑鲈IGF-I基因的cDNA序列设计引物,克隆IGFI基因内含子核苷酸序列,采用PCR产物直接测序方法,在中国养殖群体和美国野生群体中筛选IGF-I基因内含子上的多态位点。应用RFLP、CRS—RFLP和SSCP技术建立多态位点的检测方法,同时比较分析其中4个多态位点在两个群体中基因频率分布。结果表明：（1）IGF-I基因内含子1、3和4序列长分别为1317bp、712bp和1941bp;（2）在3个内含子上共发现7个多态位点,其中在内含子1的208和1070位为G—A突变;内含子3的第40个碱基为一个“A”的插入-缺失突变,第307位为C—T突变,683位是G—A突变;内含子4上的696碱基处有一个20bp的插入-缺失突变,在1563位为G—A突变,表明大口黑鲈IGF-I基因序列上存在较多的SNPs;（3）内含子1上SNPG1070A的A等位基因能为HindIII限制性内切酶识别,采用RFLP技术分型。根据内含子1上SNPG208A侧翼序列,设计错配引物,使错配碱基和A等位基因共同形成TaqI酶切位点,建立CRS—RFLP检测方法。内含子4上SNPG1563A采用SSCP检测方法,同时对内含子4上的插入-缺失突变进行PAGE电泳分型。试验结果显示,RFLP、CRS—RFLP和SSCP三种SNP检测方法简单易行,适于在水产动物SNP标记研究中推广应用;（4）在中国养殖群体中,只有内含子1上的SNPG1070A具有多态性,其它3个多态位点只在美国野生群体中存在多态,证实中国养殖群体的遗传多样性相对较低。     

重庆不同产区烤烟化学成分的比较与聚类分析

用重庆12个烤烟种植县(区)的252份烟叶样品,对重庆地区烟叶的化学品质进行了比较分析,并以主要化学成分含量为基础数据,进行了聚类分析.结果表明,①重庆市各烟区的主要化学指标平均值基本都在各成分的适宜范围之内,说明重庆市各烟区的烟叶化学成分比较协调,但不同县(区)生产的烟叶,各化学成分含量的差异显著;②基于品种平均值可以把12个县(区)分为5类,彭水、武隆、奉节和万州属于中糖中氮中碱中氯高钾区,各成分含量均比较适宜,化学品质优良,可以作为卷烟工业原料的最优选择;酉阳、黔江、丰都和南川属于中糖中氮中碱低氯中钾区,各成分含量均比较适宜,化学品质优良;巫山和石柱属于高糖低氮低碱低氯中钾区,烟叶烟碱含量低,可以为某些卷烟品牌提供低烟碱烟叶,满足卷烟工业企业的特殊配方需求;巫溪和涪陵各自独立为一类,还原糖含量偏低,建议优化施肥方案,增施钾肥,适时采收成熟度合适的烟叶,改进烘烤技术,提高烟叶还原糖和钾水平,从而提高烟叶品质.     

烤烟品种CB-1化学成分变异分析

[目的]研究烤烟品种CB-1化学成分指标与种植区域、等级的关系。[方法]以上杭、宁化、长汀、尤溪、武夷山5个CB-1主产区2009、2010年烟叶样品为材料,对9个主要化学指标进行地区、等级差异比较,并与烤烟品种F1-35、云85、云87、红大和K326的化学成分进行对比。[结果]CB-1是烤烟优质品种,化学成分与地域有关,上杭、宁化、长汀三地较为接近,而与尤溪、武夷山差异较大;烤烟各部位间除氯含量外,均存在显著差异,B2F与C3F、X2F等级差异较大;CB-1与其他品种相比,钾含量差异最大,总体与云85较为接近,与红大、F1-35差异最大。[结论]研究可为CB-1烟叶原料的合理利用,提高其工业可用性提供理论依据。     

烤烟波谱特性的分析与识别

用野外光谱辐射仪通过实地的测量,获取了临沭县的烤烟、玉米、水稻3种作物的地物反射光谱数据。着重对烤烟的生态学特性进行了波谱分析,选择了计算反射光谱红吸收峰净面积的方法来识别3种作物的地物波谱,取得了较好的效果。为进一步利用卫星遥感图像实现烤烟监测奠定了基础。     

烤烟品种资源的聚类分析

 应用计算机系统对 1 0 4个国内外烤烟品种的 1 4个性状进行聚类分析 ,形成了烤烟品种的系统分类。烤烟可分为 4个品种群和 6个品种亚群 :优质烟品种类群 (内含 2个品种亚群 ,39个品种 ) ;低烟碱多叶品种类群 (内含 1 3个品种 ) ;低糖高蛋白品种群 (内含 1 3个品种 ) ;高糖碱比品质欠佳类群 (内含 4个品种亚群 ,39个品种 )     

四川烤烟的质量特点及与国外烤烟的相似性分析

以川渝中烟工业有限责任公司库存的103份陈化烟叶为材料,运用统计方法分析了烤烟的化学成分,中性香气物质及感官质量的变化,探讨了四川烤烟的质量状况及与国外烤烟的相似性。结果表明:与国外烤烟相比,四川烤烟糖含量较高,总氮和总植物碱含量较低,与国际优质型烤烟还存在一定的差距;中性香气物质含量和感官质量劣于巴西和津巴布韦烤烟,和美国烤烟处于同一水平。聚类分析结果表明:四川各县市的烤烟在不同程度上与国外烤烟均存在一定的相似性。会理、德昌和凉山三个县市的烤烟在化学成分、中性香气物质和感官质量方面与国外烤烟的相似程度均较高,但是在进行烟叶生产时,应该因地制宜地调整栽培、调制和烘烤措施,从而进一步提高四川烤烟的品质。     

烤烟质量的影响因素分析

重点论述了烤烟外观质量和化学成分的关系,同时指出了平衡施肥技术、等级结构改善、成熟度和部位等对烤烟化学成分的影响。通过大量的数据对比分析,说明化学成分对烟叶品质的影响。     

贵州不同产区烤烟多酚类物质的分析

为探索贵州典型烟区的烤烟多酚含量在地区间的分布特征及其多酚类物质含量对烟叶质量风格特征的影响,为产区烤烟风格特色的清晰界定和细分提供参考。对贵州7个不同产区的125个烟草样品中绿原酸及其异构体、芸香苷、咖啡酸和莨菪亭等代表性多酚物质采用高效液相色谱法进行测定和差异分析。结果表明:在研究的取样范围内,7种成分中莨菪亭的变异系数最大,新绿原酸的变异系数最小;不同产区烟叶的各多酚类物质质量分数存在显著性差异,其中,六盘水地区和遵义地区单宁类多酚质量分数显著高于黔南地区,毕节地区的黄酮类多酚质量分数显著高于黔东南地区;多酚总量以毕节和六盘水两地区最高,分别为32.78mg/g和32.76mg/g。同时还发现,不同产区的多酚组成比例有一定差异,烟叶的香型风格与多酚含量之间有一定关系,产地归属于贵州清甜香型烟区的烟叶单宁类多酚及多酚总量均高于归属于醇甜香型烟区的烟叶。     

河南主产烟区烤烟化学成分分析

对河南主产烟区37个烤烟样品的14项主要化学指标进行了分析.结果表明,①河南烤烟总糖、还原糖、总氮、烟碱、钾、氯、硫、有机钾、石油醚提取物总量、总灰分含量和氮碱比适宜,蛋白质含量和糖碱比略高,钾氯比稍低;②河南烤烟化学指标中糖碱比的变异系数(50.15％)最大,钾含量的变异系数(12.31％)最小;③烤烟总糖、还原糖、总氮、烟碱、蛋白质、总灰分、糖碱比在不同部位间差异显著;④烤烟钾、氯、有机钾含量、氮碱比和钾氯比在不同产区间差异显著;⑤烤烟总氮、烟碱、石油醚提取物总量、蛋白质、总灰分含量、糖碱比和氮碱比在不同颜色间差异显著.     

优化烟叶结构措施对烤烟物理特性影响的多指标模糊评价

为明确不适用鲜烟叶田间最佳摘除数量和时期,采用下部叶摘除片数和时期、顶叶摘除片数和时期等4因素L9（34）正交试验和多指标模糊分析方法,研究了不适用鲜烟叶的田间消除处理方法对烤烟物理特性的影响。结果表明：优化烟叶结构后,烤烟单叶重、含梗率、叶质重和平衡含水率增加;影响烤烟物理特性的主要因素是摘除下部叶片数;邵阳烟区稻田烤烟优化烟叶结构以打顶时摘除下部2片烟叶和倒数第1炉时摘除顶部烟叶1片为最佳。采用效果测度模型对烤烟物理特性指标进行归一化处理和加权指数和法计算物理特性指数,寻找最优组合,使复杂问题简化。