干制羊肉基因组DNA不同提取方法的比较

为了研究干制加工羊肉基因组DNA的最佳提取方法,本试验采用传统酚-氯仿法、磁珠法、改良CTAB法、离心柱法分别提取干制处理后的羊肉基因组DNA,并对4种方法提取的羊肉基因组DNA浓度、纯度、完整性以及提取所需时间、PCR扩增效果等进行比较。结果表明,采用磁珠法提取DNA的效果更好,DNA浓度为118.87 ng·μL^-1,A₂₆₀/A₂₈₀值为1.89,而且此方法具有提取时间短、效率高、污染小等特点。本研究结果为干制加工羊肉基因组DNA的大批量提取和检测提供了参考依据。     

甘蔗基因组DNA简单和快速提取方法

目前国内外关于提取DNA的方法很多(Honeycutt et al．，1992；顾红雅和瞿礼嘉，1998)，但因研究的对象和目的不同而有所差异。甘蔗含有大量的酚和多糖等有机物质，由于这些物质的干扰，按照常规提取植物组织总DNA的方法提取甘蔗基因组DNA，常常因产量小和纯度低而不能满足实验要求。本实验在前人研究的基础上(Honeycutt et al．，1992；顾红雅和瞿礼嘉，1998)，对所用药品及技术进行改进，摸索出一套快速、简便且可获得高质量基因组DNA的改良方法。用此方法提取的DNA进行酶切、RAPD和Southem杂交分析，都取得了良好的效果。     

稻米深加工产品基因组提取方法及其对PCR的影响

以4种米粉为原料,每个样品做3个梯度(120、800和2000mg),采用改进的经典酚/仿法、CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)沉淀法以及盐酸胍/氯仿法提取基因组,经PCR扩增内标基因(SPS)检测方法的优劣。结果显示,120mg的样品经3种方法提取的基因组均不能扩增出内标基因;800和2000mg的样品只有用CTAB沉淀法提取的基因组(采用相同的模板量)能全部扩增出内标基因。结果表明,CTAB沉淀法提取基因组的效果最好,对PCR的抑制现象最少。     

蝴蝶兰类原球茎DNA总甲基化水平测定方法的研究

探讨DNA提取中不同蛋白质变性剂对胞嘧啶(C)和5-甲基胞嘧啶(5mC)色谱的影响,建立蝴蝶兰类原球茎DNA总甲基化水平的HPLC测定方法。本实验采用2种CTAB法(蛋白质变性剂不含酚和含酚)提取基因组DNA,水解后分别以反相HPLC测定C和5mC含量。色谱条件为:色谱柱HypersilBDS Cl8,甲醇-10mmol/L戊烷磺酸钠-三乙胺(6∶90∶0.2,V/V)为流动相,流速0.5ml/min,检测波长273nm。应用不含酚变性剂所提取DNA的水解液C和5mC能较有效分离。以本试验优化的DNA提取方法和HPLC色谱条件,基因组DNA水解液的C和5mC色谱可得到较好的效果。     

土壤微生物总DNA提取方法的比较

采用4种土壤DNA提取方法提取了5种类型土壤的微生物总DNA，并对4种提取方法的DNA提取效果进行综合分析，进一步通过PCR—DGGE扩增提取DNA中的细菌16S rDNA片段，并对扩增产物进行DGGE电泳分析。结果表明，SDS-高盐缓冲液法抽提的DNA得率最高，SDS-酚氯仿抽提法的DNA得率最低。DNA的纯度，以BIO-101 DNA Extraction Kit试剂盒法最高，改进试剂盒法纯度最低。通过PCR-DGGE分析土壤微生物多样性结果表明，BIO-101 DNA Extraction Kit试剂盒法提取的DNA代表的微生物多样性最全，而SDS酚氯仿法抽提的DNA代表性最差。     

稻米深加工产品基因组提取方法的研究及其对PCR的影响

本实验以四种米粉为原料，每个样品做三个梯度：120mg, 800mg, 2000mg，采用改进的经典酚/仿法、CTAB沉淀法以及盐酸胍/氯仿法提取基因组，并通过聚合酶链式反应(PCR)通过扩增内标基因(SPS)来检测提取方法的优劣。结果显示：120mg的样品经三种方法提取的基因组均不能扩增出内标基因；800mg的样品和2000mg的样品只有用CTAB沉淀法提取的基因组(采用相同的膜板量)能全部扩增出内标基因。结论：CTAB沉淀法提取基因组的效果最好，对PCR的抑制现象最少。     

浅谈芒果基因组DNA的提取

芒果是重要的经济果树之一,富含多酚、多糖、单宁等其他次生代谢干扰物质,因此其基因组DNA的获取和纯化较为困难。笔者对芒果基因组DNA提取方法进行了探讨,常用的获取方法有SDS法、CTAB法和试剂盒法,而CTAB法提取效果较好。     

稻米中PCR抑制因子的3种去除方法

针对在检测过程中发现的部分水稻(Oryza sativa)样品中存在不同程度的PCR抑制现象,研究了3种去除这些抑制物质的方法即DNA样品稀释法、硅膜纯化基因组法和低熔点琼脂糖纯化法.结果表明这3种方法均非常有效地确保了检测结果的正确性.其中DNA样品稀释法去除抑制因子最简单快捷,硅膜纯化基因组法虽然操作复杂,但去除效果最好;低熔点琼脂糖纯化法去除抑制因子的效果则介于以上两种方法之间.     

大青杨基因组DNA提取方法的比较

本研究采用改良SDS法、常规CTAB法和改良CTAB法(1.5×CTAB,2×CTAB,3×CTAB)提取大青杨基因组DNA,并用紫外光普分析、凝胶电泳、限制性内切酶消化和RAPD方法进行鉴定。结果表明:5种方法中,改良SDS法DNA提取率最高,但CTAB法比改良SDS法提取获得的DNA纯度高,OD260/OD280为1.73～1.81。与常规CTAB法比较,改良SDS法和改良CTAB法能有效去除蛋白、多糖、酚类及次生代谢物质。综合分析确定改良2×CTAB法为大青杨基因组DNA的最佳提取方法。     

一种适于PCR扩增的植物基因组快速提取新方法

在传统的碱裂解法提取基因组的基础上建立了一种新的基因组提取方法,这种方法对传统碱裂解制备基因组的方法进行优化,并且调整了中和剂的用量,引入异丙醇沉淀步骤对基因组进行纯化.实验证明这种方法扩大了碱裂解法制备基因组的适用范围,可直接从植物种子中快速提取出用于PCR(polymerasechain reaction)模板的基因组,对于600 bp以下的目的基因的检测效果显著,可以发现待测组分含量大于1%的样品.整个基因组提取时间控制在21 min,大大缩短了基因组提取时间,并且避免了酚/仿等对人体有害药品的使用.