新疆小反刍兽疫疫情诊断

2013年12月新疆伊犁州霍城县发生不明山羊疫情,根据临床症状和剖检变化怀疑为小反刍兽疫感染。对3只病死山羊病料、8只患病山羊分泌物棉拭子样品和6只患病山羊血清样品分别进行病原学和血清学检测。利用竞争ELISA试剂盒对6份血清样本进行抗体检测,结果全部为阳性。利用抗原捕获ELISA试剂盒,在11只病羊样品中都检测到小反刍兽疫抗原。利用能特异性检测小反刍兽疫病毒的荧光定量RT-PCR方法,在11只病羊样品中检测到小反刍兽疫病毒核酸。利用特异引物进行PPRV N基因片段RT-PCR反应,从11只病羊样品中检测到PPRV核酸。针对2号样本病原核酸N基因和F基因片段进行序列同源性比较,结果该毒株与西藏流行株序列片段相似性分别为96.5%和97.5%。遗传进化分析,该病原属于谱系4,与巴基斯坦等国流行毒株遗传关系最近。     

陕北白绒山羊小反刍兽疫病毒RT-PCR方法的建立

为了建立适用于本地区小反刍兽疫病毒的分子生物学快速检测方法,通过分析NCBI数据库中小反刍兽疫病毒N基因序列,根据该基因设计特异性引物,建立针对本地区小反刍兽疫病毒N基因的一步法RT-PCR检测方法,利用该方法对来自疫源地的不同病料样本进行检测,结果显示该方法对病料的可选择性较多,对检测到的阳性条带通过测序分析,发现流行毒株与陕西毒株基因型差异不明显。该检测方法的建立有利于开展小反刍兽疫疫情监测,为有效防控小反刍兽疫提供技术支撑。     

湖北省首例山羊小反刍兽疫疫情诊断

2014年3月底湖北省恩施州鹤峰县养羊户从外省购入山羊后,山羊出现发热、咳嗽、流涎、腹泻等小反刍兽疫疑似症状。采集3只病死山羊病料、8只发病山羊棉拭子和8份血清样品分别进行病原学和血清学检测。利用阻断ELISA试剂盒对8份血清样本进行抗体检测,结果全部阳性;利用小反刍兽疫病毒特异性荧光定量R T-PCR方法,从11只病羊样品中均检测到小反刍兽疫病毒核酸,结果经国家外来动物疫病研究中心复核确认,确诊为湖北省首例山羊小反刍兽疫疫情。     

小反刍兽疫疫苗毒与野毒实时荧光RT—PCR鉴别检测方法的建立

为了建立鉴别检测小反刍兽疫疫苗毒与野毒的快速分子生物学检测方法,通过对自行测序的疫苗毒基因组序列及GenBank中登录的野毒基因组序列进行比对分析,设计了2套引物和TaqMan荧光探针,对实时荧光RT-PCR反应条件进行优化,建立了小反刍兽疫疫苗毒与野毒实时荧光RT-PCR鉴别检测方法。特异性试验证实,该检测方法只能检测到目的病毒核酸,表明其具有良好的特异性。灵敏性试验发现,检测疫苗株的最低检测限可达1．38mg／L的总RNA,检测野毒株的最低检测限为0．16mg／L的核酸。对同一样品进行重复性检测,检测的荧光扩增曲线阈值完全重舍,证明其重复性极好。从180份临床样品中,检测出2份疫苗病毒株阳性样品,其余均为阴性。结果表明,本研究所建立的实时荧光RT-PCR方法能对小反刍兽疫疫苗毒及野毒进行鉴别检测,具有特异性好、灵敏度高、重复性极好的优点,是开展小反刍兽疫疫情监测的有力工具。     

实时荧光RT-PCR鉴别小反刍兽疫病毒疫苗株和野毒株

为快速鉴别小反刍兽疫病毒的疫苗株和野毒株,本研究通过分析Gen Bank中已发布的小反刍兽疫病毒全基因组序列,设计了1对通用引物以及疫苗株和野毒株特异性探针各1条,建立了小反刍兽疫病毒鉴别实时荧光RT-PCR方法。结果显示,该方法对疫苗株和野毒株的检测灵敏度均可以检测至10拷贝/反应,在108至101拷贝/反应之间具有良好的线性关系,扩增效率均接近1。该方法具有良好的特异性,能够区分不同谱系的野毒株株和疫苗株。使用该方法对136份临床疑似样品检测,检出的阳性数量与普通RT-PCR相同,并且测序后的区分结果也相同。本方法的建立为该病的实验室鉴别检测和流行病学调查提供了技术支持。     

我国首例小反刍兽疫诊断报告

2007年7月我国西藏发生不明山羊疫情,国家外来动物病诊断中心对当地动物疫病控制中心送检的14只病死山羊病料和一批血清样品分别进行病原学和血清学检测。利用较敏感的小反刍兽疫病毒(PPRV)特异性荧光定量RT-PCR方法,在11只病羊组织中检测到小反刍兽疫病毒核酸。利用次敏感的PPRV普通RT-PCR方法,从8只病羊组织中检测到PPRV核酸。针对1号样本病原核酸N基因和F基因片段进行遗传发生分析,该病原属于4系。利用竞争ELISA试剂盒对送检的13份血清样本进行抗体检测,结果全部阳性。将1号组织样本接种Vero细胞分离病毒,透射电镜观察下,发现了500纳米左右的病毒粒子。对分离毒株进行PCR检测同样证实其为PPRV。     

小反刍兽疫病毒四川简阳株N基因的系统进化分析

为了调查小反刍兽疫病毒四川简阳株(SCJY株)的分子遗传特征,我们对四川简阳发病羊鼻拭子中的小反刍兽疫病毒N基因进行了遗传进化分析。通过RT-PCR、克隆测序获得SCJY株N基因序列,使用DNASTAR软件将其与GenBank中的15条参考株序列进行同源性比对,使用MEGA6软件进行系统进化分析。结果显示:SCJY株N基因序列全长1578nt,与参考株的核苷酸同源性为88.9%～100%,氨基酸同源性为92.8%～100%,与2013～2014年小反刍兽疫中国流行毒株高度同源;系统进化分析将16个毒株N基因划分为4个谱系,SCJY株属于Ⅳ系。     

洞口县山羊感染小反刍兽疫的调查与体会

2014年3月11日,湖南省邵阳市洞口县毓兰镇金竹村部分养殖户饲养的羊出现疑似小反刍兽疫症状,发病羊360只,其中死亡234只。24日,湖南省动物疫病预防控制中心诊断为疑似小反刍兽疫疫情。25日,经国家外来动物疫病研究中心确诊,该起疫情为小反刍兽疫疫情。经调查,此次发生的小反刍兽疫疫情是由外地活羊调运传入。     

羊小反刍兽疫的诊治

小反刍兽疫病是由小反刍兽疫病毒引起羊的一种急性、发热性、病毒性传染病,也称羊瘟、假性牛瘟,小反刍兽疫病毒主要感染山羊、绵羊、美国白尾鹿等小反刍动物,其中,绵羊、山羊最易感。本文针对突然死亡的羊的临床症状、病理组织器官剖检变化、实验室诊断技术等进行综合的诊断,最后,该病被确诊为小反刍兽疫病,因此,本文介绍了对羊小反刍兽疫病的综合防控技术。     

及时处置 确保畜牧业健康发展——对一例小反刍兽疫疫情的及时处理

农业部通报：2013年12月21日,新疆哈密地区哈密市五堡镇卡日耶尔养殖小区的部分羊只出现疑似小反刍兽疫症状,发病羊176只,死亡34只;23日,新疆维吾尔自治区动物疫病预防控制中心诊断为疑似小反刍兽疫疫情;26日,经国家外来动物疫病研究中心确诊,该起疫情为小反刍兽疫疫情。     

一步法实时定量RT-PCR检测小反刍兽疫病毒方法的建立

建立了检测小反刍兽疫病毒的快速、特异的基于Taqman的一步法实时定量RT-PCR方法。通过对GenBank已公布的小反刍兽疫病毒N基因序列进行序列比较分析,设计了一对特异性引物和一条Taqman探针。利用这对引物和探针对来自不同疫源地的小反刍兽疫病毒RNA样本进行检测,都获得了特异性扩增,但是,不与牛瘟病毒、海豚麻疹病毒等其他种的麻疹病毒属病毒发生交叉反应。本方法具有高度灵敏性,最低可检测到810拷贝的RNA模板。在模板浓度为8.1×102到8.1×108拷贝范围内,都呈现良好的线性关系,而且无论是组内和或组间重复的变异系数都很低。     

一步法RT-PCR检测小反刍兽疫病毒

为建立一步RT-PCR检测小反刍兽疫病毒(PPRV)方法,针对Gen Bank中PPRV F基因进行序列比较分析,设计一对特异性引物,通过优化RT-PCR反应条件,建立了一步RT-PCR检测PPRV方法。该方法最佳退火温度为60℃,最佳引物用量为8pmo L/μL。利用这种方法对小反刍兽疫临床阳性样本进行检测,获得了特异性的扩增目标条带,但不与口蹄疫病毒、羊口疮病毒、犬瘟热病毒等发生反应。本方法具有高度灵敏性,最低检测量为3.576×10-5g/L,可广泛应用于临床小反刍兽疫病毒核酸的检测。     

辽宁省锦州市发生一起小反刍兽疫疫情

<正>农业部新闻办公室3月21日发布,辽宁省锦州市发生一起羊小反刍兽疫疫情。3月17日,辽宁省锦州市北镇市大市镇边家村、黑山县白厂门镇董屯村部分养殖户从外地调入的羊出现疑似小反刍兽疫症状,发病羊24只,死亡11只。3月19日,辽宁省动物疫病预防控制中心诊断为疑似小反刍兽疫疫情。3月21日,经国家外来动物疫病研究中心确诊,该起疫情为小反刍兽疫疫情。     

小反刍兽疫荧光PCR诊断

<正>小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒引起的发生于小反刍动物的一种急性、烈性、高度接触性传染病,主要在绵羊和山羊中流行,其对幼龄动物的致死率可达50%~80%。一步法荧光定量R T-PCR方法已用于对本病的检测。1材料与方法1.1样品4份样品S1、S2、S3、S4均为病羊鼻     

羊小反刍兽疫与大肠杆菌病的诊治

羊的小反刍兽疫病是危害养羊业主要的传染性疾病之一,感染率和死亡率达到50%以上。而羊的致病性大肠杆菌病主要引起羊的严重腹泻和突然死亡,是养羊业中常见的细菌性传染疾病之一。本文针对严重腹泻和突然死亡的羊的临床证状、病理剖检变化和实验室诊断等进行综合的诊断判定,最后,患病羊被确诊为小反刍兽疫病和大肠杆菌病感染,在此基础上对羊小反刍兽疫病和致病性大肠杆菌病的综合防控进行了综述。     

小反刍兽疫H蛋白主要抗原表位的原核表达

目的表达小反刍兽疫病毒H蛋白的主要抗原位点用于检测与预防。方法用DNAStar分析小反刍兽疫病毒H基因的主要抗原位点,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从病羊组织中扩增PPRV的H基因的主要抗原位点并克隆到原核表达载体PET-28b中,最后用PCR、酶切和测序分析对重组质粒进行鉴定;将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta中,经不同浓度的IPTG诱导表达PPRVH基因的主要抗原位点;用SDS-PAGE和Western-blotting分析所有蛋白的表达。结果将RT-PCR产物电泳,得到与预期大小相符的特异性片段;对重组质粒PET-28b-H66-249和PET-28b-H281-550酶切后,均出现预期相符的片段;DNA测序表明插入片段的序列与小反刍兽疫H蛋白基因完全一致,其大小分别为569bp和831bp;将重组表达的蛋白经SDS-PAGE和Western-blotting检测,证明所有的蛋白均得到表达。结论成功表达了PPRVH基因的主要抗原蛋白,为日后的检测与预防工作奠定了基础。     

应用PCR-焦磷酸测序技术快速检测小反刍兽疫病毒

为适应小反刍兽疫快速、准确、高通量诊断的需求,建立一种基于PCR及焦磷酸测序技术平台的小反刍兽疫病毒鉴定方法。对Gen Bank中已公布的小反刍兽疫病毒N基因序列进行分析,设计专用引物进行PCR扩增及焦磷酸测序,测得序列经比对分析可以确定是否为小反刍兽疫病毒感染。采用所建立的PCR-焦磷酸测序方法对西藏采集的10份血清样品进行检测,检测结果表明,该方法可以用于小反刍兽疫病毒的检测,而且该样品可初步鉴定为疫苗株感染。     

及时处置 确保畜牧业健康发展——对一例小反刍兽疫疫情的及时处理

正农业部通报:2013年12月21日,新疆哈密地区哈密市五堡镇卡日耶尔养殖小区的部分羊只出现疑似小反刍兽疫症状,发病羊176只,死亡34只;23日,新疆维吾尔自治区动物疫病预防控制中心诊断为疑似小反刍兽疫疫情;26日,经国家外来动物疫病研究中心确诊,该起疫情为小反刍兽疫疫情。一、基本情况五堡镇位于哈密市西南戈壁边沿75千米处,辖区总面积17159平方     

凉州区在防控小反刍兽疫情中采取的措施和体会

<正>1月22日,古浪县黄花滩乡黄花滩村部分养殖户饲养的羊出现疑似小反刍兽疫症状,发病羊951只,死亡111只。23日,甘肃省动物疫病预防控制中心诊断为疑似小反刍兽疫疫情。24日,经国家外来动物疫病研究中心确诊,该起疫情为小反刍兽疫疫情。疫情发生后,农业部迅速派出工作组赶赴当地协助指导疫情处置工作。当地按照有关应急预案和防治技术规范要     

几种外来动物病毒多重普通和实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及其初步应用

为了能够同时开展对小反刍兽疫病毒(PPRV)、蓝舌病血清8型病毒(BTV8)、鹿流行性出血热血清1型病毒(EHDV1)和非洲马瘟病毒(AHSV)4种外来动物疫病病原体的核酸检测,本试验根据GenBank中相关病毒序列设计引物和探针,建立多重普通逆转录PCR(RT-PCR)和实时荧光定量RT-PCR检测方法,并在采集的临床样本检测中进行初步应用验证。结果显示：建立的PPRV/BTV8/EHDV1三重实时荧光定量RT-PCR检测方法仅对PPRV、BTV8和EHDV1有特异荧光信号,检测敏感度可达10^1.70～10^2.08copies/μL DNA;建立的PPRV/BTV8/EHDV1/AHSV四重普通RT-PCR方法可特异性同步检测PPRV、BTV8、EHDV1和AHSV,检测敏感度可达10~3 copies/μL DNA;2种方法对羊痘、羊口疮、口蹄疫、阿卡斑、牛病毒性腹泻等临床相似的病毒均无扩增。在925份临床样本中检测出1例PPRV核酸阳性样本;经核苷酸序列测定及BLAST比对确定为谱系IV型PPRV毒株序列。本试验所建立的三重实时荧光定量...