鸡减蛋综合症和新城疫二联油佐剂灭活苗的制备及其应用（摘要）

将鸡减蛋综合症（ＥＤＳ—７６）Ｈ株和新城疫（ＮＤ）Ｌａｓｏｔａ弱毒株分别接种鸭胚和鸡胚，收获胚液（ＨＡ价分别达２１５和２１１以上），福尔马林灭活后配制成ＥＤＳ—ＮＤ二联油佐剂灭活苗，经无菌与安全性检验、免疫效力测定和田间应用结果表明：该苗安全性良好，于蛋鸡开产前一个月左右皮下或肌肉注射０．５ｍｌ／羽，免疫后２１天ＨＩ抗体效价均达１：２１０，免疫期达６个月以上。     

PCR检测鸡减蛋综合征病毒

根据已报道的鸡减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）病毒ＤＮＡ序列，设计合成了１对引物，建立了ＥＤＳ－７６病毒的双温式聚合酶链反应（ＰＣＲ）诊断方法。该方法对ＥＤＳ－７６病毒长春株、河南株和广东株扩增结果均为阳性；而对致死鸡胚孤儿病毒（ＣＥＬＯＶ）、鸡病毒性关节炎病毒（ＶＡＶ）、鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）和鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）的扩增结果均为阴性。可检测ＥＤＳ－７６病毒ＤＮＡ为０．３×１０－４ｐｇ。结果表明该方法特异且敏感。此外，将常规的三温式ＰＣＲ的操作规程改为双温式，反应体积由常规５０～１００μＬ改为２０μＬ，使其更加快速、简便、经济     

鸡新城疫和减蛋综合征异源二联灭活疫苗研究

将鸭源新城疫（ＮＤ）病毒Ｄ＿（１０）株和减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）病毒ＧＣ＿２株于同一鸭胚同时增殖，用甲醛灭活后加入１０号白油制成ＮＤ和ＥＤＳ－７６异源二联灭活疫苗，简化了生产工艺，降低了成本，克服了鸡胚苗潜伏带毒的危险。经２０余万只鸡试用，表明该疫苗可有效预防ＮＤ和ＤＥＳ－７６。     

鸡产蛋下降综合症灭活疫苗研究：EDS76—NE4株病毒的培养与鉴定

在对ＥＤＳ７６－ＮＥ４株病毒进行血清学鉴定之后，于鸭胚（ＤＥ）、鸭胚成纤维细胞（ＤＥＦ）、鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）和鸡胚肝细胞（ＥＣＬ）上适应培养。结果表明，ＥＤＳ７６－ＮＥ４株病毒为鸡产蛋下降综合症病毒，该病毒能在ＤＥ、ＤＥＦ、ＣＥＬ上增殖，在ＤＥ上增殖，尿囊液的血凝价（ＨＡ）可达１：２０４８０－１：３２７６８０倍。     

EDS76双毒株油佐剂灭活疫苗的研制及免疫原性测定

首先以ＥＤＳ７６－ＮＥ_４和ＥＤＳ７６－ＢＣ两个毒株的鸭胚培养物混合或单独分别接种鸡，证明混合接种的鸡，其ＨＩ价高于单独接种的鸡。应用混合培养物（ＨＡ价≥１∶３２７６８）制成３批灭活油佐剂ＥＤＳ７６疫苗，接种鸡６万只以上，接种鸡未出现不良反应，接种后１５、２１、３５和６０天时，鸡的平均ＨＩ价分别为７．５、８．３、９．３和８．０。     

鸡产蛋下降综合症灭活疫苗研究──EDS_（76）—NE_（4）株病毒的培养与鉴

在对ＥＤＳ７６－ＮＥ４株病毒进行血清学鉴定之后，于鸭胚（ＤＥ）、鸭胚成纤维细胞（ＤＥＦ）、鸡胚（ＣＥ）、鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）和鸡胚肝细胞（ＣＥＬ）上适应培养。结果表明，ＥＤＳ７６－ＮＥ４株病毒为鸡产蛋下降综合症病毒，该病毒能在ＤＥ、ＤＥＦ、ＣＥＬ上增殖，在ＤＥ上增殖，尿囊液的血凝价（ＨＡ）可达１∶２０４８０─１∶３２７６８０倍。     

鸡产蛋下降综合症油乳剂灭活苗的免疫及攻毒保护试验

对应用当地分离病毒株研制的鸡产蛋下降综合症系列油乳剂灭活苗进行了免疫试验。结果表明,免疫后,鸡产蛋下降综合症（ＥＤＳ７６）油乳剂灭活苗、鸡新城疫（ＮＤ）－产蛋下降综合症二联油乳剂灭活苗及鸡新城疫－鸡传染性支气管炎（ＩＢ）－产蛋下降综合症三联油乳剂灭活苗免疫组的血清ＥＤＳ７６ＨＩ抗体迅速上升,维持４个月后仍在６．８－８（ｌｏｇ２）以上,并且能够抵抗强毒的攻击。证明所研制的ＥＤＳ７６油苗、ＮＤ－ＥＤＳ７６二联油苗、ＮＤ－ＩＢ－ＥＤＳ７６三联油苗对ＥＤＳ７６具有良好的免疫作用,能够抵抗ＥＤＳ７６强毒的攻击并产生高而持久的血清ＨＩ抗体。此外,对ＮＤ－ＥＤＳ７６二联苗、ＮＤ－ＩＢ－ＥＤＳ７６三联苗免疫组的血清ＮＤＨＩ抗体测定结果表明,上述二联苗、三联苗能产生与接种ＮＤ油苗一样良好的ＮＤ免疫效果,在免疫后１３０天时,其血清ＨＩ抗体仍高达９－１１（ｌｏｇ２）以上,与对照组有极显著的差异     

不同鸡种的红血球及其浓度和新鲜度对新城疫病毒凝集价的影响

不同鸡种的红血球及其浓度和新鲜度对新城疫病毒凝集价的影响吴荣富，丁雯，王天军，王永坤，季明，朱国强（江苏农学院畜牧兽医系　２２５００１）鸡红血球凝集试验（ＨＡ）在新城疫病毒（ＮＤＶ）以及产蛋下降综合征病毒（ＥＤＳ－７６）等的检测中应用十分广泛，其效价...     

ND－EDS－76油乳剂灭活苗免疫失败病例诊治分析报告

ＮＤ－ＥＤＳ－７６油乳剂灭活苗免疫失败病例诊治分析报告张玉生，王秋红，李守芳（济宁市中区农委）郊区某鸡场，对伊沙、罗曼褐色商品蛋鸡及海兰白壳蛋鸡，首次使用ＮＤ－ＥＤＳ－７６油剂灭活苗进行免疫。免疫后一月，鸡群中又发生ＥＤＳ－７６。今将情况分析报告如下...     

产蛋下降综合征（EDS－76）病毒DNA酶切图谱分析

选用ＥｃｏＲＩ、ＰｓｔⅠ、ＰｖｕⅡ、ＨｉｎｄⅢ、ＢｇｌⅠ和ＢｇｌⅡ６种限制性内切酶，对国内４株ＥＤＳ－７６病毒鸡源分离株和国外标准株ＡＶ－１２７及１株鹅源腺病毒的ＤＮＡ进行酶切图谱的比较，结果发现４种鸡源分离株与ＡＶ－１２７株用上述６种酶切的片段数分别为４、８、１０、１０、６和７条。各酶切图形、片段大小亦十分相似，表明均为ＥＤＳ－７６病毒。ＥｃｏＲＩ－ＨｉｎｄⅢ和ＰｓｔＩ－ＥｃｏＲＩ的双酶切也得到同样结果。鹅源分离株的酶切片段数分别为６、７、９、７、４和１０条，酶切图形和片段大小均与ＡＶ－１２７有很大不同，表明该分离株可能为１株血清型相同而基因组不同的ＥＤＳ－７６鹅腺病毒。     

60Coγ射线对新城疫病毒、H9N2亚型禽流感病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的灭活研究

用⁶⁰Coγ射线对不同状态不同体积的鸡新城疫病毒(NDV)、H9N2亚型禽流感(H9N2 AIV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)进行辐照,研究⁶⁰Coγ射线对灭活疫苗中病毒的灭活效果。结果表明,6.0 kGy ⁶⁰Coγ射线辐照对冷冻和液态下5000和10000 mL的NDV、H9N2亚型AIV和PRRSV均不能灭活,辐照后NDV和H9N2亚型AIV冷冻尿囊液的HA效价降低而液态尿囊液的HA效价升高;液态下,⁶⁰Coγ射线能够灭活250 mL细胞培养液中的PRRSV,不能灭活250、5000和10000 mL尿囊液中的NDV和H9N2 AIV,250 mL与5000、10000 mL的NDV HA效价间差异显著(P＜0.05)。⁶⁰Coγ射线辐照对液态的PRRSV细胞培养液灭活效果良好,有望用于灭活苗的病毒灭活。     

Seroprevalence of egg drop syndrome - 76 virus as cause of poor egg productivity of poultry in Nsukka,South East Nigeria

To determine if egg drop syndrome 76 virus infection is among the causes of lowered egg productivity in commercial poultry farms in South Eastern Part of Nigeria and to know the prevalence of the infection, ten farms with history of lowered egg production in Nsukka local government area of Enugu State were randomly selected. Sera from ten hens in each of the selected farms were assayed for antibodies against EDS 76 virus by the haemagglutination-inhibition (HI) test. The mean HI titre of the ten hens in each of the farms was recorded as EDS - 76 antibody titre for the farm. Nine out of the 10 farms tested were positive for EDS - 76 antibodies with HI titres ranging between 16 and 256. Out of 10 flocks with production of 65% and above 9 were EDS-76 HI negative.     

提高鸡传染性支气管炎病毒血凝抗原滴度途径及抗原灭活

将７株传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）标准株（Ｍ４１、Ｈ１２０、Ｈｏｌｔｅ、Ｇｒａｙ、Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ、Ｉｏｗａ６０９和Ｔ株）和６株分离株（ＮＩＢＶ、ＧＩＢＶ、Ｍ、ＳＨ、Ｊ和Ｈ株）分别接种于鸡胚，收获尿囊液，经浓缩后，用魏氏梭菌培养液处理，制备血凝抗原。其中，Ｈ１２０株血凝滴度最高，Ｔ、Ｍ、Ｊ和Ｈ株无血凝性。应用含有不同滴度ＩＢＶ母源抗体的鸡胚增殖病毒制备抗原，效价与用ＳＰＦ鸡胚增殖病毒制备的抗原效价一致。尿囊液经反复冻融后再制备抗原会使血凝价降低。抗原分别用甲醛、高碘酸钠、硼氢化钾和ＳＤＳ灭活，其中甲醛灭活效果最理想。抗原对氯仿敏感，对乙醚稳定。适宜浓度的Ｎａ＋、Ｍｇ２＋可显著提高抗原的血凝性     

湖南省鸵鸟新城疫病毒的分离及生物学特性测定

湘南某鸵鸟养殖场饲养的鸵鸟发生一起疫病 ,疑似鸵鸟新城疫 ,为了准确迅速地对其进行确诊 ,用 SPF鸡胚进行病毒的分离 ,进行了HA、HI、病毒中和试验及生物学特性测定。结果最初接种的 SPF鸡胚 48～ 96h全部死亡 ,其尿囊液 HA效价为 2 3,死亡胚充血、出血 ,将尿囊液继续传代至第 3代时 ,死亡胚尿囊液 HA在收稿日期 :2 0 0 3- 0 4 - 0 9基金项目 :湖南省林业厅资助 (97- 2 4 )作者简介 :刘振湘 (1971- ) ,男 ,湖南耒阳人 ,湖南环境生物职业技术学院讲师。主要从事预防兽医学的教学与科研工作。2 5～ 2 6 ;其 ND HI试验为阳性 ;鸡胚中和试验结果接种经 ND标准阳性血清处理的病料未见死亡 ,HA效价为 2 0 ,而接种未经处理病料的鸡胚于 2 6～ 3 8h后全部死亡 ,HA效价为 2 6～ 7;其生物学特性测定结果 ICPI为 1 .62 ,IVPI为 1 .0 ,MDT为 45h,对氯仿和酸敏感 ,NHAT为慢 ,HOT为 1 5min。结果表明该分离毒为 NDV并表现出与鸡 NDV相同的特性。     

鸽新城疫(ND)蜂胶佐剂灭活疫苗免疫效果对比试验

采用鸽新城疫ND-GS 01株毒为种毒,分别研制出了尿囊液毒蜂胶佐剂灭活疫苗和四元材料(鸡胚尿囊液、羊水、尿囊膜、羊膜)混合病毒蜂胶佐剂灭活苗。对研制的两种灭活疫苗经安全性检验、急性毒性试验,免疫抗体消长水平与免疫持续期对比试验,结果表明,四元材料的疫苗与尿囊液疫苗性能一致。     

鹅源新城疫病毒云南流行株免疫交叉保护试验

用分离的鹅新城疫病毒KM2007株尿囊液制成油乳剂灭活苗,和NDV油乳剂灭活苗分别接种10日龄未免疫雏鸡和未免疫雏鹅,并设非免疫对照组。免疫后21 d,试验组和对照组每只鸡和鹅分别注射0.1 mL鹅新城疫病毒KM2007株尿囊液10-1稀释液,结果对照组鹅和鸡分别出现典型的鹅新城疫和鸡新城疫的症状和病理变化,而试验组鹅和鸡全部健活。结果表明,鹅新城疫病毒KM2007株油乳剂灭活苗及NDV油乳剂灭活苗均可保护鹅和鸡免受鹅新城疫病毒野毒的攻击。     

禽流感病毒HA1蛋白的原核表达及其免疫原性的初步研究

从H9N2亚型禽流感病毒感染的鸡胚尿囊液中提取病毒RNA,RT-PCR克隆全长血凝素(Hemagglutinin,HA)基因,并进一步克隆HA的主要抗原区HA1基因.将HA1克隆到原核表达载体pGEXKG,与谷胱苷肽(GST)融合表达,表达的融合蛋白GST-HA1以包涵体形式存在.包涵体经变性、复性处理,Western blot分析表明,表达蛋白具有良好的免疫学活性.ELISA检测发现,GST-HA1只能与H9亚型禽流感病毒抗体发生反应,而与H5和H7亚型禽流感病毒抗体无交叉反应.进一步将纯化的融合蛋白与佐剂混合后免疫Balb/c小鼠,免疫小鼠体内产生了较高滴度的特异性抗体.制备的HA1蛋白特异性强,具有良好的免疫原性,为禽流感病毒的鉴别诊断和禽流感疫苗开发奠定了基础.     

H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因的克隆与表达

根据已知H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因序列,设计、合成PCR引物。自H9N2亚型禽流感病毒感染的鸡胚尿囊液中提取总RNA,反转录后采用高可信度DNA聚合酶扩增血凝素基因,采用Invitrogen定向表达系统进行克隆表达,纯化获得N末端携带多聚组氨酸标签的重组血凝素,分子质量约75 ku。采用阳性血清经免疫印迹及ELISA分析重组血凝素的免疫反应性,结果表明,重组血凝素能与H9N2亚型病毒抗血清发生特异性结合,具有良好的免疫反应性。     

鸡病毒性关节炎琼脂扩散抗原制备方法的比较及应用

将呼肠孤病毒U.Conn.S1133株接种鸡胚和鸡胚成纤维细胞,采用PEG6000浓缩鸡胚尿囊液,饱和硫酸铵沉淀尿囊液和细胞上清液三种方法,制备的抗原均具有良好的特异性和敏感性,适于鸡只个体或鸡群检查。三种抗原在检出率上虽无差异,但细胞上清液制备的抗原在效价、沉淀线的清晰度方面优于其它两种抗原。用琼脂扩散试验对免疫后3周、11周、31周的祖代鸡进行抗体检测,检出率分别为100%、95%、90%,抗体效价最高达1:64。进口种鸡177份血样的检出率为49.2%。调查上海地区12个鸡群,阳性群9个,污染率在3.4%—53.7%。表明上海地区有本病污染。