猪流行性腹泻病毒适应Vero细胞培养及以传代细胞毒制备氢氧化铝灭…

采用在病毒培养液中加５－１０μｇ／ｍｌ胰酶的培养方法，将猪流行性腹泻毒ＣＶ７７７适应于Ｖｅｒｏ细胞，并传４５代，细胞病毒规律，经免疫荧光检查阳性，电镜观察可见典型冠状病毒粒子，猪传染性胃肠炎免疫荧光检查阴性，猪流行性腹泻血清可抑制细胞病变。ＰＥＤＶ ＣＶ７７７毒株１１，２５，２８，４０及４４例传代毒的毒价分别为１０＾３．５，１０＾５．５，１０＾７．０和１０＾７．０ＴＣ１Ｄ５０／０．３ｍｌ。以１１，     

猪流行性腹泻病毒适应Vero传代细胞试验

在细胞培养液中加胰酶,使猪流行性腹泻病毒成功地适应于Ｖｅｒｏ传代细胞,第６代开始培养液中不含胰酶,仍可稳定出现易于判定致细胞病变作用,第８代毒价达８．０／０．１ｍｌ。     

猪流行性腹泻病毒的分离及适应传代细胞培养病毒株的建立

作者从广东地区表现有流行性腹泻症状的病猪采集的病料通过在细胞维持液中加入每 ml 含60μg 胰酶量的细胞培养方法,可使 Vero 传代细胞在培养24小时,60%细胞出现细胞融合,形成合胞体等特征的细胞病变,并且,经过动物回归试验、电子显微镜观察、血清学、病毒核酸型鉴定和理化特性等试验结果表明,分离获得的病毒分离物为猪流行性腹泻病毒(PEDV)分离获得的 PEDV,在含有胰酶的细胞维持液条件下,用 Vero 传代细胞培养传代12代,转入不加胰酶条件下,再用 Vero 传代细胞传19代,PEDV 可适应于 Vero 传代细胞生长,并出现有特征的细胞病变,继后,转用 PK15传代细胞再传22代,PEDV 已能适应于 PK15传代细胞生长,其细胞病变程度较 Vero 传代细胞更明显易看,PEDV 在 Vero、PK15传代细胞培养物中连续传53代.转用 ST 传代细胞培养,再传4代,可见 ST 传代细胞出现明显的细胞病变.本试验证明、将分离的 PEDV 先后适应于 Voro、PK15和ST 传代细胞的方法是成功的,并已使之成为适应传代细胞的 PEDV 细胞毒株,命名为 PEDV-G1株,其毒价为10~(-5·37-6·1)TCID_(50)/0.05ml。     

猪流行性腹泻病毒的分离及适应传代细胞培养病毒株的建立

作者从广东地区表现有流行性腹泻症状的病猪采集的病料通过在细胞维持液中加入每ｍｌ含６０μｇ胰酶量的细胞培养方法，可使Ｖｅｒｏ传代细胞在培养２４小时，６０％细胞出现细胞融合，形成合胞体等特征的细胞病变，并且，经过动物回归试验，电子显微镜观察，血清学，病毒核酸型鉴定和理化特性等试验结果表明，分离获得的病毒分离物为猪流行性腹泻病毒分离获得的ＰＥＤＶ，在含有胰酶的细胞维持液条件下，用Ｖｅｒｏ传代细胞培养传代     

猪流行性腹泻病毒灭活疫苗临床免疫效果评价

猪 流 行 性 腹 泻(Porcine Epidemic Diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)引起猪的腹泻、呕吐、脱水及对仔猪高致死率的一种接触性肠道传染病,猪即使耐过也会降低经济效益.20世纪80年代初PED在我国陆续发生,目前不同...     

一株变异型猪流行性腹泻病毒的分离鉴定及其灭活疫苗的免疫效力试验

本研究旨在分离猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）变异株,通过悬浮培养工艺制备成高效价的PEDV灭活疫苗。2017年从中国多个规模化猪场采集腹泻病死仔猪的小肠及其内容物200份,通过RT-PCR方法进行PEDV检测并测序,筛选一株PEDV变异株,将其在2 L反应器里悬浮培养的Vero细胞上进行病毒分离与传代培养,收获的病毒液鉴定后测定TCID₅₀,经甲醛灭活后加入氢氧化铝胶佐剂配制成PEDV灭活疫苗,对其物理性状、稳定性、黏度、无菌等进行检验,检验合格后免疫妊娠母猪及所产仔猪,对其安全性和免疫效力进行研究。结果显示,200份病料中有86份为PEDV阳性,将筛选的PEDV变异株病料在Vero细胞上传至第5代时出现细胞病变,传至第10代收获病毒液,经鉴定后确定为PEDV变异毒株,并命名为PEDV-GF10株。收获的病毒液浓缩后测得病毒滴度可达1×10^8.0 TCID₅₀/mL。疫苗检验合格后在母猪产前40和25 d时试验组后海穴肌内注射4 mL疫苗,空白组不免疫,结果显示试验组与空白组母猪的生产情况无明显差异,所产3日龄仔猪分别免疫不同剂量后体温无显著差异,表明该疫苗对母猪和仔猪均安全性良好。随机挑选试验组与空白组母猪所产3日龄仔猪各20头,分别口服4 mL PEDV-F10病毒培养物,空白组母猪所产仔猪在攻毒24 h后PEDV发病率为100%,抗体均为阴性;试验组母猪所产仔猪只有10%出现了轻微的腹泻症状,仔猪获得了高达90%保护率,且仔猪被动免疫后抗体能持续至35 d以上。以上结果表明,PEDV-GF10变异株通过悬浮细胞培养后病毒滴度显著提高,研制的PEDV-GF10株灭活疫苗安全有效,能够对中国的PEDV变异株达到有效防控,为国内PED防控提供了理论依据。     

猪流行性腹泻灭活疫苗区域性试验

应用猪流行性腹泻灭活苗在9个省、市、区40多个猪场进行了区城性试验、共预防接种10.3万余头猪,与实验室试验结果是一致的,取得了较好的效果。在疫苗的试用中,要先进行定性诊断,并注意混合感染及适时的使用疫苗。     

猪流行性腹泻病毒在Vero细胞上的适应性试验

猪流行性腹泻病毒在Ｖｅｒｏ细胞上的适应性试验李品齐（四川省乐至世红生物制品有限公司，６４１５００）丁敦志（四川省乐至县畜牧中心，６４１５００）刘万钧（四川省畜牧兽医研究所，成都６１００６６）猪流行性腹泻病变小肠组织液直接在Ｖｅｒｏ细胞上不能生长增殖，...     

猪流行性腹泻病毒灭活疫苗的制备及攻毒保护研究

为研究现用猪流行性腹泻病毒(PEDV)CV777疫苗毒株对流行毒株的免疫保护效果,以RTPCR进行PEDV CV777疫苗株、JS12流行株S基因克隆测序,进行PEDV S基因核酸序列分析与氨基酸序列分析。分别以转瓶工艺与细胞悬浮培养工艺培养Vero E6细胞,制备PEDV CV777株转瓶灭活苗与悬浮灭活苗。分别以PEDV转瓶灭活苗、悬浮灭活苗、PEDV流行株组织灭活苗(JS12株)产前30d免疫经产母猪;母猪产仔后14d进行仔猪攻毒保护试验。核酸序列分析显示,PEDV CV777株S基因与流行毒株的相似性在96.4%~99.7%之间,氨基酸序列相似性在96.7%~99.5%之间。转瓶工艺制备PEDV抗原效价为107.0 TCID50/mL,悬浮培养制备PEDV抗原效价为108.5 TCID50/mL。攻毒保护试验显示,悬浮灭活苗免疫母猪后,仔猪有2/10发病,保护率为8/10,转瓶灭活苗组发病率为8/10,保护率仅为2/10;组织灭活苗组9/10发病;对照组10头全部发病。该试验证明,提高PEDV CV777株的抗原含量,能够有效提高疫苗对PEDV流行毒株的保护效果。     

猪流行性腹泻病毒分离鉴定及其灭活疫苗免疫保护效果研究

为筛选能用于猪流行性腹泻病毒(PEDV)疫苗研发的流行毒株,收集PEDV阳性病料,以Vero细胞进行病毒分离试验,并对分离毒株进行外源病毒检测、病毒培养特性研究、仔猪毒力试验及免疫效力试验等。9份PEDV阳性病料共分离到3株病毒,分别命名为PEDV-SC12、PEDV-JS12、PEDV-JX12。其中PEDV-SC12株存在支原体污染;PEDV-JS12株与PEDV-JX12株均能被PEDV特异性阳性血清中和;PEDV-JS12株能在Vero细胞上增殖并产生细胞病变,但适应细胞45代以后病毒培养效价仍然偏低;PEDV-JX12滴度能维持在106.0 TCID50/mL以上。PEDV-JX12株毒力试验显示,该分离株能够通过人工感染复制出腹泻病例,并能从发病动物体内检测到感染的病毒。免疫攻毒保护试验显示,以PEDV-JX12株制备的灭活疫苗免疫母猪,对所产仔猪攻毒后免疫组6.25%(1/16)发病,对照组100%(8/8)发病。说明PEDV-JX12株能够适应细胞培养,免疫接种母猪能给仔猪提供有效保护,可以用于PEDV流行毒株的疫苗研发。     

猪流行性腹泻病毒分离鉴定和灭活疫苗免疫保护效果探讨

猪流行性腹泻病毒是诱发猪流行性腹泻的关键因素,而猪流行性腹泻容易造成养殖猪,尤其是猪仔的死亡,进而给养猪业带来严重的经济损失.基于此,本文首先阐述了猪流行性腹泻的流行病学,紧接着分析了猪流行性腹泻的临床症状与病理变化,然后分析了猪流行性腹泻病毒的分离鉴定,并进行灭活免疫实验探究,希望能够为今后相关问题的研究提供一定的参考依据.     

犬细小病毒细胞培养灭活疫苗的免疫试验

以分离自南京病犬的犬细小病毒CPV-GN_1毒株研制成犬细小病毒细胞培养灭活疫苗用于免疫试验。第一次免疫后,11头试验犬的HI效价均达到1∶40以上;第二次免疫后多数达1∶80以上。第二次免疫后2周攻毒,无一发病。其抗体效价和保护效果优于其他同类疫苗。对照组21头犬,发病15头,死亡6头。结果表明,犬细小病毒细胞培养灭活疫苗安全性好,免疫效果可靠。     

猪流行性腹泻灭活疫苗的临床免疫效果评价

为防控猪流行性腹泻,筛选可靠的免疫方式,研究采用与猪流行性腹泻病毒毒株序列同源性最高的猪流行性腹泻灭活疫苗进行紧急免疫,于产前30、15 d分别免疫妊娠母猪,并检测免疫前后母猪的血清和初乳中猪流行性腹泻病毒中和抗体及免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)特异性抗体.结果表明,免疫后母猪的血清和初乳均产生高水平且...     

猪流行性腹泻的免疫试验

近二三十年来，猪流行性腹泻（PED）于每年冬春季年复一年地在猪群中流行，其主要症状是不分猪的品种、年龄，呈水样腹泻，时有呕吐．新生猪死亡率高。该病起病突然，传播迅速，发病率高，使猪群严重掉膘，浪费饲料，大批新生猪死亡，经济损失可观。在目前，国内外尚无有效的防治方法，因此用疫苗来预防本病已成当务之急。1996年冬，我们试用上海市农科院畜牧兽医研究所研制的猪流行性腹泻灭活苗，共免疫各类猪1000余头，按每头大精3～4ml、中猪2ml、小猪1ml作交巢穴注射，经冬春半年的观察，获得了满意的结果，现报告如下。1主动免疫于19…     

猪圆环病毒2型灭活疫苗的制备与免疫效力研究

猪圆环病毒2型（PCV2）经0.2%甲醛37℃作用一定时间后接种PK-15细胞,盲传3代,用PCR方法检测灭活效果。将灭活的PCV2加入适量的白油和氢氧化铝胶制成PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗,免疫小鼠,共免疫2次,时间间隔为3周,分别于一免后第21天和二免后第14天进行ELISA抗体检测。同时为了评价国产油佐剂和进口油佐剂的免疫效果,笔者进行了猪体免疫效力试验。通过ELISA抗体、攻毒后临床表现及体温变化、剖解时的病理变化、平均日增重及病毒血症等指标对疫苗免疫效果进行评价。结果如下：①PCV2能被0.2%甲醛完全灭活,灭活时间为16 h。②PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗免疫小鼠后均能产生较好的免疫应答,并且油佐剂灭活疫苗免疫效果好于铝胶佐剂灭活疫苗。③猪体免疫效力试验表明,两种油苗均能产生较高水平的ELISA抗体。攻毒后,攻毒对照猪的体温高于免疫猪,空白对照猪体温正常。免疫猪及空白对照猪平均体重均升高,而攻毒对照猪平均体重有所降低,且两个免疫组和空白对照组之间平均日增重差异显著（P〈0.05）。病毒血症检测及病毒DNA在组织中的分布检测表明两油苗均能够有效降低猪体的带毒。以上结果表明,PCV2灭活疫苗免疫小鼠和猪体后均能诱导机体产生免疫应答,并能够在一定程度上抵抗PCV2对猪体的感染。     

猪细小病毒(BJ-2株)灭活疫苗免疫效力试验

用实验室制备并经初步检验合格的猪细小病毒灭活疫苗免疫豚鼠和试验猪,测定免疫豚鼠和猪的HI抗体效价,并对免疫的怀孕母猪进行攻毒,探索HI抗体效价与攻毒免疫保护的相关性.结果显示免疫后一个月所有经免疫的豚鼠、猪的HI抗体效价均达到1∶256以上,高水平的抗体可持续一个月以上;初产母猪免疫后攻毒试验显示攻毒后免疫组不出现病毒血症,且免疫攻毒组的平均窝产仔数和产活仔数均明显高于未免疫攻毒组,且胎猪的体长、体重等指标存在显著差异,试验结果充分说明该疫苗的免疫效果是非常确实的.     

猪流行性腹泻病毒全病毒灭活疫苗量效关系研究

本研究旨在探索猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)灭活疫苗不同抗原含量对仔猪感染的保护作用。测定不同浓缩倍数PEDV感染性病毒粒子数和病毒粒子总数,用不同浓缩倍数抗原分别制备灭活疫苗免疫小鼠,利用ELISA抗体检测方法、中和试验、ELISPOT方法测定体液免疫与细胞免疫产生情况,筛选合适抗原含量疫苗进行仔猪免疫并测定抗体,利用攻毒试验研究浓缩疫苗与保护之间的关系。结果显示,当抗原含量达8×10⁶ pfu·mL^-1以上时,灭活疫苗能有效刺激小鼠产生体液免疫及细胞免疫。以2 mL含8×10⁶ pfu·mL^-1抗原的灭活PEDV疫苗免疫仔猪可抵抗PEDV攻毒引起的腹泻及连续排毒,相较于总病毒粒子数,感染性病毒粒子数与抗体产生呈显著相关(r = 0.998 1),中和效价与仔猪保护呈显著相关性(r=0.974 7)。PEDV灭活疫苗可以提供良好的免疫保护,其中感染性病毒数量是提升抗体水平的关键因子,抗体滴度作为一项体液免疫的指标是判断免疫保护的重要参考。