鸡传染性法氏囊病ELISA快速诊断盒的研制及应用

用ＩＢＤ－ＥＬＩＳＡ快速诊断盒对ＩＢＤＶ阳性法氏囊囊毒及ＩＢＤ阳性出血清，ＩＢＤＶ阴性法氏囊及ＩＢＤ阴性血清和ＩＢ，ＩＬＴ，ＥＳＤ－７６，ＲＥＯ，ＮＤ，ＭＤ等６种鸡传染病的抗原及阳性血清检测，只有ＩＢＤＶ阳性法氏囊囊毒及阳性血清呈阳性反应，证明快速诊断盒对ＩＢＤＶ法氏囊囊毒抗原及其抗体的检测是特异的，与其它６种传染病的抗原和抗体无效叉反应。与ＡＧＰ对比试验结果表明，检测ＩＢＤＶ阳性法氏囊囊毒时，快     

用抗传染性氏囊病毒单克隆抗体建立夹心阻断ELISA检测鸡血清抗体及 …

用酶标记抗传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体，建立夹心阻断ＥＬＩＳＡ，检测ＩＢＤＶ鸡血清抗体。用Ｄ７８细胞毒免疫２４日龄的雏鸡，每周采血一次，共４次，用夹心阻断ＥＬＩＳＡ、微量细胞中和试验（ＶＮ）、琼脂扩散试验（ＮＧＰ）检测鸡血清抗体，结果表明：夹心阻断ＥＬＩＳＡ同ＶＮ之间具有较高的相关性（ｒ＝０．８１２６），与ＡＧＰ的相关性较低（ｒ＝０Ｘ．７５７５）。     

间接ELISA,HI及AGP检测鸡血清中抗AIV抗体的敏感性比较

用鸭源Ａ型流感病毒Ｈ９Ｎ？滴鼻、点眼辅以腹腔注射,人工感染３周龄ＳＰＦ来航鸡,分别用ＡＧＰ、ＨＩ试验及间接ＥＬＩＳＡ定期测定其抗ＡＩＶ血清效价。结果,ＨＩ试验及间接ＥＬＩＳＡ于攻毒后第７～７９天显示阳性;ＡＧＰ试验从第１３～７９天呈阳性。根据首次检出血清中抗ＡＩＶ抗体的时间,间接ＥＬＩＳＡ比ＡＧＰ、ＨＩ更灵敏、快速。     

快速检测鸡新城疫病毒的聚乙二醇单抗夹心ELISA试验的建立和应用

以抗鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）单抗夹心ＥＬＩＳＡ试验为基础，在６０００，建立了ＰＥＧ－ＥＬＩＳＡ法，使用此法检测临诊样品，与单抗夹心ＥＬＩＳＡ相比，时间缩短７０分钟且提高了ＯＤ４９０值，易于识别。结果表明，ＰＥＧ－ＥＬＩＳＡＩ法具有实际应用价值。ＰＥＧ能加强抗原－抗体反应的速率和强度，这种效应在固相夹心ＥＬＩＳＡ第二步表现尤其明显。ＰＥＧ的这种非特异性效应对于检测其它抗原或抗体的ＥＬＩＳＡ试验可能具有     

抗IBDV独特型抗体疫苗的制备与应用

应用提取纯化的抗ＩＢＤＶＩｇＧ免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ２／０细胞在ＰＥＧ作用下融合，应用ＥＬＩＳＡ法检测筛选，经有限稀释法克隆２次，获得２株（２Ｂ６株，５Ｆ４株）分泌抗ＩＢＤＶ独特型抗体的杂交瘤细胞株，其能诱生ＢＡＬＢ／ｃ小鼠产生高效价的含抗ＩＢＤＶ独特型抗体的腹水。用此独特型抗体分别与福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂按１∶１比例乳化制备成抗ＩＢＤＶ独特型抗体疫苗，免疫接种ＳＰＦ鸡和普通京白公鸡，然后用ＩＢＤＶ野毒株经点眼和滴鼻方式攻毒，保护率分别为８／８、１４／１４，从而证实抗独特型抗体疫苗有潜在的研究和应用价值。     

斑点免疫金银染色法检测鸡传染性支气管炎病毒抗原的研究

用建立的斑点免疫金银染色（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）法检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）抗原,确定兔抗ＩＢＶ血清工作浓度为１：４００,ＳＰＡ－胶体金探针的工作浓度为１：８０,该法对纯化ＩＢＶ抗原的最低检出量为０．４３１４ｎｇ／点,用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ与斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）同时检测１５只人工感染ＩＢＶ鸡的气管,肺,肾病科,ＩＢＶ阳性检出率均为１００％,对３２份疑似ＩＢＶ感染鸡病料检测,Ｉ     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ，病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单隆抗体的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭＣＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ２ａ，后２株属于ＩｇＧ１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均     

用单抗介导的荧光抗体技术检测鸡尿囊细胞内传染性支气管炎病毒的研究

用传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１、ＡＲＫ、澳大利亚Ｔ株、野外分离株ＲＳ、ＲＹ及鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）、鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ），鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）、减蛋综合症病毒（ＥＤＳＶ）等分别接种９日龄ＳＰＦ鸡胚，３７℃孵育４８小时后，将其尿囊液离心，沉淀用ＰＢＳ悬浮，涂片，用抗ＩＢＶ单抗ＭＣ作一抗、进行间接荧光抗体检测。结果：Ｈ１２Ｏ、Ｈ５２、Ｍ４１“ＡＲＫ、Ｔ株及ＲＳ、ＲＹ均显阳性，而ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＩＬＴＶ、ＥＤＳＶ均为阴性。结果表明、用此法检测鸡胚尿囊液中ＩＢＶ．具有快速、敏感、特异的优点。     

分泌抗IBDV独特型抗体细胞株的建立

应用提取纯化的抗ＩＢＤＶ ＩｇＧ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，其脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在ＰＥＧ作用下融合，应用ＥＬＩＳＡ法检测筛选，经有限稀释法克隆２次，获得了２株（２Ｂ６株、５Ｆ４株）分泌抗ＩＢＤＶ独特型抗体的杂交瘤细胞株，并能诱生Ｂａｌｂ／ｃ小鼠产生高效价的含抗ＩＢＤＶ独型抗体腹水。     

RT—PCR与夹心ELISA检测粪便及饲料中IBDV的研究

将ＩＢＤ病鸡粪便及饲料经ＰＥＧ浓缩处理后用ＲＴＰＣＲ与单克隆抗体夹心ＥＬＩＳＡ进行ＩＢＤＶ检测。在ＲＴＰＣＲ试验中，粪便和饲料的阳性检出率均为１００％（８／８）；在夹心ＥＬＩＳＡ试验中，粪便的阳性检出率为１００％（８／８），而在饲料中末检出ＩＢＤＶ（８／８％。试验结果证明，ＲＴＰＣＲ是ＩＢＤＶ流行病学特别是传播途径研究的首选方法。     

间接夹心ELISA检测新城疫病毒抗原

以ＳＰＦ鸡抗新城疫病毒ＩｇＧ为包被抗体，兔抗ＮＤＶ ｖｅｒｏ细胞培养纯化毒ＩｇＧ为第二抗体，酶标记羊抗兔ＩｇＧ为指示抗体，建立了检测ＮＤＶ的间接夹心ＥＬＩＳＡ，并分别以兔抗ＮＤＶ鸡胚毒纯化ＨＮ糖蛋白，Ｆ糖蛋白ＩｇＧ为第二抗体进行了比较试验，并对攻毒鸡外分泌物样品进行了病原检测。     

应用间接免疫荧光法检测禽网状内皮组织增生病病毒抗体的研究

用禽网状内皮组织增生病病毒（ＲＥＶ）感染ＳＰＦ鸡胚次代成纤维细胞涂片为抗原，建立了检测ＲＥＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＦＡ）。确定了待检血清稀释度１：６４和兔抗鸡ＩｇＧ荧光抗体的稀释度１：３２的工作浓度。应用该ＩＦＡ方法对人工感染ＲＥＶ的２０只３０日龄ＳＰＦ鸡进行了检测，接种后４天时均呈阴性反应，７天时８只鸡呈阳性反应，１４天２０只全部呈阳性的反应。通过对ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＬＶ、ＭＤＶ、ＣＩＡＶ、     

抗鸡IgG重链单克隆抗体的制备与应用

以提纯鸡ＩｇＧ做抗原免疫Ｂａｌｌ／ｃ小鼠，取鼠细胞在ＰＥＧ１０００作用下与小鼠骨髓细胞（Ｓｐ２／ｏＡｇ１４）融合，采用间接免疫荧光（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测上清抗体，阳性孔经有限稀法进行细胞克隆，共获得了７株分泌抗鸡ＩｇＧ单克隆抗体的杂交瘤细胞（２Ｈ８、４Ｄ８、４Ｄ８、１Ｂ７、２Ａ７、２Ｂ３、１Ｇ１２、３Ｄ１２）将这些细胞分别接种间系小鼠制备出腹水抗体，ＥＬＩＳＡ效价可达１０＾     

鸡传染性法氏囊病毒强毒株的分离鉴定

从广州市郊区某鸡群送检的６周龄曾经ＩＢＤＶ免疫的病鸡法氏囊中分离到１株ＩＢＤＶ强毒。该毒株能使鸡胚于接种后３６～７２小时内死亡，易感鸡１００％发病，５０％死亡。电镜观察，该病毒颗粒直径６０ｎｍ左右，无囊膜。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测，病毒核酸有二条ＲＮＡ带。     

马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原I型特异性和群共同性决定簇的…

用能表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）的重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞免疫小鼠，制备针对ＭＤＶｇＢ的单克隆抗体，以Ｉ型马立克氏病病毒ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原，同时以免疫荧光试验（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来筛选杂交瘤细胞，结果获得了ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ均为阳性的１株单克隆抗体细胞株，定义名ＢＡ４和ＢＤ８。在ＩＦＡ和免疫沉淀试验中，单抗ＢＤ８与Ｉ，ⅡⅢ型ＭＤＶ均呈阳     

异源抗原在建立ELISA检测传染性法氏囊病毒抗体中的应用

本文报告采用ｖｅｒｏ细胞增殖的ＩＢＤＶ抗原建立了间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），用于定量检测鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）抗体。该法快速、敏感性高、特异性强、重复性好。同时，通过３０份血清样品ＥＬＩＳＡ效价（ＥＴ）的对数值（ｌｏｇＥＴ）与血清Ｐ／Ｎ值（待检血清ＯＤ值与阴性血清ＯＤ值之比）的线性回归分析，得直线方程ｙ＝３．０５８９＋０．０７３９ｘ（ｒ＝０．９１７４），从而血清样品的ＥＴ可通过血清单一稀释度的Ｐ／Ｎ值来计算。用不同来源抗原作ＥＬＩＳＡ表明，从ｖｅｒｏ细胞增殖的抗原比从鸡胚成纤维（ＣＥＦ）细胞增殖的抗原可提高检测血清ＯＤ值近２０％，表现出异源抗原具有更高的特异性     

抗原捕捉ELISA与常规方法滴定IBDV的比较

作者建立了两种抗原捕捉酶联免疫吸附试验方法（多抗和单抗ＡＣ－ＥＬＩＳＡ），用于滴定用不同宿主系统增殖的传染性氏囊毒病，这些宿主系统包括ＢＧＭ－７０传代细胞系。鸡胚成纤维细胞和鸡法氏囊，两种检测方法都有较高的特异性，但是多克隆ＡＣ－ＥＬＩＳＡ比单克ＡＣ－ＥＬＩＳＡ更加敏感（Ｐ〈０．０５），结果还表明，滴定ＩＢＤＶ抗原的常规方法（细胞培养物和鸡胚）比多抗ＡＣ－ＥＬＩＳＡ更敏感。     

马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原Ⅰ型特异性和群共同性决定簇的单克隆抗体

用能表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）的重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞免疫小鼠，制备针对ＭＤＶｇＢ的单克隆抗体。以Ⅰ型马立克氏病病毒ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原，同时以免疫荧光试验（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来筛选杂交瘤细胞，结果获得了ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ均为阳性的２株单克隆抗体细胞株，定名为ＢＡ４和ＢＤ８。在ＩＦＡ和免疫沉淀试验中，单抗ＢＤ８与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ＭＤＶ均呈阳性反应；单抗ＢＡ４只对Ⅰ型ＭＤＶ（包括ＣＶＩ９８８疫苗株）呈阳性反应。免疫沉淀反应进一步确证２株单抗识别的是ＭＤＶ糖蛋白Ｂ抗原。     

应用双抗体夹心法ELISA检测IBDV的研究

从抗ＩＢＤＶ高免蛋黄液中提取ＩｇＧ，用作包被抗体和酶标记，建立了检测ＩＢＤＶ的双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ。经抗原阻断，无关病毒对照、取代、验证等项试验，并与常规ＡＧＰ法比较，对来源不同的１００多个样品进行检测，结果表明：该法对患鸡腔上囊、脾脏的检出率均为１００％，比ＡＧＰ法敏感１００倍以上，用肉眼观察阳性与阴性之间颜色差异显著，不存在非特异性反应。试验证明该法具有满意的待异性、敏感性、快速性和稳定性，是ＩＢＤ早期病原学诊断和流行病学调查的有效手段。     

鸡,鸭体内传染性法氏囊病病毒的分离及理化性质比较

从疑似传染性法氏囊病（ＩＢＤ）病鸡及同群饲养的鸭体内各分离到１株病毒，用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体夹心ＥＬＩＳＡ试验证明两病毒均为ＩＢＤＶ，病毒血清型为Ⅰ型。病毒可致死鸡胚，适应于鸡胚成纤维细胞并产生细胞病变（ＣＰＥ）。理化性质比较表明，两病毒为同源ＩＢＤＶ。研究表明，鸭可成为ＩＢＤＶ的携带者或传染源。