抗菌肽BSN-37的抑菌活性及其稳定性分析

试验旨在研究抗菌肽BSN-37的抑菌活性和稳定性。采用微量倍比稀释法测定抗菌肽BSN-37的最小抑菌浓度(MIC),菌落计数法分析抗菌肽BSN-37对大肠杆菌CVCC1568的杀菌动力学特征,扩散法测定抗菌肽BSN-37的盐离子稳定性、酸碱稳定性、血清稳定性、胰酶稳定性、热稳定性、反复冻融稳定性、室温保持稳定性、药效保持时间稳定性。结果显示,抗菌肽BSN-37对革兰氏阴性菌(大肠杆菌和沙门氏菌)的MIC为1.5625～25μg/mL,对革兰氏阳性菌(枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌)的MIC为1.5625～12.5μg/mL,对真菌(白色念珠菌)没有活性;抗菌肽BSN-37可在90min内完全杀灭大肠杆菌CVCC1568;除了Fe2+和胰酶会影响抗菌肽BSN-37的抑菌活性外,在75～100℃的高温、150～250mmol/L高浓度盐离子(Na+、K+、Ca2+和Mg2+)、20%～25%饱和浓度的Cu2+、pH 4～10、20%～25%的血清、10～12次的反复冻融、10～12d室温保存等条件下仍能保持较好的抑菌活性,药效保持时间可达7.5d。本试验结果表明,抗菌肽BSN-37具有替代抗生素成为新抗菌药物的潜力,为抗菌肽BSN-37的临床应用提供了理论依据。     

抗菌肽BSN-37的抑菌活性及其稳定性分析

试验旨在研究抗菌肽BSN-37的抑菌活性和稳定性。采用微量倍比稀释法测定抗菌肽BSN-37的最小抑菌浓度(MIC),菌落计数法分析抗菌肽BSN-37对大肠杆菌CVCC1568的杀菌动力学特征,扩散法测定抗菌肽BSN-37的盐离子稳定性、酸碱稳定性、血清稳定性、胰酶稳定性、热稳定性、反复冻融稳定性、室温保持稳定性、药效保持时间稳定性。结果显示,抗菌肽BSN-37对革兰氏阴性菌(大肠杆菌和沙门氏菌)的MIC为1.5625～25μg/mL,对革兰氏阳性菌(枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌)的MIC为1.5625～12.5μg/mL,对真菌(白色念珠菌)没有活性;抗菌肽BSN-37可在90min内完全杀灭大肠杆菌CVCC1568;除了Fe2+和胰酶会影响抗菌肽BSN-37的抑菌活性外,在75～100℃的高温、150～250mmol/L高浓度盐离子(Na+、K+、Ca2+和Mg2+)、20%～25%饱和浓度的Cu2+、pH 4～10、20%～25%的血清、10～12次的反复冻融、10～12d室温保存等条件下仍能保持较好的抑菌活性,药效保持时间可达7.5d。本试验结果表明,抗菌肽BSN-37具有替代抗生素成为新抗菌药物的潜力,为抗菌肽BSN-37的临床应用提供了理论依据。     

抗菌肽P3的序列分析及其抑菌活性的测定

为研究抗菌肽P3的生物学功能,试验通过在线软件分析了抗菌肽P3的理化特性、与其他抗菌肽的相似性、二级结构、剪切位点、疏水性、表面极性和抗原性,用琼脂糖扩散法测定了抗菌肽P3的抑菌活性,用倍比稀释法测定了抗菌肽P3的最小抑菌浓度和溶血性。结果表明,抗菌肽P3为疏水性的α螺旋型阳离子多肽,与APD3数据库中抗菌肽Alyteserin-2Ma有最高的相似度,可被9种酶剪切,不具有抗原性,对大肠杆菌、沙门菌、枯草芽孢杆菌、屎肠球菌和白色念珠菌有抑菌活性,对鸡红细胞有较低的溶血性。研究结果说明,抗菌肽P3有抑菌活性,可作用于细胞膜,从而导致菌体死亡。     

抗菌肽JH-3对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑菌和抗炎作用研究

为研究抗菌肽JH-3对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicilin-resistant Staphyloccocus aureus,MRSA)ATCC25923的杀菌和抗炎作用,本研究通过琼脂扩散和最小抑菌浓度(MIC)检测了抗菌肽JH-3对ATCC25923的抑菌作用,结果显示JH-3对ATCC25923具有良好的杀菌作用,1 MIC的JH-3在20 min内可使ATCC25923活菌数降低1 000倍;利用结晶紫染色和电镜观察检测JH-3对ATCC25923生物膜形成的影响,结果显示较低浓度的JH-3(0.5 MIC)可以显著降低ATCC25923生物被膜的形成;通过细胞毒性试验和RT-PCR在细胞水平上评价了JH-3对ATCC25923介导的LDH和细胞因子释放的影响,结果显示JH-3(50μg/mL)可以显著降低ATCC25923介导的A549细胞LDH的释放,同时JH-3还具有剂量依赖性的降低ATCC25923诱导的A549细胞炎症相关细胞因子(IL-1β、IL-2和IL-6)的表达;对其他8株不同的MRSA进行抑菌性测定,结果显示JH-3对这些菌株均有很好的杀菌作用,20 min内均可使活菌数降低至10~3cfu/mL～10~7cfu/mL。本研究首次证实了JH-3能够有效杀灭MRSA及抑制MRSA介导的炎症作用,为新型抗菌药物的研发奠定基础。     

抗菌肽JH-3的抗菌谱、溶血性及生物信息学分析

为了解抗菌肽JH-3的抗菌谱、溶血性和生物信息,试验利用琼脂糖扩散法测定抗菌肽JH-3对不同细菌和真菌的抗菌活性,利用分光光度法检测抗菌肽JH-3对红细胞的溶解活性,用生物软件对抗菌肽JH-3进行生物信息学分析。结果表明:抗菌肽JH-3对大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌、多杀性巴氏杆菌、副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、金黄色葡萄球菌、猪链球菌2型、白色念珠菌、青霉有抗菌活性,浓度小于4μg/m L时没有溶血性;二级结构为α螺旋,有3个磷酸化位点,没有糖基化和泛素化位点,有10种酶的酶切位点,为阳离子性疏水多肽。说明抗菌肽JH-3为无溶血性的螺旋型阳离子抗菌肽,抗菌谱广。     

蝇蛆抗菌肽粗提的优化及其抑菌活性研究

为了提高蝇蛆抗菌肽粗提成功率,探讨其抑菌活性,本试验采用不同方法进行蝇蛆抗菌肽的提取,对大肠杆菌和沙门菌诱导的抗菌肽粗提液的抗菌活性及其在-20℃和-80℃下的抑菌效果进行了测定。结果显示,大肠杆菌和沙门菌诱导的蝇蛆抗菌肽浓度和抑菌圈直径均大于庆大霉素对照组;-20℃浸提匀浆液和-80℃冷冻保存过上清的蝇蛆抗菌肽对各种菌的抑菌效果显著高于其他温度。提示,经大肠杆菌和沙门菌诱导蝇蛆活体、-20℃浸提匀浆液和-80℃冷冻保存蝇蛆抗菌肽粗提液等条件均能明显提高蝇蛆抗菌肽的获得率和抑菌活性。     

锯缘青蟹Scygonadin抗菌肽的毕赤酵母表达及其产物抑菌活性分析

Scygonadin抗菌肽是一类阴离子抗菌肽,从锯缘青蟹体内分离得到,对溶壁微球菌和嗜水气单胞菌具有较好的抑制作用。研究从锯缘青蟹c DNA文库中找出Scygonadin抗菌肽的成熟核苷酸序列和对应的氨基酸序列,并根据毕赤酵母的偏好密码子进行密码子优化,优化后的密码子经人工合成后连接到毕赤酵母表达载体p PCIZαA上,构建锯缘青蟹Scygonadin抗菌肽的真核表达载体,然后经电击转化至毕赤酵母X-33中。表达产物经镍柱纯化后进行SDS-PAGE电泳。结果表明,锯缘青蟹Scygonadin抗菌肽在毕赤酵母X-33中获得表达,且测序结果显示与最初设计的氨基酸序列一致;体外抑菌试验表明:纯化的重组多肽具有抑制溶壁微球菌及嗜水气单胞菌的作用,而且还可抑制金黄色葡萄球菌等多种革兰阳性菌,但其对革兰阴性菌的抑制作用相对较弱。     

抗菌肽Gal-4体外抑菌活性的初步鉴定

为了鉴定抗菌肽Gal-4的体外抑菌活性,试验采用打孔法和细菌生长曲线法鉴定抗菌肽Gal-4对金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌的抑菌活性。结果表明:抗菌肽Gal-4对两种受试菌均表现出良好抑菌活性,两种受试菌的对照孔均未出现抑菌圈,而试验孔出现了较大的抑菌圈,其对金黄色葡萄球菌的抑菌活性要强于多杀性巴氏杆菌,随着抗菌肽Gal-4浓度的增大其抑菌活性也逐渐增强。说明抗菌肽(Gal-4)对金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌均有抑制效果。     

抗菌肽对抗生素耐药菌株的抑菌活性研究

[目的]研究抗菌肽对抗生素耐药菌株的抑菌活性。[方法]利用抗性平板划线法从腹泻病牛血便中筛选分离出1株耐药菌,通过16S rDNA序列进行鉴定,采用琼脂孔穴扩散法通过梯度盐酸壮观霉素（spectinomycin,Spe⁺）、氨苄青霉素（ampicillin,Amp⁺）、硫酸卡那霉素（kanamycin,Kan⁺）和氯霉素（chloramphenicol,Cm⁺）试验确定该菌药敏特性,并利用1种抗菌肽制剂对该菌株进行药敏试验。[结果]经BLAST比对分析该菌16S rDNA序列,鉴定该耐药菌为科氏葡萄球菌（Staphylococcus cohnii）,此菌对Amp⁺敏感,但对试验中其他抗生素均有耐药性,各梯度抗菌肽对该耐药菌均具有明显的抑菌活性。[结论]抗菌肽能有效抑制耐药科氏葡萄球菌的生长,有望在畜牧生产中代替抗生素使用。     

人源抗菌肽LL-37对畜禽病原菌的抑菌活性及体外稳定性研究

测定LL-37对常见畜禽病原菌的抑菌活性及其体外稳定性,并与常用抗生素抑菌活性进行对比。结果表明,LL-37抗菌肽具有广谱的抑菌作用,能够有效抑制细菌生长,但在抑菌效果上弱于常用抗生素如阿莫西林等;LL-37的稳定性较差,在pH=8的碱性环境及消化酶作用的条件下,LL-37的抑菌效果大大降低。研究结果证明LL-37具有一定的抑菌效果,但其抑菌活性和稳定性还有待提高。     

蜂毒肽对常见病原菌的抑菌活性及其稳定性研究

为了对比蜂毒肽和常用抗生素对常见病原菌的抑菌活性并对蜂毒肽稳定性进行探究,试验通过测定常见抗生素和蜂毒肽对常见病原菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),绘制时间动态杀菌曲线,比较杀菌速率;通过控制变量的方法,测定温度、pH值、消化酶对蜂毒肽抑菌活性的影响,从而确定影响蜂毒肽稳定性的因素。结果表明:蜂毒肽对常规致病菌的抑菌活性与常用抗生素相比较弱,但杀菌速率优于常规抗生素;其热稳定性较好,在50～90℃条件下抑菌活性几乎不受影响,但其抑菌活性在pH值为2和8的条件下表现不佳,且对胃蛋白酶和胰蛋白酶的耐受性表现较差。说明蜂毒肽在通过生化修饰结构、提高酶解抗性后,具有一定的市场应用前景。     

蛙源抗菌肽Magainin Ⅱ对畜禽常见病原菌抑菌活性与体外稳定性测定

抗菌肽MagaininⅡ是来源于非洲爪蟾体内的一种具有抗菌活性的小肽类物质。试验采用微量肉汤稀释法测定蛙源抗菌肽MagaininⅡ对几种常见畜禽致病菌的抑菌活性;在此基础上将抗菌肽MagaininⅡ在不同温度、pH值及人工胃蛋白酶与胰蛋白酶进行处理,进而评价其稳定性。试验结果表明,抗菌肽MagaininⅡ对革兰氏阳性菌不具有抑菌作用,但对几种革兰氏阴性菌表现出一定的抗菌活性,MIC值处于64~256μg/ml;由时间杀菌曲线可知,MagaininⅡ不能有效抑制金黄色葡萄球菌ATCC 25923菌落的形成,但能够在90 min内对大肠杆菌ATCC 25922发挥抑制作用;MagaininⅡ的稳定性测试结果表明,分别经不同温度、pH值以及人工胃蛋白酶与胰蛋白酶处理后的MagaininⅡ对金黄色葡萄球菌ATCC 29523和表皮葡萄球菌ATCC 12228始终没有发挥抑菌活性,在经50~70℃处理后能够对大肠杆菌K12和肠炎沙门氏菌CMCC 50041稳定发挥抗菌效果,MIC值始终为64μg/ml;经两种人工酶处理后的MagaininⅡ对两种试验革兰氏阴性菌不再具有抑菌作用;经pH值为2处理后,MagaininⅡ对大肠杆菌K12和肠炎沙门氏菌CMCC 50041的MIC均为256μg/ml,比未处理时明显增大,经pH值为8处理后,MagaininⅡ不能抑制大肠杆菌K12,对肠炎沙门氏菌CMCC50041的MIC为128μg/ml。基于试验结果可推断:MagaininⅡ对革兰氏阳性菌抗菌效果不明显,对革兰氏阴性菌具有一定的抗菌效果,经人工酶处理后性质不稳定,该研究为MagaininⅡ在畜禽生产上的应用提供参考。     

黑斑蛙皮肤抗菌肽的纯化及抑菌活性研究

为了从黑斑蛙皮肤中获得纯度高且抑菌活性较强的抗菌肽(AMPs),试验采用稳压电刺激的方法提取黑斑蛙皮肤分泌物的粗提物。结果表明:黑斑蛙皮肤分泌物的粗提物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有抑菌活性。利用高效液相色谱法对其进行纯化,通过纯化获得了一种纯度高且抑菌活性较强的AMPs,经过质谱鉴定,这种AMPs的相对分子质量为2 878.102。     

抗菌肽对猪源大肠杆菌和猪链球菌体外抑菌活性研究

<正>1材料和方法1.1材料(1)试验菌株。8株猪大肠杆菌(E.coil)分离自大肠菌感染的猪体,8株猪链球菌株分离自感染的病猪,均来源于河南省内猪场,由河南农业大学牧医工程学院传染病实验室自行分离保存。(2)试剂和药物。抗菌肽和牛肉膏(生化试剂)购自北京奥星生物技术有限公司,批号20070720;蛋白胨(生化试剂)购自北京奥星生物技术有限公司,批号20081102;氯化钠(分析纯)购自天津北方天医化学试剂厂,批号20080924;磷酸氢二钾(分析纯)购自上海恒信化学试剂有限公司,批号20080602。     

大口黑鲈不同组织中抗菌肽粗提及抑菌活性测定

研究了大口黑鲈不同组织中抗菌肽的提取及其粗提物对不同菌种的抑菌作用。以新鲜的大口黑鲈为试验材料,用5％乙酸作为提取液,对大口黑鲈粘液、皮肤、肝脏、脾、卵、鳃组织进行提取,并对粗提物进行抑菌活性检测。结果表明大口黑鲈粘液、皮肤和肝脏组织提取物对嗜水气单胞菌有抑菌作用,皮肤和肝脏组织提取物对大肠杆菌有抑菌作用。肝脏组织抗菌肽提取物经SephadexG-25凝胶过滤层析柱分离后,其收集液对嗜水气单胞菌仍具有抑菌作用。大口黑鲈皮肤和肝脏组织提取物对嗜水气单胞菌、大肠杆菌均有抑菌作用。