促黄体生成素受体在雌性山羊颈动脉体的分布

检测促黄体生成素受体(LHR)在雌性山羊颈动脉体(CB)中存在及其分布特点,为促黄体生成素(LH)是否对CB起调节作用提供形态学基础。取雌性山羊的CB进行LHR免疫组织化学(SP)法染色观察与分析。结果表明:LHR免疫阳性物质在颈动脉体中分布广泛;镜下可见,在CB的小球结构内,Ⅰ型、Ⅱ型细胞的细胞膜LHR免疫阳性物质呈棕黄色,为强阳性,在其细胞质和细胞核中LHR免疫阳性物质呈黄色,为中等阳性;CB的间质组织中,血管内皮细胞LHR免疫阳性物质呈棕黄色,为强阳性;此外间质还可见许多点状或线状的非细胞阳性结构,呈淡黄色,为弱阳性。对实质细胞群和间质组织平均光密度的分析结果表明,CB的实质细胞是LH作用的主要靶细胞之一,提示LH可能通过CB实质细胞上的LHR来介导生物学效应,影响CB的实质细胞对血液内化学刺激的感知,间接的影响动物机体心血管的功能。     

催产素受体在雌性山羊腹腔肠系膜前神经节的分布

本研究旨在探讨催产素(OT)是否可以影响雌性山羊腹腔肠系膜前神经节的活动。采用免疫组化SP法观察催产素受体(OTR)在雌性山羊腹腔肠系膜前神经节的分布特点。结果显示,催产素受体在腹腔肠系膜前神经节分布广泛,节内的神经细胞、支持细胞和过路纤维均有OTR免疫阳性产物分布;OTR主要在神经细胞中表达,相对表达量与其他非神经结构相比差异性极显著(P<0.01);在神经细胞中,OTR免疫阳性产物主要存在于胞膜和胞质,核不着色。雌性山羊腹腔肠系膜前神经节神经元对OT具有反应性,提示OT可能通过影响腹腔肠系膜前神经节神经元的活动,从而经其发出的交感节后神经这一途径调节胃肠的生理活动。     

催产素受体在雌性山羊颈胸神经节的分布

为探讨催产素(OT)是否可以影响雌性山羊颈胸神经节的活动.采用免疫组化SP法观察催产素受体在雌性山 羊颈胸神经节的分布特点.催产素受体在颈胸神经节分布广泛,节内的神经细胞、卫星细胞和过路纤维均有OTR 免疫阳性产物分布;OTR主要在神经细胞中表达,相对表达量与其他非神经结构相比差异性显著(P＜0.05);在神经 细胞中,OTR免疫阳性产物主要存在于胞膜、胞质、核仁,核膜不着色.雌性山羊颈胸神经节神经元对OT具有反应 性,提示OT可能通过影响颈胸神经节神经元的活动,从而经其发出的交感节后神经这一途径调节其所支配的靶器 官如心血管、汗腺、呼吸等的生理活动.     

卵泡刺激素受体在雌性山羊颈动脉体的分布

为了检测雌性山羊颈动脉体中是否存在卵泡刺激素受体(FSHR),探讨卵泡刺激素(FSH)是否可以影响雌性山羊颈动脉体的活动,本试验采用免疫组织化学SP法观察卵泡刺激素受体(FSHR)在山羊颈动脉体内的分布特点,利用IPP 6.0图像半定量分析系统分析FSHR在颈动脉体中实质细胞和非实质细胞上的表达量差异。结果显示,FSHR主要分布在颈动脉体的实质细胞(Ⅰ型细胞和Ⅱ型细胞)。Ⅰ型细胞中FSHR强阳性产物分布于细胞核,中等阳性产物分布于细胞膜,弱阳性或阴性产物分布于细胞质;Ⅱ型细胞中有强阳性产物;血管内皮细胞中有中等阳性或强阳性产物。FSHR在颈动脉体的实质细胞与非实质细胞中相对表达量呈显著性差异(P<0.05)。结果表明,证实FSHR在雌性非妊娠山羊颈动脉体内广泛表达,提示颈动脉体可能接受FSH的调节,这为研究FSH作用于非生殖系统及颈动脉体神经内分泌调节机制提供形态学依据。     

催产素受体在山羊颈中神经节的定位研究

为了研究山羊颈中神经节(middle cervical ganglion, MCG)的神经细胞内是否具备接受催产素(oxytocin, OT)调节的条件。取成年羊山颈中神经节,采用免疫组化SP法检测催产素受体(oxytocin receptor, OTR)在颈中神经节内各种结构上的分布特点,用Image-pro plus 6.0分析颈中神经节神经细胞和非神经细胞结构的催产素受体表达差异性。结果表明,颈中神经节内OTR免疫阳性产物分布广泛,神经细胞、过路神经纤维、血管内皮细胞、支持细胞和雪旺细胞均有不同程度的着色。OTR免疫阳性产物在神经细胞的胞质和细胞核核膜着色最深,为棕褐色,呈强阳性。大部分神经细胞胞质着色为黄褐色,呈中等阳性,这部分神经细胞胞质约占神经细胞总数的91%。血管内皮细胞、细胞膜,以及一小部分神经细胞胞质和少量神经纤维着色较浅,为淡黄色,呈弱阳性。大部分的过路神经纤维着色极浅或不着色,为阴性。图像分析表明神经细胞胞体的相对表达量与其他非神经细胞结构相比差异性极显著。OTR免疫阳性产物在山羊颈中神经节中广泛表达分布,且主要分布在颈中神经节交感节后神经细胞内。     

雌激素受体α、β在雌性山羊颈动脉体的分布

为探索雌性山羊颈动脉体(CB)是否具有接受雌激素作用的条件,本试验采用免疫组织化学SP法检测雌性山羊CB中ERα、ERβ的分布特点。结果表明,雌性山羊CB中ERα与ERβ的免疫阳性产物分布广泛,在球细胞、支持细胞、血管内皮细胞及周围结缔组织均有不同程度的阳性产物分布,但主要分布于球细胞。以上结果表明CB的球细胞是雌激素作用的主要靶点,提示雌激素可能通过作用于分布在CB球细胞上的ER对心血管系统的功能活动产生神经途径的调节作用。     

孕激素受体在雌性山羊颈前神经节的分布

为研究雌性山羊颈前神经节(SCG)是否具备接受孕激素作用的条件,从而推测孕激素是否参与靶器官内分泌过程的神经调控,本试验采用免疫组织化学SP法研究雌性山羊SCG中孕激素受体(PR)的分布特点。结果显示在雌性山羊的SCG中,PR免疫反应阳性产物广泛分布,在神经元胞体、施万细胞、卫星细胞、神经纤维中均有不同程度的着色。其中神经元均为PR阳性,细胞膜和细胞质呈黄褐色,PR为中等阳性,而细胞核呈棕褐色为强阳性。另外施万细胞、支持细胞和神经纤维中也有淡黄色、弱阳性的PR阳性产物。图像分析表明,神经元胞体PR的相对表达量极显著(P<0.01)高于其他非神经成分。以上结果表明雌性山羊颈前神经节是孕激素作用的主要靶器官之一,提示孕激素可能作用于SCG交感节后神经元,从而参与SCG支配的靶器官的功能活动,而SCG内神经元上的PR有可能作为一个节点协调孕激素对内脏器官的内分泌调节和自主神经对内脏器官的神经调节。     

发情周期中奶山羊下丘脑-垂体-卵巢轴催产素的免疫组化定位

用免疫组化ABC法,对发情周期中奶山羊下丘脑-垂体-卵巢轴催产素(OT)分布进行了观察研究.结果表明,下丘脑中分泌OT的神经元主要分布在室旁核和视上核,在穹窿周核、腹内侧核、腹外侧核、交叉上核、背内侧核、乳头体、下丘脑外侧区、下丘脑前核等核团也有一定数量的阳性神经元;阳性神经纤维仅见于室旁核、下丘脑前核、视上核等少数核团,在正中隆起和第3脑室室周可见到一定数量的阳性神经纤维.在垂体前叶未见到OT免疫反应阳性产物,自垂体柄和正中隆起的一侧可见到平行排列的OT阳性神经纤维断续地延伸至神经部.卵巢的卵泡及间质未见OT免疫阳性反应,,在黄体组织中存在数量较多的免疫反应阳性细胞,阳性细胞主要呈圆形、卵圆形,小梁两侧及黄体中央近腔区域的阳性细胞呈长梭形,有相当数量的阳性细胞具有突起.连续切片HE染色对照观察显示,黄体中OT主要由大黄体细胞产生,但小黄体细胞也存在OT免疫阳性反应.     

发情周期中奶山羊下丘脑—垂体—卵巢轴催产素的免疫组化定位

用免疫组化ABC法，对发情周期中奶山羊下丘脑—全体—卵巢轴催产素(OT)分布进行了观察研究。结果表明，下丘脑中分泌OT的神经元主要分布在室旁核和视上核，在穿窿周核、腹内侧核、腹外侧核、交叉上核、背内侧核、乳头体、下丘脑外侧区、下丘脑前核等核团也有一定数量的阳性神经元；阳性神经纤维仅见于室旁核、下丘脑前核、视上核等少数核团，在正中隆起和第3脑室室周可见到一定数量的阳性神经纤维。在全体前叶未见到OT免疫反应阳性产物，自垂体柄和正中隆起的一例可见到平行排列的OT阳性神经纤维断续地延伸至神经部。卵巢的卵泡及间质未见OT免疫阳性反应，在黄体组织中存在数量较多的免疫反应阳性细胞，阳性细胞主要呈圆形、卵圆形，小梁两侧及黄体中央近腔区域的阳性细胞呈长梭形，有相当数量的阳性细胞具有突起。连续切片HE染色对照观察显示，黄体中OT主要由大黄体细胞产生，但小黄体细胞也存在OT免疫阳性反应。     

Oct4在山羊睾丸组织中的表达与定位

探讨不同时期山羊睾丸组织中干细胞的分布和特点,以45 d和75 d山羊胎儿及出生后4月龄山羊睾丸为试验材料,进行了HE染色和Oct4抗体的免疫组化染色。结果显示,在45 d山羊胎儿睾丸组织中睾丸实质细胞聚集呈团状,形成岛屿状组织结构;发育到75 d山羊胎儿睾丸组织中睾丸的间质与实质组织结构差异明显,睾丸生精小管已经形成,生精小管管腔闭锁;出生后4月龄山羊睾丸组织结构明显,生精小管形态特征清晰,但管腔仍处于闭锁状态;Oct4免疫组织化学显示在45 d山羊胎儿睾丸组织中Oct4阳性细胞呈岛屿状分布,多见于生精小管前期的组成细胞;对于75 d山羊胎儿睾丸组织Oct4阳性细胞呈环状分布于生精小管中,睾丸间质组成细胞中则较少;在出生后4月龄山羊睾丸中阳性细胞主要分布于睾丸组织生精小管基底膜,沿基底膜环状分布。试验证实了在早期山羊睾丸组织中Oct4主要表达在生精前体细胞。     

猕猴脾脏中雌激素受体的表达及其性别差异

选取健康成年雌雄猕猴各3只,采用免疫组织化学SP法研究了雌激素受体(ER)在脾脏中的分布,观察猕猴脾脏中ER的表达及性别差异.结果显示,ER免疫阳性反应物主要分布于脾脏红髓区,脾小结相对较少,而动脉周围淋巴鞘、血管内皮、脾小粱等组织结构内仅有少量分布.ER阳性产物主要定位于细胞核中.部分存在于胞浆和胞膜上.雌性猕猴脾脏中的阳性细胞数量显著高于雄性,表达强度也较雄性强.这表明,ER参与雌激素对脾脏的免疫功能调控.ER阳性产物分布特点表明雌激素发挥作用主要是通过经典基因组机制,同时也通过非基因组机制途径.而ER表达的明显性别差异提示体内雌激素水平可能对脾脏中B淋巴细胞的功能有正调节作用.     

奶山羊妊娠黄体中催产素免疫反应细胞的分布

运用免疫组化ABC法妊娠26～120d的奶山羊黄体中催产素免疫反应细胞的分布进行了观察。结果表明，奶山羊妊娠黄体中存在催产素(Oxytocin,OT）免疫反应阳性细胞。阳性细胞在形态上以卵圆形、圆形、棱形为主，还有一些具有明显的突起。根据阳性细胞胞质内反应颗粒着色的深浅，可把OT阳性细胞分为强阳性、中等阳性和弱阳性3种。在妊娠26～30d，阳性细胞数量最多，强阳性细胞主要分布于黄体的周边，中等阳性及弱阳性细胞则均匀分布于整个黄体组织中，妊娠31～60d，阳性细胞数量明显下降，弥散于整个黄体组织中；妊娠61～120d，阳性细胞的数量及逐渐增多，以中等阳性和弱阳性细胞为主，而强阳性细胞数量较少。连续切片HE染色的对照观察显示妊娠黄体中大、小黄体细胞均可出现OT免疫阳性反应。     

神经生长因子及其受体TrKA在山羊脊髓发育中的表达特点

运用免疫组织化学超敏 SP法对山羊胎儿脊髓发育中神经生长因子 (nerve growth factor,NGF)及其高亲和力受体 Tr KA的表达及其功能进行了系统的研究和探讨。结果显示 ,山羊胎儿脊髓灰质中存在 NGF及其受体 Tr KA,于 6周龄胚就可检测到 ,随胚龄增加 ,其表达范围及免疫反应着色程度逐渐增强。 NGF主要分布于腹角和背角的神经细胞 ,反应产物主要定位于胞质和突起 ;Tr KA的分布主要以腹角及胶状质为主 ,反应产物主要定位于胞核 ,后期胞质及突起也可见到阳性反应。在山羊胎儿脊髓白质中也可观察到 NGF及 Tr KA免疫阳性反应 ,其发育后期更为显著 ,阳性反应主要分布于神经胶质细胞核、神经纤维的轴索及雪旺氏细胞。结果提示 ,NGF不仅对交感和感觉神经元的发育起作用 ,而且还与腹角运动神经元的发育有关     

五羟色胺对体外培养山羊黄体细胞增殖的影响

为了探讨5-羟色胺(5-HT)与山羊黄体细胞的生长是否存在密切的关联性,揭示其在黄体发育中的生物学作用,采用胶原酶Ⅱ消化法获得原代山羊黄体细胞并用催产素(OT)染色对细胞进行鉴定,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度5-HT对山羊黄体细胞的影响,免疫组织化学染色法(SP法)检测山羊黄体细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达。MTT法结果显示,5-HT对山羊黄体细胞的增殖起到促进作用,促增殖的浓度范围在10~(-8) mol/L~10~(-4) mol/L,浓度越高,促增殖作用越明显。免疫组织化学染色法证实,5-HT能够使山羊黄体细胞中PCNA蛋白的表达增多。结果提示,5-HT可能是通过促进PCNA蛋白的表达来实现对山羊黄体细胞的促增殖作用。5-HT在黄体发生、发展过程中发挥的重要作用及相关分子机制的初步揭示都为生殖内分泌系统的研究奠定了理论基础。     

雌激素受体α,β在雌性山羊肠系膜后神经节的表达

为探究雌激素是否通过交感神经调节雌性生殖系统的生理状态,试验选取雌山羊肠系膜后神经节,采用免疫组织化学SP法,检测雌激素受体α,β在肠系膜后神经节中的表达及分布。结果显示,雌激素受体α,β阳性产物在雌性山羊肠系膜后神经节广泛存在,强阳性产物存在于神经元胞膜和核中,阳性产物存在于整个神经元胞体以及核仁中。在神经节其他组成结构中也出现了阳性产物。表明在雌山羊肠系膜后神经元中存在雌激素受体,说明神经元对雌激素具有反应性;在神经节其他组成结构中出现阳性产物,说明雌激素可以经交感神经通路影响雌性生殖系统的生理机能,为研究雌性生殖系统的免疫神经调节提供了形态学证据。     

大豆异黄酮对去卵巢大鼠垂体ER和NGF蛋白表达的影响

探讨植物雌激素大豆异黄酮对大鼠垂体雌激素受体(ER)、神经生长因子(NGF)表达的影响。运用超敏感的免疫组织化学SP法,以青年雌性SD大鼠垂体为研究对象,通过补充不同剂量的大豆异黄酮,观察其对ER、NGF在垂体中的表达和分布变化的影响。结果显示,ER、NGF免疫阳性反应物在垂体中广泛分布。ER主要分布于中间垂体、腺垂体和神经垂体;NGF主要分布于中间垂体和腺垂体。ER免疫阳性反应物主要定位在细胞核和核膜,NGF免疫阳性反应物主要定位在细胞核,但在部分区域可见胞膜和胞浆中有阳性产物表达。去卵巢大鼠垂体中ER、NGF的表达强度及阳性细胞数量的总趋势是显著降低,而补充不同剂量的大豆异黄酮6周后,两种阳性产物的表达强度和阳性细胞数目随着补充剂量的增加而有较显著回升。表明大豆异黄酮可促进ER和NGF的表达,在维持和保护垂体的功能中发挥了一定作用;另外ER、NGF表达变化的相似性提示二者在大豆异黄酮对垂体的作用中是相互调节和影响的。     

妊娠期山羊卵巢中雄激素受体的免疫组化定位

用免疫组织化学技术对不同妊娠时期山羊卵巢组织中雄激素受体的表达及其变化规律进行研究,以探讨雄激素受体在卵巢生殖功能中的调节作用。结果显示,妊娠期黄体细胞的形态结构随所处妊娠的不同阶段而变化,退化黄体细胞数量随周期进程逐渐增多。在妊娠各时期卵巢的被膜、次级卵泡颗粒层细胞和黄体细胞均存在雄激素受体的阳性表达,从阳性反应产物定位来看,阳性反应主要位于细胞膜和细胞质内;随妊娠进程雄激素受体的表达强度逐渐减弱。     

妊娠山羊黄体组织中ghrelin的表达

运用组织学和免疫组化方法对不同妊娠时期山羊黄体的组织学结构及ghrelin的分布规律进行了研究,结果表明:黄体外覆结缔组织性被膜,实质主要由粒性(大)黄体细胞和膜性(小)黄体细胞组成;在各时期均存在大黄体细胞的退化现象,退化黄体细胞数量随周期进程逐渐增多,结构变化表现为:细胞形态多变,胞质呈强嗜酸性,胞核固缩或碎裂.ghrelin阳性反应主要位于被膜和黄体细胞,各阶段被膜上均存在ghrelin表达,主要为纤维及血管的着色;黄体内ghrelin主要定位于大黄体细胞,另外部分小细胞也有表达,从分布范围和染色强度看,呈现出少-多再渐少的变化趋势;结合各周龄山羊黄体组织中ghrelin阳性产物相对表达量的分析,表明在妊娠早中期,黄体组织内有较高的ghrelin表达,而在妊娠后期表达较低.不同妊娠时期山羊黄体组织中ghrelin的这种周期性表达模式与黄体的功能相适应,提示ghrelin的表达与黄体的功能密切相关.     

成年发情期奶山羊下丘脑催产素及其mRNA的表达

应用免疫组织化学SP法和原位杂交法研究了催产素（oxytocin，OT）及OT mRNA在成年发情期奶山羊下丘脑中的分布和表达。结果，OT免疫反应阳性细胞主要分布在视上核和室旁核，在视上弥散核、弓状核、室周核和乳头体各核团也存在免疫阳性神经元；在室旁核、视上弥散核、正中隆起和第三脑室附近有较多数量的强阳性神经纤维，在交叉上核有少量阳性神经纤维。在下丘脑23个核团（区）中均能检测出OT mRNA的阳性细胞。结果表明，OT和OT mRNA在下丘脑中分布广泛，且OT可能通过轴突传递和血液运输，将OT mRNA合成的OT运送到别的核团；OT在奶山羊发情过程中发挥了重要作用。     

FGF22及其受体在庆阳黑山羊正常睾丸与隐睾中的表达比较

试验旨在研究成纤维生长因子22（fibroblast growth factor 22,FGF22）及其受体2（fibroblast growth factor receptor 2,FGFR2）、硫酸乙酰肝素糖蛋白（heparan sulfate proteoglycans,HSPG）在庆阳黑山羊正常睾丸与隐睾中的分布与表达,探究其在山羊睾丸发育和隐睾形成中的作用。采用HE和特殊染色观察其组织学结构特征,进而以免疫组织化学及免疫荧光法结合形态计量学统计研究FGF22、FGFR2和HSPG在山羊正常睾丸及隐睾中的定位。结果表明,山羊隐睾较正常睾丸生精小管缩窄,腔内各级生精细胞排列紊乱,间质的胶原纤维和网状纤维增多,糖原类物质阳性反应较弱,FGF22在隐睾组织的Leydig、Sertoli细胞、管周肌样细胞及血管内皮细胞整体表达密度相较于正常睾丸显著减弱（P<0.05）。HSPG在正常睾丸表达显著强于隐睾（P<0.05）,间质组织变化尤其明显。FGFR2在隐睾组表达显著增高（P<0.05）,且以Sertoli细胞强阳性表达为主。庆阳黑山羊隐睾较正常睾丸发育异常,间质组织有纤维化趋势,糖原类物质含量减少;FGF22及HSPG表达降低应与隐睾局部环境温度变化密切相关;FGFR2在隐睾组表达增高提示其在发生隐睾时可能通过Sertoli细胞进行适应性调节。