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1.
应用提取纯化的抗IBDV IgG免疫Balb/c小鼠,其脾细胞与SP2/O细胞在PEG作用下融合,应用ELISA法检测筛选,经有限稀释法克隆2次,获得了2株(2B6株、5F4株)分泌抗IBDV独特型抗体的杂交瘤细胞株,并能诱生Balb/c小鼠产生高效价的含抗IBDV独型抗体腹水。 相似文献
2.
抗IBDV独特型抗体疫苗的制备与应用 总被引:1,自引:1,他引:0
应用提取纯化的抗IBDVIgG免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞在PEG作用下融合,应用ELISA法检测筛选,经有限稀释法克隆2次,获得2株(2B6株,5F4株)分泌抗IBDV独特型抗体的杂交瘤细胞株,其能诱生BALB/c小鼠产生高效价的含抗IBDV独特型抗体的腹水。用此独特型抗体分别与福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂按1∶1比例乳化制备成抗IBDV独特型抗体疫苗,免疫接种SPF鸡和普通京白公鸡,然后用IBDV野毒株经点眼和滴鼻方式攻毒,保护率分别为8/8、14/14,从而证实抗独特型抗体疫苗有潜在的研究和应用价值。 相似文献
3.
以提纯鸡IgG做抗原免疫Ball/c小鼠,取鼠细胞在PEG1000作用下与小鼠骨髓细胞(Sp2/oAg14)融合,采用间接免疫荧光(IFA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清抗体,阳性孔经有限稀法进行细胞克隆,共获得了7株分泌抗鸡IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞(2H8、4D8、4D8、1B7、2A7、2B3、1G12、3D12)将这些细胞分别接种间系小鼠制备出腹水抗体,ELISA效价可达10^ 相似文献
4.
采用腹腔的接种1次脾内注射禽呼肠孤病毒(ARV)蛋白免疫小鼠,经3次融合后,共筛选8株分泌抗禽呼肠孤病毒(单克隆抗体杂交瘤细胞株,这8株McAb均可与ARVS1133株,FDO株发生反应,而与IBDV,MDV,EDS-76病毒不发生反应,经亚类鉴定,AE7,AF8,BD1,DH10,EE5为IgG1;AD6,CG4为IgC2a,AG7为IgG2b。腹水效价在10^3~10^5之间。 相似文献
5.
以纯化的兔出血症病毒免疫BALB/C鼠,应用杂交瘤技术获得了分泌抗RHDV单抗杂交瘤细胞17株,其中有3株杂交瘤细胞分泌单抗的ELISA效价为1:409600,1:4096;5株单抗具有血凝抑制活性。兔抗RHDV高兔血清对17株McAb的ELISA抑株为IgG2b。各株McAb与欧洲棕色兔病病毒无抗原交叉反应,也无沉淀反应特性。 相似文献
6.
分泌抗鸡Ig单抗杂交瘤细胞系的建立与单抗生物学特性的鉴定 总被引:7,自引:0,他引:7
从传染性法氏囊病病毒(IBDV)单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞系1D10、1G1中得到了3株能稳定分泌抗鸡免疫球蛋白(Ig)McAb的杂交瘤细胞系1B7、1D7、3G6。其抗体类和亚类均属IgG2b,腹水的ELISA效价≥1∶25600,琼扩效价为1∶8~1∶16。3株McAb能与鸡血清中的Ig出现沉淀反应,琼扩在24h以内出现清晰的沉淀线,而不能和鸭、鸽、鹌鹑等禽类及异种动物血清出现沉淀线。纯化的鸡IgG、IgM经SDS-PAGE后,分别用纯化并经辣根过氧化物酶(HPR)标记的1B7、1D7、3G6单抗酶结合物进行免疫印迹试验证明,3株单抗识别的均为IgG、IgM分子的轻链 相似文献
7.
产蛋下降综合征病毒单克隆抗体的制备 总被引:2,自引:1,他引:1
以粗提的EDS-76病毒(NE-4株)作为抗原,按常规方法免疫BALB/c鼠,最后一次免疫后第3天取脾细胞与SP2/0细胞进行融合,采用间接ELISA和HI进行双重筛选,共检出25个阳性孔,阳性率为14.88%。对其中的11个阳性值较高的孔进行3次克隆,最后获得的11株杂交瘤细胞,经长期体外培养和冻存后复苏仍能稳定地分泌抗体;ELISA阻断试验和与其他病毒的交叉试验证明,其分泌的抗体具有高度特异性。经鉴定,11株McAb均为IgG,均无免疫沉淀特性,腹水和细胞培养上清的ELISA效价分别为1:3200~1:51200和1:128~1:2048。杂交瘤细胞的染色体数目为80~112,平均92。尤为重要的是,11株杂交瘤细胞中有4株分泌抗EDS-76病毒血凝素决定簇的中和单抗,细胞培养上清和腹水的HI价分别为210~2 ̄(12)和2 ̄(22)~2 ̄(24),腹水的中和效价为1:1280~1:5120。 相似文献
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9.
抗鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的制备及其特性的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
本实验将鸡传染性支气管炎病毒(澳大利亚T株)进行纯化,制成抗原,应用杂交瘤技术建立了5株分泌抗鸡传染性支气管炎病毒的杂交瘤细胞株,其免疫球蛋白的亚类分别属于IgG1、IgG3、IgM。杂交瘤细胞分泌抗体的能力稳定,长期传代对其抗体分泌能力没有影响。5株单克隆抗体与其它12株鸡传染性支气管炎病毒标准株之间存在不同程度的交叉反应,但对鸡新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、产蛋下降综合征病毒及禽流感病毒均无交叉反应。用此杂交瘤细胞制备腹水的ELISA效价为10-6~10-7,抗体对热的稳定性有一定的差别。抗体纯化后,经SDS-PAGE凝胶电泳表明具有单克隆抗体的特征,经快速蛋白分析鉴定其纯度为89.49%。竞争ELISA法证明其中4株的单抗与抗原结合位点并不完全相同。采用单抗夹心ELISA法,对抗原的检测方法进行了初步探索。 相似文献
10.
用赭曲霉素A(OA)-BSA合成抗原免疫Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与sp2/0细胞融合,通过克隆和ELISA法筛选,建立三株泌抗OA单克隆抗体杂交瘤细胞株(3C12,1D12和2G7)。用间接ELISA法测定,细胞上清液抗体效价为128^×(3C12)和64^×(1D12和2G7)腹水抗体效价为10^-7(3C12,1D12)和10^-6(2G7)。三株单抗(McAb)均属IgG类,分泌抗体 相似文献
11.
具有中和活性的减蛋综合征病毒单抗的研制 总被引:1,自引:0,他引:1
用减蛋综合征病毒毒株WPDV205纯化抗原免疫BALB/c小鼠,在最后一次免疫后第3天取脾细胞与SP2/0细胞在PEG-4000的作用下融合。用间接ELISA初步筛选出阳性克隆10株(4B1、1D4、2D6、3D6、3A5、2A1、3C6、3C1、1B3和2C5)。这些杂交瘤细胞经克隆化和再次检测后生产腹水,用微量细胞中和试验筛选出具有中和活性的单克抗隆体4株(4B1、3C1、3C6和2C5),其 相似文献
12.
抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的研制及其特性鉴定 总被引:1,自引:1,他引:0
以新生乳猪增殖猪流行性腹泻病毒(PEDV),通过蔗糖密度梯度离心将其纯化,获得较为完整的病毒颗粒。病毒ELISA效价为1∶3×105,蛋白含量为3.96g/L。将提纯的PEDV免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,融合率为95.6%。用间接ELISA进行筛选,共检出38个阳性孔,阳性率为28.8%。对其中15个阳性值较高的孔进行3次再克隆,阳性率达100%,最后获得15株稳定分泌特异性抗PEDV单抗(McAb)的杂交瘤细胞。ELISA阻断试验与交叉试验证明,其分泌的抗体具有高度特异性。腹水和细胞培养上清的ELISA效价分别为1∶103~1∶106和1∶128~1∶512。经鉴定,15株McAb的分子类型均为IgG,均无免疫沉淀特性。杂交瘤细胞的染色体数目为90~110,平均95。尤为重要的是,这些杂交瘤细胞所分泌的抗体,有的对PEDV具有中和作用,能够阻断病毒对猪只的侵害作用。 相似文献
13.
应用H—Y单克隆抗体鉴定小鼠和家兔胚胎性别 总被引:5,自引:0,他引:5
以C57BL/6雄性小鼠的脾细胞免疫同雌性小鼠,选择免疫应答反应较好的雌性小鼠4只,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合的杂交瘤细胞经过3次克隆,筛选出了2株能够分泌H-Y抗体的杂交瘤细胞系HYA1和HYA2,其分泌的相应抗体分别名为HYa1和HYa2。琼脂双扩散试验表明,HYa1和HYa2分别属于IgM和IgG亚类。胚间接免疫荧炮分析及胚胎细胞毒试验表明,HYa1和HYa2分别属于IgM和I 相似文献
14.
用绵羊肺炎支原体(MO)抗原免疫的BALB/C小鼠,取血清抗体阳性免疫鼠的脾细胞与SP2/O细胞在聚乙二醇作用下进行融合,产生杂交瘤细胞、用间接ELISA法对杂交瘤细胞生长孔上清液进行检测,筛选阳性杂交瘤细胞株.以有限稀释法克隆1~2次,得到6株分泌抗绵羊肺炎支原体抗原的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株.选择抗体分泌较高的14A6、7A27、B38进行了较详细的研究,结果表明,其核内染色体数为94~96.抗体属性是:1株为IgG2a、2株为IgG1.用间接ELISA法对3株McAb作符异性分析、该McAb只特异地与绵羊肺炎支原体抗原发生反应,而不与猪肺炎支原体、山羊无乳症支原体抗原发生反应.将杂交瘤细胞注射BALB/C小鼠诱生腹水.其抗体效价提高100倍.杂交瘤细胞在液氮中保存1~2年后复苏仍能稳定地分泌抗绵羊肺炎支原体McAb。 相似文献
15.
禽多杀性巴氏杆菌单克隆抗体的制备及其基本性状研究 总被引:6,自引:2,他引:4
将多杀性巴氏杆菌(P.m.)C48-1株(Heddleston1型;Carter分型5:A)灭活后全菌免疫的BALB/C小鼠脾细胞与SP/0骨髓瘤细胞在PEG1000作用下融合。用全菌包被的间接ELISA方法检测抗体,获得了23株能稳定分泌抗P.m.1型单克隆抗体的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞培养2个月和冻存3个月后复苏培养,均能稳定分泌特异性单克隆抗体。23株腹水ELISA效价分别从10-3—10-11,无免疫沉淀性,也无凝集性。Ig类型鉴定表明,3株属于IgM,20株属于IgG。间接ELISA检测结果表明:23株单抗只与P.m.1型起反应,而不与P.m.3、4、16型起反应,也不与禽类易感的鸡白痢沙门氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌、李氏杆菌起反应,具有型的特异性。用IC8H9腹水建立的夹心ELISA方法检定P.m.1型菌株,其敏感性高,特异性强,也更为方便。 相似文献
16.
通过SDSPAGE、免疫印迹和相加ELISA分析了五株抗伪狂犬病病毒杂交瘤细胞系所分泌的单抗5H2、2E6、2G11、3D10和1B5(均为IgG1)各自所识别的病毒多肽。结果证明:单抗5H2、2E6、2G11和3D10识别伪狂犬病病毒97KD多肽,单抗1B5识别54KD多肽。相加ELISA证实单抗5H2、2E6、2G11和3D10识别同一多肽的重叠表位或邻近表位。 相似文献
17.
蓝舌病病毒单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定 总被引:7,自引:0,他引:7
以纯化的蓝舌病病毒(BTV)11型VP7免疫BALB/c小鼠,动用淋巴细胞杂交瘤技术,借助间接ELISA筛选,获得了3株分泌抗BTV11 VP7的群特异性单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,命名为C12D9、B4F3、E1A7。这3株杂交瘤细胞株连续传代3个月再经液氮冻存6个月后复苏培养,仍能稳定分泌特异性McAb。3株McAb均具有ELISA特性和免疫沉淀特性,其中C12D9株上清液的ELIS 相似文献
18.
马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原Ⅰ型特异性和群共同性决定簇的单克隆抗体 总被引:3,自引:1,他引:2
用能表达马立克氏病病毒(MDV)糖蛋白B(gB)的重组杆状病毒感染的Sf9细胞免疫小鼠,制备针对MDVgB的单克隆抗体。以Ⅰ型马立克氏病病毒GA株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原,同时以免疫荧光试验(IFA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)来筛选杂交瘤细胞,结果获得了IFA和ELISA均为阳性的2株单克隆抗体细胞株,定名为BA4和BD8。在IFA和免疫沉淀试验中,单抗BD8与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型MDV均呈阳性反应;单抗BA4只对Ⅰ型MDV(包括CVI988疫苗株)呈阳性反应。免疫沉淀反应进一步确证2株单抗识别的是MDV糖蛋白B抗原。 相似文献
19.
ABC—Dot—ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒 总被引:4,自引:0,他引:4
建立了ABC-Dot-ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的方法,其最佳反应条件是:包被液为0.05mol/LpH9.6的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(CBS),免疫IBV IgG的最佳工作浓度为1:80;抗原的最佳浓度为1:800;封闭剂选用0.01mol/L pH7.4含30mL/L白明胶的PBS,B-AgG和ABC-HEP的最佳工作浓度为1:200。用ABC-HEP的最佳工作浓度为1:20 相似文献
20.
抗A型产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立与中和效应 总被引:2,自引:0,他引:2
用提取的 A 型产气荚膜梭菌 α毒素包涵体免疫 B A L B/c 小鼠后, 取小鼠脾细胞与 S P2/0 骨髓瘤细胞进行融合和克隆化,经间接 E L I S A 筛选,共获得 1 A8、1 C3、1 D5、1 D8、1 F1、1 H1 和 2 E3 7 株稳定分泌单克隆抗体( M c Ab)的杂交瘤细胞株。经鉴定,7 株 M c Ab 的 Ig 亚类有 Ig G1(1 D8)、 Ig G3(1 A8、1 C3 和 2 E3)和 Ig M(1 D5、1 F1 和 1 H1)。细胞培养上清和腹水抗体效价分别为 1∶512~1∶1 024 和 1∶106 ~1∶108 。尤为重要的是,2 E3 杂交瘤细胞株分泌的 M c Ab 不仅能够中和 α毒素的磷脂酶 C活性和溶血活性,而且能够对致死性腹腔感染小鼠产生良好的被动保护作用。 相似文献