c-Fos调节hCG诱导的仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的信号转导途径

睾酮是一种重要的类固醇激素,动物体内约95%的睾酮都由睾丸间质细胞合成并分泌。研究显示,原癌基因参与性腺功能调控,c-Fos作为原癌基因的1种,在生精细胞发育过程和睾丸内分泌功能中起着重要调控作用。本试验以荣昌仔猪为试验对象,探究c-Fos调节hCG诱导仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的信号转导途径,为进一步研究仔猪睾酮分泌的机理奠定基础。结果显示:(1)间质细胞cAMP在hCG诱导后显著增高,当二丁酰cAMP与hCG共同作用时,睾酮分泌达到最大,且当二丁酰cAMP与c-Fos ASONDs作用时,可明显逆转c-Fos ASONDs对hCG诱导仔猪间质细胞睾酮分泌的抑制作用。(2)维拉帕米(10-5 mol/L)对hCG诱导的间质细胞睾酮分泌未见明显作用,当维拉帕米和c-Fos ASONDs共同作用时也没有加强c-Fos ASONDs对hCG诱导的睾酮分泌的抑制作用。     

睾丸间质细胞线粒体调控睾酮合成的研究进展

睾丸间质细胞(Leydig cells, LCs)的主要功能是合成和分泌睾酮。在睾丸间质细胞内,以胆固醇为原料,位于线粒体外膜上的类固醇合成急性调节蛋白(steroidogenic acute regulatory protein, StAR)促进胆固醇向线粒体内膜转运,在线粒体内膜胆固醇侧链裂解酶(cholesterol side-chain cleavage cytochrome, P450scc)的催化下生成孕烯醇酮,而后通过光面内质网的羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase, 3β-HSD)和转运蛋白(translocator protein, TSPO)的共同作用合成睾酮。因此,睾丸间质细胞合成和分泌睾酮与线粒体密切相关,线粒体结构和功能的完整性直接影响睾酮的生物合成,而位于线粒体上的StAR和P450scc是睾酮合成的关键调控因子。睾酮能够促进雄性生殖器官发育成熟并维持其功能,对促进蛋白质合成(如肌肉、骨骼及生殖器官的蛋白质合成)具有重要意义。近年来,通过维持线粒体结构完整性和改善线粒体氧化损伤、线粒体生物发生等功能进而促进睾酮的合...     

睾酮合成的表观遗传调控机制研究进展

睾酮是一种主要由睾丸间质细胞合成分泌的类固醇激素，参与调节生殖和其他生理活动，对精子发生及维持雄性生殖健康具有重要作用。睾酮合成是一个非常复杂的过程，受到激素、转录因子及信号转导等调控。表观遗传是在基因序列不变的基础上基因表达发生的可遗传变化，其主要类型包括DNA甲基化、组蛋白甲基化、组蛋白乙酰化、组蛋白泛素化、非编码RNA和RNA甲基化调控等。表观遗传作为睾酮合成的重要调节途径，近年来越来越受关注。本文简要介绍了表观遗传对睾酮合成的调控，总结了DNA甲基化、组蛋白甲基化、组蛋白乙酰化、组蛋白泛素化、非编码RNA和RNA甲基化调控睾酮合成的相关研究进展，以期为进一步研究睾酮合成机制提供参考。     

成年小鼠睾丸间质细胞的分离、鉴定及功能检测

为建立成年小鼠睾丸间质细胞分离纯化方法,并对分离纯化的睾丸间质细胞进行睾酮分泌功能检测,对成年小鼠睾丸组织进行Ⅰ型胶原酶消化、Percoll分离液密度梯度离心,分离成年小鼠睾丸间质细胞.细胞纯度用3β-羟类固醇脱氢酶(3β-hydroxy-steroid-dehydrogenase,3β-HSD)染色鉴定.将分离纯化的睾丸间质细胞进行体外培养,在基础睾酮和人绒毛膜促性腺激素(hCG)刺激培养条件下,用放射免疫分析法对培养上清中的睾酮含量进行检测.结果显示,通过该方法能获得高纯度成年小鼠睾丸间质细胞(＞95％),培养的睾丸间质细胞具有分泌基础睾酮以及对hCG刺激反应的能力.提示采用该方法对成年小鼠睾丸间质细胞进行分离纯化具有高效性、可用性,通过该方法获得的睾丸间质细胞是体外研究药物对睾酮分泌功能影响的良好模型.     

c-jun调节hCG诱导仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的作用机制

为了研究c-jun调节h CG诱导仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的作用机制,采用离体仔猪睾丸间质细胞体外孵育法,c-jun ASODNs拮抗c-jun,加用c AMP,通过酶联免疫方法检测睾酮水平来观察c-jun在调节h CG诱导仔猪睾丸间质细胞分泌睾酮的影响。结果是h CG可刺激仔猪睾丸间质细胞的睾酮分泌,c-jun ASODNs(0.125~2μmol/L)呈剂量依赖性抑制h CG诱导离体睾丸间质细胞的分泌(r=-0.787,P0.01)。加用c AMP后睾酮分泌增加,可逆转c-jun ASODNs抑制h CG诱导离体睾丸间质细胞的睾酮分泌。结论是c-jun可促进h CG诱导离体仔猪睾酮间质细胞睾酮的分泌,此过程可能以c AMP作为第二信使,进行信息传递。     

牛磺酸对大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的影响及作用机理初探

将雄性Wistar大鼠（220～250g）的睾丸间质细胞混悬液用不连续梯度（5％、30％、58％、70％）Percoll分离液分离，在细胞培养液中分别加入牛磺酸及促性腺激素（HCG）、雄烯二酮、孕酮、cAMP进行培养，用放射免疫分析方法测定作用24h后培养液中睾酮含量。结果表明，牛磺酸可使睾丸间质细胞分泌睾酮的能力显著增加；能增加HCG和cAMP诱导的睾酮分泌；能促进雄烯二酮和孕酮向睾酮的转化。牛磺酸能增加睾丸间质细胞睾酮的分泌，并可能在类固醇合成的多个环节中都起到了一定的促进作用。     

IGF-Ⅰ对山羊睾丸间质细胞分泌睾酮的调节机理

以３０～４０日龄山羊的睾丸间质细胞为研究对象,采用体外细胞培养的方法,用胰岛素样生长因子－Ⅰ（ＩＧＦ－Ⅰ）和ｈＣＧ进行不同的处理,用放射免疫分析法（ＲＩＡ）测定了睾酮和ｃＡＭＰ的含量,用荧光分光光度分析法测定了ＤＮＡ含量。结果表明,ＩＧＦ－Ⅰ能促进体外培养的山羊睾丸间质细胞ｃＡＭＰ生成、睾酮分泌及ＤＮＡ合成,以上作用随ＩＧＦ－Ⅰ剂量的增大而加强,并且与ｈＣＧ有协同作用。根据以上结果首次提出ＩＧＦ－Ⅰ调节山羊睾丸间质细胞分泌睾酮机理的假设：ＩＧＦ－Ⅰ与其膜受体结合引起ｃＡＭＰ增多,ｃＡＭＰ通过激活一系列合成ＤＮＡ和睾酮所需酶类而使ＤＮＡ和睾酮的合成增加。这与催乳素（ＰＲＬ）和白细胞介素－１α（ＩＬ－１α）等含氮激素（因子）调节间质细胞分泌睾酮的机理不同,而与ＦＳＨ、ＬＨ等含氮激素调节性腺分泌类固醇激素的作用机理相似。     

睾酮对动物生殖和生长发育影响的研究进展

睾酮(T)是最主要的雄性激素,主要由睾丸间质细胞(LCs)生成,对精子发生和卵泡发育以及维持其他组织器官正常的生理活动具有重要意义。研究发现,睾酮除了通过结合雄激素受体(AR)调控基因转录和蛋白质表达以外,还可通过结合AR或其他膜受体并激活一系列信号通路,从而调控相关细胞因子的表达,在生殖系统、骨组织、心脑血管和皮肤等方面扮演重要角色。目前关于睾酮的研究多集中在模式动物上,尤其是其作为激素分子的信号通路研究方面,缺少从来源到发挥作用这一完整途径的相关资料。文章从LCs的分化和成熟、睾酮的合成及合成调控、睾酮对动物生殖与生长发育的影响三个方面进行综述,以期为睾酮的进一步研究提供参考资料。     

神经肽W对猪睾丸间质细胞增殖和睾酮分泌的影响

为了明确神经肽W(NPW)对猪睾丸间质细胞功能的影响,本试验采用RT-PCR和免疫荧光(IFA)技术研究了NPW受体NPBWR1(GPR7)、NPBWR2(GPR8)基因和蛋白在睾丸间质细胞的表达与分布,用MTT法和放射免疫分析(RIA)技术研究了不同浓度的NPW(NPW-30)对睾丸间质细胞增殖和睾酮分泌的影响。结果表明,NPBWR1和NPBWR2 mRNA在猪睾丸间质细胞中表达,NPBWR1在睾丸间质细胞上分布;10-6和10-8mol/L NPW处理睾丸间质细胞24 h可分别极限著或显著促进睾酮的分泌(P0.01,P0.05),10-10mol/L NPW可极显著促进睾丸间质细胞的增殖P0.01)。研究结果提示,NPW可促进猪睾丸间质细胞的增殖和睾酮的分泌,进而参与生殖的调控。     

维生素E对绵羊原代睾丸间质细胞睾酮合成的影响

本试验旨在研究维生素E对绵羊原代睾丸间质细胞睾酮合成的影响。选择2月龄杜×寒杂交公羔,屠宰后取睾丸组织。分离绵羊睾丸间质细胞,随机分为4个处理组,每个处理组3皿,培养基内添加不同浓度维生素E(0、40、80、160μg/m L)。培养结束后,测定培养基上清睾酮含量,将细胞裂解测定睾酮合成相关酶3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)、17β-羟基类固醇脱氢酶(17β-HSD)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、17α-羟化酶(CYP17)以及睾酮合成相关基因3β-HSD、17β-HSD、P450scc、CYP17、类固醇合成急性调节蛋白(St AR)基因相对表达量。结果表明:与对照组相比,添加40μg/m L维生素E有提高绵羊睾丸间质细胞睾酮分泌量的趋势(P=0.061),添加40μg/m L维生素E能显著提高P450scc和3β-HSD酶含量(P0.05),P450scc m RNA与3β-HSD m RNA相对表达量也显著提高(P0.05)。     

miRNAs对睾丸内细胞功能调控的研究进展

睾丸内细胞类群较多,研究多集中于间质细胞、支持细胞以及生殖细胞。3种细胞虽功能不同,但最终都可影响精子的发生。miRNA大约22 nt,广泛分布于3种细胞内,并对细胞功能起到重要的调控作用。本文综述了miRNAs对睾丸内间质细胞、支持细胞以及生殖细胞的功能调控作用。miRNAs可以通过抑制下游靶基因,影响间质细胞的数量及睾酮合成、调控支持细胞的增殖和凋亡以及生殖细胞的细胞周期、凋亡和染色质重塑。     

C-fos对体外培养仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的影响

通过C-fos ASODNs诱导C-fos基因发生转录后沉默,用人绒毛膜促性腺激素(HCG)诱导体外培养的3周龄荣昌仔猪睾丸间质细胞(Leydig cells,LC)睾酮分泌,用酶联免疫分析方法检测基础状态下和HCG诱导下体外培养的仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的水平。结果显示,C-fos ASODNs以剂量依赖性方式抑制基础状态下和HCG诱导下的睾酮分泌(P0.01),这表明C-fos在基础状态下还是HCG诱导下均可促进仔猪睾丸间质细胞睾酮的分泌。     

L-精氨酸对热处理MLTC-1细胞氧化、凋亡及睾酮合成相关基因表达的影响

试验旨在研究热处理对睾丸间质细胞的影响及L-精氨酸对热处理睾丸间质细胞抗氧化、抗凋亡及睾酮合成相关基因表达的影响.试验选用小鼠睾丸间质瘤细胞系(MLTC-1)细胞,将细胞分为4组,分别为对照组(C)、热处理组(HT)、5 μg/mL L-精氨酸+热处理组(5H)和10μg/mL L-精氨酸+热处理组(10H),处理结束...     

白细胞介素-1α对仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的影响

用体外培养的仔猪睾丸间质细胞，研究了白细胞介素－１α（ＩＬ－１α）对间质细胞睾酮分泌的影响。结果，ＩＬ－１α能抑制ｈＣＧ诱导的间质细胞分泌睾酮，其睾酮产生量随ＩＬ－１α剂量的增加及作用时间的延长而下降；用２０Ｕ／ｍＬ和５０Ｕ／ｍＬ的ＩＬ－１α作用４８ｈ，可分别抑制６０％及６５％的睾酮分泌量；但无ｈＣＧ诱导时，５０Ｕ／ｍＬ的ＩＬ－１α可使间质细胞基础睾酮的生成量增加１倍。提示睾丸内ＩＬ－１α可能通过多种途径调节间质细胞睾酮的产生。     

催乳素调节绵羊睾丸间质细胞睾酮分泌机制的研究

本实验利用睾丸间质细胞体外培养方法，研究了催乳素（ＰＲＳ）对睾酮分泌调节的机制。结果表明，体外培养的绵羊睾丸间质细胞对激素的刺激在培养的前四天较敏感。ｈＣＧ依剂量关系刺激睾酮的分泌。ＰＲＬ对ｈＣＧ的刺激作用起着双相调节作用：低剂量的ＰＲＬ（１￣３０ｎｇ／ｍｌ）可以增加ｈＣＧ的刺激强度３５￣７１％，而高剂量的ＰＲＬ（１０００ｎｇ／ｍｌ）则抑制ｈＣＧ的活性４０％。当培养液中加入不同剂量的睾酮合成前体物     

关于动物性腺激素的常识

1雄激素雄激素是一类具有维持雄性第二性征的类固醇激素,主要由睾丸间质组织中的间质细胞所分泌。雄性动物肾上腺也可分泌雄激素,即睾酮类似物———雄酮。人工合成的雄激素类似物主要有甲基睾酮和丙酸睾酮,其生物学效价远比睾酮高,并可口服,通过消化道淋巴系统直接被吸收。对于雄性动物,雄激素的主要生理作用是刺激     

半胱亚磺酸脱羧酶和牛磺酸转运体mRNA在成年小鼠睾丸间质细胞的表达

为检测成年小鼠睾丸间质细胞是否存在牛磺酸生物合成关键酶半胱亚磺酸脱羧酶(CSD)和牛磺酸转运体(TauT)mRNA的表达,通过Percoll分离液分离纯化成年小鼠睾丸间质细胞,运用RT-PCR方法测定睾丸间质细胞中CSD和TauT mRNA表达情况。结果显示,成年小鼠睾丸间质细胞存在CSD和TauT mRNA表达。说明成年小鼠睾丸间质细胞能通过CSD途径合成牛磺酸以及睾丸间质细胞可能存在牛磺酸的转运活动。     

白纤维介素—1α调节仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的机制

本实验利用体外培养的２－３周龄仔猪睾丸间质细胞，研究了ＩＬ－１α调节间质细胞睾酮分泌的机制。结果表明，ＩＬ－１α能抑制ｈＣＧ刺激间质细胞分泌睾酮，其睾酮产生量随ＩＬ－１α剂量增大（０－１０μ／ｍｌ）及刺激时间延长（０－４８ｈ）而下降。     

X射线照射对体外培养仔猪睾丸间质细胞增殖和睾酮分泌的影响

通过X射线照射体外培养仔猪睾丸间质细胞(Leydig Cells,LC),检测睾酮分泌及LC增殖情况,了解X射线对雄性睾酮分泌的影响.以3周龄仔猪为研究对象,采用体外培养体系,在hCG诱导下,X射线辐射,测定24 h后LC睾酮分泌量及LC增殖的影响.结果显示,试验常用X射线曝光剂量(43.12～84.86 μGy)曝光一次以及在63.16μGy剂量下照射5 min、15min、30 min对体外培养仔猪睾丸间质增殖有抑制作用,但在曝光剂量43.12～84.86 μGy下LC睾酮分泌量与对照组相比差异不显著,在63.16μGy剂量下照射15 min、30 min睾酮分泌量与对照组相比差异显著(P＜0.05).表明常用X射线剂量曝光一次对睾丸间质细胞增殖有抑制作用,但睾酮分泌量影响不大,但随着照射时间的延长,间质细胞增殖和睾酮分泌显著下降,故在临床使用X射线时应该缩短照射时间,并做好防护.     

菟丝子黄酮对BPA致小鼠睾丸间质细胞分泌雄性激素异常的保护作用

为研究菟丝子黄酮对双酚A(BPA)干扰小鼠睾丸间质细胞激素分泌的缓解作用,以TM3小鼠睾丸间质细胞为对象,采用1μg/mL～500μg/mL的菟丝子黄酮与TM3(小鼠睾丸间质细胞)细胞共同培养24 h,以MTT法检测细胞增殖,确定菟丝子黄酮对TM3细胞的安全剂量。然后采用1μmol/mL～200μmol/mL的双酚A干扰TM3细胞24 h,以MTT法检测细胞增殖,通过TM3细胞的相对存活率,确定BPA最适染毒剂量;最后先用菟丝子黄酮和TM3细胞共同培养4 h后,再用BPA干扰TM3细胞24 h。通过ELISA检测细胞上清液睾酮(T)和黄体生成素(LH)的含量,并分析菟丝子黄酮对BPA干扰小鼠睾丸间质细胞激素分泌的缓解作用。结果表明,250μg/mL～400μg/mL的菟丝子黄酮(等差法)对TM3细胞作用24 h后,有极显著的增殖效果(P<0.01);80μmol/mL的BPA对TM3细胞作用24 h后,细胞存活率为81%,可作为最适染毒剂量;菟丝子黄酮保护4 h后,再用BPA干扰12 h、24 h后,不同浓度的菟丝子黄酮可显著升高TM3细胞睾酮和黄体生成素的水平(P<0.05)。说明菟丝子黄酮对BPA致小鼠睾丸间质细胞睾酮和黄体生成素的分泌异常具有明显的保护作用。