犬源大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶基因检测

犬源大肠杆菌是引起犬的乳房炎、子宫蓄脓、肺炎、脓皮病的一类病原菌。通过对犬的上述4种疾病类型的病料进行分离培养,研究分离菌株的形态染色特性、培养特性、生化特性、对抗生素敏感性、血清型特性,并测定它们的TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-9型超广谱β-内酰胺酶基因特性,探讨犬源大肠杆菌的致病机理,为预防和控制犬源大肠杆菌病提供理论依据。     

48株大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶基因型检测

为了解重庆地区部分鸭场大肠杆菌中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因分布情况及抗生素的应用对鸭场环境菌的影响。本试验采用PCR技术,对48株大肠杆菌(包括20株病料分离株和28株鸭场土壤分离株)的ESBLs基因TEM、SHV、CTX-M进行检测。结果表明,TEM、SHV、CTX-M型基因在病料分离株中的检出率分别为100%、30%、25%,鸭场土壤中的检出率分别为57.1%、21.4%、28.6%。不同来源的菌株均能检测出耐药基因,且部分细菌携带两种以上耐药基因;病料分离株和鸭场土壤分离株中携带的ESBLs基因均以TEM型为主。     

青岛地区牛源产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌流行性分析

大肠埃希菌是奶牛乳房炎和犊牛腹泻的主要病原菌之一,为了调查青岛地区奶牛场大肠杆菌的超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌的流行情况,本试验对22个奶牛场采集到的782株大肠杆菌检测了耐药基因bla_(CTX-M),并进行了双盘协作试验确证了ESBLs表型,共得到42株阳性大肠杆菌。药敏试验结果显示,42株ESBLs阳性大肠杆菌对头孢噻肟、头孢噻呋、头孢呋辛和氨苄西林的耐药率为100%(42/42),对多黏菌素、萘啶酸、多西环素、四环素、链霉素和氟苯尼考耐药率介于16.6%(7/42)～47.6%(20/42);对庆大霉素、恩诺沙星、左氧氟沙星、环丙沙星、卡那霉素和磷霉素具有较高的敏感性,介于90.5%(38/42)～97.7%(41/42),所有受试菌株均对美罗培南、阿米卡星和替加环素敏感。菌株多重耐药情况以2耐、3耐为主,分别占38%(16/42)和28.6%(12/42),另有9.5%(4/42)大肠杆菌耐6类药物。本试验对青岛地区产ESBLs的大肠杆菌治疗提供了理论依据。     

辽西地区鸡源大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶的检测

为检测辽西地区(锦州、盘锦、阜新、朝阳、葫芦岛)鸡源大肠杆菌的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),选取15种代表药物,采用Kirby-Bauer纸片法、最小抑菌浓度(MIC)法进行药敏试验。结果:分离检测到产ESBLs的37株大肠杆菌,对氨苄西林、头孢噻呋、新诺明的耐药率较高,均高于91.2%,对硫酸安普霉素、阿米卡星、恩诺沙星、复方新诺明的耐药率均高于78.4%,对多西环素、氟苯尼考、克林沙星药物耐药率等于或低于46.0%,头孢吡肟、阿莫西林与棒酸(CA)酶抑制剂联用后耐药率低于8.11%。由此表明,辽西地区鸡源大肠杆菌产ESBLs耐药菌株表现多重耐药现象,但配合ESBLs抑制剂能明显增强抗菌活性,降低耐药率。     

猪源产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌的耐药性调查与耐药基因型分析

为了解猪源产超广谱β-内酰胺酶(Extended Spectrum Beta-Lactamases,ESBLs)大肠杆菌的耐药基因型分布情况,采用CLSI推荐方法进行ESBLs表型检测和确证试验,采用PCR方法ESBLs耐药基因型分析。结果表明,60.21%(112/186)的猪源大肠杆菌菌株为ESBLs阳性。blaCTX-M、blaTEM、blaSHV和blaOXA型ESBLs菌株检出率分别为91.07%、68.75%、4.46%和1.78%。由此可见,河南部分猪场大肠杆菌广泛流行ESBLs,流行的主要基因型为blaCTX-M型和blaCTX-M+blaTEM型,且多为复合基因型耐药菌株。     

山东地区鸡源大肠杆菌中超广谱β-内酰胺酶和磷霉素耐药基因的流行性研究

为了解山东地区鸡源大肠杆菌中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和磷霉素耐药基因的流行性,测定了336株鸡源大肠杆菌(蛋鸡源153株,肉鸡源183株)对14种抗菌药物的敏感性,并检测了菌株中的ESBLs和磷霉素耐药基因。结果显示,336株菌对四环素类药物耐药率高于78.6%;对头孢菌素类、氟喹诺酮类和磷霉素的耐药率分别达38.4%～44.9%,26.8%～50.0%和28.7%。336株菌中,123株携带CTX-M型ESBLs,携带率最高的为bla_(CTX-M-9G )(24.1%),其次为bla_(CTX-M-1G)(15.5%),其中3.3%菌株同时携带bla_(CTX-M-9G)和bla_(CTX-M-1G);fosA3检出率为21.7%,未检出其他磷霉素耐药基因和ESBLs基因。此外,肉鸡源大肠杆菌中fosA3与ESBLs的检出率均显著高于蛋鸡源大肠杆菌(P0.01),且fosA3与ESBLs密切相关。本研究为山东地区鸡大肠杆菌病治疗的临床用药提供科学依据。     

贵州两市猪源大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶的检测

为了解贵州安顺、遵义市猪源细菌对β-内酰胺类抗生素的耐药性,采用CLSI推荐的双纸片扩散法,调查108株临床分离的大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌的比例。结果表明:遵义、安顺两市108株大肠杆菌确认有72株ESBLs阳性菌株,检出率66.7%(72/108),其中遵义市(79.6%,43/54)检出率高于安顺市(53.7%,29/54),两市猪源产ESBLs大肠杆菌的检测率较高,对β-内酰胺类抗生素的耐药较为严重。     

鸡白痢沙门氏菌超广谱β-内酰胺酶基因亚型分析

为研究鸡白痢沙门氏菌的耐药表型及产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因亚型,分别采用微量稀释法及PCR扩增、测序比对法对8株分离自河南的鸡白痢沙门氏菌进行耐药表型检测及ESBLs基因亚型分析.结果显示,8株鸡白痢沙门氏菌对氨苄西林、三代头孢、氟苯尼考、恩诺沙星等耐药较为严重,仅对头孢噻呋/舒巴坦(2∶1)、头孢哌酮/他唑巴坦(4∶1)和头孢吡肟高度敏感.PCR检测表明8株受试菌共检出TEM-1(6株)、CTX-M-65(3株)、CTX-M-90(1株)、OXA-1(2株)和OXA-10(1株)5种基因亚型,其中CTX- M-90为国内外首次检出并命名.CTX-M-90的氨基酸序列与CTX-M-14和CTX-M-65相比均仅发生了1处氨基酸变异(80Ala→ Val或275Arg→Ser),故CTX-M-90亚型属于CTX-M-9亚群.结果提示8株鸡白痢沙门氏菌不仅多重耐药严重,而且携带的ESBL基因型复杂.     

CTX-M型超广谱β-内酰胺酶对细菌耐药性的影响

产生CTX-M型酶是影响细菌对第三代头孢菌素耐药性最重要的因素。近几年来blaCTX-M基因突变的数量迅猛增长,在世界各地大流行,给临床用药造成威胁。     

哈尔滨地区猪源大肠杆菌PMQR基因流行性检测

为了解哈尔滨地区猪源大肠杆菌中质粒介导的氟喹诺酮耐药(Plasmid mediated fluoroquinolone resistant,PMQR)基因的流行情况,本文通过对哈尔滨地区规模化养猪场进行采样处理,最终分离得到67株猪源大肠杆菌菌株,采用微量肉汤稀释法测定其对8种药物的最小抑菌浓度,针对PMQR基因设计特异性引物进行PCR扩增,结果显示,对8种兽医临床常用抗菌药物耐药率较高,多表现为多重耐药。oqx AB,qnr S,aac(6′)-Ib-cr,qnr B,qep A的检出率分别为70.15%,64.18%,22.39%,13.43%,11.94%,并没有检测到qnr A、qnr C、qnr D基因,这表明,PMQR基因在哈尔滨地区猪群中存在很高的检出率,这势必会加剧临床用药的难度,并且还为基因的水平传播提供可能。     

我国动物源CTX-M型超广谱β内酰胺酶的流行及变异

β内酰胺酶是一类常见的为细菌提供多种β内酰胺类抗生素耐药性的水解酶。本文总结了近期我国动物源CTX-M型超广谱β内酰胺酶的流行、变异等研究情况,为科学应对动物源CTX-M型超广谱β内酰胺酶的流行提供依据。     

猪源致病性沙门氏菌耐药基因的分析

采用平板稀释法，选用氨基糖苷类、四环素类、磺胺类和氯霉素类4大类抗生素的11种药物，对30株猪源致病性沙门氏菌进行了药敏试验，结果有28株菌（93．3％）至少对一种药物有耐药性；对四环素、强力霉素、磺胺甲基异口恶唑、复方新诺明、链霉素、卡那霉索和氯霉素有耐药性的菌株较普遍，在所有菌株中占比例分别为83．3％、80％、80％、76．7％、60％、56．7％和56．7％。设计了25对引物，对耐药基因进行了扩增及序列测定，结果扩增到13种耐药基因，与GenBank中的相应基因有很高的同源性（≥98．1％）。30株猪源致病性沙门氏菌中至少含有一种耐药基因的菌株有28株（93．3％），sul1、aph（3′）-Ⅱa、tetC、Catl、tetA和aadAl耐药基因较为普遍，检出率分别为76．7％、60％、60％、43．3％、40％和36．7％。药敏试验结果与耐药基因检测结果有很高的一致性（≥88％）。     

胶东地区耐药猪源大肠杆菌Ⅰ型整合子-基因盒流行状况分析

在胶东地区119株多重耐药大肠杆菌中,共92株菌有I型整合子整合酶基因,检出率达77.31%。92株I型整合子携带大肠杆菌共扩增出7类不同大小的基因盒插入区片段,大小分别为1008bp、1318bp、1586bp、1663bp、1913bp、1945bp、3149bp,其中以大小为1008bp的插入区片段的检出率最高,为31.67%。而检出率最低的为长度为1318bp的基因盒插入区。将基因盒插入区扩增片段的测序结果与Genebank中的相关序列进行比对,得出Ⅰ型整合子携带的耐药基因盒种类分别为aadA1、aadA2、aadA5、aadA22、aadB、dfrA1、dfrA12、dfrA17、dfrA27、lnuF、cmLA6、aar-3、orfF分别编码对相应药物的耐药性。     

胶东地区耐药猪源大肠杆菌I型整合子-基因盒流行状况分析

在胶东地区119株多重耐药大肠杆菌中,共92株菌有I型整合子整合酶基因,检出率达77．31％。92株I型整合子携带大肠杆菌共扩增出7类不同大小的基因盒插入区片段,大小分别为1008bp、1318bp、1586bp、1663bp、1913bp、1945bp、3149bp,其中以大小为1008bp的插入区片段的检出率最高,为31．67％。而检出率最低的为长度为1318bp的基因盒插入区。将基因盒插入区扩增片段的测序结果与Genebank中的相关序列进行比对,得出I型整合子携带的耐药基因盒种类分别为aadA1、aadA2、aadA5、aadA22、aadB、dfrA1、dfrA12、dfrA17、dfrA27、1nuF、cmLA6、aar-3、orff分别编码对相应药物的耐药性。     

伴侣动物源细菌质粒介导的黏菌素耐药机制研究进展

临床应用中,抗菌药物不合理使用导致细菌很容易产生耐药性甚至多重耐药性。由于碳青霉烯类药物的耐药性不断上升,黏菌素被视为对抗多重耐药菌的最后一道防线。然而,宠物和人类中已出现质粒介导的新型移动黏菌素抗性基因,产生的获得性耐药菌株将严重影响黏菌素的疗效,增大耐药基因跨物种传播的风险,给公共卫生造成重大威胁。论文从目前黏菌素的使用情况、耐药性形成和传播机制以及黏菌素耐药菌流行现状等几方面进行综述,以期为伴侣动物临床用药和耐药性转移的风险评估提供参考。     

猪源大肠杆菌floR、CTX-M、mcr-1耐药基因多重PCR检测方法的建立

为了建立猪源大肠杆菌对氟苯尼考、β-内酰胺类与粘杆菌素耐药基因的多重PCR检测方法,本研究以氟苯尼考耐药基因floR、β-内酰胺耐药基因CTX-M、粘杆菌素耐药基因mcr-1作为目的基因,设计3对特异性引物,通过对多重PCR反应体系及条件的优化,成功建立了多重PCR检测方法。该方法的灵敏度为1.46×10^5CFU/m L,具有高度特异性、敏感性和可重复性。本方法的建立为大肠杆菌中常见耐药基因的快速检测及分子流行病学调查提供了新的手段。     

河南省部分地区猪源大肠杆菌耐药基因floR、CTX-M、mcr-1的分子流行病学调查

为掌握河南省猪源大肠杆菌耐药基因floR、CTX-M、mcr-1的分布和流行情况,对2013-2018年从河南省内分离的856株大肠杆菌进行floR、CTX-M、mcr-1等三种耐药基因筛查检测,调查其分布特征,并对猪源大肠杆菌耐药基因在郑州、开封、焦作、许昌四个地区的分布和流行趋势进行了分析研究。结果显示,2013-2018年floR基因的检出率一直保持在较高水平,CTX-M基因的检出率持续增长,mcr-1基因的检出率在2014年达到最高,之后逐年下降,直到2018年未检出,并且不同地区耐药基因的流行趋势有一定差异。     

猪源大肠杆菌中氯霉素类药物耐药基因的检测与分析

氯霉素类药物包括氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考等。此类药物抗菌谱广、吸收快、体内分布广泛,在兽医临床上发挥着举足轻重的作用,其耐药性也备受重视。因此,本试验对黑龙江省受试养殖场60株临床分离的猪源大肠杆菌的floR和cmlA基因进行分子检测和分析,旨在为猪源大肠杆菌氯霉素类药物耐药基因的研究和分子流行病学调查提供试验依据,对临床合理用药以及控制细菌耐药性发展均具有重要意义。     

鸡源大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性分析

为探明泰州地区鸡源大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况及耐药情况,对13株分离自泰州地区的鸡源大肠杆菌进行ESBLs检测,并采用微量肉汤稀释法测定不同药物对产ESBLs菌和非产ESBLs菌的最小抑菌浓度(MIC).结果显示,13株分离菌中有5株被确定为产ESBLs菌株,阳性率为38.5%.产ESBLs菌对β-内酰胺类抗菌药的耐药性极其严重,耐药率明显高于非产ESBLs菌,二者对氨苄西林的耐药率分别为100%和62.5%,对头孢噻呋的耐药率分别为100%和12.5%,对头孢曲松的耐药率分别为80%和20%,产ESBLs菌对其他抗菌药物的耐药率也明显高于非产ESBLs菌.氨苄西林与舒巴坦(2:1)联用与单用氨苄西林相比,对产ESBLs菌的MIC值降低至单用氨苄西林时的1/16~1/8,但对非产ESBLs菌的MIC值没有明显变化.氨苄西林与阿米卡星(1:1)联用与单用两者中的任何一种相比,对产ESBLs菌和非产ESBLs菌的MIC值均降低至单药时的1/16~1/2.结果表明,临床可选择β-内酰胺酶类抗生素与β-内酰胺酶抑制剂的混合制剂来治疗产ESBLs鸡大肠杆菌的感染,也可尝试将不同种类、不同作用机理药物联合应用来治疗鸡大肠杆菌感染,尤其是耐药性鸡大肠杆菌感染.     

动物源大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶与头孢菌素酶基因型分析

为了解重庆地区动物源大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)及头孢菌素酶(AmpC)基因型的分布,利用初筛及表型确认方法,从临床分离的192株仔猪白痢大肠杆菌、65株奶牛乳腺炎大肠杆菌、69株鸡大肠杆菌中筛选出19株产ESBLs、6株产ArnpC酶大肠杆菌,并应用PCR扩增及PCR产物测序方法进行ESBLs及AmpC基因型分析.结果显示,重庆地区动物源大肠杆菌携带TEM型、CTX-M型、DHA-1型和CMY-2型基因的阳性率分别为2.15%、5.21%、0.61%和0.61%.其中,有5株同时携带2种基因.而DHA-1型基因为国内兽医临床首次检出,获得GenBank登录号为FJ386455.结果提示,重庆地区以TEM型和CTX-M型β-内酰胺酶为主,且产ESBLs与AmpC酶大肠杆菌为多重耐药菌株,需引起兽医临床的高度重视.