褐牙鲆(♀)×犬齿牙鲆(♂)杂交F1及其亲本肌肉营养成分分析与比较

褐牙鲆(Paralichthys olivaceus)为东亚地区重要的海水养殖鱼类,在中国、日本和韩国海水养殖业中占有重要的地位.目前,褐牙鲆经过连续多代缺乏选择的人工繁育和养殖,造成养殖群体种质发生退化,生长速度和抗逆性下降,极大制约了牙鲆养殖业发展.以选育生长迅速、抗逆性强、饵料转化率高的牙鲆类养殖新品种为目的,作者对褐牙鲆(♀)×犬齿牙鲆(Paralichthys dentatus)(♂)的杂交育种进行了研究.本实验对褐牙鲆(♀)×犬齿牙鲆(♂)杂交F1及其亲本肌肉营养成分进行测定.结果显示,杂交F1含水率显著低于双亲(P＜0.05),粗蛋白含量显著高于双亲(P＜0.05),粗脂肪含量介于二者之间;杂交F1的氨基酸总量、必需氨基酸、非必需氨基酸、半必需氨基酸与鲜味氨基酸总量都显著高于褐牙鲆与犬齿牙鲆(P＜0.05);脂肪酸含量方面,脂肪酸总量、不饱和脂肪酸总量3种鱼由高到低排列顺序为褐牙鲆、犬齿牙鲆、杂交F1,三者饱和脂肪酸总量差异不显著(P＜0.05).对3种鱼肌肉的营养品质进行了评价,杂交F1的必需氨基酸指数EAAI(90.30)明显高于褐牙鲆(77.75)与犬齿牙鲆(79.34),在蛋白质品质上表现出一定杂种优势.上述结果表明,杂交F1的肌肉具有蛋白和氨基酸含量较高、脂肪酸含量较低的特点.     

褐牙鲆♀×大西洋牙鲆♂杂交育种研究

为探讨褐牙鲆和大西洋牙鲆杂交育种的可行性,通过繁殖调控使褐牙鲆和大西洋牙鲆同步性成熟,采取正反交试验,获得了褐牙鲆(♀)×大西洋牙鲆(♂)杂交F1代——花美牙鲆(Paralichthys olivaceus♀×P.dentatus♂)。花美牙鲆受精卵卵径平均1.01mm;孵化适宜温度15～21℃,盐度25～35,孵化率平均71.3%,初孵仔鱼全长2.5～2.7mm;仔鱼在16～20℃下36d后伏底变态,变态个体全长平均11mm,育成率32.5%;反交受精率和孵化率极低,未获得杂交后代。简述了其发育时序和形态特征,探讨温度、盐度对花美牙鲆胚胎和仔鱼发育的影响,比较亲本与杂交鱼早期生长特征,初步分析反交不成功的原因。     

褐牙鲆(♀)×犬齿牙鲆( ♂)杂交子一代胚胎发育及仔稚鱼形态学观察

杂交是目前水产育种中应用最为广泛、最有成效的育种途径,为了选育一个能够促进中国海水鱼类养殖业发展,改善目前养殖褐牙鲆发病严重的现状的牙鲆类养殖新品种,对褐牙鲆(Paralichthys olivaceus)(♀)×犬齿牙鲆(P.dentatus)(♂)的杂交进行了研究。在Nikon MS800解剖镜下对褐牙鲆(♀)×犬齿牙鲆(♂)人工杂交子一代的胚胎及胚后发育进行观察,并使用Nikon数码相机拍摄其发育特征,描述了各发育时期的发育时序和形态特征。杂交子一代胚胎发育可分为卵裂前期、卵裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、器官发生期、尾芽期、肌肉效应期、脱膜孵化期共9个时期,除克氏泡出现时期以及胚体开始扭动时期具有相对特异性外,胚胎发育过程与褐牙鲆相比无显著差异。在水温(16.5±0.5)℃,盐度32~33的条件下,受精卵历时67 h完成孵化。(19±0.5)℃水温下,仔鱼3 d以前营内源性营养(卵黄囊仔鱼),3 d开口摄食营外源性营养(前弯曲期仔鱼),20 d左右进入变态期(弯曲期仔鱼),40 d后基本完成变态进入稚鱼阶段,生活方式由浮游转为底栖生活,50 d左右全身被鳞。同时观察了自胚胎发育时期至幼鱼期体表色素的分布及形态变化过程,描述了仔鱼变态期冠状鳍条、眼位置和尾部的发育、变化过程。早期生活史无鳔器官发生。     

褐牙鲆♀×大西洋牙鲆♂杂交育种研究

为探讨褐牙鲆和大西洋牙鲆杂交育种的可行性，通过繁殖调控使褐牙鲆和大西洋牙鲆同步性成熟，采取正反交试验，获得了褐牙鲆（♀）×大西洋牙鲆（♂）杂交F1代——花关牙鲆（Paralichthysolivaceus早×Pdentatus6）。花关牙鲆受精卵卵径平均1．01mm；孵化适宜温度15—21℃，盐度25～35，孵化率平均71．3％，初孵仔鱼全长2．5～2．7mm；仔鱼在16—20℃下36d后伏底变态，变态个体全长平均11mm，育成率32．5％；反交受精率和孵化率极低，未获得杂交后代。简述了其发育时序和形态特征，探讨温度、盐度对花关牙鲆胚胎和仔鱼发育的影响，比较亲本与杂交鱼早期生长特征，初步分析反交不成功的原因。     

异源精子诱导犬齿牙鲆的雌核发育

用冷冻保存的花鲈精子作为异源精子,采用紫外线(UV)对精子进行照射使其遗传物质失活,然后与卵子进行"授精",可以刺激犬齿牙鲆鱼卵进行雌核发育,在受精后一定时间采用冷休克处理"授精"卵,抑制第二极体排出成功获得了犬齿牙鲆雌核发育二倍体鱼苗.实验表明:犬齿牙鲆同源精子经80 mJ/cm2的紫外线照射可以完全失活,冻存花鲈精子经紫外线照射后也同样具有诱导犬齿牙鲆雌核发育的能力.无论同源精子还是异源精子,最佳诱导条件为在18℃条件下,精子经80 mJ/cm2的紫外线照射,受精后4～5 min将受精卵放在3℃海水中进行冷休克处理,持续时间为45 min,同源精子和异源精子二倍体诱导分别为32.66%±7.03%和28.00%±6.48%.采用形态学、流式细胞仪DNA含量分析和微卫星标记技术对雌核发育鱼苗进行了分析,证明了雌核发育鱼苗为雌核发育二倍体.     

牙鲆减数分裂与有丝分裂雌核发育的遗传差异

利用同一尾牙鲆亲鱼的同一批卵子诱导减数分裂雌核发育二倍体和有丝分裂雌核发育二倍体,同时用牙鲆精子做人工授精制备普通二倍体,作为对照组。利用10对微卫星引物对普通二倍体和两种雌核发育二倍体进行遗传分析。结果表明,母本基因型在8个位点为杂合,2个位点为纯合。普通二倍体有6种基因型,等位基因均来自父母本的随机结合,类型丰富;母本与子代、子代个体之间的遗传相似系数分别为0.452 8和0.560 3,接近随机交配群体的遗传相似度。减数分裂雌核发育二倍体有3种基因型,除在1个位点出现异于母本的纯合基因型外,其他所有位点的基因型与母本完全一致;母本与子代、子代个体之间遗传相似系数分别为0.976 6和0.959 5,接近近交系的遗传相似度。有丝分裂雌核发育二倍体有2种基因型,且全部为纯合型;母本与子代、子代个体之间遗传相似系数分别为0.806 2和0.742 5,有丝分裂雌核发育二倍体全部为纯合个体。减数分裂雌核发育二倍体具有高度的遗传相似性,适于固定母本性状;有丝分裂雌核发育二倍体纯合度高,适于作为制备克隆的亲本;两者具有明显不同的遗传特性,均可作为特征不同的育种材料。     

褐牙鲆(♀)、夏鲆(♂)及其杂交子一代的ITS1序列特征分析

以雌褐牙鲆(Paralichthys olivaceus)、雄夏鲆(P.dentatus)及其子一代为研究对象,对其核糖体基因的ITS1序列进行比较分析。结果表明,ITS1序列具有明显的种间及个体内差异。在雄夏鲆ITS1序列中仅发现1种基因类型(X型),而在雌褐牙鲆及子一代ITS1序列中发现两种差异显著的基因型(X型和Y型)。在亲本中未检测到两种类型的交换重组序列,而在子代中检测到4个X型与Y型的重组序列,说明子代ITS1区域更容易发生交换重组。进一步的遗传距离分析发现,母本与子代之间的遗传距离(0.059)明显大于父本与子代之间的遗传距离(0.018),且子代中X型片段出现的频率(85.5%)远大于Y型片段出现频率(8.7%),表明亲本双方ITS1区域的遗传信息都遗传给了子代并且X型片段的遗传信息明显占有优势,进而从分子水平上证明子代为褐牙鲆与夏鲆的杂交后代。本研究旨在分析牙鲆属亲本及子代的ITS1序列特征,为鱼类核糖体基因的研究积累数据。     

牙鲆属主要经济鱼类的生物学及养殖研究概况

综合介绍了世界牙鲆属鱼类的主要特征及种类,主要介绍了养殖品种褐牙鲆、犬齿牙鲆、漠斑牙鲆以及实验研究品种北美牙鲆、多耙牙鲆、小眼牙鲆、黑斑牙鲆、巴南牙鲆和巴塔戈尼牙鲆的生物学及养殖研究概况。简要介绍了热带牙鲆、四斑牙鲆、河口牙鲆和伍氏牙鲆等生物学有关知识。     

mtDNA 和微卫星标记在放流牙鲆和非放流牙鲆鉴定中的应用

用mtDNA控制区特异性引物对牙鲆(Paralichthys olivaceus)亲鱼、放流牙鲆和回捕牙鲆的DNA进行扩增,获得了3个群体的mtDNA控制区第一高变区部分序列。分析结果表明:母本55尾具有26种单倍型,作为其子代的预备放流牙鲆129尾具有5种单倍型,与亲本的单倍型全部一致,验证了mtDNA方法鉴定子代的准确性。回捕牙鲆435尾具有70种单倍型,其中330尾具有17种单倍型,与母本的单倍型相一致,为疑似放流牙鲆;另外105尾具有53种单倍型,与母本的单倍型不一致,为野生牙鲆或非北戴河站母本后代放流牙鲆。利用4个高多态性微卫星标记对330尾疑似放流牙鲆做进一步鉴定。结果表明,330尾检测个体中有310尾等位基因与候选亲本等位基因全部对应,可确认其为放流牙鲆;另外20尾等位基因与候选亲本不对应,可确认其为非放流牙鲆。结合mtDNA和微卫星标记鉴定的结果,可以确认2013年的435尾回捕牙鲆中有310尾放流牙鲆,占71.26%;另外125尾为非放流牙鲆,占28.74%。本研究结果表明,利用mt DNA标记可快速排除回捕鱼中的非放流牙鲆,利用微卫星标记作进一步鉴定,可以排除疑似放流牙鲆中的非放流牙鲆,是区分放流牙鲆与非放流牙鲆,准确评价放流效果的好方法。     

大西洋牙鲆的苗种生产技术

大西洋牙鲆(Atlantic flounder)学名犬齿牙鲆(Paralichthys dentatus)或狼齿牙鲆，是西北大西洋所产4种牙鲆中的1种较大型鱼类。其生长速度快，耐高温能力较我国目前养殖的褐牙鲆及大菱鲆强，国家海洋局第一海洋研究所于2002年9月将其首次引入我国。此鱼的引进对改善国内养殖牙鲆品种单一、品质改良和遗传育种等具有重要意义。     

大西洋牙鲆雄鱼与漠斑牙鲆雌鱼杂交的初步研究

从山东引进全长3-5cm的美国大西洋牙鲆和漠斑牙鲆幼鱼到宁德市飞鸾镇海鑫育苗场,经2年6个月养殖后,从养殖群体中挑选出大西洋牙鲆雄鱼为父本,漠斑牙鲆雌鱼2为母本,在生殖季节通过埋植激素和人工调控环境条件催熟亲鱼,采用人工受精方法,获得杂交受精卵478．6g,受精率为62．9％,孵化率为75．3％,获得初孵仔鱼36万尾。经过65d的培育,育出平均全长4．20cm的杂交鱼苗22万尾,育苗成活率61．1％。鱼苗生长迅速,初步表现出杂交子代的优势性状。     

名优新品种 杂交牙鲆

杂交牙鲆是中国科学院海洋研究所应用夏鲆（♂）和牙鲆（♀）进行人工杂交授精,获得的生长发育正常的杂交子代。在养殖过程中,杂交牙鲆表现出生长速度快、成活率高、抗逆性强、对环境的适应性强、不育等特点。     

温度、盐度对褐牙鲆(♀)×犬齿牙鲆(♂)杂交子一代胚胎发育和仔鱼存活的影响

探讨了温度、盐度对褐牙鲆(♀)×犬齿牙鲆(♂)杂交子一代(杂交F1)胚胎和初孵仔鱼发育的影响。结果表明,杂交F1受精卵孵化适宜温度范围和最适温度分别为15～21℃和18℃,在适宜温度范围内胚胎发育时间随温度的升高而缩短,二者符合乘幂函数关系式N=115.99T-0.7668(R2=0.9769)。胚胎发育的生物学零度和有效积温分别是7.54℃和540.1℃.h,积算温度(A)与试验水温间呈乘幂函数相关,表达式:A=1328.1T-0.3149(R2=0.9624)。胚胎发育的最低盐度界限为10,孵化的适宜盐度范围和最适盐度范围分别为10～45、25～35;初孵仔鱼生存发育的适宜盐度范围、最适盐度范围分别为10～40和10～20。     

异源精子诱导犬齿牙鲆雌核发育

用冷冻保存的花鲈精子作为异源精子,采用紫外线（UV）对精子进行照射使其遗传物质失活,然后与卵子进行“授精”,可以刺激犬齿牙鲆鱼卵进行雌核发育,在受精后一定时间采用冷休克处理“授精”卵,抑制第二极体排出成功获得了犬齿牙鲆雌核发育二倍体鱼苗。实验表明：犬齿牙鲆同源精子经80 mJ/cm² 的紫外线照射可以完全失活,冻存花鲈精子经紫外线照射后也同样具有诱导犬齿牙鲆雌核发育的能力。无论同源精子还是异源精子,最佳诱导条件为在18 ℃条件下,精子经80 mJ/cm²的紫外线照射,受精后4~5 min将受精卵放在3 ℃海水中进行冷休克处理,持续时间为45 min,同源精子和异源精子二倍体诱导分别为32.66%±7.03%和28.00%±6.48%。采用形态学、流式细胞仪DNA含量分析和微卫星标记技术对雌核发育鱼苗进行了分析,证明了雌核发育鱼苗为雌核发育二倍体。     

温度、盐度对褐牙鲆（♀）×犬齿牙鲆（♂）杂交子一代胚胎发育和仔鱼存活的影响

探讨了温度、盐度对褐牙鲆（♀）×犬齿牙鲆（♂）杂交子一代（杂交F1）胚胎和初孵仔鱼发育的影响。结果表明，杂交F1受精卵孵化适宜温度范围和最适温度分别为15～21℃和18℃，在适宜温度范围内胚胎发育时间随温度的升高而缩短，二者符合乘幂函数关系式N=115．99T^-0.768.8（R^2=0．9769）。胚胎发育的生物学零度和有效积温分别是7．54℃和540．1℃·h，积算温度（A）与试验水温间呈乘幂函数相关，表达式：A=1328．1T^-0.3149。（R^2=0．9624）。胚胎发育的最低盐度界限为10，孵化的适宜盐度范围和最适盐度范围分别为10～45、25～35；初孵仔鱼生存发育的适宜盐度范围、最适盐唐范围分别为10～40和10～20。     

牙鲆“鲆优1号”

牙鲆“鲆优1号”是将抗鳗弧菌感染的中国牙鲆[选育出的抗病选育群体（RS）],与日本引进后选育的牙鲆群体（JS）进行交配。从中筛选出养殖成活率高、生长较快的杂交群体,再以其雌鱼作为母本,与韩国引进选育牙鲆群体作为父本进行杂交．得到的三杂交后代即为牙鲆“鲆优1号”。     

犬齿牙鲆苗种引进与养成技术研究

本文介绍了由国家海洋局第一海洋研究所和青岛市渔业技术推广站承担、黄岛润勃水产有限公司和胶南新兴水产养殖育苗有限公司协作完成的"犬齿牙鲆苗种引进与养成技术研究"项目实施情况.项目组首次于2002年9月12日从美国引进平均全长3.9厘米,平均体长3.2厘米的犬齿牙鲆鱼苗2200尾进行试养,该项目2004年5月通过了青岛市科技局组织验收鉴定.养殖20个月平均体长45.07厘米,平均体重1116.11克.试验表明:此鱼生长速度、抗病力、耐高温能力、成活率较褐牙鲆高,是一种极具发展潜力的养殖新品种.     

褐牙鲆♀×犬齿牙鲆♂杂交与繁育技术研究

犬齿牙鲆是分布于北美洲东海岸的牙鲆属鱼种,属温水性鱼类,适宜温度5～31℃,适宜盐度4～35,抗逆性较强,近年来由美国引进我国,极具养殖发展潜力。     

褐牙鲆幼鱼工厂化养殖密度优化软件的初步实现

为解决当前褐牙鲆(Paralicthys olivaceus)工厂化养殖过程中对养殖密度难以把握的问题,在水温(20.0±0.4)℃、空气充氧与纯氧充氧模式下,探讨溶解氧和养殖密度对小规格(1.26±0.45)g与较大规格(14.00±2.10)g褐牙鲆幼鱼生长的影响.根据试验结果,分析这2种规格褐牙鲆幼鱼的最适养殖密度,并通过线性回归法,建立了褐牙鲆幼鱼最适养殖密度的标准曲线.运用.NET C#开发了在Windows系统下运行的褐牙鲆幼鱼工厂化养殖密度优化软件,初步实现在人机交互界面上对褐牙鲆幼鱼合理养殖密度的查询.     

鱼类养殖新星——大西洋牙鲆

大西洋牙鲆学名犬齿牙鲆(Paraliehthys dentatus),俗称夏季鲆(Summer flounder)、巨齿牙鲆(Large-toothflounder),原产于北美洲大西洋沿岸。 在农业部948项目办公室的资助下,国家海洋局第一海洋研究所和青岛市海洋与渔业局共同承担了“犬齿牙鲆种质和育苗技术引进”项目。2002年9月12日由海洋局一所毛兴华研究员,从美国首次引进了大西洋牙鲆鱼苗5000尾,开始了驯化和养殖试验。经过1个