贵州剑河白香猪Ⅱ系选育初报

贵州剑河白香猪是原始的小型猪种，毛色基本属于两头乌（称贵州剑河白香猪Ⅰ系）。为探索其毛色表型猪的种质，利用耳部有白色基因表型的这种香猪同质选配，产出黑白花耳香猪，再用花耳的香猪经３个世代同质选配，产生全白毛的香猪（称贵州剑河白香猪Ⅱ系）。经各世代后裔测定，Ⅱ系白香猪的体尺、体重与Ⅰ系相近；２月龄体重５～７ｋｇ，体高２５～３０ｃｍ；６月龄体重２５ｋｇ左右，体高３６～４２ｃｍ。具有矮、短、小、丰圆、肥腴的香猪特点，其它生产性状与Ⅰ系完相相同，是作实验动物的最佳原始猪种。     

剑白香猪7世代的繁殖性能测定

贵州香猪资源丰富，具有体型矮小、遗传稳定、行动灵繁、耐粗饲和抗病力强等特点。经产地长期的自然选择和人工选择，形成其近交程度较高而不易退化的特点，将为我国用猪作实验动物模型填补空白。贵州剑白香猪是其中的原始小型猪种之一，初步分为剑白香猪Ⅰ系（两头乌香猪）和剑白香猪Ⅱ系（全白毛香猪）。贵州大学从剑白香猪中纯系选育出全白毛系，丰富了香猪的类型，成为目前国内具有最完善谱系的白色原始香猪品系。     

贵州剑河白香猪的繁殖性能观测

香猪是我国的珍稀猪种，是作烤乳猪和其它猪肉产品加工的最佳原材料，更是作医用实验动物理想材料。因此，80年代以来一直受人们关注。白香猪更利于作猪肉产品加工和医用实验动物。 　　猪繁殖性能是保证猪生产取得经济效益的重要条件。1997年5月至1998年8月，对贵州剑河白、黑香猪的繁殖性能进行了观测，结果报告如下。 1　材料与方法 1.1　试猪来源 　　贵州剑河、黑香猪是1997年5月贵州大学动科系从“中国香猪之乡”的贵州黔东南州剑河县引到贵州大学动科系猪育种基地进行测定。 1.2　试猪管理     

小型猪发情周期和妊娠早期外周血清孕酮含量测定

本试验测定了５头贵州香猪和５头版纳微型猪发情周期和妊娠早期外周血清的孕酮含量。这两个品种发情周期血清孕酮含量有相似的变化，峰值均出现在发情周期的９－１２天，贵州香猪为２６．００ｎｇ／ｍｌ，版纳微型猪为２４．３０ｎｇ／ｍｌ。在妊娠早期的变化也大致相同。     

贵州香猪能量代谢与沉积规律研究

为促进贵州香猪的科学饲养和制订《贵州香猪饲养标准》提供技术参数,选用从江香猪,采用扣除蛋白质等消化能(DEpf)日粮设计和比较屠宰试验,对贵州香猪能量沉积代谢规律进行了研究。结果表明,在相同DEpf进食水平下,贵州香猪DE转化为ME的效率为95.84%,维持DE需要为484 W0.75,每1kg增重生长DE需要:7~16kg体重段为21.17 MJ,16~25kg体重段为22.60 MJ。建立了贵州香猪的能量需要模型:DE(MJ/d)=238.0853 W0.75-100.0708 W+0.0340 We+473.8475△W-1590.0288△W2+296395.1748△W2.6733e-398.7895(R2=0.9999,P<0.01)。     

贵州剑河白香猪和黑香猪组织器官的LDH同工酶比较

用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术测定6月龄贵州剑河白香猪和黑香猪的心、肝、肾、肺、胃、脾、小肠、眼肌和血清9种组织器官乳酸脱氢酶（LDH）同工酶。结果表明，贵州剑河白香猪和黑香猪各组织器官LDH同工酶的分布和含量差异不显著（P＞0．05），两个猪群的心、肝、肾、肺、胃、小肠和血清7种组织器官以LDH1＋LDH2为主，骨骼肌以LDH5为主，而脾脏LDH五种同工酶含量较均衡，A：B亚基之比接近1：1，发现控制LDH同工酶A亚基的基因出现变异。     

贵州白香猪母系与父系遗传检测

采用PCR测序技术分析贵州白香猪两品系(Ⅰ系、Ⅱ系)mtDNA D-loop区和Y染色体SRY基因编码区序列.结果表明,在遵循母系遗传的mtDNA D-loop区,贵州白香猪Ⅰ系具有3种单倍型H1、N2和H3;Ⅱ系具有1种单倍型H1;在遵循父系遗传的SRY基因编码区,两品系共享单倍型GWXP Ⅰ.说明贵州白香猪Ⅰ系具有3个母系血统,Ⅱ系具有1个母系血统;Ⅰ系和Ⅱ系具有1个父系血统.通过与GenBank上收录的其他猪品种的同源序列比对发现,贵州白香猪具有独特的线粒体遗传结构,且其线粒体基因纯合性较高.     

无特定病原(SPF)猪群的建立

SPF猪是指在母猪临产前采用剖腹取胎或无菌接产获得仔猪,然后在无菌状态下把仔猪送往隔离的仔猪舍内,与非SPF猪隔离饲养,以至它们能自然产生下一代SPF猪,进而形成SPF猪群。SPF猪群的建立,不仅可以有效地防止四大慢性传染病的传播和蔓延,也可以减少疾病的发生,提高猪的成活率、增加体重和降低饲料消耗,缩短育肥期,降低生产成本。     

贵州香猪维持的钙、磷需要研究

选择3.5月龄、遗传来源相似、体重9.83±1.78 kg的贵州从江香猪去势公猪6头,采用NFD+5%EHC无钙无磷纯合饲粮法进行代谢试验,以测定贵州香猪内源钙与内源磷的代谢规律。结果表明,贵州香猪每千克自然体重内源钙、磷排泄量分别为47.31、20.74 mg/d。贵州香猪维持的净钙、净磷需要分别为0.047 3、0.020 7 g/kg BW。     

贵州白香猪Gadd45G的cDNA克隆与序列分析

采用试剂盒提取RNA和RT-PCR法获得贵州白香猪Gadd45G基因cDNA序列,构建了贵州白香猪Gadd45G基因的pMD19亚克隆载体,并对该重组质粒进行测序分析,为贵州白香猪作为模式动物提供理论基础,为构建Gadd45G基因真核表达载体和转基因猪研究奠定基础。PCR、双酶切鉴定结果表明,已成功克隆的贵州白香猪Gadd45G基因的cDNA序列长度为480 bp。测序结果显示,贵州白香猪Gadd45G基因cDNA序列与普通猪、人类、家鼠、牛的同源性分别为99.6%、89.6%、90.2%、91.2%,氨基酸同源性分别为98.8%、95.6%、95.0%、96.2%。序列分析表明,贵州白香猪Gadd45G基因编码序列与普通猪相比,有两处发生碱基突变,其中一处为错义突变(第385处的G→A突变)使氨基酸由丙氨酸突变成苏氨酸。     

实验小型猪发情周期和妊娠早期外周血清孕酮含量的变化规律

测定了5头贵州香猪和5头上海小型猪发情周期和妊娠早期外周血清的孕酮含量.发现两个品种发情周期血清孕酮含量有相似的变化,峰值均出现在发情周期的9～12 d.贵州香猪为26.00 ng/mL,上海小型猪为24.36 ng/mL;妊娠早期的变化也大致相同.贵州香猪和上海小型猪在妊娠-3～12 d与发情周期-2～12 d的孕酮含量变化相近,妊振第12天峰值贵州香猪为21.40 ng/mL,上海小型猪为27.78 ng/mL在妊振12 d后两品种猪孕酮含量略有下降;16～20 d后又开始回升,并维持在较高水平.发情周期和妊娠早期外周血清孕酮含量16 d后有明显差异,可供早期妊娠诊断参考.     

贵州白香猪FSHß基因多态性与产仔数的关联分析

运用PCR-SSCP技术和直接测序技术,对贵州白香猪的FSHß基因编码区3个外显子SNPs位点进行检测,利用一般线性模型分析其与产仔数的关联性。结果在贵州白香猪FSHß基因外显子2中发现1个多态位点,对于初产母猪,AB基因型母猪比AA基因型母猪的产仔数多2.57头（P<0.05）;在外显子3中发现1个多态位点,对于初产母猪和经产母猪,AB基因型母猪比BB基因型母猪的产仔数分别多2.97头和2.08头（P<0.05）。B等位基因为优势等位基因。研究表明,FSHß基因可以作为贵州白香猪产仔性状改良的分子标记基因。     

贵州剑白黑香猪的亲缘的关系

用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,测定贵州剑河白,黑香猪血清转铁蛋白、前白蛋白、后白蛋白的遗传多态性,计算其基因频率。同时,利用其他学者的研究结果与对贵州剑河白,黑香狸与湖南,江西等省的部分地方猪种的遗传距离进行估算,利用类平均聚类法对它们之间的亲缘关系进行研究;并绘制了类平稳聚类图。结果表明,贵州剑白香与黑香猪的遗传距离最近,可以认为是同一品种而两个不同毛色的品系或亚群;贵州省剑河白香与黑香狸与湖南的汀     

贵州从江香猪与中国农大小型猪Ⅰ系的杂交性能

为加快贵州香猪资源的开发利用,培育出高品质的实验用小型猪,以贵州从江香猪为母本、中国农大小型猪Ⅰ系为父本进行杂交,测定杂交猪(农×从杂交猪)的繁殖性能和F1代的生长发育性能指标。结果表明:农×从杂交猪的平均窝产仔数为10.26头,窝断奶仔猪数为8.89头,仔猪初生重为0.68kg/头,与贵州从江香猪差异不显著(P0.05);农×从杂交猪F1代的生长速度缓慢,6月龄杂交猪平均体重为25.85kg,体高为42.44cm,体长为75.29cm,胸围为69.78cm,均显著低于纯繁贵州从江香猪(P0.05)。农×从杂交猪F1代体型矮小,生长发育缓慢,是较为理想的实验动物选育群。     

贵州剑河香猪头骨测定

用同条件下饲养的６月龄贵州剑河白，黑香猪屠宰，对其头骨采用大体解剖学方法进行解剖，观测其结构和记录数据结果为，白香猪的顶骨，颞骨均小于黑香猪，两猪的颅骨各骨的面积相近，差异均不显著（Ｐ〉０．０５）；前颌骨，鼻骨，泪骨，颧骨测定结果白季猪小于黑香猪两猪面骨的种间差异均不显著（Ｐ〉０．０５）。     

敌百虫中毒对贵州白香猪氧化应激及自由基损伤的影响

为探讨急性敌百虫中毒对贵州白香猪氧化应激和自由基损伤的影响,为贵州白香猪有机磷农药中毒诊断和治疗提供参考数据,采用兽用敌百虫对贵州白香猪进行经口急性毒性试验,观察试验猪临床中毒症状并用分光光度法检测其肝、脾、肺、肾等组织的乙酰胆碱酯酶(AchE)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、胆碱酯酶(CHE)活力及VC、VE水平。结果表明:中毒贵州白香猪体内存在严重氧化应激及自由基损伤;与对照相比,染毒处理试验猪的肝、脾、肺、肾中的AchE、CHE活力及VC、VE含量均呈下降趋势,SOD和POD活力则有所提高,说明,有机磷中毒导致乙酰胆碱酯酶活力受抑制,体内自由基反应加剧。     

贵州白香猪γ干扰素基因的克隆与序列分析

为获得贵州白香猪γ干扰素基因,以提取的经刀豆蛋白A诱导培养的贵州白香猪外周血淋巴细胞总RNA为模板,扩增全长猪γ干扰素基因,并克隆至pMD18-T Simple载体后测序分析。结果表明,pIFN-γ基因全长501bp,可编码166个氨基酸,其中前23位氨基酸为信号肽序列;pIFN-γ含有2个潜在N-糖基化位点;贵州白香猪与国内地方猪种之间pIFN-γ基因差异不大,具有很近的亲缘关系,其中与藏猪、成华猪、枫径猪、梅山猪的同源性达100%,而与内江猪的亲缘关系相对较远,与荣昌猪(DQ902588)亲缘最远。     

贵州白香猪的白细胞介素2基因的克隆及其序列分析

为获得贵州白香猪白细胞介素2基因,以提取的经刀豆蛋白A诱导培养的贵州白香猪外周血淋巴细胞总RNA为模板,扩增全长猪白细胞介素2(IL-2)基因,并克隆至pMD18-T Simple载体后测序。结果表明:贵州白香猪IL-2基因ORF长为465bp,可编码154个氨基酸,其中前20个氨基酸为信号肽,后134个氨基酸为成熟肽,具有一个潜在的N-糖基化位点;贵州白香猪除与FJ543109(99.4%)、Neijiang(98.7%)、JN851821(98.7%)、AB194099(98.5%)氨基酸一致性相对较低外,与其他猪源IL-2的一致性均为100%,而与其他种属动物的IL-2基因氨基酸一致性则较低,为11.9%～75%。     

小型猪发情周期和妊娠早期外周血清孕酮含量测定

本试验测定了5头贵州香猪和5头版纳微型猪发情周期和妊娠早期外周血清的孕酮含量。这两个品种发情周期血清孕酮含量有相似的变化,峰值均出现在发情周期的 9～12天,贵州香猪为 26.00ng/ml,版纳微型猪为24.30ng/ml。在妊娠早期的变化也大致相同。香猪和版纳微型猪在妊娠-3～12天与发情周期-2～12天的孕酮含量变化相近,妊娠 12天峰值香猪为 21.40ng/ml,版纳微型猪为 27.80ng/ml;在妊娠12天后两品种猪孕酮含量略有下降;16～20天后又开始回升,并维持在较高水平。发情周期和妊娠早期外周血清孕酮含量16天后有明显差异（P<0.01）,可供早期妊娠诊断参考。     

贵州地方猪品种脂蛋白脂酶基因第8内含子的多态性研究

以可乐猪、萝卜猪和香猪3个贵州地方猪种和欧洲猪种为材料,采用PCR-SSCP技术对脂蛋白脂酶（Lip-oprotein lipase,LPL）基因第8内含子的多态性进行了研究。以特异性PCR从样品基因组中扩增出163bp的DNA片段,经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,从两个猪群体的LPL基因第8内含子中都检测到了AA基因型和AB基因型,未检测到BB基因型;欧洲猪品种和贵州地方猪品种均以AB基因型占优势;与欧洲猪品种相比,贵州地方猪品种的B等位基因频率明显较高,A等位基因频率则较低。