有效阻断猪链球菌传播模式的探索

为了探索中越边境地区防控人感染猪链球菌的有效模式，试验选取3个猪场作为猪链球菌病免疫场和非免疫场，运用PCR和ELISA方法评估猪场免疫防控猪链球菌2型的效果，即选择边境地区东兴市、大新县和那坡县作为猪链球菌2型免疫示范区，对猪群接种猪链球菌2型疫苗后监测屠宰场和免疫场的猪链球菌2型抗体水平，以及通过培训等方式对普通群众和密切接触的相关人员普及猪链球菌病防控知识，并调查了免疫示范区人感染猪链球菌的情况。结果表明：免疫场猪群在免疫猪链球菌2型疫苗2次后产生较高的抗体水平，能极显著降低猪链球菌的感染率(P<0.01)。2016—2020年免疫示范区东兴市、大新县和那坡县猪链球菌2型疫苗免疫平均密度达到73.24%,免疫场猪链球菌2型抗体水平合格率为93.37%。3个县(市)实行免疫后，连续5年人感染猪链球菌数为0。说明在猪场进行猪链球菌2型疫苗免疫，能有效阻止猪群感染猪链球菌；在中越边境建设猪链球菌免疫示范区，通过加强疫苗免疫、抗体监测及防控培训切断了猪链球菌传人的途径，实现了人员零感染猪链球菌。     

2015年华中地区猪链球菌2型感染的血清学调查

监测华中地区22个未免疫猪链球菌疫苗猪场2015年不同月份、不同猪群的猪链球菌2型(SS2)抗体水平,以期揭示SS2的感染流行情况。共收集923份血清样品,结果 442份为SS2抗体阳性,阳性率为4789%,表明SS2在华中地区感染普遍存在;统计分析发现不同月份感染阳性率差别较大,其中6~9月份最高,说明该病与季节有一定的关系,在夏季尤其应该注意该病的防控;不同阶段猪群统计结果表明保育猪阳性率最低,更应做好保育猪的SS2免疫防控工作。     

湖南省猪链球菌2型病流行情况调查

应用酶联免疫吸附法(EUSA)和细菌分离鉴定,对湖南省9个市33个猪场的631份血清样品和126份病死猪内脏组织样品进行猪链球菌2型病血清学调查和细菌分离鉴定,结果血清中猪链球菌2型的抗体阳性率为48.0%;所调查的9个市均有不同程度感染猪链球菌的猪场,场阳性率为84.8%;不同日龄猪群阳性率分别为种猪65.2%、肥猪51.3%、中猪39.8%、小猪25.2%;健康猪群与发病猪群抗体阳性率分别为41.8%和58.5%.分离出的12株猪链球菌2型分布在7个市的10个猪场,说明湖南省猪链球菌2型流行面广.     

猪流感H1亚型和猪链球菌2型临床分离血清的抗体检测

以各省份未免疫猪链球菌病疫苗和猪流感疫苗猪场的临床发病猪分离的4 661份猪血清作为检测对象,使用猪流感病毒(H1亚型)ELISA抗体检测试剂盒和猪链球菌2型ELISA抗体检测试剂盒分别检测猪流感病毒(H1N1)和猪链球菌2型(SS2)的抗体,将检测结果从时间、空间进行分析,以探究猪流感与猪链球菌感染的基本规律,从而为疾病的防治提供借鉴和指导。检测结果表明,初春4月左右是猪流感流行的季节,猪流感H1N1抗体平均阳性率为45.19%;猪链球菌一般在7-11月流行,猪链球菌2型(SS2)抗体平均阳性率为54.85%,双阳性的血清检出率在10-12月最高,双阳性的血清检出率最高的是湖南省。     

猪链球菌Ⅱ型高免卵黄抗体粉的研制

试验用猪链球菌Ⅱ型CVCC606株制备疫苗免疫产蛋鸡,首免后7d检测到低水平的卵黄抗体,再经3次强化免疫,于末次免疫后7d卵黄抗体效价达到9log2,最高效价达到10log2,高水平卵黄抗体可维持到末次免疫后50d,随后出现下降。收集抗体效价大于9log2的高免蛋卵黄,经喷雾干燥成卵黄抗体粉,效价在10log2以上,卵黄抗体粉质量稳定,于室温(25℃)保存6个月抗体水平无明显降低。体外抑菌试验表明,高免卵黄抗体粉可有效抑制猪链球菌Ⅱ型CVCC606株和猪链球菌II型强毒分离株。高免卵黄抗体粉可有效预防猪链球菌Ⅱ型菌株对BALB/c小鼠的致死性感染。     

临床健康猪群猪链球菌2型带菌率流行情况调查

为了解钦州市临床健康猪群中猪链球菌2型的流行情况,采用PCR方法对采集的病料进行检测分析。374份样品的PCR检测结果显示,链球菌、猪链球菌、猪链球菌2型的带菌率分别为81.8%、48.9%、2.9%,表明钦州市健康猪中猪链球菌带菌率高,但猪链球菌2型带菌率较低。     

猪链球菌自溶素的原核表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立

【目的】 建立快速、准确检测猪链球菌自溶素（atl）抗体的间接ELISA方法。【方法】 根据GenBank登录的猪链球菌atl基因序列设计1对引物,采用PCR方法从猪源链球菌中获得atl基因序列;构建pET-32a-atl和pGEX-4T-1-atl重组质粒,并将重组质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞中进行诱导表达;以表达纯化后的atl-His融合蛋白为免疫原,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体;以兔多克隆抗体为一抗,用Western blotting方法检测atl-GST融合蛋白的反应原性;以纯化后的atl-GST融合蛋白为包被抗原,猪链球菌感染阳性血清作为标准血清,建立猪链球菌自溶素抗体的间接ELISA检测方法。利用本试验建立的ELISA方法与商用猪链球菌2型ELISA抗体检测试剂盒同时对184份血清样品进行检测并用本试验建立的方法进行临床样品检测。【结果】 从猪链球菌中成功扩增出atl基因;构建的重组质粒,经诱导表达和纯化,获得大小为40 ku的atl-His和48 ku的atl-GST融合蛋白;经Western blotting验证,兔抗atl-His抗血清与atl-GST融合蛋白具有良好的反应原性;间接ELISA结果显示,该检测方法的阴阳临界值为0.318,阳性血清稀释至1：1 280检测仍为阳性;批内批间变异系数均<10%,表明该方法具有良好的重复性及敏感性。本试验所建立的ELISA方法检测出96份阳性样品,商用猪链球菌2型ELISA抗体检测试剂盒检测出66份阳性样品,符合率为71.7%。应用建立的方法检测458份不同饲养阶段的猪血清样品,其中检出277份阳性样品,阳性率为60.4%。【结论】 本试验成功建立了检测猪链球菌自溶素抗体的间接ELISA方法并进行了初步应用,为猪链球菌病血清流行病学调查奠定了基础。     

广东省东莞市屠宰场猪群猪链球菌2型感染及环境污染状况调查

为了解屠宰环节猪群猪链球菌2型感染及环境污染情况,评估屠宰环节猪链球菌2型传播风险,在广东省东莞市所有的10个生猪屠宰场采集570份猪扁桃体、1 200份环境拭子样品,以及120份猪胴体和120份猪内脏表面拭子样品,采用荧光PCR方法进行猪链球菌2型核酸检测。结果显示:猪扁桃体样品的猪链球菌2型阳性率为0.88%;屠宰环境拭子样品的阳性率为3.17%,其中待宰区为3.50%,屠宰区为8.50%,分割区为4.00%,屠宰工具为3.00%;在车间出入口的猪胴体和猪内脏表面拭子样品中检出猪链球菌2型阳性,其中猪胴体阳性率为0.83%,猪内脏阳性率为4.17%。结果表明,东莞市屠宰场猪群中存在猪链球菌2型感染,猪群携带的病原对屠宰加工环境以及屠宰加工产品可造成不同程度的污染。因而屠宰场存在传播猪链球菌2型的风险,需要加强对屠宰场环境及屠宰用具的清洗消毒以及相关职业人群的自身防护教育。     

河池市屠宰猪群中猪链球菌2型的流行病学调查

从我市4个县区的屠宰场采集屠宰猪扁桃体426份,其中东兰195份、宜州78份、环江35份、巴马118份.采用多重PCR方法检测样品中猪链球菌2型的流行病学情况.检出240份(56.34%)样品猪链球菌(SS)阳性,其中7份(1.64%)携带猪链球菌2型(SS2).表明河池市屠宰猪群中广泛存在猪链球菌,但猪链球菌2型带菌率较低.     

猪链球菌通用型和2型双重荧光定量PCR快速检测技术的建立和应用

为快速区分检测猪链球菌血清型2型和其他血清型,以猪链球菌的保守基因gdh和2型特异性基因cps2J为靶基因设计引物和TaqMan探针,建立猪链球菌通用型和2型特异性的双重荧光定量PCR检测方法,并与常规PCR方法一起对临床样品进行检测。结果显示:本方法在1.5h内可完成猪链球菌和2型猪链球菌同时检测,与其他细菌无交叉反应;检测灵敏度可达5拷贝数,标准曲线相关系数大于0.999,批内和批间CV均小于1.25%。对67份临床样品检测显示猪链球菌和2型猪链球菌检出率分别为79.1%和35.8%,与常规PCR检测结果的符合率为92.5%和89.6%,kappa值为0.800和0.757,具有极好的一致性。成功建立了灵敏、特异和稳定的双重荧光定量PCR方法,实现了猪链球菌和2型猪链球菌同时及快速诊断。     

安徽省2015年猪口蹄疫定点监测分析

为了解安徽省猪口蹄疫感染状况和免疫情况,使用荧光RT-PCR和ELISA检测方法,对安徽省12个生猪固定监测点采集的578份扁桃体样品和578份血清样品分别开展口蹄疫（通用型）病毒核酸、猪A型口蹄疫抗体和猪O型口蹄疫抗体检测。结果显示：猪口蹄疫（通用型）病毒核酸阳性率为0,A型抗体阳性率为25.95%,O型抗体合格率为32.87%。结果表明,安徽省中小型生猪养殖场口蹄疫防控情况较好;部分猪场使用了A型口蹄疫疫苗免疫,但效果并不理想;O型口蹄疫抗体合格率不高,除免疫时间短的因素外,说明仍有部分猪场不重视口蹄疫免疫。     

2016年江苏省猪口蹄疫监测结果分析

为了解江苏省猪口蹄疫感染和免疫情况,采用荧光RT-PCR和ELISA方法,对收集的8000份猪组织样品和2718份猪血清样品分别进行口蹄疫病毒核酸和O型口蹄疫抗体检测.数据显示,口蹄疫病毒核酸阳性率为0;O型口蹄疫抗体合格率为68.95%.结果表明,江苏省规模场和屠宰场猪口蹄疫防控情况较好;O型口蹄疫抗体合格率略低于70%,说明仍有个别场户的口蹄疫免疫工作存在瑕疵.     

四川省部分猪场猪链球菌病免疫前后的病原及抗体调查

猪链球菌是重要的人兽共患病病原。本研究通过对四川省部分规模猪场猪链球菌灭活疫苗免疫前、一次免疫后及二次免疫后,分别对猪进行三次采样,检测猪扁桃体拭子中的病原和血清样本抗体水平。结果表明:与免疫前相比,二次免疫后60 d,猪链球菌带菌率由8.75%降到0,而抗体阳性率11.25%上升到100%。同时,部分未免疫猪群存在猪链球菌的隐性感染,猪链球菌病灭活疫苗免疫后,明显减少了猪群中猪链球菌的带菌率,整个猪群未发生猪链球菌病病例。免疫预防有效降低了猪群中猪链球菌带菌率和感染率,是防控猪链球菌病的重要措施之一。     

一例猪场多病原混合感染的诊断与分析

为了对一例规模化猪场发病病例所患疾病进行诊断,同时了解该猪场的抗体水平及病原感染情况,试验对该猪场的血清样品、鼻拭子、粪便样品及组织样品进行血清学和病原学检测。结果表明:发病猪组织样品中蓝耳病病毒阳性率为71. 4%、猪圆环病毒2型阳性率为85. 7%、肺炎支原体阳性率为85. 7%、伪狂犬病病毒阳性率为14. 3%、副猪嗜血杆菌阳性率为71. 4%。鼻拭子中猪肺炎支原体阳性率为16. 3%。血清样品中猪瘟病毒抗体、蓝耳病病毒抗体阳性率达到80%以上,抗体水平较高;伪狂犬病病毒g E抗体阳性率达到34. 8%;肺炎支原体疫苗只免疫了仔猪,全群抗体阳性率为59. 3%;猪圆环病毒2型疫苗全场未免疫,而抗体阳性率却高达77. 1%。粪便样品中A群轮状病毒阳性率为66. 7%;球虫阳性率为100%。说明蓝耳病病毒、猪圆环病毒2型、肺炎支原体、伪狂犬病病毒、副猪嗜血杆菌、轮状病毒和球虫是该场的主要病原,应加强防控,提高猪群的免疫水平,降低猪群的感染风险。     

河北部分地区猪圆环病毒2型ELISA检测与分析

为分析河北部分地区不同猪场、不同阶段猪圆环病毒病2型(PCV-2)的感染情况。采集血清样品248份,采用PCV抗体诊断试剂盒(PCV-2-ELISA)检测其抗体水平及其阳性率。结果显示,采集的248份血清样品中,PCV-2抗体阳性216份,阳性率为87.1%,其中断奶仔猪PCV-2抗体阳性率为93.9%,后备猪PCV-2抗体阳性率88.0%,经产母猪PCV-2抗体阳性率84.1%;1～3胎母猪PCV-2抗体阳性率最高,分别为94.1%、91.3%、90.9%;4～6胎母猪PCV-2抗体阳性率分别为87.9%、84.2%、75.0%。该地区PCV-2感染率较高,免疫效果较差,该研究为该地区的猪PCV-2的防控提供研究基础。     

陕西部分猪场PCV2抗体及病毒检测分析

为了解陕西省猪群中猪圆环病毒2型(PCV2)感染及其免疫抗体情况,2016-2017年间,在陕西省7个地区21个猪场采集544份血清样品(其中8个免疫猪场进行PCV2疫苗免疫,采集320份血清样品;13个非免疫猪场未进行PCV2疫苗免疫,采集224份血清样品),分别通过ELISA方法检测PCV2血清抗体及PCR方法检测PCV2核酸。结果显示,采集的544份血清中PCV2血清抗体平均阳性率为68%(368/544),其中免疫猪场为85%(271/320),非免疫猪场为43%(97/224);PCV2核酸平均阳性率为19%(103/544),其中免疫猪场为10%(32/320),非免疫猪场为32%(71/224)。结果表明,在PCV2疫苗免疫猪场和非免疫猪场均存在PCV2感染情况,疫苗免疫在一定程度上可以减少PCV2的感染,但是并不能完全阻止PCV2的感染。在防控PCV2感染工作中,除了做好生物安全工作以外,疫苗免疫接种是防止病毒感染的有效措施,但还要做好免疫猪抗体检测工作,减少病毒感染,防止猪圆环病毒相关疾病的发生。     

2016年四川省猪链球菌2型感染的血清流行病学调查

猪链球菌是一种重要的人兽共患病原菌,其中以猪链球菌2型致病性最强。本研究通过ELISA方法,对2016年采集自四川省21市(州)的1 604份猪血清样品进行猪链球菌2型的检测。结果表明:猪链球菌2型的阳性检出率为9.41%(151/1604),其中规模场阳性检出率为7.67%(66/860),散养户阳性检出率为11.42%(85/744)。本研究为四川地区猪链球菌病的防控提供了理论依据。     

屠宰场猪链球菌分离菌株分型及其致病性和耐药性分析

为了解吉林省猪链球菌的流行情况,从屠宰场采集的猪咽拭子和鼻拭子样品中分离鉴定猪链球菌,并进行菌株血清型、基因型和毒力表型的鉴定,以及致病性和耐药性的分析。结果表明,从100份样品中共分离鉴定猪链球菌104株,其中29株鉴定为血清2型、9型和1型等几种常见的致病性血清型,其他75株不属于常见的致病性血清型。血清2型的菌株中,2株经鉴定为ST1基因型和mrp+epf+sly+毒力型,并经动物试验鉴定为强毒菌株;其他菌株均为ST28基因型和mrp+epf-sly-毒力型,具有中等毒力。血清9型的菌株,均为mrp-epf-sly-毒力型,动物试验鉴定均为强毒菌株。根据Kirby-Bauer纸片扩散法的药敏试验结果,98%的猪链球菌分离株对四环素耐药;对大环内酯类、克林霉素和链霉素的耐药率都在50%以上;对β-内酰胺类、氯霉素和喹诺酮类抗生素的耐药率小于20%。总体分析,从屠宰场分离的猪链球菌强毒菌株所占的比例并不高,但是菌株多重耐药的情况非常严重。     

2009-2010年新疆地区活禽市场肉鸡禽流感H5抗体监测与分析

为了解新疆地区活禽市场中肉鸡禽流感H5抗体的情况,对2009-2010年新疆五个地区八个大型活禽批发市场采集的37批次1225份血清样品进行了AIH5抗体监测。结果表明,AIH5抗体效价≥4.0log2样品占总样品率的32.5%,0效价样品率达到54.5%;不同地区和不同市场的样品AIH5抗体效价存在较大差异;在37批次样品中有9批次样品来自于免疫鸡群,抗体效价≥4.0log2样品率达到99.2%以上;28批次样品来自于非免疫鸡群,0效价样品率高达71.3%。     

辽宁省猪链球菌流行株主要血清型毒力因子检测及其致病性

为了解辽宁省猪链球菌流行菌株主要血清型毒力因子分布特征及致病性,依据猪链球菌属保守基因及血清型特异性基因,从辽宁地区采集猪链球菌疑似病例肺脏、肝脾、脑、关节液等样品进行猪链球菌及其血清类型鉴定;应用猪链球菌6种主要毒力因子特异性基因扩增检测方法,检测所分离到的不同血清类型猪链球菌的毒力因子分布情况,并应用小鼠攻毒试验和病理学技术对其致病性进行观察研究。结果显示:从辽宁地区采集的72个样品中共分离到23株猪链球菌,主要血清型有1,2,7型,其中SS1型4株,SS2型2株,SS7型5株。其余12株未确定血清型。SS1、SS2、SS7型阳性率分别为17.39%,8.69%,30.43%。毒力因子检测结果显示,上述6种毒力因子检出率分别为100%,66.6%,25%,16.7%,75.0%,58.3%,其中SS2均具备6种毒力因子,SS1、SS7和血清型阴性株猪链球菌均具有部分毒力因子,与SS2的差异毒力因子为epf。SS2可引起小鼠的急性败血症以及脑膜炎,SS1、SS7均可引起小鼠发病,但各器官的损伤则较轻。SS1、SS2、SS7脑内接种均可引起小鼠脑膜炎,炎症反应SS2最重,SS1次之,SS7最轻。