吡虫啉对家蚕的毒性

吡虫啉对蚕的毒性试验表明 :4龄起蚕致死中浓度 (LC50 )为 2 71mg/L ,致死中量 (LD50 )为0 0 3 4 μg/头。 4龄起蚕连续添食吡虫啉水溶液试验表明 :0 0 0 71mg/mL( 1 4× 1 0 4 倍稀释液 )浓度吡虫啉连续添毒对蚕有明显的毒性 ,茧的经济性状也有显著地下降。 0 0 1 2 5mg/mL( 8× 1 0 4 倍稀释液 )吡虫啉连续添毒 1 2h的蚕 ,上蔟率为 86%,死笼茧率为 3 9%,鲜茧茧层率为 2 1 2 %,比对照区低 0 3 %,而持续添毒则表现为全部死亡。此外 ,吡虫啉对家蚕具有触杀和熏蒸毒性     

ELISpot技术检测猪抗口蹄疫γ干扰素方法的建立

猪口蹄疫免疫防御是控制猪口蹄疫疫情的重要手段,免疫水平指标通常用免疫抗体水平判定。对于其细胞免疫水平检测尚缺乏成熟可靠的技术,本试验利用市售ELISpot试剂盒建立猪口蹄疫特异γ干扰素检测方法,刺激物分别采用疫苗全病毒颗粒（O/Mya98/XJ/2010）、口蹄疫病毒T细胞表位多肽池,以植物血凝素（PHA）为阳性对照,对细胞浓度、刺激物浓度、孵育时间等进行优化。优化条件为：外周血PBMC新鲜提取或冻存细胞成活率90%以上,最佳细胞数为2×10⁵个/孔,最佳反应时间是16 h,病毒粒子146 S含量为100 ng/mL,多肽最佳浓度10 μg/mL,PHA的最佳浓度是20 μg/mL。ELISpot技术检测口蹄疫病毒感染猪γ干扰素方法的建立,为口蹄疫免疫力评价及口蹄疫疫苗免疫效果评估及进一步研究其与疫苗保护力（PD₅₀）的相关性奠定基础。     

犬转移因子对犬淋巴细胞体外增殖的影响

无菌采取犬抗凝血,分离并制备不同浓度外周血单个核细胞(PBMC)悬液。应用正交试验,测定植物血凝素,犊牛血清对不同浓度PBMC增殖的影响。用 MTT法测定不同浓度犬转移因子(TF)对 PBMC 增殖的影响。结果表明,当 PBMC 为 5×109 个/L,植物血凝素为 12. 5 mg/L, 犊牛血清为100 mL/L,PBMC 增殖效果最佳。TF 浓度在0.39 g/L~100 g/L时,对 PBMC转化增殖均有促进作用,在浓度为 1.56 g/L时促淋转效果最佳。且TF单独作用于 PBMC的效应明显优于PHA P的协同作用。TF对 PB MC有良好的刺激增殖效果。     

鸭疫里氏杆菌生长曲线的测定

采用P L琼脂平板涂布法 ,测定鸭疫里氏杆菌WJ4株 (血清 1型 )、FXb7株 (血清 2型 )在P L肉汤中静置培养和振荡培养情况下的生长曲线。结果表明 ,在P L肉汤中振荡培养时 ,WJ4株培养 10h达生长最高峰 ( 4 7× 10 1 0 CFU mL) ,FXb7株 11h活菌数最高达 ( 4 2× 10 1 0 CFU mL) ;在静置培养时 ,WJ4株培养 2 2h达最高峰 ( 1 8× 10 9CFU mL) ,FXb7株 2 3h可达最高峰 ( 1 3× 10 9CFU mL)。     

大肠杆菌对奶牛子宫内膜上皮细胞炎性损伤的研究

试验旨在研究大肠杆菌（E.coli）对奶牛子宫内膜上皮细胞（bovine endometrial epithelial cells,BEECs）的体外炎性损伤,探究大肠杆菌引发炎性反应的最佳浓度、作用时间及机制。首先,用不同浓度的大肠杆菌（5×10⁴、5×10⁵、1×10⁶、2.5×10⁶、5×10⁶ CFU/mL）诱导刺激细胞3、6和9 h,通过倒置显微镜观察细胞形态、CCK-8法测D_{450 nm}值,检测大肠杆菌对细胞活性的影响;其次,用不同浓度的大肠杆菌（5×10⁴、5×10⁵ CFU/mL）处理细胞3、6和9 h,用ELISA方法检测细胞上清液中白介素-1β（IL-1β）、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的分泌量;最后,用不同浓度的大肠杆菌（5×10⁴、5×10⁵ CFU/mL）处理细胞6和9 h,用Western blotting检测核因子κB抑制蛋白α（IκBα）和p65蛋白的磷酸化水平。结果显示,与对照组相比,大肠杆菌感染细胞9 h后,1×10⁶、2.5×10⁶和5×10⁶ CFU/mL大肠杆菌组细胞活性均极显著降低（P<0.01）,5×10⁵ CFU/mL大肠杆菌组显著降低（P<0.05）;大肠杆菌感染细胞9 h后,5×10⁵ CFU/mL大肠杆菌组IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α极显著升高（P<0.01）;大肠杆菌感染细胞6 h后,5×10⁵ CFU/mL大肠杆菌组IκBα、p65蛋白磷酸化水平和IL-6均极显著升高（P<0.01）,5×10⁴ CFU/mL大肠杆菌组IκBα和p65蛋白磷酸化水平显著升高（P<0.05）。结果表明,大肠杆菌可以刺激奶牛子宫内膜上皮细胞产生炎性反应,且当细胞与5×10⁵ CFU/mL大肠杆菌作用6 h或与5×10⁴ CFU/mL大肠杆菌作用9 h为最佳。     

无角陶赛特羊冻精制作技术

对无角陶赛特种公羊 (n =10 )精液品质、精液保存稀释液和冷冻精液制作技术进行了研究。结果表明 :精液密度为 2 0 .0 3± 0 .2 5亿个 /ml,活率 (冻前为 0 .80± 0 .0 6 ,冻后为 0 .5 1± 0 .0 1) ,畸形率 (冻前为 10 .1± 1.0 3,冻后为 2 9.6±0 .3) ,死精子百分率为 14 .1± 7.1;冻精的平均菌落数小于 5 0 0个 /剂。从 3种精液稀释液中选出了一种最佳稀释液 (三羟基氨基甲烷 卵黄 葡萄糖 柠檬酸 ) ;从 3种冷冻保护剂中筛选出甘油为理想的抗冻保护剂 ,其最佳浓度为 4 %～ 6 %。     

猪sCD2对其天然配体及SRBC培养上清液促淋转效应的影响

以２、４、１６、３２倍稀释猪血清ｓＣＤ２或５、１０、１００、５００倍稀释猪ＰＢＭＣｓＣＤ２，分别替代最优水平组合中的ｓＣＤ２，进行淋转抑制试验。试验结果提示，２、４倍稀释猪血清ｓＣＤ２或５、１０倍稀释猪ＰＢＭＣｓＣＤ２，分别对猪血清ｓＣＤ２配体或ＳＲＢＣｓＣＤ２配体促淋转及协同ＰＨＡ－Ｐ促淋转效应有显著或极显著的掏作用（Ｐ〈０．０５或Ｐ〈０．０１）。在ＳＲＢＣ培养上清液和猪血清中可能存在一定量的ｓ     

ELISpot技术检测猪抗口蹄疫γ干扰素方法的建立

猪口蹄疫免疫防御是控制猪口蹄疫疫情的重要手段,免疫水平指标通常用免疫抗体水平判定。对于其细胞免疫水平检测尚缺乏成熟可靠的技术,本试验利用市售ELISpot试剂盒建立猪口蹄疫特异γ干扰素检测方法,刺激物分别采用疫苗全病毒颗粒(O/Mya98/XJ/2010)、口蹄疫病毒T细胞表位多肽池,以植物血凝素(PHA)为阳性对照,对细胞浓度、刺激物浓度、孵育时间等进行优化。优化条件为:外周血PBMC新鲜提取或冻存细胞成活率90%以上,最佳细胞数为2×105个/孔,最佳反应时间是16h,病毒粒子146S含量为100ng/mL,多肽最佳浓度10μg/mL,PHA的最佳浓度是20μg/mL。ELISpot技术检测口蹄疫病毒感染猪γ干扰素方法的建立,为口蹄疫免疫力评价及口蹄疫疫苗免疫效果评估及进一步研究其与疫苗保护力(PD50)的相关性奠定基础。     

MTT法测定猪TF对犬淋巴细胞转化增殖的研究

无菌采集犬抗凝血,分离淋巴细胞并制备成不同浓度。应用正交试验,探讨不同浓度淋巴细胞、犊牛血清(FCS)、植物血凝素(PHA-P)对淋巴细胞增殖的影响。在此基础上,研究不同浓度猪转移因子(transferfactorTF)对犬淋巴细胞增殖的影响。结果表明:在犬淋巴细胞浓度为5×106个/mL,FCS为10%时,PHA-P为12.5μg/mL时,淋巴细胞增殖效果最佳。在最佳培养条件下,猪TF浓度在0.195～25mg/mL时,对犬淋巴细胞转化增殖均有明显促进作用,但猪TF单独或与PHA-P共同作用时对淋巴细胞增殖的最佳刺激浓度均为1.56mg/mL,且猪TF单独作用于淋巴细胞的效应优于与PHA-P的协同作用。试验结果证实,猪TF对犬淋巴细胞增殖有良好的刺激效果。     

阿莫西林钠在猪体内的生物利用度及药动学研究

1 4头健康杂种猪 ,随机平均分为两组 ,按随机交叉试验设计 ,进行静注及内服阿莫西林钠 (1 0mg/kg)的药动学研究 ,以及肌注阿莫西林钠及阿莫西林钠长效制剂 (1 0mg/kg)的药动学比较。高效液相色谱法测定猪血浆中阿莫西林的浓度 ,MCPKP计算机程序处理血浆药物浓度 时间数据。健康猪静注给药的药时数据适合二室开放模型 ,主要药物动力学参数为 :t1 /2α0 31± 0 1 6h;t1 /2 β2 2 9± 0 94h ;V1 0 2 2± 0 1 2L/kg ;Vd(area) 1 0 6± 0 45L/kg ;ClB0 33±0 0 7L·kg- 1 ·h- 1 ;AUC31 67± 7 0 9mg·L- 1 ·h。健康猪内服给药的药时数据适合一级吸收二室模型 ,主要药物动力学参数为 :t1 /2ka0 74± 0 36h ;t1 /2 β5 96± 3 41h ;tmax1 52± 0 43h ;Cmax5 33± 2 0 7μg/mL ;AUC2 3 89± 9 40mg·L- 1 ·h ;F79 64 %± 38 47%。健康猪肌注阿莫西林钠和阿莫西林钠长效制剂的药时数据均适合一级吸收二室模型 ,主要药物动力学参数为 :t1 /2ka0 1 1± 0 0 5h和 0 0 9± 0 0 5h ;t1 /2 β3 2 8± 1 89h和 7 32± 3 55h ;tmax0 33± 0 1 4h和 0 36±0 1 6h ;Cmax1 6 51± 4 41 μg/mL和 1 8 98± 2 70 μg/mL ;AUC30 61± 8 2 7mg·L- 1 ·h和 49 44± 1 1 31mg·L- 1 ·h ;F96 65     

5种中草药提取液对蓟马等草莓害虫杀虫作用研究

在农业生产中,为降低化学农药的使用,增加食品安全性,本试验选择苦参、川芎、生姜、当归、丁香等5种中草药,以期研制一种新的植物型药剂。通过回流提取法和浸泡提取法提取5种中草药原液,在室内条件下,试验设定5种稀释浓度对2种害虫进行喷施,选择10倍稀释液进行田间试验。结果发现,在室内试验72h后,稀释5倍和10倍对蓟马和蚜虫没有显著差异。在田间试验7d后,10倍稀释液对蚜虫防效为63.70%;对蓟马的防效为50.82%。     

中甸牦牛瘤胃正常菌群的研究

试验通过对 6头中甸牦牛瘤胃内拟杆菌、乳酸杆菌、韦荣氏球菌定量培养方法和细菌进行测定。结果细菌含量 :拟杆菌为 13 0 933× 10 9个 /mL、乳酸菌为 3 5 85 9× 10 9个 /mL、韦荣氏球菌为 0 0 4 5 8× 10 9个 /mL ,拟杆菌与乳酸杆菌差异显著 (P <0 0 5 ) ,拟杆菌与韦荣氏球菌差异极显著 (P <0 0 1) ,乳酸杆菌与韦荣氏球菌差异不显著 (P >0 0 5 ) ,证明中甸牦牛瘤胃内优势菌群拟杆菌 >乳酸杆菌 >韦荣氏球菌。     

禽流感H5、H7、H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测试剂盒灵敏性试验

为了确定深圳出入境检验检疫局和深圳太太基因工程有限公司联合研制的禽流感H5、H7、H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测试剂盒对H5和H9亚型禽流感的灵敏度，通过测定已知鸡胚半数致死量（ELD50）的标准毒株的进行了定量。利用9～11日龄SPF鸡胚，对深圳出入境检验检疫局保存的H5和H9亚型标准禽流感毒株进行了鸡胚半数致死量（ELD50）的测定，结果为H5亚型禽流感毒株的半数致死量为10^-7.75/0．2mL，H9亚型禽流感毒株的半数致死量为10^-8.5／0．2mL。用所研制的禽流感H5、H7、H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测试剂盒对H5和H9亚型标准禽流感毒株原液进行10倍连续稀释，进行实时荧光RT-PCR灵敏度的测定，结果发现：试剂盒检测H5亚型标准禽流感毒株的灵敏度为标准毒株10^-5倍稀释液，该稀释液含有281ELD50病毒量；检测H9亚型标准禽流感毒株的灵敏度为标准毒株10^-8倍稀释液，该稀释液含有15．8ELD50病毒量。同时检测H5和H9时，试剂盒的灵敏度要比单独检测一个亚型时的灵敏度增加一个数量级。本灵敏度已经能够检测到感染鸡的喉拭子和（或）泄殖腔拭子所采集的病毒量，能够满足检验检疫的实际需要。     

猪精液常温保存稀释液配方筛选试验

猪精液常温保存技术是实现猪人工授精的重要环节 ,研究适宜的常温保存稀释液配方 ,有效延长猪精液保存时间并维持其有效活力在 0 5级以上 ,对降低生产成本 ,大力推广猪人工授精具有重要意义。试验在葡柠液基础上设计了 8个猪精液常温保存的稀释液配方 ,通过测定精子有效存活时间、总存活时间、存活指数等项目筛选出 3号、9号稀释液配方 ,14～ 18℃恒温下精子 0 5级保存时间分别达93 0± 19 0小时和 10 1 0± 11 0小时、总存活时间为 12 6 0± 12 0小时和 134 8± 18 2小时、生存指数为 70 4± 11 2小时和 76 8± 15 0小时 ,极显著优于对照组葡柠液 (P <0 0 1)。     

克蚕菌与家蚕血浆蛋白结合率的研究

用平衡透析法测定克蚕菌与家蚕血浆蛋白结合率 ,克蚕菌浓度用标准曲线法求出。克蚕菌血浆浓度在5 74～ 188.6 7μg/mL时血浆蛋白结合率为 5 3 4 0 %～ 2 9.2 8%。结合参数的最大结合力 ( β)为 5 88× 10 -6mol/g;解离常数 (Kdp)为 1 0 8× 10 -4mol/L ;结合常数 (K)为 9 82× 10 3 L/mol;结合部位 (N)为 0 9132。克蚕菌与家蚕血浆蛋白具有单一类型的结合部位 ,药物血浆浓度升高结合率下降。     

原花青素对猪精液常温保存效果的影响

为探究常温保存稀释液中添加原花青素(OPC)对猪精液保存效果的影响,本实验在经典猪精液稀释液BTS中添加0、10、20、30、40、50、60、70μg/mL OPC,检测17℃保存过程中猪精子活率、质膜和顶体完整性、总抗氧化能力(T-AOC)及精液丙二醛(MDA)含量等指标。结果表明:在经典猪精液稀释液BTS中添加OPC,随着添加浓度的增大,其对精子的保护作用呈先上升后下降的趋势,且添加浓度达50μg/mL时,效果最佳,可显著提高常温保存过程中猪精子活率、质膜和顶体完整率(P0.05);当保存至第5天时,精子活率仍为61.63%、质膜完整率为41.88%、顶体完整率为75.88%、T-AOC浓度为1.43 U/mL、MDA含量为2.37 nmol/mL。因此,在经典猪精液稀释液BTS中添加50μg/mLOPC能够提高猪精液常温保存效果,延长精液保存时间。     

猪圆环病毒2型荧光定量PCR检测方法的建立

通过条件优化,以定量的10倍系列稀释质粒pMD-ORF2(含PCV2-ORF2全基因)为标准品,进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立了猪圆环病毒2型(PCV2)的荧光定量PCR检测方法。该方法检测灵敏度可达1.0×100拷贝/μL,线性范围为109~100,达10个数量级;对起始浓度为1.0×106、1.0×105、1.0×104拷贝/μL的标准品的最终实际测得值分别为1.000×106、0.935×105、0.987×104拷贝/μL,变异系数分别为2.527%、2.067%、2.092%。该方法的检测灵敏度与套式PCR(nPCR)相当,甚而高于常规PCR。     

肝素调控猪嗜中性粒细胞对精子的趋化和吞噬作用

为降低由人工授精诱导的猪子宫局部免疫反应,从而提高其人工授精效率,在含有10%血清的培养液中添加不同浓度的肝素(0、100、500、1000μg/mL),检测猪嗜中性粒细胞(PMNs)对猪精子的吞噬性和趋化性。结果表明,100~1000μg/mL的肝素可显著抑制猪PMNs对精子的吞噬性(P<0.01)和趋化性(P<0.05)。提示肝素可作为猪精液稀释液的保护成分,降低由人工授精所导致的子宫炎症反应,从而提高猪的人工授精受胎率。     

不同抗氧化剂对猪精液冷冻保存效果的影响

在LEY冷冻稀释液基础上分别添加不同浓度维生素C(0、5、10、20、40、60 mmol/mL)、维生素E(0、0.2、0.5、1.0、2.5、5.0 mg/mL)、SOD(0、100、200、400、600 IU/mL)、CAT(0、50、100、200、300 IU/mL)、GSH(0、1、5、10 mmol/mL)等抗氧化剂,检测冷冻-解冻后精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率、平衡后和解冻后精子MDA含量,以观察5种抗氧化剂对猪精液冷冻保存效果的影响。结果表明:在冷冻稀释液中联合添加100 IU/mLSOD和200 IU/mL CAT明显提高冷冻-解冻后精子活力、活率、质膜完整率和顶体完整率(P<0.01)。     

不同组合猪肌肉肌苷酸含量的分析

利用HPLC法测得纯种小梅山猪、大约克夏×小梅山猪、长白× (大约克夏×小梅山 )猪背最长肌中肌苷酸的含量范围为 2 .0 8～ 2 .39mg/ g ,组间差异不显著 (P >0 .0 5 ) ,pH值范围为 5 .5 4～ 6 .0 3,组间差异达到显著水平 (P <0 .0 5 )。