SPMI基因在公母猪生殖道的时空表达特性研究

为揭示猪精子运动抑制因子(Seminal plasma motility inhibitor,SPMI)基因在公母猪生殖道的时空表达特性,本研究运用定性RT-PCR分析了SPMI在生殖道的组织表达谱,利用半定量RT-PCR技术分析了SPMI在公猪精囊腺和尿道球腺组织的发育性表达.定性RT-PCR分析结果发现,SPMI基因在精囊腺中的表达丰度最高,在尿道球腺和子宫角中呈中等丰度表达,在前列腺、子宫颈和卵巢中的表达较弱,在其它生殖道组织未检测到mRNA表达.半定量RT-PCR分析结果显示,SPMI基因在公猪精囊腺和尿道球腺中的发育性表达规律相似,都在初生时即启动,表达水平随着日龄的增加不断提高,直至性成熟(150日龄).其中SPMI基因在精囊腺中的表达在60、90和150日龄均有显著提高(P＜0.05);而在尿道球腺中,SPMI基因的表达在30、90和150日龄均有显著提高(P＜0.05),而60日龄的表达较30日龄时有所提高,但差异不显著(P＞0.05).这些结果提示SPMI基因在公母猪生殖道呈广泛表达,其发育性表达呈日龄依赖性特点,表达水平在初情期至性成熟期有显著提高.     

骨桥蛋白在长白公猪生殖细胞中的表达及其与繁殖性能的相关性

本试验旨在研究骨桥蛋白（osteopontin,OPN）在长白公猪生殖细胞中的表达和定位,并探究其与公猪繁殖性能的相关性。试验采集了长白公猪精液和不同阶段（3日龄、3月龄、6月龄和12月龄）的睾丸组织,通过蛋白印迹的方法检测OPN蛋白在精液和不同月龄睾丸中的表达,通过免疫组化的方法对OPN蛋白在公猪睾丸细胞中进行定位;同时,根据配种胎次≥ 20胎,3次配种公猪为同一头的标准,筛选并采集17头长白种公猪精液,统计相对应的1 388头母猪的生产成绩,计算得到公猪繁殖性能指标（包括窝产总仔数、窝产活仔数、分娩率和繁殖力）。低温离心精液分离得到精子和精浆,丙酮法提取精浆蛋白,Lysis buffer方法提取精子蛋白,最后运用BCA和ELISA的方法检测精子和精浆中OPN蛋白的含量,分析OPN蛋白与公猪繁殖性能的相关性。蛋白印迹结果显示,OPN在精子、精浆和各月龄阶段的长白公猪睾丸中均以两种形式表达（67.4和33.7 ku）,且67.4 ku的形式在3月龄公猪睾丸中表达量最高;免疫组化的结果显示,OPN在长白公猪的初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞中表达,在精母细胞、支持细胞和间质细胞中无表达;BCA和ELISA结果显示,精子中的OPN蛋白含量是精浆中的7倍（P<0.05）,精液中的OPN蛋白与公猪窝产活仔数显著正相关（P<0.05）。本试验结果表明,OPN在各阶段的长白公猪睾丸中都有表达,且在精子和精浆中也有表达,这可能与公猪的繁殖性能有关,从而为后期OPN蛋白在公猪受精力的研究奠定基础。     

骨桥蛋白在长白公猪生殖细胞中的表达及其与繁殖性能的相关性

本试验旨在研究骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在长白公猪生殖细胞中的表达和定位,并探究其与公猪繁殖性能的相关性。试验采集了长白公猪精液和不同阶段(3日龄、3月龄、6月龄和12月龄)的睾丸组织,通过蛋白印迹的方法检测OPN蛋白在精液和不同月龄睾丸中的表达,通过免疫组化的方法对OPN蛋白在公猪睾丸细胞中进行定位;同时,根据配种胎次≥20胎,3次配种公猪为同一头的标准,筛选并采集17头长白种公猪精液,统计相对应的1 388头母猪的生产成绩,计算得到公猪繁殖性能指标(包括窝产总仔数、窝产活仔数、分娩率和繁殖力)。低温离心精液分离得到精子和精浆,丙酮法提取精浆蛋白,Lysis buffer方法提取精子蛋白,最后运用BCA和ELISA的方法检测精子和精浆中OPN蛋白的含量,分析OPN蛋白与公猪繁殖性能的相关性。蛋白印迹结果显示,OPN在精子、精浆和各月龄阶段的长白公猪睾丸中均以两种形式表达(67.4和33.7 ku),且67.4 ku的形式在3月龄公猪睾丸中表达量最高;免疫组化的结果显示,OPN在长白公猪的初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞中表达,在精母细胞、支持细胞和间质细胞中无表达;BCA和ELISA结果显示,精子中的OPN蛋白含量是精浆中的7倍(P0.05),精液中的OPN蛋白与公猪窝产活仔数显著正相关(P0.05)。本试验结果表明,OPN在各阶段的长白公猪睾丸中都有表达,且在精子和精浆中也有表达,这可能与公猪的繁殖性能有关,从而为后期OPN蛋白在公猪受精力的研究奠定基础。     

猪PSP-Ⅰ/PSP-Ⅱ的生物学特性研究

精浆是精子悬浊在精液中的液体,是附睾和雄性性腺分泌的相当复杂的混合物。精浆的蛋白质组成因不同的家畜而异,在不同的家畜上的报道表明,精浆中包含的蛋白质因子不仅影响精子的受精能力,还在影响雌性动物的繁殖生理学方面发挥重要的作用〔1~2〕。受精起始于精子表面的凝集素与卵母细胞透明带寡聚糖的相互作用。公猪的精浆蛋白是一个糖蛋白家族,它们的分子量在12~16kDa之间。AQN-1、PSP-I、PSP-Ⅱ、AQN-3和AWN(1和2)是精囊腺上皮细胞主要分泌物,他们占精液中总可溶性蛋白的80%〔3,4〕。另外,AWN-1由睾丸网和直精小管上皮细胞合成。…     

藏猪生殖器官生长发育研究

选择舍饲条件下日龄、体重相近的藏公猪、母猪进行生殖器官生长发育测定。结果表明：藏公猪尿道球腺、精囊腺的发育早于其它生殖器官,而成熟要晚于其它生殖器官;藏公猪适宜配种时间为5-6月龄,藏母猪适宜配种时间为6月龄。     

二花脸猪和大白猪睾丸IGF-Ⅰ和IGF-IR基因表达发育变化的研究

为了研究生长轴激素对猪繁殖性能发育的影响,随机选取0、3、20、30、90、120、180日龄纯种二花脸公猪和大白公猪各4头,屠宰并采取睾丸组织样,以18S rRNA为内标,用相对定量RT-PCR法研究睾丸IGF-Ⅰ和IGF-IR mRNA的表达及发育性变化。结果表明,二花脸猪与大白猪睾丸IGF-ⅠmRNA表达的发育模式在30日龄前完全相同,即随着日龄的增加而呈极显著增加（P〈0.01）;二花脸猪睾丸IGF-Ⅰ mRNA相对表达量在30-180日龄无显著变化;大白猪睾丸IGF-Ⅰ mRNA相对表达量在90日龄有所下降,而在120和180日龄又恢复到30日龄水平。二花脸猪睾丸IGF-Ⅰ mRNA相对表达量显著高于大白猪（P〈0.05）。二花脸猪与大白猪睾丸IGF-IR mRNA表达的发育模式不同。二花脸猪睾丸IGF-IR mRNA相对表达量在90-120日龄呈显著下降趋势（P〈0.05）;大白猪IGF-IR mRNA相对表达量在0日龄较高,随后显著下降（P〈0.05）,并在观察期内持续保持较低水平。二花脸猪IGF-IR mRNA相对表达量显著高于大白猪（P〈0.05）。睾丸IGF-Ⅰ mRNA和IGF-IR mRNA相对表达丰度呈极显著正相关（r=0.575,P〈0.01）。结论：（1）不同品种猪睾丸IGF-Ⅰ和IGF-IR mRNA表达具有特定的发育模式;（2）猪睾丸中IGF-Ⅰ和IGF-IR mRNA的协同表达可能对猪繁殖性能的发育有重要调节作用。     

扬翔Ⅰ号猪配套系终端父本生长性能分析

扬翔Ⅰ号猪配套系终端父本以引进的美系杜洛克、丹系杜洛克为育种素材,进行自主培育。展示扬翔Ⅰ号猪配套系终端父本YX101公猪(丹系杜洛克)、YX102公猪(美系杜洛克)、YX106公猪(美系与丹系合成的杜洛克,称合成系杜洛克)生长性能数据,其中校正100 kg体重日龄:YX101(152.2 d)YX106(158.5 d)YX102(165.5 d);校正100 kg体重日增重:YX101(651.23 g)YX106(626.5 g)YX102(598.1 g),各品系校正100 kg体重日龄、日增重均差异极显著。扬翔Ⅰ号猪配套系终端父本生长性能优良。     

梅山猪UBE2b基因的克隆及组织表达特征的研究

UBE2b基因编码的泛素结合酶参与的泛素-蛋白酶通路(UPP)在哺乳动物精子发生中起着重要作用。本研究根据相关ESTs拼接的序列采用PCR扩增鉴定的方法获得梅山猪UBE2b基因cDNA全序列,对其序列进行生物信息学分析,利用半定量RT-PCR的方法研究150日龄梅山公猪UBE2b基因的组织表达特征和不同日龄(2、30、60、90、150日龄)公猪睾丸的表达规律。结果表明:梅山猪UBE2b基因cDNA全长1 329 bp,编码153个氨基酸,具有UBCc家族的保守结构域。该基因编码氨基酸序列在不同物种间具有较高的保守性,根据编码氨基酸序列构建的分子进化树显示猪与牛的亲缘关系最近,与斑马鱼的关系最远。UBE2b基因在梅山公猪各组织中广泛表达,其中睾丸为高丰度表达。该基因在梅山猪睾丸中的表达随日龄增加呈显著上升趋势,与睾丸发育显著相关(r=0.82,P<0.01),推测UBE2b可能在梅山猪精子发育和性发育中起重要作用。     

藏猪和杜洛克猪SCD、CPT1B基因表达差异及其与IMF含量相关性分析

为了揭示脂肪型的藏猪和瘦肉型的杜洛克猪肌内脂肪(IMF)沉积相关基因的表达差异,试验采用荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测了两猪种背最长肌中硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)基因、肉碱脂酰转移酶Ⅰ(CPT1B)基因在180日龄的表达差异,分析其表达与IMF含量的相关性。结果表明:180日龄藏猪SCD mRNA表达量极显著高于杜洛克猪(P0.01),而藏猪CPT1B mRNA表达量显著高于杜洛克猪(P0.05)。相关性分析结果显示,SCD、CPT1B mRNA表达量均与IMF含量呈正相关。     

梅山猪杂交后代生长、繁殖性能及血清指标的比较研究

梅山猪作为我国优良地方猪品种,通过梅山猪、巴克夏×梅山猪和杜洛克×梅山猪繁殖性能、生长性能及血液生化指标的比较分析,筛选出最优杂交组合,对下一阶段梅山猪遗传资源的保种和开发利用具有指导意义。试验选取梅山猪、杜洛克×梅山猪、巴克夏×梅山猪各8窝,饲养至断奶30日龄,按照猪场管理要求正常饲养,在出生、20日龄、30日龄分别称重,同时进行血清生化指标的检测,并对试验结果进行统计分析。纯种梅山猪与杂交猪产仔数无显著差异水平(P>0.05),而仔猪乳头数量(左、右)、出生个体重、30日龄个体重及平均日增重差异显著(P<0.05)。随着日龄的增长,巴×梅山猪和杜×梅山猪平均日增重显著高于梅山猪。梅山猪血清总胆固醇水平显著高于巴×梅山猪和杜×梅山猪(P<0.05),血清甘油三酯水平高于巴×梅山猪和杜×梅山猪,但差异不显著(P>0.05)。纯种梅山猪与杂交猪血清免疫球蛋白和氨基酸指标差异不显著(P>0.05)。相对于梅山猪而言,与巴克夏、杜洛克的杂交后代初期生产性能就有很大的改善,巴×梅猪的生产性能、繁殖性能一定程度上优于杜×梅猪,在生产中适合推广。     

gabra1基因在小梅山猪和苏姜猪下丘脑中表达量的比较

用荧光定量方法对不同日龄小梅山猪和苏姜猪下丘脑中gabra1基因的表达进行了研究。结果发现:小梅山猪和苏姜下丘脑gabra1 mRNA表达丰度的变化,从初生到初情期逐渐升高,初情期后下降;小梅山猪不同发育阶段间差异显著(P<0.05),苏姜猪初生与180日龄间差异不显著(P>0.05),其余各阶段间差异显著(P<0.05)。小梅山猪初生、初情期、初情后三个发育阶段下丘脑gabra1mRNA表达丰量均显著高于苏姜猪(P<0.05)。     

新老美系杜洛克猪生长性能测定

选择初始重为20kg左右的新、老美系杜洛克猪各12头进行肥育试验,体重达90kg左右结束,之后进行胴体品质测定。结果表明,新美系杜洛克猪日增重770g,老美系杜洛克猪日增重728g,差异极显著;不同性别日增重为公猪813.4g、母猪698.1g、阉公猪813.7g,母猪与公猪、阉公猪日增重差异极显著,而公猪与阉公猪日增重仅差0.3g,差异不显著;瘦肉率新美系杜洛克猪64.21%,老美系杜洛克猪61.17%,差异显著。     

南通地区不同品种公猪夏季精液品质变化

通过对江苏省南通如东家畜改良站内不同品种公猪夏季精液品质的检测,探讨了该地区夏季高温对不同品种公猪的精液品质的影响。选取大白、长白、杜洛克和梅山4个品种公猪,采集精液并分析各品种在5、6、7、8和9月的精液体积、密度和精子总数变化。结果表明:与5月相比,长白和梅山公猪7月精液体积显著减少(P<0.05),长白和大白公猪9月精液密度显著减少(P<0.05),并且长白、大白和杜洛克9月精子总数显著降低(P<0.05);而梅山公猪精子总数未出现显著变化。可见,南通地区夏季高温影响公猪精液品质,并且相较外来猪种,梅山猪耐热性能较好。     

Tektin3基因在猪生殖系统发育中的表达规律研究

TEKTIN是附着于精子尾部基因丝的重要组分,对于基因丝的稳定和结构的复杂性起重要作用。Tektin3是其家族成员之一。研究采用RACE方法,获得梅山猪Tektin3基因全序列,利用生物信息学方法分析其结构和功能,采用半定量的方法研究150日龄梅山公母猪23个不同组织Tektin3基因的表达特征,并用Realtime PCR方法分析2、30、60、90和150日龄梅山公猪睾丸的表达规律。结果表明:(1)Tektin3基因全序列1 761bp,包含5'UTR 95bp,完整的CDS序列1 473bp和3'UTR 193bp,编码490个氨基酸,相对分子质量为56 481.3,理论等电点为7.94。(2)Tektin3基因在睾丸中高丰度表达,在下丘脑和子宫角中表达丰度较低。(3)Tektin3基因从梅山猪60日龄开始表达,到90日龄时显著下降(P0.05),150日龄时显著上升(P0.05)。结果表明该基因编码氨基酸除与精子发生有关,可能还与部分组织或器官的纤毛发生及公猪的性发育有关。     

缺硒对幼年公猪生殖器官发育及精子发生影响的初步研究

为进一步探索硒在公猪繁殖中的确切作用,本试验观察了11头缺硒的(日粮的硒水平为0.01ppm)及8头补硒(日粮的硒水平为0.26ppm)的幼年公猪的生殖器官。观察到缺硒组睾丸、附睾、尿道球腺、精囊腺及前列腺的重量(克/每公斤体重)分别是:1.94、0.38、0.31、0.22及0.04,补硒组相应的各生殖器官的重量是:1.78、0.44、0.44、0.41及0.05,两组精囊腺重量差异显著。观察到7头缺硒组猪的曲精细管的生殖细胞层内有很多大小不一的空泡。并且,附睾尾的附睾管外径及附睾头和附睾尾的附睾管上皮细胞高度,都是补硒组显著比缺硒组高。缺硒组猪附睾尾精浆中精子密度比补硒组低,活率也较低、头部及尾部畸形率都较高,两组精子的尾部畸形率差异显著。测定了各试验猪睾丸及副性腺的硒含量,缺硒组猪的睾丸、尿道球腺、精囊腺及前列腺的硒含量(鲜样重,ppm)是:0.115、0.015、0.030及0.028,补硒组相应的硒含量为:0.222、0.069、0.114及0.118,两组副性腺的硒含量差异非常显著。     

清除公猪精液胶状物的研究

<正> 我们通过外科手术方法,论证了尿道球腺是分泌和决定精液中胶状物的腺体,并反复实践了摘除尿道球腺的公猪在性成熟时可采集无胶状物质的精液。为了探明公猪尿道球腺摘除后对其生长发育、性机能和精液质量的影响及应用于猪人工授精的效果,我们于1978年8月至1981年8月继续进行应用方面的研究。材料和方法供试用健康公猪30头,其中中约克与陆川杂交猪各15头。摘除尿道球腺的18头公猪中,有12头在3月龄体重达20—40公斤时施术;另外6头     

TGFβ-SMAD信号通路基因在梅山猪与杜洛克猪不同级别卵泡中的表达分析

为探索TGFβ-SMAD信号通路基因在卵泡中的表达规律,采用Real-time PCR方法检测TGFβ-SMAD信号通路基因THBS1、DCN、LTBP1、TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3、TGFβRⅠ、TGFβRⅡ、SMAD2、SMAD3、SMAD4基因在梅山、杜洛克S、M1、M2、L卵泡中的表达量变化。结果表明:TGFβ配体1、2、3型及正向调控因子THBS1、LTBP1、负向调控因子DCN、受体TGFβRⅠ、TGFβRⅡ以及受体调控SMAD2、SMAD3和辅SMAD4都在梅山与杜洛克的中等卵泡中存在表达差异,TGFβ1基因、TGFβRⅠ基因在梅山猪各级卵泡中的表达量均极显著高于杜洛克(P0.01)。研究提示,TGFβ-SMAD基因可能参与卵泡发育过程。     

梅山猪公猪育成期生长曲线拟合的研究

为研究梅山猪公猪育成期的生长发育规律,并拟合其生长曲线。本研究以67头饲养于生产性能测定系统(FIRE系统)的梅山猪公猪的生长发育数据(108d到255d)为基础,研究其生长发育规律。结果梅山猪公猪育成期的累积生长曲线呈现出"S"型曲线,利用2种非线性模型对其生长曲线进行拟合,都获得了较理想的拟合效果。其中,以Logistic模型的拟合优度最高,拟合结果最接近真实情况。在其拟合生长曲线中,梅山猪公猪最大理论体重为85.412kg,生长拐点体重是42.706kg,拐点日龄是159.388日龄,最大日增重为512.465g/d。     

二花脸猪和大白猪睾丸IGF-I和IGF-IR基因表达发育变化的研究

为了研究生长轴激素对猪繁殖性能发育的影响,随机选取0、3、20、30、90、120、180日龄纯种二花脸公猪和大白公猪各4头,屠宰并采取睾丸组织样,以18S rRNA为内标,用相对定量RT-PCR法研究睾丸IGF-I和IGF-IRmRNA的表达及发育性变化。结果表明,二花脸猪与大白猪睾丸IG-FI mRNA表达的发育模式在30日龄前完全相同,即随着日龄的增加而呈极显著增加(P<0.01);二花脸猪睾丸IG-FI mRNA相对表达量在30~180日龄无显著变化;大白猪睾丸IGF-I mRNA相对表达量在90日龄有所下降,而在120和180日龄又恢复到30日龄水平。二花脸猪睾丸IG-FI mRNA相对表达量显著高于大白猪(P<0.05)。二花脸猪与大白猪睾丸IGF-IR mRNA表达的发育模式不同。二花脸猪睾丸IG-FIR mRNA相对表达量在90~120日龄呈显著下降趋势(P<0.05);大白猪IG-FIR mRNA相对表达量在0日龄较高,随后显著下降(P<0.05),并在观察期内持续保持较低水平。二花脸猪IG-FIR mRNA相对表达量显著高于大白猪(P<0.05)。睾丸IGF-I mRNA和IG-FIR mRNA相对表达丰度呈极显著正相关(r=0.575,P<0.01)。结论:(1)不同品种猪睾丸IGF-I和IG-FIR mRNA表达具有特定的发育模式;(2)猪睾丸中IGF-I和IG-FIR mRNA的协同表达可能对猪繁殖性能的发育有重要调节作用。     

梅山猪垂体中GH、PRL及TSHβ基因发育性表达规律的研究

生长激素(GH)、催乳素(PRL)及促甲状腺激素β亚基(TSHβ)是动物生长发育过程中的重要调控因子。本研究我们通过RT-PCR检测了GH、PRL及TSHβ基因在不同生长阶段梅山猪垂体中mRNA的表达水平。结果发现:GH和TSHβ基因在公、母猪的生长发育过程中的表达量总体上都呈现先升高后降低的趋势;而PRL在公猪中的表达量在不同发育阶段相对稳定,而在母猪中呈现先下降后升高的趋势。总体上GH、PRL及TSHβ3个基因在公、母猪的生长发育过程中的表达呈现性别二相性。其中GH基因的表达在1、30、90和150日龄公、母猪间呈现出显著差异(P0.05);而PRL基因的表达在1、60和90日龄的公、母猪表现显著差异(P0.05);而TSHβ基因的表达在60和150日龄的公、母猪表现显著差异(P0.05)。