大口黑鲈鰤诺卡菌的分离鉴定及其感染的病理损伤研究

【目的】近年来,四川养殖大口黑鲈(Micropterus salmoides)流行一种以体表溃疡、内脏器官出现白色结节为主要病症的疫病。本研究对其病因及病理损伤特点进行分析。【方法】进行病原菌分离、人工感染、病原菌理化特性分析和16S rDNA与hsp65基因(65-ku heat shock protein gene)序列分析,同时进行药敏试验与病理损伤观察。【结果】从病鱼内脏分离到3株具有弱抗酸性的G⁺丝状杆菌,人工感染试验证实了分离菌的病原性,其理化特性与鰤诺卡菌(Nocardia seriolae) ATCC43993一致;在以16S rDNA序列与hsp65序列构建的系统发育树上,分离菌与鰤诺卡菌聚为一族,3株分离菌都被鉴定为鰤诺卡菌。3株分离菌对多西环素、红霉素和庆大霉素均敏感,对青霉素和头孢噻呋均耐药,但在对恩诺沙星、氧氟沙星与复方新诺明的敏感性上存在一定差异。鰤诺卡菌感染大口黑鲈的组织病理损伤主要表现为:全身多组织器官内出现大小不等的慢性肉芽肿结节,尤以鳃、肝、脾、心、肾和头肾损伤严重,且组织切片革兰氏染色显示肉芽肿中有大量病原菌分布。【结论】鰤诺...     

鰤鱼诺卡氏菌感染卵形鲳鲹的组织病理学研究

目的近年来,四川养殖大口黑鲈(Micropterus salmoides)流行一种以体表溃疡、内脏器官出现白色结节为主要病症的疫病。本研究对其病因及病理损伤特点进行分析。方法进行病原菌分离、人工感染、病原菌理化特性分析和16S rDNA与hsp65基因(65-ku heat shock protein gene)序列分析,同时进行药敏试验与病理损伤观察。结果从病鱼内脏分离到3株具有弱抗酸性的G⁺丝状杆菌,人工感染试验证实了分离菌的病原性,其理化特性与鰤诺卡菌(Nocardia seriolae) ATCC43993一致;在以16S rDNA序列与hsp65序列构建的系统发育树上,分离菌与鰤诺卡菌聚为一族,3株分离菌都被鉴定为鰤诺卡菌。3株分离菌对多西环素、红霉素和庆大霉素均敏感,对青霉素和头孢噻呋均耐药,但在对恩诺沙星、氧氟沙星与复方新诺明的敏感性上存在一定差异。鰤诺卡菌感染大口黑鲈的组织病理损伤主要表现为：全身多组织器官内出现大小不等的慢性肉芽肿结节,尤以鳃、肝、脾、心、肾和头肾损伤严重,且组织切片革兰氏染色显示肉芽肿中有大量病原菌分布。结论鰤诺卡菌感染是此次大口黑鲈发病的病因,造成大口黑鲈多组织器官形成肉芽肿结节,且结节内有大量病原菌。     

宁夏地区大口黑鲈高效养殖模式及关键技术

近年来,宁夏渔业大力推进“养殖结构调整,提质增效”。目前,在国内,大口黑鲈作为潜在淡水和盐碱水养殖新对象,无论是养殖区域和养殖数量都在逐年扩大增加。大口黑鲈的耐盐碱性能,非常适合宁夏规模化养殖。针对大口黑鲈在宁夏养殖期短,室外池塘养殖不能像南方地区当年春天放苗秋天达到出塘规格的问题,介绍2种宁夏地区鲈鱼产业化规模化高效养殖模式,以期为解决春季大规格鱼种的培育供给实现高效养殖提供参考。     

四川兔源大肠埃希菌的耐药性及耐药基因检测

从四川地区规模化家兔养殖场分离鉴定出97株大肠埃希菌(Escherichiacoli),采用Kirby–Bauer纸片法进行耐药性测定,同时采用PCR方法对相关耐药基因进行检测。结果显示:分离菌株对四环素类药物表现高度耐药,耐药率高达90.72%以上,对磺胺类药物的耐药率达72.16%,对氨基糖苷类药物的耐药率31.96%~58.76%,对多肽类的耐药率较低,为14.43%;耐药基因tet A、tet B、tet C、arm A、rmt B和flo R的检出率分别为61.86%、84.54%、16.49%、4.12%、3.09%和8.25%,未检出tet D、tet E、tet M、tet O、tet L、tet K、rmt A、rmt C、rmt D、rmt E、npm A和cfr基因。     

鰤鱼诺卡氏菌感染卵形鲳鲹的组织病理学研究

从阳江闸坡海水网箱养殖的患病卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)病灶中分离出病原鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae),并人工回接感染卵形鲳鲹,病鱼的脾脏、肾脏、肝脏、鳃、心脏等器官出现直径为0.1-0.3 cm的白色结节,对患病卵形鲳鲹进行病理组织学观察,发现脾脏出血,淋巴细胞增生;肾小管上皮细胞变性、坏死,淋巴细胞增生;肝脂肪变性;鳃小片上皮细胞增生,相互融合在一起棒状化;心肌细胞肿胀,断裂,溶解。     

鰤鱼诺卡氏菌感染斑马鱼模型的建立与组织病理学研究

鱼类诺卡氏菌病近年来在我国南方省份不断蔓延,对水产行业造成巨大影响,鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)是鱼类诺卡氏菌病的主要病原,危害约20种海、淡水养殖鱼类。本研究以斑马鱼为模式动物,腹腔接种不同稀释度的强毒株鰤鱼诺卡氏菌ZJ0503,通过临床症状观察、病理剖检、病原菌分离鉴定、Kaplan-Meier生存曲线分析、半数致死剂量(LD_(50))统计和组织病理学研究,初步建立了鰤鱼诺卡氏菌-斑马鱼模型。研究发现攻毒后斑马鱼出现明显的发病症状,鰤鱼诺卡氏菌ZJ0503对斑马鱼的LD50为3.39×106CFU·尾,斑马鱼感染后,肾脏、肝脏、胰脏、鳃、皮肤和肌肉等组织出现明显病理学变化。结果表明,斑马鱼是鰤鱼诺卡氏菌良好的动物感染模型,该动物模型的建立将有助于诺卡氏菌病致病机理的研究和疫苗的研制。     

宠物源大肠埃希菌耐药性及耐药基因调查

【目的】了解广州市宠物源大肠埃希菌Escherichia coli耐药性和耐药基因携带情况。【方法】2016年7月至2017年7月从广州市4家宠物医院采集健康或患病犬猫样品共319份,其中,健康动物127份,患病动物192份。采用选择性培养基分离大肠埃希菌,利用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)鉴定菌种;采用琼脂稀释法测定大肠埃希菌对11种抗菌药物的敏感性,利用PCR和测序检测耐药基因的携带情况。【结果】319份样品共分离得到大肠埃希菌203株,其中,患病动物源109株,健康动物源94株。203株大肠埃希菌中有179株至少对1种抗生素耐药;对氨苄西林耐药率最高(76.85%),对头孢噻肟、四环素、多西环素和磺胺甲噁唑-甲氧苄啶耐药率均高于50%;对阿米卡星最为敏感,耐药率仅为10.84%。患病动物源大肠埃希菌对11种抗菌药物的耐药率均高于健康动物源,除阿米卡星、氟苯尼考和磷霉素外,对其他药物的耐药性均差异极显著(P 0. 01)。耐药基因检测结果显示,floR检出率最高(检出率为34.97%),blaCTX-M-9G、blaCTX-M-1G、fos A3、rmt B和bla CMY-2检出率分别为22.66%、20.19%、17.73%、10.34%和1.48%,未检测到blaCTX-M-2G和blaCTX-M-25G。【结论】广州地区宠物源大肠埃希菌耐药状况严峻,且常携带多种重要耐药基因。应当加强对宠物源细菌耐药性的监测。     

基于细菌全基因组的大口黑鲈源维氏气单胞菌AV040株致病性与耐药性解析

2021年7月安徽某养殖场的大口黑鲈(Micropterus salmoides)苗在下塘期发生了爆发性死亡。在排除寄生虫和病毒感染后,从患鱼脾脏和肾脏分离到多株细菌,经鉴定,血平板单菌落β-溶血试验和回归感染筛选出一株致病力较强的维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)AV040株。AV040全基因组测序(GenBank ID:CP095841)显示,253个编码序列为毒力基因,其中编码的黏附(adherence)分子156个、分泌系统(secretion system)85个、毒素(toxin)12个。腹腔注射AV040株对大口黑鲈(约10 g)和昆明白小鼠(约20 g)的半数致死浓度(median lethal dose, LD₅₀)分别为6.53×10⁶ CFU·g^-1和2.97×10⁷ CFU·g^-1;受染大口黑鲈表现为胸鳍、腹鳍、肛门、肝胰腺、脾脏和幽门垂出血;受染小鼠表现为蜷缩、眯眼和颤抖,肝脏和肠道出血。AV040全基因组中有5个耐药基因,并采用K-B...     

福州地区宠物犬源大肠杆菌耐药性及耐药基因调查

从福建农林大学校宠物医院采集健康和患病犬肛拭子50份(健康犬23份、患病犬27份),通过选择性培养基分离大肠杆菌,并采用肠杆菌科细菌生化鉴定管进行细菌鉴定;采用琼脂稀释法测定大肠杆菌对12种抗菌药物的敏感性,通过PCR检测耐药基因的携带情况.结果显示：分离的50株宠物犬源大肠杆菌对氟苯尼考的耐药率最高(86%),其次是四环素(50%)、庆大霉素(30%)、环丙沙星(28%)、卡那霉素(26%)、头孢噻呋(24%)、阿奇霉素(16%)、头孢他啶(14%)、阿米卡星(4%)、多黏菌素E(4%);所有菌株均对美罗培南和甲氧苄啶/磺胺甲噁唑敏感;β-内酰胺类耐药基因以bla_TEM为主(检出率24%),四环素类耐药基因以tet(A)为主(检出率28%),氟喹诺酮类耐药基因则以qnrS(检出率18%)、qnrB(检出率14%)、oqxA(检出率14%)较为流行.综上,福州地区宠物犬源大肠杆菌的耐药状况严峻,且携带多种重要耐药基因,应加强对宠物细菌耐药性的监测与管理.     

野生与养殖大口黑鲈肌肉营养成分的比较

[目的]对野生与养殖大口黑鲈进行营养成分和营养价值比较。[方法]采用国标生化分析方法对野生与养殖大口黑鲈肌肉一般营养成分及氨基酸和脂肪酸组成进行比较。[结果]二者在肌肉常规营养成分组成上基本一致,但含量存在差异。与野生大口黑鲈相比,养殖大口黑鲈肌肉水分、粗灰分、钙、磷含量降低;粗蛋白含量有所提高,但差异不显著(P>0.05);粗脂肪含量显著提高(P<0.05);在氨基酸组成成分上,养殖大口黑鲈肌肉鲜样中总氨基酸含量和鲜味氨基酸含量分别达到17.29%和6.70%,高于野生大口黑鲈。二者的氨基酸评分(AAS)和化学评分(Cs)非常接近;野生与养殖大口黑鲈肌肉必需氨基酸指数(EAAI)分别为77.74和75.31,高于许多其他经济鱼类;大口黑鲈的不饱和脂肪酸含量也很高,其中EPA与DHA尤为明显。[结论]野生与养殖大口黑鲈的蛋白质含量高,含有丰富的氨基酸和不饱和脂肪酸,均具有较高的营养价值。     

加洲鲈与罗非鱼群体的RAPD分析

利用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术对加洲鲈和罗非鱼种群间的亲缘关系进行分析。品种间带纹相似系数（共享度）根据Lynch的公式进行计算：F_（xy）=2N_（xy）/N_x＋N_y（N_（xy）是RAPD指纹图谱中品种X和品种Y的共有带纹数,N_x和N_y分别为品种X和品种Y各自可分辨带纹总数）。品种间的遗传距离（D）根据2个品种的共享度（F）来计算：D=1-F。根据遗传距离的D值,再用UPGMA法求出各类间距离后再聚类。结果显示：从20个随机引物中筛选出4个清晰,多态性丰富的引物用于分析。各种群平均每一引物所获得的带纹数为：加洲鲈7.8±2.45,罗非鱼5.1±1.87。4个引物共扩增出加洲鲈35条带其中特异性带16条,罗非鱼21条带其中特异性带8条,测得加洲鲈与罗非鱼之间的带纹相似系数为0.236,遗传距离为0.764,表明加洲鲈和罗非鱼之间的亲缘关系较远。     

加洲鲈与罗非鱼群体的RAPD分析

利用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术对加洲鲈和罗非鱼种群间的亲缘关系进行分析。结果显示加洲鲈与罗非鱼之间的带纹相似系数为0．236,遗传距离为0．764。表明加洲鲈和罗非鱼之间的亲缘关系较远。     

大口黑鲈烂身病病原菌的分离、鉴定与特性分析

从患烂身病的大口黑鲈溃烂部位分离到优势菌株M-1。人工回归感染试验结果显示,分离的菌株M-1能复制出相似症状;对M-1菌株进行形态学、理化特性分析,初步判定所分离菌为嗜水气单胞菌;对M-1菌株进一步进行DNA分子鉴定,结果显示该菌的16S rRNA基因、溶血素(hemolysin,hlyA)基因,均与GenBank上已登录的嗜水气单胞菌的相应基因具有较高同源性;利用16S rRNA和hlyA构建的系统进化树也显示M-1菌株与与嗜水气单胞菌聚为一类。综合人工回归感染试验、理化特性分析与基因鉴定结果,确定患烂身病的大口黑鲈应为嗜水气单胞菌感染。     

大口黑鲈肝细胞原代培养方法的建立

取材大口黑鲈肝脏组织,培养其原代细胞,比较研究了组织块法和酶消化法两种培养方法及不同的培养条件,以确定其最佳培养方法和条件,同时观察了长期培养过程中肝细胞的形态变化。结果表明:组织块方法不适于大口黑鲈肝细胞的培养,未见细胞从组织块中迁出。而胰蛋白酶消化法获得良好稳定的培养效果。胰蛋白酶浓度0.25%,消化时间20 min,分步收集肝细胞,经台盼蓝检测和血球计数板计数,平均活力>90%,每克肝重可获得3×106个分离肝细胞。在细胞活力和数量两方面达到最佳平衡。在含20%胎牛血清、10μg/mL胰岛素的M199/L15培养基中,于4%CO2,28℃培养箱中长期培养并传代。     

大口黑鲈肝细胞原代培养方法的建立

取材大口黑鲈肝脏组织,培养其原代细胞,比较研究了组织块法和酶消化法两种培养方法及不同的培养条件,以确定其最佳培养方法和条件,同时观察了长期培养过程中肝细胞的形态变化。结果表明:组织块方法不适于大口黑鲈肝细胞的培养,未见细胞从组织块中迁出。而胰蛋白酶消化法获得良好稳定的培养效果。胰蛋白酶浓度0.25%,消化时间20 min,分步收集肝细胞,经台盼蓝检测和血球计数板计数,平均活力>90%,每克肝重可获得3×106个分离肝细胞。在细胞活力和数量两方面达到最佳平衡。在含20%胎牛血清、10μg/mL胰岛素的M199/L15培养基中,于4%CO2,28℃培养箱中长期培养并传代。     

大口黑鲈北方亚种和佛罗里达亚种的同工酶分析

应用水平式淀粉凝胶电泳法,对2尾大口黑鲈的肌肉、肝脏、肾脏、心脏、眼、脑和鳃等7种组织的12种同工酶及蛋白质进行了检测筛选的预试验。实验认为,肌肉和肝脏的电泳带清晰、可以判别个体基因型的同工酶有7种,分别为AAT、GPI、IDH、LDH、MDH、ME和PGM。依据筛选结果,检测了50尾大口黑鲈北方亚种和40尾佛罗里达亚种肌肉和肝脏组织的7种同工酶,共检测出13个基因座位。除AAT-I＊基因座位之外的12／~-基因座位上两个亚种群体内的个体间无变异,平均杂合度观察值硪和平均杂合度预期值He均为0。田H。J＋和MD￡卜j＋两个基因座位在两个亚种间有明显差异,佛罗里达亚种均具有＋a基因,北方亚种均具有书b基因,可以此鉴定两个亚种。两亚种群体间的肫遗传距为0．1823。     

大口黑鲈早期生长发育规律的研究

为了研究大口黑鲈Micropterus salmodies早期生长的发育规律,选用8个全同胞家系的大口黑鲈,每月从每个家系中随机选取30～40尾,对其体重和体长进行测量。运用Gompertz、Logistic和Von Bertalanffy3种非线性模型对大口黑鲈体重和体长的生长进行非线性曲线拟合分析,同时利用幂函数方法对大口黑鲈体重与体长的生长关系进行分析。结果表明:3种非线性模型均能较好的模拟大口黑鲈体重和体长的生长,而Logistic模型拟合效果更佳;进一步分析体重和体长的最佳拟合参数,发现体重和体长的拐点月龄分别为5.77月龄和4.95月龄,拐点处体重和拐点处体长分别为146.35 g、13.75 cm;幂函数方程能很好地拟合大口黑鲈体重和体长之间的关系,其方程为W=0.076L2.650(R2=0.998)。研究结果可为大口黑鲈养殖中的饲养管理和品种选育提供参考。     

大口黑鲈早期生长发育规律的研究

为了研究大口黑鲈Micropterus salmodies早期生长的发育规律,选用8个全同胞家系的大口黑鲈,每月从每个家系中随机选取30～40尾,对其体重和体长进行测量。运用Gompertz、Logistic和Von Bertalanffy3种非线性模型对大口黑鲈体重和体长的生长进行非线性曲线拟合分析,同时利用幂函数方法对大口黑鲈体重与体长的生长关系进行分析。结果表明：3种非线性模型均能较好的模拟大口黑鲈体重和体长的生长,而Logistic模型拟合效果更佳;进一步分析体重和体长的最佳拟合参数,发现体重和体长的拐点月龄分别为5.77月龄和4.95月龄,拐点处体重和拐点处体长分别为146.35 g、13.75 cm;幂函数方程能很好地拟合大口黑鲈体重和体长之间的关系,其方程为W=0.076L2.650（R2=0.998）。研究结果可为大口黑鲈养殖中的饲养管理和品种选育提供参考。     

1龄加州鲈形态特征及其相关参数分析

为全面了解加州鲈生物学特性,以期进一步丰富其生物学资料,为其分类和养殖提供科学依据,采用传统形态学方法和解剖学方法,观察和测量了其外部形态特征、可量和可数性状及内部结构特征.1龄加州鲈体型纺锤形,背部黑色,体侧青绿色,腹部白色,身体两侧分布有黑色条纹,身上布满栉鳞,其比肠长、比肠重和比内脏重分别为0.833、0.006...