鸭茅RAPD分子标记反应体系优化

以鸭茅基因组DNA为模板,对RAPD反应体系中的一些重要参数进行摸索和优化实验,建立了一套鸭茅RAPD分子标记的最优化反应体系。即20μl体系中,最终浓度:Mg2+2.0mm/L,dNTP200μmol/L,Taq酶1.0U,引物浓度0.5pmol/μl,模板DNA量为60ng。     

茄子RAPD分子标记体系的建立与优化

采用改良的CTAB法提取茄子基因组DNA,并通过单因素多水平梯度试验,比较筛选RAPD扩增体系的各影响因素,建立了茄子RAPD-PCR的最佳反应体系:20μL反应体系其中含25 mmol/L MgCl2 2.0μL1、0×PCR Buffer 2.0μL、10mmol/L dNTP 0.5μL5、U/μL Taq E 0.2μL0、.1μmol/L Primer 3μL1、0 ng/L模板DNA 3μL、灭菌双蒸水9.3μL。扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,37℃退火1 min7,2℃延伸1.5 min4,5个循环;72℃延伸10 min后4℃保存。     

獭兔RAPD反应体系优化研究

对獭兔RAPD体系中Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度、基因组DNA浓度进行研究。结果表明:Taq酶浓度为1.0 U,引物浓度为10 pmol/μl,基因组DNA浓度为50 ng/μl时,可获得清晰、稳定性好的条带。优化的RAPD反应体系为:总体积为20.0μl。10×Buffer(含Mg2+)为2.0μl;dNTPs(各2.5 mmol/L)为2.0μl;Taq酶浓度为1.0 U,引物浓度为10 pmol/μl,基因组DNA浓度为50 ng/μl;超纯水为13.8μl。PCR扩增条件为:97℃预变性7 m in,94℃1 m in,36℃退火1 m in,72℃2 m in,45个循环后,在72℃延伸10 m in结束,4℃保存。PCR扩增产物通过1.4%的琼脂糖凝胶电泳检测。点样后,以2~3 V/cm电压降稳压电泳3.0~3.5 h。     

甜瓜RAPD反应体系的优化

以甜瓜单性花类型植株为材料,采用改良的CTAB法提取基因组,对影响RAPD反应的各种因子进行筛选。结果表明:在20μL反应体积中,RAPD优化反应体系为:模板DNA浓度2.5ng/μL,dNTP 0.25 mmol/L,随机引物0.8μmol/L,TaqDNA聚合酶1.0U。利用此优化的反应体系,采用BSA法筛选出一条长约550bp与甜瓜单性花相关基因连锁的分子标记。     

黄芪RAPD反应体系的优化

以蒙古黄芪和膜荚黄芪为材料,建立了黄芪RAPD反应优化体系。即在20μl反应体积中,模板DNA为5 ng,引物为0.2μmol/l,dNTP为150μmol/L,MgCl2为2 mmol/L,Taq DNA聚合酶为1 unit,1×Buffer,反应程序为预变性94℃5 min,94℃45 s3,8℃60 s,72℃90 s,共循环40次,最后72℃延伸7 min。     

杜仲RAPD反应体系的优化

以杜仲优良品种的幼叶为材料提取总DNA,采用单因素梯度试验筛选法进行了杜仲RAPD反应的优化.确定的优化反应体系为:25 μL反应体积中,10×buffer 2.5 μL,TAqDNA聚合酶1 U,随机引物(5 μmol/L)2.0 μL,MgCl2(25 mmol/L)2.0 μL,dNTP(2.5 mmol/L)2.0 μL,模板2 mg/L,补ddH2O至25 μL.扩增程序为:94 ℃预变性5 min,94 ℃变性30 s,37 ℃退火30 s,72 ℃延伸90 s,35个循环,72 ℃延伸10 min,4 ℃保持产物.在此条件下得到的RAPD图谱清晰、稳定,为进一步利用该技术开展杜仲有关分子生物学研究提供了技术参考.     

晒烟RAPD反应体系的优化

以晒烟苗期幼叶为试材,通过设置不同的模版DNA、引物、dNTP、Mg2+及Taq DNA聚合酶的浓度梯度,优化RAPD的反应条件,建立1个适合晒烟的比较稳定的RAPD反应体系。结果表明,适合晒烟RAPD的反应体系是在25μL反应体系中,含模板40ng;引物UBC-388 1.5μL;Mg2+1.6mM;dNTP 0.2mM;Taq酶1U。     

苦楝RAPD反应体系的优化

以苦楝叶片提取的基因组DNA为材料,通过单因素多水平梯度试验,筛选DNA模板,Mg^2＋,Taq DNA聚合酶,dNTPs和随机引物的浓度及用量,建立苦楝RAPD技术分析体系.结果表明：当基因组DNA浓度为60 ng/μL,镁离子浓度为3.0 mmol/L,dNTP浓度为0.25 mmol/L,引物浓度为0.30μmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1 U/20μL,反应体系总体积20μL时,出现可辨认的清晰谱带.其扩增程序为：94℃预变性2 m in;然后38个循环（94℃变性30 s,37℃退火1 min,72℃延伸80 s）;最后72℃延伸8 min,4℃保存.     

山杏RAPD反应体系条件的优化

以山杏新鲜叶片为材料,研究了山杏RAPD分析过程中的影响因素,包括Taq酶、Mg2 、dNTP、引物、模板DNA浓度、变性时间、循环次数等,建立了适合山杏RAPD反应的PCR体系,即20μl反应体系中含有Taq酶1.0U、Mg2 2.0mM,四种dNTP各0.1mM,引物0.5μM,模板DNA50ng。扩增程序为:94℃预变性4mins;94℃变性1min,36℃退火1min,72℃延伸1.5mins,10个循环;94℃变性30s,36℃退火40s,72℃延伸60s,30个循环;最后72℃延伸5min。     

樟树RAPD反应体系的优化

以樟树叶片提取的基因组DNA为材料,对影响其RAPD-PCR各种反应条件的因子进行研究。结果表明:PCR反应时,总反应液20μL中基因组DNA浓度为8 ng/μL,镁离子浓度为2.0 mmol/L,dNTP浓度为0.2 mmol/L,引物浓度为0.2μmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1 U/(20μL)时,出现可辨认的鲜明谱带,为RAPD分析应用于樟树遗传多样性研究和良种选择打下良好的基础。     

半夏不同变异类型的RAPD分析

为了利用RAPD技术研究半夏的各种变异类型。以栽培多年的6个不同变异类型的半夏为实验材料,取每一变异类型中的5~10株新鲜叶片,提取总基因组DNA。从100条随机引物中筛选出17条重复性好、条带清晰、能体现半夏性状变异类型差异的引物进行RAPD扩增。RAPD分析结果表明,17个RAPD引物扩增出了81条带,其中55条为多态带,占67.9%,表明半夏不同变异类型间存在分子水平的遗传差异。该研究为半夏的品种改良与栽培奠定了基础。     

昭通半夏染色体观察

采用BSG去壁低渗法,对采集于云南省昭通市昭阳区的半夏(Pinellia ternata)进行染色体观察,研究结果表明:半夏染色体数目2n=78与文献报道一致;该地区的半夏还存在2n=66。分析讨论了不同居群半夏染色体倍性及数目多样性的关系。     

半夏疏松愈伤组织诱导条件的优化研究(英文)

[目的]建立半夏细胞悬浮培养体系。[方法]以半夏叶柄为外植体,采用正交试验设计研究了2,4-D、NAA、毒莠定和KT4种植物生长物质及其配比对疏松愈伤组织形成的影响。[结果]2,4-D和毒莠定对半夏叶柄愈伤组织诱导效果最显著,KT和NAA次之。诱导半夏叶柄形成疏松愈伤组织的适宜培养基为MS+0.5mg/L2,4-D+1.0mg/LNAA+1.0mg/L毒莠定+1.5mg/LKT。[结论]为通过半夏细胞悬浮提取有效成分和生产人工种子奠定了基础。     

半夏疏松愈伤组织诱导条件的优化研究

[目的]建立半夏细胞悬浮培养体系。[方法]以半夏叶柄为外植体,采用正交试验设计研究了2,4-D、NAA、毒莠定和KT 4种植物生长物质及其配比对疏松愈伤组织形成的影响。[结果]2,4-D和毒莠定对半夏叶柄愈伤组织诱导效果最显著,KT和NAA次之。诱导半夏叶柄形成疏松愈伤组织的适宜培养基为MS＋0.5 mg/L 2,4-D＋1.0 mg/L NAA＋1.0 mg/L毒莠定＋1.5 mg/L KT。[结论]为通过半夏细胞悬浮提取有效成分和生产人工种子奠定了基础。     

施肥对半夏总蛋白质含量的影响

采用氮、磷、钾肥三因素五水平二次通用旋转组合设计,研究了在北方人工栽培条件下施肥对半夏总蛋白质含量的影响。结果表明:氮肥用量是决定各等级半夏蛋白质含量高低的关键,氮肥呈正效应,磷、钾肥呈负效应,肥料的主效应表现为氮肥钾肥磷肥。     

半夏及其易混品的DNA分子鉴定

基于ITS、matK、trnL-trnF、rpl32-trnL和rps16序列对栽培半夏及其易混品开展DNA条形码鉴别研究,结果表明:ITS、rps16序列可作为DNA条形码用于半夏及其易混品的鉴别研究中,matK、trnL-trnF序列可作为天南星科不同属间DNA条形码或条形码组合候选序列鉴别半夏及其邻近属植物,rpl32-trnL序列可作为鉴别半夏及其易混品的DNA条形码候选序列。     

不同地区半夏无机元素含量分析

测定了6个半夏居群及其土壤样品中的6种人体必需元素,以了解半夏对元素的富集能力和分布规律,为其品质评价提供依据。结果显示:不同居群半夏及其土壤的元素含量存在着显著性差异;同一居群的半夏和土壤元素含量不具有相关性;半夏皮中元素含量最高;药材元素含量相关性显示Zn和Se、Fe和N i、Fe和Ca具有协同吸收特点;富集系数表明半夏对元素富集能力较低。     

生长调节物质对半夏人工种胚形成的影响

以半夏叶片为外植体,研究了生长调节物质6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)、α-NAA(α-萘乙酸)、IBA(吲哚丁酸)对半夏人工种胚诱导和增殖的影响。结果表明,6-BA和2,4-D有利于半夏叶片愈伤组织的诱导和增殖,适宜培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L;6-BA、IBA和NAA对半夏人工种胚的诱导和增殖效果较好,适宜培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 2.0 mg/L或MS+6-BA1.0 mg/L+NAA 2.0 mg/L。结果为对半夏人工种胚诱导及工厂化提供了试验依据。     

半夏的组织培养与快繁试验

以传统中药半夏的小块茎为外植体进行组织培养,对适合不定芽分化增殖、生根的培养基进行了研究。结果表明,利于愈伤组织诱导的培养基为MS＋6-BA2．0mg／L＋NAA0．2mg／L,利于不定芽增殖的培养基为MS＋6-BA2．0mg／L＋NAA0．5mg／L,利于生根的培养基为MS＋NAA0．5mg／L。试验表明,应用本项组织培养技术大批量生产优质半夏种苗是可行的。     

半夏愈伤组织诱导和分化再生植株的研究

研究半夏外植体愈伤组织诱导、放置方式、外植体的苗龄对分化再生植株的影响,结果表明:块茎的愈伤组织诱导效果最佳,叶片次之,叶柄最差。当MS+6-BA2mg/L+2,4-D2mg/L激素组配时,愈伤组织分化率达100%。外植体的放置方式对分化出苗有很大影响,块茎垂直放置出芽率最高,而叶柄和叶片平放于培养基效果较好。无菌苗苗龄对分化率有较大的影响,最适无菌苗苗龄为10～25d。当6-BA为3mg/L时芽增殖倍数达4倍左右,而当6-BA0.2mg/L+2,4-D0.2mg/L组配时,生根效果最好。