甘薯脱毒技术及增产效果研究

作者于１９８８～１９９５年研究了甘薯病毒及甘薯脱毒技术,明确了侵染山东甘薯的主要病毒种类是甘薯羽状斑驳病毒和甘薯潜隐病毒,在国内首次分离侵染甘薯的烟草花叶病毒,探明了其生物学特性。筛选出适合山东甘薯茎尖培养基的最佳激素配比,浓度,ｐＨ值。探索了脱毒薯的增产机理和增产效果,提出了组织培养,茎尖苗检测,脱毒薯速率与推广应用的配套技术规程,培养出徐薯１８等１２个品种的脱毒苗,平均增产４２．９％出干率提高     

甘薯茎尖脱毒研究

本文报道了应用甘薯茎尖分生组织培养技术获得脱毒苗的研究结果。试验表明切取的茎尖大小与脱毒效果呈显著的负相关（ｒ＝－０．９８７５），表明病毒距茎尖呈递减分布，越接近茎尖顶端带病毒越少或不带病毒。分生组织带１～２个叶原基脱毒效果较好，添加适量的病毒钝化剂可提高脱毒率，但抑制茎尖生长，成苗率有所降低。选用无症状、生长健壮的薯苗作脱毒材料，可以得到较高脱毒率的组培苗。     

菊花母株病毒鉴定及其茎尖组培脱毒苗的病毒检测

选用显斑驳症状的兼云香、赤线金钩和叶片黄化的泉乡万圣和泉乡冲天等共4个品种的葡萄母株，龙茎脱毒获得的茎组培苗用生物学和血清学方法检测葡萄母株和组培苗的带毒情况。鉴定结果表明，兼云香母株（1A）带有葡萄B病毒，其组培苗未能脱去该病毒。赤线金钩母株（2A）带有番茄不孕病毒（TAV）和葡萄B病毒（CVB）复合侵染，其组培苗脱去了TAV病毒还带有CVB病毒。万乡泉圣母株（3A）和泉乡冲天母株（4A）带有菊花B病毒，其组培苗均脱去了此病毒，是真正的脱毒组培苗。     

甘薯病毒病脱毒技术及检测

茎尖分生组织脱毒培养技术是目前国际上防治甘薯病毒病最有效的方法。本文综述了我国甘薯病毒病的田间表现及病原种类，在此基础上阐述了茎尖分生组织脱毒培养技术以及脱毒效果的检测技术等。     

电流处理抑制甘薯丛枝病症状及提高茎尖培养成苗率

甘薯丛枝病在我国东南沿海主薯区流行多年,发病率高,是影响我国甘薯产量和品质的一个主要限制因子。其典型症状是植株叶小、褪绿、矮缩和侧枝丛生。甘薯丛枝病病原物是一种类菌质体(Mycoplasma-like organism,MLO),现在国际上统称植原体(Phytoplasma)。     

柑桔碎叶病毒,茎陷衰退病毒脱除技术研究

Calavan等(1972)报道采用40/30℃ 44/30℃6 2星期,脱除北京柠檬碎叶病毒。Roistacher等(1972)采用50℃湿热处理北京柠檬3～22h,得到无碎叶病毒,并于1976、1977年报道,茎尖嫁接不能脱除柑桔碎叶病毒(CTLV)。宫川(1980)提出40/30℃120日脱除椪柑、蕉柑等碎叶病毒。Koizumi(1984)采用40/30℃9日 35/30℃13～20日 茎尖     

甘薯病毒病的研究Ⅰ甘薯羽状斑驳病毒的分离、鉴定

 本文从寄主范旧,蚜传特性、病毒颗粒形态、免疫电镜等方面对嫁接获得的甘薯羽状斑驳病毒廊坊分离物(SPFMV-LF)进行了鉴定,并和SPFMV-RC(美国株)进行了实验比较。SPFMV-LF易汁液摩擦传播和嫁接传播,并以蚜虫非持久性传播,SPFMV-LF系统侵染巴西牵牛(Ipomoea setosa)、牵牛(I.nil);不侵染Chenopodium quinoa、C.ama-ranticolor、Nicotiana benthamiana及其它烟草。尚未发现其局部斑寄主。SPFMV-LF及SPFMV-RC感染I.setosa后引起相似的症状,但感染I.nil后症状差别较大。病毒颗粒长860-830nm,经两次蔗糖垫超速离心从SPFMV-LF感染的I.setosa叶片提取病毒并在BALB/C小鼠中制备抗SPFMV-LF的腹水多克隆抗体,免疫电镜表明,SPFMV-LF的抗体和SPFMV-RC株系有反应。上述实验结果表明SPFMV-LE是SPFMV的一个株系,但不同于SPFMV-RC。     

地黄脱毒技术及增产效果

对地黄脱毒技术进行了研究.从6种不同浓度激素组合的培养基中,筛选出地黄茎尖培养较适宜的培养基为MS 6-BA 1mg/L NAA 0.1mg/L,不同地黄品种在该培养基上的茎尖培养成苗率为76.6%～90.5%;适宜的快繁培养基为MS 6-BA 0.3mg/L NAA 0.02mg/L GA 0.1mg/L.建立了地黄茎尖苗的病毒检测技术,培育出4个地黄品种的脱毒苗,茎尖苗的平均脱毒率为52.3%.对地黄脱毒苗与非脱毒苗的生育性状、田间发病率及产量进行了比较,脱毒地黄种苗的株高、叶面积和叶片数明显高于非脱毒苗;脱毒地黄地上部病毒病的显症率明显下降,新生叶片数增加;脱毒地黄的增产幅度为16.5%～45.5%,平均31.0%.     

用作遗传种质的马铃薯健康检验及其无毒苗的再生

健康种质是马铃薯生产和品质改良的基本要求。在对３个用作转基因种质的马铃薯进行病毒检测时，发现均带ＰＶＸ及ＰＶＹ病毒，经茎尖培养，获得了这３个品种的健康无毒苗，最后，对健康种质检验标准、病毒检测方法及再生无毒苗的方法进行了讨论     

植物诱抗剂AHO联合茎尖培养脱除马铃薯S病毒和马铃薯Y病毒

研究了植物诱抗剂3-丙酮基-3-羟基羟吲哚(3-acetonyl-3-hydroxyoxindole, AHO)联合茎尖培养从试管苗中脱除马铃薯S病毒(PVS)?马铃薯Y病毒(PVY)的方法和效率?取PVS侵染的‘定薯3号’和‘定薯4号’以及PVY侵染的‘靖薯3号’和‘靖薯4号’的壮芽, 茎尖剥离后培养至4~5个叶片, 用100 mg/L植物诱抗剂 AHO水剂喷施试管苗, 每隔2 d喷施一次, 共3次, 末次喷施2 d后取茎尖剥离培养, 获得再生试管苗?用电子显微镜负染色?ELISA?荧光定量RT-PCR检测再生试管苗的带病毒情况?结果显示, AHO对4个品种的马铃薯试管苗生长无影响, 用AHO处理后再茎尖剥离培养, 脱毒率均高于未处理的对照; 检测结果还显示AHO处理的马铃薯再生苗的带毒量也低于未处理的对照, 且随处理次数增加带毒量下降?研究结果表明, 利用植物诱抗剂AHO联合茎尖剥离培养方法可以提高脱除PVS?PVY的效率, 获得无病毒核心苗?     

中国甘薯病毒种类的血清学和分子检测

 2009～2010年,从我国18个省（市）采集了176份表现病毒病症状的甘薯样品。利用血清学、PCR和核苷酸序列测定的方法,对上述样品中的病毒种类进行了鉴定。血清学检测结果表明,供试样品中甘薯羽状斑驳病毒（SPFMV）的阳性率最高,达56.3%,其次为甘薯G病毒（SPVG）和甘薯类花椰菜花叶病毒(SPCaLV),阳性率分别为34.1%和33.5%。PCR和核苷酸序列测定结果表明,我国甘薯上至少存在SPFMV、SPVG、甘薯潜隐病毒（SPLV）、甘薯褪绿斑病毒（SPCFV）、甘薯褪绿矮化病毒（SPCSV）、黄瓜花叶病毒（CMV）、甘薯脉花叶病毒（SPVMV）和甘薯卷叶病毒（SPLCV）8种病毒。此外,供试样品中没有检测出甘薯轻斑驳病毒（SPMMV）,是否存在甘薯轻斑点病毒(SPMSV)、SPCaLV和C 6病毒尚不能确定。     

山东甘薯主要病毒的鉴定及多样性分析

为明确山东省甘薯病毒病发生现状,在重病区调查采样,通过鉴别寄主、电镜和分子检测技术明确主要病毒种类;并克隆病毒外壳蛋白基因序列,利用Mega 5.0构建系统进化树进行遗传分析。结果显示,巴西牵牛嫁接甘薯染病枝条后叶片黄化、褪绿及皱缩;病样组织中存在大量600~900 nm的线状病毒粒子和柱状内含体。24份病样中检测到甘薯羽状斑驳病毒、甘薯潜隐病毒、甘薯G病毒、甘薯曲叶病毒和甘薯褪绿矮化病毒5种病毒,其中23份为复合侵染,存在11种侵染类型。遗传分析显示山东省甘薯羽状花叶病毒主要为EA、O和C株系,甘薯潜隐病毒与周边省份分离物相近,甘薯G病毒与中国海南和美国分离物相近,甘薯曲叶病毒分属3个株系。表明山东地区甘薯病毒种类繁多,侵染模式复杂,病毒遗传结构具有多样性。     

昆虫病原斯氏和异小杆线虫人工大量培养的研究概况

昆虫病原斯氏和异小杆线虫的大面积田间应用要求线虫有效地生产，本文介绍业已建立线虫大量培养方法及合适于大规模生产线虫的工厂化培养系统及有关的技术参数，并讨论其优化管理问题。     

稻曲病菌薄壁分生孢子制备的影响因素分析

本文研究了培养基、温度、振荡速度等因素对稻曲病菌Ustilaginoidea virens薄壁分生孢子产孢量的影响。结果表明,稻曲病菌薄壁分生孢子在培养第7天基本达到最大孢子量;该菌最适宜产孢的培养基为马铃薯煮汁,在煮汁中添加蔗糖可大幅提高产孢量;适宜的产孢温度为26~28℃;静止培养不利于产孢,振荡培养有利于产孢,并表现为转速越高产孢量越多;光照条件对产孢量没有影响。     

First identification of a sweet potato begomovirus (sweepovirus) in Uganda: characterization,detection and distribution

Sweet potato begomoviruses diverge basally from all other begomoviruses and have been named sweepoviruses. In 2009, a sweepovirus was detected for the first time in sweet potato crops in Uganda by using the indicator plant Ipomoea setosa and generic primers in a polymerase chain reaction (PCR). An isolate was cloned and sequenced, the first fully sequenced genome of a sweepovirus from mainland Africa. At the nucleotide level, this isolate differed from other sweepoviruses by at least 13%, discriminating the Ugandan isolate as a new species which has been tentatively named Sweet potato leaf curl Uganda virus (SPLCUV). In infected sweet potato plants, SPLCUV showed an uneven distribution; it was detected more often in samples from the midrib and lamina of middle and lower leaves, and reversion to healthy tissue occurred, especially in shoots of cv. New Kawogo. This appears to be the first report of resistance to a sweepovirus in sweet potato. While it was only detected at relatively low efficiency by PCR, use of I. setosa plants as an indicator of sweepovirus infection in sweet potato plants was as efficient as using real‐time quantitative PCR (qPCR). Storage of dry leaves for 84 days and dried DNA extracts for 21 days did not affect the ability of PCR and qPCR to detect it. Sweepovirus(es) was detected frequently using generic primers in cultivars Ejumula, New Kawogo and 318L in eastern and central Uganda.     

Uneven distribution of two potyviruses (feathery mottle virus and sweet potato latent virus) in sweet potato plants and its implication on virus indexing of meristem derived plants

Abstract

The distribution of two sweet potato potyviruses, FMV and SPLV, was assessed in three plants infected with both viruses and in one plant infected with FMV only. All leaves, the top and basal sections of the main stem, and branch sections were tested by ELISA. Both symptomless leaves and leaves showing symptoms including purple rings, chlorotic spots, mottle or discoloration were found to contain the viruses. However, neither could be detected in every leaf or stem piece. SPLV was found in a lower proportion of leaf and stem samples than FMV. This indicates that the two viruses are either very unevenly distributed within sweet potato plants or that the virus concentration in some parts is below the detectable level. Testing of each leaf is recommended for reliable virus indexing of small, meristem‐derived sweet potato plantlets, if the ELISA method is used. Additional indexing of all ELISA‐negative materials by grafting to susceptible indicator plants is nevertheless still necessary.