CDNF-BMSCs移植治疗帕金森病的试验研究

采用Lipo 2000试剂将重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-CDNF(大脑多巴胺能神经营养因子)转染至骨髓间充质干细胞(BMSCs);确认构建CDNF-BMSCs成功后,以脑立体定位技术为帕金森病(PD)模型大鼠进行纹状体内CDNF-BMSCs移植治疗;在治疗后不同时间点检测试验动物的旋转行为;利用免疫组织化学、WB技术检测纹状体内CDNF及酪氨酸羟化酶(TH)的表达变化,探讨CDNF-BMSCs移植治疗PD的效果。结果表明:细胞移植治疗2周后,CDNF-BMSCs组大鼠的行为学显著改善,纹状体内CDNF蛋白表达量极显著增加、TH蛋白表达量显著增加;同时,CDNF-BMSCs组动物脑纹状体内CDNF、TH阳性细胞数均随时间逐渐增多。这一研究为基因治疗PD等神经退行性疾病提供了试验依据。     

基于DirectX的地貌晕渲实现机制研究

目的:探讨偏侧帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠黒质致密部(SNpc)胶质细胞的变化.方法:6-羟多巴胺(6-OHDA)立体定向注射制备偏侧PD大鼠模型.采用免疫组化方法观察大鼠黒质致密部酪氨酸羟化酶(TH)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、增殖细胞核抗原(PCNA)和S-100蛋白免疫阳性细胞并对其面密度进行定量分析. 结果:帕金森病组大鼠毁损侧SNpc部位的TH免疫阳性面密度较正常组大鼠明显减少(P<0.01),而GFAP、PCNA、S-100免疫阳性面密度则明显增多(P<0.01).结论:PD大鼠毁损侧SNpc部位存在明显的胶质细胞增生;SNpc部位的胶质细胞可能影响着PD的发生及其严重程度.     

迷迭香酸甲酯对6-OHDA所致脑内氧化损伤的影响

采用脑内定位注射6-羟基多巴胺(6-OHDA)建立帕金森病小鼠模型,以阿朴吗啡诱导的转圈试验、转棒试验检测小鼠的运动功能,免疫组织化学染色法检测各组小鼠纹状体区TH阳性纤维的量,以化学比色法测定小鼠脑内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及丙二醛(MDA)活性水平,以Western-blot检测小鼠纹状体区SOD1、SOD2和Nrf2水平,q-PCR检测各组脑内NQO1、Sod1、Sod2、Cat和Gpx1水平。结果表明:迷迭香酸甲酯可显著减少阿朴吗啡诱导的PD小鼠旋转圈数量,增加PD小鼠在转棒上的停留时间、纹状体区TH阳性纤维量及SOD1、SOD2和Nrf2的蛋白水平。结果提示迷迭香酸甲酯对6-OHDA诱导的PD小鼠多巴胺能神经元损伤有显著的保护作用,其可能通过抑制脑内氧化应激水平而发挥神经保护作用。     

白芍提取物对MPTP致帕金森病小鼠的保护作用及机制的研究

为了探讨白芍(Radix paeoniae Alba)提取物对MPTP(1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶)致帕金森病小鼠的保护作用,试验采用不同剂量的白芍提取物(0.75、1.50、3.00 g生药/kg体重)灌喂小鼠,每日一次,连续15 d。第八天起所有小鼠每日腹腔注射MPTP 1次共8次,建立小鼠帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型,通过检测小鼠的自主活动、爬杆能力、滚轴能力及悬挂能力等行为学表现,同时检测小鼠脑黑质中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)水平的变化来评价白芍提取物对PD小鼠的影响。结果显示,经MPTP诱导的小鼠,其自主活动次数显著减少、爬杆时间差值显著增加、附着能力评分显著降低;经高剂量白芍提取物预处理后能显著(P0.05)增加小鼠在测试时间内的自发站立次数,显著(P0.05)缩短爬杆时间差值,显著(P0.05)提高附着能力分值,极显著(P0.01)提高小鼠脑内SOD、GSH-Px水平,MDA水平极显著(P0.01)。     

慢性缺氧和促炎性细胞因子刺激对大鼠十二指肠TH和urocortin表达的影响

【目的】探讨在慢性缺氧和炎性刺激影响下,大鼠十二指肠粘膜层酪氨酸羟化酶(TH)和尿皮质素(Urocortin,Ucn)的表达变化,为阐明慢性缺氧和炎性刺激影响十二指肠功能活动和应激反应机制提供形态学依据。【方法】建立慢性缺氧和促炎性细胞因子rmIL-1β刺激的大鼠模型,采集供试大鼠十二指肠,制备切片,用荧光免疫组织化学方法观察TH和Ucn的表达变化。【结果】慢性缺氧引起十二指肠粘膜固有层中的TH阳性细胞数显著减少,这种作用与缺氧的时间呈负相关(P0.01);而炎性细胞因子刺激后,十二指肠粘膜固有层中的Ucn阳性细胞数增加(P0.05)。【结论】慢性缺氧刺激可能通过十二指肠中TH的表达减少而使其生理功能减弱;炎性细胞因子刺激引起Ucn表达增加,可能是因为其参与了肠对缺氧的应激反应。     

日本真海带褐藻聚糖硫酸酯降血脂功效及其相关基因表达研究

为研究日本真海带Laminaria japonica褐藻聚糖硫酸酯(LF)的降血脂效果及其机制,以高脂血症Wistar大鼠模型为对象,试验设置空白对照组、模型组、阳性药物组及LF低剂量(100 mg/kg·d)、LF高剂量(300 mg/kg·d)组,每日投饲一次、灌胃一次,试验共进行12周,在第4、8、12周时测定各组血清脂质指标、肝脏抗氧化酶活性及胆固醇代谢、脂质合成与分解相关基因的表达,并观察其肝脏组织变化。结果表明:日本真海带褐藻聚糖硫酸酯的总糖含量为75.27%、硫酸基含量为19.58%,LF主要由岩藻糖(41.61%)和半乳糖(24.90%)单糖组成,同时还含有葡萄糖、葡萄糖醛酸、木糖、果糖;降血脂试验中,通过与模型组相比,LF对高脂饲料引起的Wistar大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平上升有显著的抑制作用(P0.05),灌胃12周后效果最佳;灌胃LF 12周后,Wistar大鼠的高密度脂蛋白(HDL-C)水平显著提升(P0.05)、低密度脂蛋白(LDL-C)水平显著降低(P0.05);灌胃高剂量LF 8周和12周时对大鼠肝脏MDA水平表现出显著抑制作用(P0.05),灌胃LF后可显著提升Wistar大鼠肝脏SOD和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性(P0.05);灌胃LF组大鼠肝脏HMG-CoA表达量下调和LCAT表达量上升,表明LF降血脂作用主要通过控制胆固醇和脂肪酸合成实现的,SREBP-1c表达量下调和SCD1表达量上升,表明LF能减缓脂质合成;肝组织显微结构观察显示,喂食LF的大鼠肝脏脂肪化显著降低。研究表明,真海带褐藻聚糖硫酸脂通过抑制胆固醇和脂肪酸的合成、促进脂肪的分解从而达到降血脂作用,其降血脂效果与降血脂药物相当,可作为开发新型降血脂保健食品或药品的原料。     

原花青素对铁负荷大鼠肝脏功能及TfR2、hepcidin基因表达的影响

为探讨原花青素对铁负荷致大鼠肝损伤的影响,通过监测肝功能、病理切片及转铁蛋白受体-2(TfR2)、铁调素(hepcidin)基因表达,将40只SD大鼠随机分为对照组、原花青素组、铁负荷组和试验组(铁负荷+原花青素)。ICP法辅以肝脏普鲁士蓝染色判别铁负荷大鼠模型是否建立成功;相关试剂盒检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的活性;HE染色观察肝组织形态学变化;Real-Time PCR检测肝组织中TfR2、hepcidin基因表达的变化。与对照组相比,铁负荷组Fe及ALT、AST水平显著升高(P0.05),肝组织结构严重紊乱,hepcidin基因的表达量显著下降(P0.05),TfR2基因的表达无明显差异;原花青素组Fe显著降低(P0.05),ALT、AST水平无显著性变化,肝组织结构正常,TfR2与hepcidin基因的表达量显著下降(P0.05)。与铁负荷组相比,试验组ALT、AST水平显著降低(P0.05),肝组织紊乱程度减轻,Fe含量、TfR2及hepcidin基因的表达量均略降低,但差异无统计学意义。原花青素可以抑制铁的摄入量;在机体铁过载状态下,原花青素抑制铁吸收的能力可以在一定程度上改善肝功能。     

银杏叶提取物对氯化铝诱导大鼠的氧化应激及神经递质变化的影响

试验选取24只成年雄性白化病大鼠,随机分为4组。对照组正常饲喂;试验2组饲料中添加银杏叶提取物,剂量为每kg体重饲喂200 mg;试验3组饲料中添加氯化铝,每kg体重饲喂10 mg;试验4组饲喂银杏叶提取物和氯化铝,每kg体重饲喂200 mg银杏叶提取物,饲喂10 mg氯化铝。试验为期3个月。结果表明,大鼠饲料中添加氯化铝显著增加了硫代巴比妥酸反应物质(P0.05),而谷胱甘肽、过氧化氢酶含量显著降低,脑和睾丸组织匀浆中超氧化物歧化酶含量显著降低(P0.05)。脑组织中去甲肾上腺素、多巴胺、5-羟色胺含量显著降低(P0.05)。血清中锌离子含量、铜离子含量显著降低(P0.05),铁离子含量显著增加(P0.05),而镁离子含量无显著变化。此外,血清中碱性磷酸酶、酸性磷酸酶含量显著增加(P0.05),睾酮含量显著降低(P0.05)。组织学检查发现,试验4组中,大鼠脑组织和睾丸组织发生了一些退行性改变,但生化和组织学方面显著改善。因此,银杏叶对大鼠的保护作用可能是由于其抗氧化性能。     

社会隔离对雌性小鼠动情周期及中枢ERα和TH免疫活性表达的影响

雌激素受体(ERα)和多巴胺(DA)可参与雌性动物动情周期调节,故本研究通过酪氨酸羟化酶(TH)标记DA神经元,探讨了社会隔离对雌性动情周期及ERα和DA的影响。成年雌性ICR小鼠社会隔离10 d后,检测其动情周期变化及动情期和动情间期中枢ERα-IR和TH-IR神经元表达。结果发现,社会隔离延长了雌鼠的动情前期和动情期(P0.05),但对动情后期和动情间期没有影响;社会隔离和动情周期均会显著影响终纹床核(BNST)、内侧视前区(MPOA)和下丘脑弓状核(AR)的ERα-IR神经元表达(P0.05),并对AR的ERα-IR表达和中脑腹侧被盖区(VTA)的TH-IR神经元表达有交互影响(P0.05),表现为社会隔离减少动情期AR的ERα-IR表达(P0.05),增加动情期和动情间期TH-IR表达(P0.05),且对动情期的影响更明显。提示社会隔离会干扰雌鼠的动情周期,ERα和DA在特定脑区的变化对此具有重要调制作用。     

大豆异黄酮对大鼠肝脏脂肪酸代谢的影响

【目的】研究不同剂量大豆异黄酮对大鼠肝脏脂肪酸代谢的影响并对其机理进行探讨。【方法】试验选取40只6周龄SD大鼠并随机分为对照组和低、中、高剂量组,每组10只。将不同剂量的大豆异黄酮(0、50、250、500 mg/kg)连续4周经口灌胃并记录大鼠每周体重变化;利用荧光定量PCR检测大鼠肝脏中固醇调节元件结合蛋白1(SREBP-1c)、乙酰辅酶A羧化酶α(ACC1)、脂肪酸合成酶(FAS)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)以及甘油三酯水解酶(ATGL)mRNA表达水平。【结果】与对照组相比,中、高剂量组大鼠体重极显著(P0.01)降低并呈剂量依赖性;低剂量组甘油三酯含量显著下降(P0.05),中剂量组总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白含量显著下降(P0.05),高剂量组甘油三酯和低密度脂蛋白含量极显著下降(P0.01);肝脏HE染色未见异常病理变化,油红O染色可见中、高剂量组脂滴明显减少;低剂量组大鼠肝脏中FAS、ACC1 mRNA表达量显著降低(P0.01),中、高剂量组FAS、SREBP-1C和ACC-1mRNA表达量显著降低(P0.05或P0.01),而PPARα和ATGL mRNA表达量显著升高(P0.05或P0.01)。【结论】大豆异黄酮可通过抑制SREBP-1c、ACC1和FAS,增加ATGL和PPARα的基因表达,从而影响肝脏脂肪酸代谢。     

Normalization of spiroperidol binding in the denervated rat striatum by homologous grafts of substantia nigra

Transplantation of embryonic substantia nigra into the adult rat brain decreases the motor asymmetry that is produced by dopamine receptor supersensitivity after a unilateral lesion of the substantia nigra. The authors report that this effect of transplantation is specific to grafts of substantia nigra. They also report that, in conjunction with the decrease in motor asymmetry, these grafts cause postsynaptic dopaminergic binding sites to return to normal density as measured by tritiated spiroperidol autoradiography. Thus, in animals with brain lesions, grafts of substantia nigra produce a long-term alteration in the functional status of host brain cell receptors that is associated with a reduction in the behavioral deficit.     

Memory disruption by electrical stimulation of substantia nigra, pars compacta

Electrical stimulation of the substantia nigra, pars compacta, of albino rats while they were learning a simple foot shock task of withdrawal and response suppression disrupted retention of that task 24 hours after original learning. Stimulation in the reticular zone of the substantia nigra was without effect on retention performance. Stimulation through electrodes in the medial lemniscus, red nucleus, or brainstem regions surrounding the substantia nigra, pars compacta, was also ineffective. Original learning performance, measured as time to criterion, was unimpaired by the stimulation. Posttrial stimulation in the substantia nigra, pars compacta, but not in adjacent structures, also disrupted retention performance.     

血管紧张素Ⅲ受体AT1R、AT2R和ERK1在大鼠主动脉损伤中的表达及其意义

目的探讨大鼠主动脉损伤后血管紧张素受体（AT1R、AT2R）和胞外信号调控激酶1（ERK1）表达及其意义。方法 36只SD大鼠随机分为正常组、单纯损伤组、PD123319（AT2R拮抗剂）组、缬沙坦（AT1R拮抗剂）组、PD98059（ERK1拮抗剂）组、缬沙坦＋PD98059组,其中后4组在主动脉球囊损伤模型制作前、后给予相应的受体拮抗剂。造模后7d处死,用RT-PCR和Western blotting检测降主动脉中层及内膜中AT1R、AT2R和ERK1表达。结果单纯损伤组、PD123319组和PD98059组AT1R表达明显高于正常组、缬沙坦组和缬沙坦＋PD98059组（P〈0.01）。PD123319组AT2R表达明显高于其它4组（P〈0.01）。与单纯损伤组比较,缬沙坦组、PD98059组及缬沙坦＋PD98059组ERK1表达明显下调（P〈0.01）。结论 AT2R可能通过下调AT1R激活的ERK1来抑制新生内膜形成,AT2R可望成为治疗血管成形术后再狭窄的新靶点。     

Neurodegeneration prevented by lentiviral vector delivery of GDNF in primate models of Parkinson's disease

Lentiviral delivery of glial cell line-derived neurotrophic factor (lenti-GDNF) was tested for its trophic effects upon degenerating nigrostriatal neurons in nonhuman primate models of Parkinson's disease (PD). We injected lenti-GDNF into the striatum and substantia nigra of nonlesioned aged rhesus monkeys or young adult rhesus monkeys treated 1 week prior with 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP). Extensive GDNF expression with anterograde and retrograde transport was seen in all animals. In aged monkeys, lenti-GDNF augmented dopaminergic function. In MPTP-treated monkeys, lenti-GDNF reversed functional deficits and completely prevented nigrostriatal degeneration. Additionally, lenti-GDNF injections to intact rhesus monkeys revealed long-term gene expression (8 months). In MPTP-treated monkeys, lenti-GDNF treatment reversed motor deficits in a hand-reach task. These data indicate that GDNF delivery using a lentiviral vector system can prevent nigrostriatal degeneration and induce regeneration in primate models of PD and might be a viable therapeutic strategy for PD patients.     

Aged rats: recovery of motor impairments by intrastriatal nigral grafts

Dissociated cell suspensions, prepared from the substantia nigra and septal regions of rat embryos, can be grafted to the depths of the caudate-putamen and hippocampus of aged rats. The grafts were rich in dopamine-containing and acetylcholinesterase-positive neurons and had produced extensive new dopaminergic and cholinergic terminal networks in the host neostriatum and hippocampus, respectively. The intrastriatal dopaminergic grafts were associated with a significant improvement in motor coordination in the aged rats. This result suggests that the intracerebral grafting technique may provide a new tool for exploring the role of dopaminergic and cholinergic deficits in the neurological and behavioral impairments associated with aging.     

舒胃汤对功能性消化不良大鼠胃肠平滑肌Bcl-2、Caspase-12表达的影响

目的 通过观察舒胃汤对功能性消化不良（functional dyspepsia,FD）肝郁脾虚证模型大鼠胃窦和幽门区Bcl-2、Caspase-12蛋白及mRNA表达的影响,探讨舒胃汤治疗FD的作用和机制。方法 将Wistar大鼠60只随机分成空白组,模型组,莫沙必利组,舒胃汤低、中、高剂量组。按改良复合病因造模法造成FD肝郁脾虚证模型,连续21 d。分组干预,连续14d。处死大鼠后,取胃窦平滑肌和十二指肠上段组织。Western-blot法检测Bcl-2、Caspase-12蛋白表达;RT-PCR法检测Bcl-2、Caspase-12的mRNA表达。结果 Western-blot检测发现,与空白组比,模型组Caspase-12表达升高而Bcl-2表达降低（P<0.05）;与模型组比,舒胃汤中、高组Caspase-12 mRNA表达显著降低（P<0.01）。RT-PCR检测发现,与空白组比,模型组Caspase-12表达显著升高而Bcl-2表达显著降低（P<0.01）;与模型组相比,舒胃汤低、中、高剂量组Caspase-12表达显著降低（P<0.01）,中、高剂量组Bcl-2表达显著升高（P<0.01）。结论 舒胃汤可能通过调控胃窦和幽门区凋亡因子Bcl-2、Caspase-12的表达抑制平滑肌细胞的凋亡,从而有效地治疗功能性消化不良。     

加味生脉补心丹对2型糖尿病大鼠心肌损伤的保护作用

目的 探讨加味生脉补心丹（以下简称BXD）对自发性非肥胖2型糖尿病Goto-kakisaki （GK）大鼠心肌损伤的保护作用。方法 8~9周龄雄性Wistar大鼠8只作为空白组,另将40只糖尿病模型GK大鼠按随机数字表将大鼠分为5组,分别为：模型组、西药组（格列齐特缓释片组）、BXD低剂量组、BXD中剂量组、BXD高剂量组。各组大鼠按治疗方法给药10周后处死,腹主动脉采血检测空腹血糖（FPG）、糖化血红蛋白（HbAlc）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）,取左心室行心肌组织HE染色、PAS染色观察病理改变,免疫组化测定心肌凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果 与空白组比较,模型组FPG、HbAlc显著升高（P<0.01）,SOD、GSH-Px均显著降低（P<0.01）,MDA显著升高（P<0.01）;HE染色可见心肌组织水肿坏死、纤维溶解断裂;PAS染色可见大量糖原物质沉积;免疫组化示心肌组织Bax表达增多、Bcl-2表达减少（P<0.01）。与模型组比较,BXD低剂量组FPG降低（P<0.05）,西药组和BXD中、高剂量组FPG均显著降低（P<0.01）;西药组HbAlc显著降低（P<0.01）,BXD高剂量组HbAlc降低（P<0.05）;西药组与BXD高剂量组SOD、GSH-Px均显著升高（P<0.01）、MDA含量均降低（P<0.05）;西药组、BXD高剂量组Bax表达显著减少（P<0.01）,西药组及BXD中剂量组、高剂量组Bcl-2表达显著增多（P<0.01）。结论 BXD对GK大鼠心肌损伤具有保护作用,其机制可能是通过增强抗氧化能力、抑制心肌细胞凋亡,从而起到心肌保护作用。     

Haloperidol-induced plasticity of axon terminals in rat substantia nigra

An electron micrographic morphometric analysis of nerve endings in substantia nigra of rats repeatedly treated with haloperidol was performed. Although most parameters showed no difference, drug-treated animals exhibited a significant shift in the distribution of relative numbers of axon terminals, suggesting neuroleptic-induced axon-collateral sprouting.     

Pax6 PAI亚结构域在黑色素细胞中对MITF、TYR、TYRP1和TYRP2的影响

【目的】高度保守的PAX转录因子家族在黑色素细胞的分化和黑色素的生成中起重要的作用,其家族共有的PD结构域是其与下游基因结合的主要位点,而PD结构域氨基端的PAI亚结构域在其与下游基因的结合过程中发挥重要的作用。研究表明Pax6在视网膜上皮黑色素细胞的分化中发挥至关重要的作用,本试验借助研究Pax6 PAI亚结构域的功能来对PAX转录因子家族共有的PD结构域和PAI亚结构域进行研究。【方法】首先通过Psipred对Pax6 PD结构域的结构进行分析,使用NCBI对Pax6 PD结构域与下游基因的结合位点进行分析,使用Jaspar对MITF、TYR、TYRP1和TYRP2启动子中Pax6 PD结构域可能的作用位点进行预测。使用普通PCR克隆Pax6PAI亚结构域,将其连入T载体,酶切后连入慢病毒载体,并送公司测序确认。将构建好的PAI亚结构域过表达载体通过细胞转染导入到培养的小鼠黑色素细胞中,使其过量表达。收集细胞,分别通过观察绿色荧光蛋白检测转染效率,使用RT-PCR和Western blot来检测MITF、TYR、TYRP1和TYRP2在m RNA和蛋白水平的变化,同时检测黑色素细胞中黑色素生成量的变化。【结果】通过NCBI分析可知,Pax6 PD结构域与下游基因的作用位点主要集中在氨基端的PAI亚结构域。通过Jaspar预测分析,得知,MITF启动子-695处存在Pax6 PD结构域的结合位点,TYR启动子-873和-1133处存在Pax6 PD结构域的结合位点,TYRP1启动子-629处存在Pax6 PD结构域的结合位点,TYRP2启动子-655处存在Pax6 PD结构域的结合位点。在黑色素细胞中过表达Pax6 PAI亚结构域后,与空载组相比,试验组MITF m RNA升高2.05倍(P0.01),蛋白质升高1.7倍(P0.01);TYR m RNA升高2.09倍,蛋白质升高2倍(P0.05);TYRP1 m RNA升高2.93倍(P0.05),蛋白质升高1.9倍(P0.01);TYRP2 m RNA升高3.62倍(P0.01),蛋白质升高1.37倍。同时试验组的黑色素含量是空载组黑色素含量的1.33倍(P0.001)。【结论】在小鼠黑色素细胞中,过表达Pax6 PAI亚结构域可以促进MITF、TYR、TYRP1和TYRP2的表达,进而使黑色素细胞黑色素的生成量增加。