5'-腺苷磷酰硫酸激酶及其R68K突变体对5'-腺苷一磷酸3'羟基的磷酸化

硫作为生命活动的必需元素,主要以-2价和+6价发挥生物学功能。硫的同化代谢包括胞内活化、转移以及还原等反应。其活化是同化代谢的关键反应,包括ATP硫酸化酶(ATP sulfurylase,ATPS)催化硫酸盐与ATP反应生成腺苷-5'-磷酰硫酸(adenosine 5'-phosphosulfate,APS)和焦磷酸(pyrophosphate,PPi)以及腺苷-5'-磷酰硫酸激酶(adenosine 5'-phosphosulfate kinase,APSK)催化APS 3'羟基磷酸化生成3'-磷酸腺苷-5'-磷酰硫酸(3'-phosphoadenosine 5'-phosphosulfate,PAPS),APSK催化APS磷酸机理已经较为清楚。利用APSK对AMP的磷酸化进行了初步分析,发现AMP可作为APSK的底物,反应生成3,5'二磷酸腺苷(3'-phosphoadenosine 5'-phosphate,PAP);对APSK的三维结构进行分析发现,R68同时和APS的磷酸根和硫酸根形成氢键,稳定APS的结合,而K侧链基团比R短2.4魡,R68K突变将导致K不能和距离较远的硫酸根离子相互作用,从而减弱APS的亲和力,而增加与磷酸根离子的相互作用,可能提高AMP的亲和力。研究结果表明,R68K突变体的最适底物变为AMP,KmAMP是对照的0.2倍,而催化效率是对照的5倍。以R68K为偶联酶成功测定了具有较低KmPAP的酵母3,5二磷酸核苷酸酶(3',5'-bisphosphate nucleotidase,YND)动力学常数,为分析测定AMP底物的酶活提供了工具。     

N6-(6-氨基己基)-5′-磷酸腺苷的合成

由肌苷开始经五步合成出Ｎ６－（６－氮基己基）－５’－磷酸腺苷。对６－氯－９β－Ｄ－呋喃核糖嘌呤的合成进行了改进。１，６－己二胺同６－氯－９β－Ｄ呋喃核糖嘌呤－５’－磷酸发生取代反应，合成出Ｎ６－（６－氮基己基）－５′－磷酸腺苷，基于核苷的总产率约７０％。     

植物核苷二磷酸激酶(NDPKs)研究进展

为了给植物核苷二磷酸激酶NDPKs的进一步研究提供参考,总结了植物核苷二磷酸激酶(NDPKs)的分类、亚细胞定位、功能及其在植物基因工程中的应用。重点分析了NDPKs功能方面研究的最新进展,NDPKs不仅能够作为一种看家酶,维持细胞NDP和NTP代谢平衡,而且还是一组多功能蛋白,参与植物细胞的生长与分化、光敏色素A、紫外线-B、热击响应及氧化胁迫响应中的信号传导等多种生命活动过程,甚至具有核酸酶活性。最后指出植物NDPKs的研究方向,并展望了其在植物抗逆基因工程方面良好的应用前景。     

鸡局部黏着斑激酶基因5′UTR及启动子的克隆鉴定

为了研究鸡局部黏着斑激酶(FAK)基因表达调控的分子机制,运用cDNA末端快速扩增技术确定了鸡胚成纤维细胞FAK基因的转录起始位点,并发现FAK基因mRNA的5′非翻译区(5′UTR)存在4种剪切形式.分析这4种剪切形式的5′端序列,发现它们都不影响蛋白的编码,但可能影响mRNA的翻译效率.另外,将启动子序列935 bp片段克隆构建到荧光素酶报告基因表达载体pGL3-Basic中,转染鸡胚成纤维细胞,测定启动子的转录活性.通过启动子序列系列缩短的克隆,将核心启动子区定位在转录起始位点上游-662至+7的669 bp片段内,该启动子的典型特征是:没有TATA盒,而富含“GC“碱基.以上结果为FAK基因的表达调控研究提供了分子基础.     

鸡局部黏着斑激酶基因5′UTR及启动子的克隆鉴定

为了研究鸡局部黏着斑激酶(FAK)基因表达调控的分子机制,运用cDNA末端快速扩增技术确定了鸡胚成纤维细胞FAK基因的转录起始位点,并发现FAK基因mRNA的5′非翻译区(5′UTR)存在4种剪切形式.分析这4种剪切形式的5′端序列,发现它们都不影响蛋白的编码,但可能影响mRNA的翻译效率.另外,将启动子序列935 bp片段克隆构建到荧光素酶报告基因表达载体pGL3-Basic中,转染鸡胚成纤维细胞,测定启动子的转录活性.通过启动子序列系列缩短的克隆,将核心启动子区定位在转录起始位点上游-662至 7的669 bp片段内,该启动子的典型特征是:没有TATA盒,而富含"GC"碱基.以上结果为FAK基因的表达调控研究提供了分子基础.     

外源5′-腺苷酸二钠和5′-鸟苷酸二钠对断奶仔猪生长性能及抗氧化能力的影响

将90头28日龄断奶的"杜×长×大"三元杂交仔猪随机分成3组,每组3个重复,对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ和Ⅱ组饲喂在基础日粮中分别添加0.03%5′-腺苷酸二钠和5′-鸟苷酸二钠的日粮,试验期28 d,测定仔猪生长性能和试验开始后第7、14和28天血清中的超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量,研究外源5′-腺苷酸二钠和5′-鸟苷酸二钠对断奶仔猪生长性能和抗氧化功能的影响.结果表明,Ⅰ和Ⅱ组仔猪断奶后不同时间血清中的SOD活性呈下降趋势(P0.05),其中,Ⅰ组仔猪第14天SOD活性显著低于对照组(P0.05),对其他抗氧化指标没有显著影响(P0.05),各组仔猪生长性能差异不显著(P0.05).可见,日粮中分别添加5′-腺苷酸二钠和5′-鸟苷酸二钠对仔猪生长性能均无显著影响,5′-腺苷酸二钠有降低仔猪血清中SOD活性的作用.     

O,O-二烷基-N-莰-2-基(硫)磷酰胺酯的合成

合成了14个含有 N-莰-2-基的磷酰胺和硫代磷酰胺类化合物,用红外、核磁及元素分析确定其结构,并探讨了~(31)Pδ值的规律性变化。初步生物试验表明,磷酰胺类化合物对水稻发芽具有明显的抑制作用,其中化合物Ⅱ1的活性大于对照药剂抗倒胺但低于多效唑。     

九州虫草5′-核苷酸的毛细管区带电泳分析

用超声波对九州虫草4个样品进行预处理,添加较高浓度的标准溶液,采用毛细管电泳法检测电泳图谱中各峰峰高、峰面积的变化,测定了各样品中的5′-核苷酸组分及含量。结果表明,在九州虫草的各部分中均可检测到高含量的鸟苷酸,其中以菌丝体的含量最高(0.90 mg/g),其他核苷酸只在菌丝体中检测到,分别为5-′UMP 0.46 mg/g,5-′GMP 0.90 mg/g,5-I′MP 0.98 mg/g,5-′XMP 1.19 mg/g。该方法快速简便,重现性好,能有效地测定样品中核苷酸类成分。     

硫苷生物合成过程中硫来源的研究进展

硫苷是十字花科Cruciferae植物中一类富含氮硫的次生代谢物,硫苷合成途径,特别是硫与硫苷合成关系的研究取得了很多进展。从硫苷核心结构形成过程中还原硫供体来源、活化硫酸盐来源以及半胱氨酸（Cys）、谷胱甘肽（GSH）和高能硫供体3'磷酸腺苷5'磷酰硫酸（PAPS）等初生硫代谢产物与硫苷合成间的关系等方面对硫苷合成过程中硫来源的研究进展进行了综述,提出GSH等初生硫代谢调控因子、氮硫等营养元素之间的平衡以及葡萄糖等信号分子对硫苷生物合成的调控机制将成为新的研究热点,以期为硫苷的生物合成调控研究提供理论依据。     

水稻1,3,4-三磷酸肌醇5/6-激酶基因的电子克隆及表达

利用电子克隆的基因克隆策略,以拟南芥1,3,4-三磷酸肌醇5/6-激酶AtITL1的cDNA序列为信息探针,在水稻基因组数据库搜索到高度同源的水稻基因组序列,通过人工序列拼接及RT-PCR方法克隆得到了水稻编码1,3,4-三磷酸肌醇5/6-激酶类似物的基因OsITL1的全长cDNA序列。RNA凝胶印迹分析表明,OsITL1基因的表达在转录水平上受NaCl、干旱及ABA的诱导,OsITL1可能参与了一些非生物胁迫的应答过程,在逆境条件下的基因转录和磷酸肌醇信号转导途径的调控中起重要作用。     

外源5′-尿苷酸对断奶仔猪生长性能及抗氧化能力的影响

【目的】研究外源5′-尿苷酸对断奶仔猪生长性能和抗氧化能力的影响。【方法】将90头28日龄断奶的"杜×长×大"三元杂交断奶仔猪,随机分成3组,每组3个重复,对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ和Ⅱ组在基础日粮中分别添加质量分数0.15%,0.25%5′-尿苷酸日粮,试验期为28d。测定断奶仔猪生长性能、腹泻频率,以及试验开始后第7,14和28天断奶仔猪血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性、总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)活性和MDA含量。【结果】与对照组相比,Ⅱ组断奶仔猪平均日增质量、日采食量均呈上升趋势,料重比、腹泻频率均呈下降趋势,但差异不显著(P>0.05),第7和14天,Ⅱ组断奶仔猪血清SOD活性分别较对照组提高20.89%和25.35%(P<0.05);第14天T-AOC和第28天CAT活性均显著高于对照组(P<0.05),第14天MDA含量显著低于对照组(P<0.05)。【结论】日粮中添加质量分数0.25%5′-尿苷酸,可以提高断奶仔猪的生长性能和抗氧化能力。     

神经递质5-羟色胺(5-HT)及其受体对鱼类行为和生理影响的研究进展

随着养殖智能化水平的提高和鱼类福利关注度的提升,对养殖条件下鱼类生理和行为的研究日益受到重视。5-羟色胺(5-hydroxy tryptamine, 5-HT)是一种广泛存在于大脑和外周组织中的抑制性神经递质,在相应受体的介导下,参与调控鱼类的攻击、摄食、认知、社会等级及情绪调节等多种行为和生理过程。本文综述了近年来国内外有关5-HT及其受体对鱼类的生理活动(摄食、免疫、生殖等)、攻击行为、社会等级、情绪调节、学习认知能力等方面的影响,分析了5-HT及其受体在基础研究和产业中的应用现状,并提出未来应深入开展5-HT的作用机制及其在不同环境下鱼类行为可塑性上的应用,以及5-HT不同受体的基本功能和对鱼类行为与生理响应调控等方面的研究建议,以期为提高基于鱼类行为的规模化智能养殖水平和鱼类福利等研究提供参考。     

神经递质5-羟色胺(5-HT)及其受体对鱼类行为和生理影响的研究进展

随着养殖智能化水平的提高和鱼类福利关注度的提升,对养殖条件下鱼类生理和行为的研究日益受到重视.5-羟色胺(5-hydroxy tryptamine,5-HT)是一种广泛存在于大脑和外周组织中的抑制性神经递质,在相应受体的介导下,参与调控鱼类的攻击、摄食、认知、社会等级及情绪调节等多种行为和生理过程.本文综述了近年来国内...     

茶树GDP-甘露糖-3′,5′-异构酶基因cDNA全长的克隆与表达

【目的】对茶树GDP-甘露糖-3′,5′-异构酶(GDP-Mannose-3′,5′-epimerase,GME)基因cDNA全长进行克隆分析及原核表达。【方法】以茶树品种"乌牛早"叶片的cDNA为模板,用RT-PCR和RACE技术克隆GME,并对其进行生物信息学分析。利用pETiteTM N-His SUMO Vector构建GME原核表达载体pET-GME,在大肠杆菌HI-Control BL21(DE3)中进行原核诱导表达。采摘同一茶树嫩茎、芽、叶片以及不同品种茶树叶片样品,提取其RNA,反转录合成cDNA后,通过荧光定量PCR分析GME在不同茶树组织和品种中的表达谱。【结果】克隆获得了长度为1 427bp的GMEcDNA全长序列,其包含长度为1 131bp的开放阅读框,编码376个氨基酸。构建了GME原核表达载体pETGME,其在大肠杆菌HI-Control BL21(DE3)中能诱导表达分子质量约60ku的融合蛋白。荧光定量PCR结果显示,GME基因在芽中的表达量最高,在嫩茎中的表达量最低,在叶片中的表达量随成熟度的增加而逐渐降低;在不同茶树品种之间的表达也存在明显差异。【结论】从茶树叶片中克隆得到了GMEcDNA全长序列,并成功对其进行了原核表达。     

5-氨基乙酰丙酸在植物非生物胁迫中的功能研究进展

简述5-氨基乙酰丙酸在植物上的应用,综述植物对非生物胁迫的响应和5-氨基乙酰丙酸在非生物胁迫中对植物的调节作用,包括盐胁迫、低温胁迫、干旱胁迫和重金属胁迫等方面的研究进展,并对5-氨基乙酰丙酸的研究和应用进行了展望,旨在为作物抗逆研究育种栽培提供理论依据。     

5-羟色胺(5-HT)摄食调节作用的研究进展

摄食是一种复杂的行为活动,受多种神经递质和凋质的调节。5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)是一种经典的神经递质,具有广泛的生理功能,可抑制摄食等。本文对5-HI、的生物合成、在中枢神经系统的定位分布、参与摄食调节的受体及摄食调节作用的机理进行了综述。     

植物萜类合成酶1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原酶研究进展

综述了近年来植物萜类合成酶1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原酶（DXR）的研究进展,指出DXR是萜类物质生物合成途径中的关键酶,从植物中克隆出的DXR基因结构相似,表达于植株的大部分器官中;它们大多与植物体内萜类物质的合成有关,植株体内上调DXR基因有可能增加萜类物质的含量。     

中药活性小分子5-羟甲基糠醛生物活性研究进展

鉴于5-羟甲基糠醛生物活性的研究备受关注,总结了5-羟甲基糠醛的性质,归纳了其毒副作用及药理作用,提出5-羟甲基糠醛可能是一种隐藏在中药背后新的活性成分,有很好的开发前景,值得进一步研究。     

HPLC法检测蝉拟青霉中N6-(2-羟乙基)-腺苷含量

为了建立蝉拟青霉(Paecilomyces cicadae)5704s中N6-(2-羟乙基)-腺苷(HEA)含量测定方法,以去离子水为溶剂,采用超声辅助水浴法提取HEA,基于HPLC法测定其含量。经优化确定色谱条件为Agilent ZORBAX Extend-C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇∶5 mmol/L乙酸铵(含0.1%甲酸),梯度洗脱,检测波长为260 nm,流速为1.0 mL/min,柱温为25℃,进样量为10μL。结果显示,HEA浓度为0.25～100.00μg/mL时,峰面积和HEA含量之间线性关系良好,R²=0.999 9,仪器的检出限为0.25μg/mL,平均回收率为97.73%～108.95%,RSD为0.37%～1.29%,测得样品中HEA含量为0.78 mg/g。该方法简便、快捷、准确、稳定,适用于蝉拟青霉5704s菌丝体中HEA的测定。     

甘蔗Δ~1-吡咯啉-5-羧酸合成酶(ScP5CS)基因分离及其分析(英文)

以甘蔗品种ROC22为材料,待甘蔗生长至4～5叶期直接以25%PEG6000淋灌根部模拟水分胁迫。采用同源克隆与RT-PCR法从甘蔗叶片中得到甘蔗Δ1-吡咯啉-5-羧酸合成酶(Saccharum officinarum L.Δ1-pyrroline-5-carboxy-late synthetase,ScP5CS)基因的编码区cDNA序列,其长度为2151 bp,为一个完整的ORF,编码716个氨基酸,GenBank注册号为EU005373。核苷酸序列与前人已注册的甘蔗P5CS(EF155655)相比,同源率达到98%,但推断编码的氨基酸同源率仅为92%。该基因具有P5CS共有的结构域与结合位点:Putative ATP-binding site;Putative leucine domains;Glu-5-kinase domain;Putative NADPH-binding domain;Conserved GSA-DH domain保守区,脯氨酸反馈抑制作用位点。与前人已注册的甘蔗P5CS基因氨基酸序列(ABM30223)比较,在γ-GK保守域(Glu-5-kinase domain)内氨基酸变化较大...