减毒猪霍乱沙门菌C500作为基因疫苗运载体的研究现状

基因疫苗具有众多的优点,被誉为疫苗研究的第3次革命,但是在畜牧生产的使用中存在系列亟待解决的问题,其中关键的问题就是如何将基因疫苗表达质粒导入到动物机体免疫细胞,减毒胞内寄生菌的应用很好的解决这一问题.目前我国仔猪副伤寒弱毒活疫苗使用的基本都是C500株,以其作为猪群重要传染病基因疫苗运载体的应用研究具有重要临床应用价值,对猪霍乱沙门菌疫苗株C500作为基因疫苗运载体的研究现状予以概述.     

猪霍乱沙门菌C500运载CSFV新型基因疫苗的稳定性及免疫安全性

为研究猪霍乱沙门菌C500(S.C500)运载猪瘟病毒(CSFV)新型基因疫苗的稳定性与免疫安全性,将表达载体pCB-ME2-IL-15、pCC-ME2-IL-15、pCI-ME2-IL-15及pCI-neo转入S.C500,采用体外增殖试验考察不同表达载体在S.C500中的稳定性;采用携质粒S.C500对ST细胞的粘附、侵袭力和增殖试验研究不同表达载体对运载体生物学特性的影响;采用BALB/c小鼠口服免疫试验研究表达质粒在体内的稳定性和运载体对小鼠的安全性。结果显示:体外增殖中pCB-ME2-IL-15、pCC-ME2-IL-15和pCI-ME2-IL-15稳定性好于pCI-neo,说明外源目的基因正调表达质粒在运载体内的稳定性;空运载体S.C500对ST细胞的粘附率和侵袭率均高于4组含不同质粒的菌株,而4组含不同质粒的菌株之间亦有差异;空运载菌在ST细胞内的增殖能力与4组含不同质粒的菌株之间亦有显著性差异;分别对携带表达载体pCB-ME2-IL-15、pCC-ME2-IL-15和pCI-ME2-IL-15菌株以每只2×108CFU/0.2 mL的剂量进行小鼠口服免疫,腹泻率依次为0%、8.33%和25%。在第7和14天,使用DHL/Amp琼脂培养平板,均可从肝脏、脾脏、十二指肠和新鲜粪便样品中分离到重组菌。试验提示采用猪霍乱沙门菌C500运载CSFV新型基因疫苗免疫BALB/c小鼠具有相对稳定性和免疫安全性。     

猪霍乱沙门菌C500株的检定及安全性评价

为进一步评价仔猪副伤寒活疫苗生产用菌种C500株的安全性,本研究繁殖了1批菌种(F2代)并对其全面检定。同时将从仔猪副伤寒活疫苗中分离出疫苗株和仔猪副伤寒活疫苗(2头份疫苗菌数与菌种安全性试验标准一致)均按《中华人民共和国兽用生物制品规程》安全性的标准进行试验。结果显示,真空度、纯粹、剩余水分、小鼠安全性及兔子免疫原性均符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》的规定,但兔安全性初次检验不符合规定,重检符合规定,猪安全性初次检验不符合规定,重检符合规定,疫苗分离菌兔安全性比同菌数疫苗的安全性好。剖检结果显示,所有安全性试验的兔和猪均存在不同程度的内脏损伤。提示菌数超过一定范围会影响其安全性,在配疫苗时不能为满足活菌计数的要求,盲目增加菌数的附加量,本研究对疫苗生产和临床应用具有一定指导意义。     

猪霍乱沙门菌C500运载猪瘟病毒新型基因疫苗在家兔体内的免疫应答

为研究猪霍乱沙门菌C500(S.C500)运载猪瘟病毒(CSFV)新型基因疫苗口服免疫家兔的体内免疫应答特点,采用电转化法将CSFV新型基因疫苗转化到S.C500,构建重组工程菌,口服免疫接种家兔,检测CSFV、S.C500特异性抗体;并用猪瘟兔化弱毒疫苗及猪伤寒沙门菌野毒株依次进行攻毒试验。结果显示,成功构建CSFV新型基因疫苗重组菌S.C500/pCB-ME2-IL-15,S.C500/pCC-ME2-IL-15。口服免疫家兔可以诱导产生抗CSFV和S.C500的特异性ELISA抗体,且S.C500/pCC-ME2-IL-15略显优势。经三免后免疫家兔能够部分抵抗猪瘟兔化弱毒疫苗与猪伤寒沙门菌野毒株的攻击。试验提示以S.C500为CSFV新型基因疫苗运载体的猪用重组活菌苗具有可行性。     

减毒鼠伤寒沙门菌活疫苗载体研究进展

活载体疫苗技术的发展促使产生了更多的疫苗设计新思路.沙门菌是一种肠道细菌,目前已通过基因突变的方法构建了许多种减毒株,如GID101、GID105、X4064、ZJⅢ、Ty800、X4632、X4550、X4072和X3730等,这些减毒株被突变掉了两个或两个以上的基因,然而其基因型和血清型仍很稳定,所以人们常将其用作基因疫苗的表达载体或运送载体.现在已有许多种细菌、病毒和寄生虫的减毒沙门菌活载体疫苗被研制成功.文章对沙门菌的减毒方法,减毒沙门菌的免疫机理以及其用途和作为疫苗载体的优缺点做了简述.     

减毒猪霍乱沙门氏菌作为疫苗及载体的研究进展

猪霍乱沙门氏菌是引起仔猪副伤寒的主要病原之一,同时也是食物中毒的重要病原,因此在养殖业和公共卫生上均有重要意义。本文就其疫苗及疫苗作为载体的研究进展作一综述。     

禽用减毒沙门菌活载体疫苗的研究进展

疫苗主要通过激发机体的免疫系统来达到防治疾病的目的。目前,疫苗主要有灭活疫苗、减毒疫苗及基因工程疫苗等。基因工程疫苗包括基因缺失苗、基因重组苗等。活载体疫苗是将胞内感染性的细菌直接用来运载目的基因进入体内,而产生相应的免疫应答反应。目前沙门菌的预防与治疗通常使用药物,但沙门疫苗研究正迅速发展,如减毒沙门菌活载体疫苗则是将减毒后的沙门菌作为载体,     

减毒猪霍乱沙门氏菌C500抗冻保护剂的优化研究

本试验旨在优化减毒猪霍乱沙门氏菌C500抗冻保护剂,提高工程菌C500的存活率。通过单因素试验考察了4种类型的抗冻保护剂（渗透性、半渗透性、非渗透性保护剂及抗氧化剂）对工程菌C500冷冻保存前后存活率的影响,各保护剂设置不同的浓度并与工程菌C500等体积混合,于液氮中保存2周后进行平板计数以计算其成活率,初步筛选出最有利于菌种保存的渗透性保护剂、半渗透性保护剂、非渗透性保护剂和抗氧化剂及其最佳保护浓度,最后将筛选出的4种保护剂进行四因素三水平的正交试验以得出最佳的组合配方。单因素试验的结果表明,渗透性保护剂中乙二醇、半渗透性保护剂中蔗糖、非渗透性保护剂中聚乙烯吡络烷酮（PVP）及抗氧化剂中甘氨酸对工程菌C500的保护作用最佳,最佳保存浓度分别为15%、6%、6%和0.25%;正交试验结果表明,各因素均对工程菌C500的存活率有显著影响,筛选出的最佳组合配方为17%乙二醇、9.0%蔗糖、6.0% PVP、0.35%甘氨酸,最佳组合在-80 ℃的保存效果最佳,此温度下保存6周存活率可达88.34%,其次为液氮组、-20 ℃组及4 ℃组。这表明本试验得到的保护剂配方极大地提高了工程菌C500的抗冻能力,使其存活率大大提高。     

沙门菌nirB基因启动子区域分子克隆及序列分析

为了给构建含沙门菌内源性诱导启动子基因疫苗表达载体奠定物质基础,试验从活化培养的 猪霍乱沙门菌C500中提取细菌基因组DNA,运用PCR技术扩增nirB基因启动子区域,回收、纯化,将TA克隆到pUCX-T载体上,对阳性克隆进行测序和生物信息学分析.结果表明:成功扩增出nirB基因启动子区域,长约760 bp;成功构建了...     

猪霍乱沙门菌抗噬菌体菌株筛选及受体基因突变位点分析

【目的】筛选抗噬菌体菌株并分析其受体基因突变位点,为解析猪霍乱沙门菌噬菌体抗性突变的产生机制提供理论依据。【方法】以猪霍乱沙门菌CICC 21501及其裂解性噬菌体vB＿SenS＿S528(噬菌体S528)为研究对象,通过波动实验筛选自发突变的抗噬菌体菌株,观察菌落形态,并测定其对噬菌体的敏感性、吸附特性、生长曲线及对温度和pH的敏感性。通过全基因组重测序结合PCR验证定位耐受基因突变位点。【结果】成功筛选出1株抗噬菌体S528的突变菌株,命名为B6-2。B6-2菌落边缘粗糙,与野生菌相比,生长曲线无显著差异,对pH表现出敏感性,在40、50℃时表现出温度耐受性。噬菌体S528对抗噬菌体菌株B6-2的吸附率减少60%(对野生菌吸附率为93%)。通过全基因组重测序及比对分析得知,B6-2菌株有3个位点发生了突变,分别为PROKKA＿04510基因中2个位点和rfbC基因中的1个位点发生突变。突变基因片段的PCR产物电泳及测序结果均表明,PROKKA＿04510基因上的2个位点并未发生突变,而真正发生突变的位点位于rfbC基因的350 bp处,碱基由C突变为T。【结论】筛选到1株与受体改变...     

猪霍乱沙门菌菌蜕的制备及免疫保护力研究

为制备猪霍乱沙门菌菌蜕并研究其免疫保护力,本实验克隆噬菌体phiX174裂解基因E,与pBV220连接,构建温控溶菌表达载体,将该载体转入猪霍乱沙门菌TTB1中,制备菌蜕并对其裂解率、安全性以及对小鼠的免疫保护力进行了研究。结果显示：成果克隆了裂解基因E、片段大小274bp,构建了温控溶菌质粒载体pBVE,制备了猪霍乱沙门菌菌蜕,其裂解率最高为99.46%、经冻干灭活残余活菌,安全性试验检测证实其安全后,对小鼠进行了免疫保护试验,其保护率为70%、与弗氏佐剂灭活苗保护率相当、优于甲醛灭活苗。研究结果为猪霍乱沙门菌引发疾病的防治奠定了基础。     

减毒沙门菌疫苗研究进展

沙门菌是重要的人兽共患病痛原,在医学、兽医学和公共卫生学上均具有十分重要的意义。最早用灭活苗来预防沙门菌病,逐步发展到基因工程减毒活疫苗,其中基因工程活疫苗经过不断的发展,逐步显示出其优越性。论文就沙门菌的疫苗的研究进展进行了综述。     

减毒沙门菌在禽用疫苗应用中的研究进展

减毒沙门菌感染宿主细胞后,可诱导机体产生强烈的体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫反应,不仅可以用作疫苗,而且也是理想的疫苗载体.文章对禽用疫苗中的减毒沙门菌活疫苗、减毒沙门菌携带的重组疫苗和DNA疫苗的研究进行了综述,以期为新型禽用疫苗的研究提供参考.     

5种中药对猪霍乱沙门菌的抑菌作用

为研究黄连、黄芩、五倍子、黄柏和鱼腥草提取物对猪霍乱沙门菌的抑菌效果,采用超声波处理,乙醇回流,水浴加热的方法提取5种中药的有效成分,采用2倍稀释法分别测定提取物对猪霍乱沙门菌的最小抑菌质量浓度(mini-mum inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌质量浓度(minimum bactericidal concentration,MBC),采用肉汤稀释棋盘法,测定提取物对猪霍乱沙门菌的联合抑菌效果。结果显示,黄连单独抑菌时的MIC值较其他中药的MIC值低,且与黄芩、五倍子联合用药时MIC值由7.81×103 mg/L降到3.91×103 mg/L。而黄芩与黄连、黄柏、五倍子、鱼腥草联合用药时MIC值均降低。黄芩与其他4种药联合用药后抑菌效果增强,且与五倍子联合用药时FICI值小于0.5表现为协同作用,并且2种药物的MIC降低明显。结果表明,黄连、黄芩、五倍子对猪霍乱沙门菌有较好的抑菌作用,黄连、黄芩、五倍子联用时,抑菌效果为协同或相加作用;黄芩与鱼腥草联用时抑菌效果为无关作用;黄柏与鱼腥草联用时抑菌效果也为无关作用。     

沙门菌疫苗的应用现状及研究前景

沙门菌病（salmonellosis）是由沙门菌属（Salmonella）细菌感染引起的人畜共患病。接种疫苗是预防和控制畜禽沙门菌病的有效途径。由于当前使用的沙门菌减毒疫苗成本较高,免疫效果不稳定,免疫程序复杂,导致使用率不高。口服植物型沙门菌疫苗具有产量高、生产时间短、成本低、安全性高等特点。对口服植物型沙门菌疫苗的研究前景和研究方向进行综述,以期为该类疫苗的进一步研究开发和广泛利用提供参考。     

猪霍乱沙门菌裂解性噬菌体的分离鉴定及生物学特性研究

以药敏试验筛选出的多重耐药猪霍乱沙门菌为宿主,经双层琼脂纯化法从健康猪粪便中获得裂解性噬菌体SP3383。电镜观察发现该噬菌体为长尾病毒科成员;酶切分析表明其基因组为大于47.4 kb的双链DNA,可被限制性内切酶Nco I和BamH I酶切;生物学特性研究表明SP3383对温度和酸碱环境耐受力较好;最佳感染复数为0.1,潜伏期约为30 min,爆发期约60 min,平均爆发量为48 PFU/cell。本研究可为应用噬菌体治疗耐药猪霍乱沙门菌感染提供参考。     

禽沙门菌疫苗的研究进展

沙门菌(Salmonella)是重要的人畜共患病病原,能引起人类和动物的胃肠道疾病.污染沙门菌的家禽产品是人类感染沙门菌的主要来源之一.家禽的沙门菌疫苗接种是近年来用于降低家禽感染沙门菌概率及种群净化的重要策略,有助于降低人类感染沙门菌的风险.文章综述了多种沙门菌疫苗的优势、存在问题以及应用情况,为禽沙门菌疫苗的开发应...     

绿荧光蛋白基因在猪霍乱沙门氏菌C500株asd-缺失株平衡致死载体系统中的表达

猪霍乱沙门氏菌C500株是用化学方法致弱用于预防仔猪副伤寒病的弱毒疫苗株，毒力弱且免疫原性良好。为将猪霍乱沙门氏菌开发为适于粘膜免疫的疫苗活载体并保持原有免疫原性，构建了以C500为亲本菌，用负向选择的重组自杀性质粒介导接合转移的方法构建了无抗性标记的asd^-缺失株。首先构建asd（天冬氨酸β-半乳糖脱氢酶）基因缺失1408bp的带有蔗糖敏感基因sacB的重组自杀性质粒，与C500接合转移，两步法筛选无抗性的asd^-缺失株，通过PCR鉴定。该缺失株在无外源DAP（二氨基庚二酸）条件下溶菌死亡，它的生长必需外源DAP。PCR扩增绿荧光蛋白突变体4基因，克隆到带有asd基因的原核表达载体pYA3493中，电转化C500 asd^-缺失株，转化子在LB中生长，并激发强的绿荧光。上述结果表明，该asd^-缺失株的构建是成功的，并且可以用来作为宿主载体平衡致死系统来高效表达外源基因，为开发C500为载体的口服多价疫苗奠定了基础。     

活菌载体疫苗的研究概述

活菌载体疫苗是指将病原菌特异性抗原基因片段插入已知细菌中,以提呈表达所编码的抗原。因其具有安全性好、生产费用低、易于构建多价疫苗、能激起持久的系统和黏膜免疫反应且兼具免疫佐剂作用等优势,已成为疫苗领域的研究热点。目前,对活菌载体的研究主要集中在沙门氏菌、牛分枝杆菌-卡介苗(BCG)、志贺菌、单核细胞增多性李斯特杆菌等,本文主要对这类载体及疫苗研究做一概述。     

猪霍乱沙门菌的分离鉴定与耐药性分析

猪霍乱沙门菌是引起1～4月龄幼猪副伤寒的病原菌,属沙门菌属肠杆菌科,为革兰阴性小杆菌。其所引发的疾病称仔猪副伤寒,可造成猪场重大损失。笔者从滨州某大型养猪场发生幼猪慢性结肠炎的病猪中采集血液及粪便,分离出2例猪霍乱沙门菌,对其进行分离培养、鉴定和耐药性分析,旨在对养猪业的健康发展、饮食安全和公共卫生有一定指导意义。