猪源多重耐药大肠杆菌通过接合水平传播传递耐药性研究

为了检测多重耐药大肠埃希菌中可移动元件质粒在耐药性传播中的作用。采用质粒接合试验,筛选接合菌,并用K-B纸片测定接合前后细菌的耐药谱,并测定MIC值和MBC值,比较接合菌在接合前后耐药性变化。其结果70株供体菌中,一共接合成功31株,成功率达44.29%。通过药敏试验以及MIC值和MBC值的测定发现,接合后93.3%细菌的耐药谱型发生变化、76.7%接合菌最小抑菌浓度发生变化,56.7%接合菌的最小杀菌浓度发生变化。表明从菌株的耐药谱及对药物的抗性变化上可以初步判定,可移动元件质粒在传播细菌耐药性方面起到重要作用。     

鸡源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药性分析及相关耐药突变研究

本试验采用药敏纸片法对2014年从13个不同规模化鸡场分离的135株鸡源大肠杆菌进行常用12种抗菌药物敏感性试验,结果表明,头孢西丁和阿莫西林/棒酸耐药率较低,分别为17.8%、18.5%,而氟喹诺酮类的环丙沙星、诺氟沙星和左氧氟沙星的耐药率较高,分别为68.9%、65.2%和63.7%;进一步对高耐药率的氟喹诺酮类耐药菌株测定环丙沙星MIC值为4~256μg/ml;PCR扩增相关耐药基因(gyr A和par C),并测序分析耐药决定区突变及与MIC对应关系表明,耐药菌株突变主要发生在gyr A基因的Ser83密码子和Asp87密码子,及par C基因的Ser80密码子和Glu84密码子上,不同突变类型分别对应一定MIC值范围,其中73.1%(57/78)突变类型为gyr A基因的C(Ser83)→T(Leu)和G(Asp87)→A(Asn)突变,及par C基因的G(Ser80)→T(Ile)突变,其MIC值在8~256μg/ml之间;本研究提示规模化鸡场在防治大肠杆菌等细菌病时,应根据药敏结果选用药物,少用或不用氟喹诺酮类药物。     

鸡源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的多重耐药性

利用药敏试验监测系统分析了71株鸡源大肠杆菌临床分离菌株对9种氟喹诺酮类药物的耐药性,结果表明临床分离菌株对沙拉沙星、恩诺沙星、环丙沙星、二氯沙星、单诺沙星、奥比沙星和萘定酸呈现很高的耐药性。耐药率分别为69%、69%、55％、76%、69%、76%和99%;对盖特沙星和左氟沙星有轻度的耐药性,耐药率分别为11％和13％。在71株分离菌株中,只有1株没有耐药性,对3种以上药物有耐药性的菌株占74％(52／70),对6种以上药物有耐药性的菌株占70%(49／70),呈现出多重耐药性。对耐药菌株GyrA基因QRDR氨基酸变异分析表明70株耐药菌株的第83位氨基酸均发生了变异,由丝氨酸(Serine)变为亮氨酸(Leucine)。对6种以上氟喹诺酮类药物有耐药性的49株分离株除了83位氨基酸发生变异外,其87位氨基酸也发生了变异,41株87位的氨基酸由天冬氨酸(D)变为天冬酰胺(N),6株87位的氨基酸由天冬氨酸(D)变为酪氨酸(Y),由天冬氨酸(D)变为甘氨酸和丙氨酸的各1株;对3种以下氟喹诺酮类药物有耐药性的21株87位的氨基酸没有发生变异。由此表明鸡源大肠杆菌GyrA基因QRDR区的变异与菌株对氟喹诺酮类药物的耐药程度密切相关,83位的氨基酸变异是大肠杆菌呈现对氟喹诺酮类药物耐药性的关键氨基酸。     

宠物源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的多重耐药机制研究

目的:研究分析宠物源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物耐药性。方法 :采用荧光测定法对氟喹诺酮类药物的亲水性和疏水性,在临床分离的宠物源大肠杆菌敏感株及多重耐药株菌体内的蓄积量及葡萄糖与能量抑制剂氰氯苯对氟喹诺酮类药物在菌体内的影响。结果:能量依赖性是大肠杆菌敏感菌株与多重耐药菌株中的氟喹诺酮类药物浓度主要是通过能量依赖性进行降低,其中主要是多重耐药株菌浓度下降较快。结论:能力以来主要是大肠杆菌耐药原因之一,积蓄量减少将会导致耐药菌株在氟喹诺酮类药物中难以生存。     

淄博地区鸡源耐氟喹诺酮大肠杆菌的耐药特点

为了解淄博地区鸡源耐氟喹诺酮大肠杆菌的耐药特点及其耐药基因携带特点。本研究于2016年5月对淄博地区两个鸡场粪便棉拭子采集,分离耐头孢噻肟大肠杆菌,并对15种抗生素进行药敏检测。PCR检测qnr A、qnr B、qnr S、aac-(6’)-Ib-cr耐药基因。共收集34份粪便棉拭子,分离14株耐喹诺酮大肠杆菌,分离率47%。所有耐喹诺酮大肠杆菌呈现多重耐药,但都对碳青霉烯类药物敏感。12株菌携带qnr S基因,携带率最高为85.7%。鸡源耐喹诺酮大肠杆菌分离率高耐药谱广,给临床中应用抗生素的治疗带来困难。     

耐氟喹诺酮类药物大肠杆菌基因突变耐药机制的研究

取临床分离的 4株耐药菌、实验室诱导培养获得的 3株耐药菌和 1株敏感菌 ,提取其染色体 DNA,PCR扩增 gy-r A和 par C基因片段 ,并将其克隆和测序。结果表明 ,无论是临床分离的还是实验室诱导的耐药菌 ,gyr A基因在其编码第 83位或第 87位氨基酸处均发生突变 ,par C基因在其编码第 80位或第 84位氨基酸处发生突变 ,而敏感菌 ES在2个基因位点上均未发生突变。其中 2株低度耐药菌株的 gyr A基因出现单一突变 ,使其编码的氨基酸发生改变 ,分别为 Ser83→ L eu或 Asp87→ Asn,但在 par C基因上却未发生突变 ;其余 5株高度耐药菌 gyr A基因突变导致氨基酸发生改变 :Ser83→ L eu(n=5 ) ,Asp87→ Asn(n=4 )和 Tyr(n=1) ,par C基因突变导致氨基酸改变 :Ser80→ Ile(n=4 )和Glu84→ L ys(n=1)。这 2个基因的突变均与文献报道的突变相同 ,表明 gyr A基因 Ser83和 Asp87突变以及 par C基因 Ser80和 Glu84突变可能与大肠杆菌的喹诺酮类药耐药机制有关 ,且低度耐药只在 gyr A基因上出现单一位点突变 ,当高度耐药时 ,才同时在 par C基因上出现突变     

猪源大肠杆菌的耐药性分析

<正>大肠杆菌是兽医临床常见的病原之一,其血清型多样、抗原性复杂,临床症状和病理变化多变,且常与其他病毒和/或细菌并发感染,大大加剧了畜禽的死亡率,给畜牧业造成了严重的经济损失。近年来,随着抗生素的大量使用,细菌耐药性逐渐增强,导致大肠杆菌耐药菌株的不断出现,耐药谱也不断扩大,给我国畜牧业的健康发展和生态环境带来了极大危害。因此对大肠杆菌耐药性的分析、监测,有利于准确用药,控制疾病,避免抗生素滥用。     

大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制研究现状

大肠杆菌是典型的革兰氏阴性杆菌,其耐药谱广,耐药机制复杂,是国内外耐药性研究较为详细的细菌.大肠杆菌对氟喹诺酮药物的耐药性问题是当前国内外研究的热点.本文就大肠杆菌与氟喹诺酮耐药性有关的gyrA、gyrB、parC、parE点突变;多药外输泵;多重耐药基因;抗性质粒等方面的研究进展作一综述.     

猪源携带质粒介导喹诺酮类耐药基因大肠杆菌气源性传播的研究

为了调查养猪场携带质粒介导喹诺酮类耐药基因大肠杆菌的气源性传播情况,本试验分别在5个猪场舍内及舍外上风向和下风向不同距离收集空气样品,并在舍内随机采集粪便样品,分离大肠杆菌。药敏试验检测其对14种抗生素的耐药性。以质粒介导喹诺酮类耐药基因(qnr、aac(6')-Ib-cr、qepA)为指示基因,利用肠杆菌基因间重复一致序列聚合酶链式反应(ERIC-PCR)鉴定技术,分别对5个猪场不同样品中大肠杆菌的遗传相似性进行分析,评估其向舍外空气的传播情况。结果显示,5个猪场中的大肠杆菌对庆大霉素、卡那霉素、四环素、链霉素、萘啶酸、复方新诺明等12种常用抗生素耐药率较高,且呈现多重耐药。ERIC-PCR结果显示,46.34% (19/41)的舍内空气分离株与粪便分离株来源相同,其中73.68% (14/19)的分离株携带的耐药基因也相同;68.42% (26/38)的舍外空气分离株与舍内空气或粪便分离株来源相同,其中65.38% (17/26)的菌株携带相同的耐药基因。结果表明,起源于舍内粪便的携带质粒介导喹诺酮类耐药基因的大肠杆菌能形成气溶胶污染舍内空气,并借助舍内外气体交换,传播到舍外不同距离空气中(≥400 m),对养殖场周围的环境卫生及社区居民的健康形成威胁。     

贵州猪 鸡源大肠杆菌质粒介导喹诺酮类耐药基因调查

为调查贵州省动物源性大肠杆菌质粒介导的喹诺酮耐药基因(PMQR)流行情况,从贵州省5个地区147个规模养殖场采集猪肛门拭子、鸡泄殖腔拭子2469份,分离得到1 928株大肠杆菌,应用PCR方法和基因测序检测大肠杆菌qnrA、qnrB、qnrS、qnrD、qepA和aae(6′)Ib-c,基因的携带情况。结果表明,6种PMQR基因的总检测率为60.72%,qnrA、qnrB、qnrS、qnrD、qepA及aac(6′)Ib-cr的检出率分别为9.54%(184/1928)、12.03%(232/1928)、22.04%(425/1928)、4.36%(84/1928)、3.42%(66/1928)和30.65%(591/1928),且细菌同时携带多个基因的情况严重。     

猪源大肠杆菌耐药性质粒的监测研究

在１１５株猪大肠杆菌耐药性监测的基础上,提取耐药类型最普遍的５株耐药菌的质粒进行质粒指纹图谱分析。结果表明：同一来源、耐药类型相同的菌株有相似的质粒图谱,来源不同者,酶切图谱有提示出它们之间的同源性,说明质粒指纹图谱可作为流行病学调查的工具。     

猪源致病性大肠杆菌gyrA基因喹诺酮耐药决定区的SSOP分析

DNA旋转酶基因gyrA中喹诺酮耐药决定区碱基变换在大肠杆菌对喹诺酮的耐药性方面起着十分重要的作用.采用PCR-SSCP(PCR-单链构象多态性)技术可对大肠杆菌gyrA基因QRDR的突变进行有效检测.本文以142株猪源致病性大肠杆菌氟喹诺酮药物敏感菌株为样本,测定了细菌对喹诺酮药的MIC值,结果表明142株猪源大肠杆菌对环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、氧氟沙星的耐药率分别为78.8%,56.3%,65.5%,76.8%.猪源大肠杆菌对氟喹诺酮药物的耐药率高,且耐药菌株MIC值较大.菌株WJPE2-1(对环丙沙星的NIC为0.5μg/mL)的诱导耐药试验,结果表明,在通过药物浓度梯度连续诱导过程中获得了MIC为2,8,64,128μg/mL的四株诱导菌株,诱导菌株4对ENR、NOR、OFL、CIP的MIC值分别增加到诱导前的32,128,128,256倍,且4株诱导菌株对CIP、ENR、NOR、OFL的MIC值均呈现递增.根据GenBank注册的大肠杆菌gyrA序列设计引物,横跨gyrA的第40和118密码子位置,包含完整的QRDR,从27株不同MIC值的大肠杆菌株、ATCC25922、4株诱导耐药菌株均获得约300bp的PCR产物.采用291的交联度、12%的聚烯酰胺浓度,1×TBE,凝胶中添加5%的甘油的条件,对诱导菌株、药物敏感菌株及不同耐药水平的分离菌株进行SSCP分析,结果表明,诱导菌株的谱型与敏感对照菌不同,低MIC值菌株SSCP谱型与敏感对照与敏感对照一致性高;耐药菌株的谱型多数与敏感对照不同.四株诱导大肠杆菌PCR产物的SSCP谱型均与对照不一致,检出率为100%;27株不同耐药性的猪源大肠杆菌中,7株敏感大肠杆菌共有6株的SSCP谱型与标准敏感菌株对照一致,符合率为85.7%;20株耐药大肠杆菌其谱型与标准敏感对照一致的菌株为2株,检出率为90.0%.序列比较结果表明,敏感菌株WJPE2-1的PCR产物与敏感对照有2个碱基(第91,111位氨基酸残基位置)的差异,序列同源率为99.16%(236/238).诱导菌株1与2表现在第83位氨基酸编码序列由tcg突变为ttg,菌株3、4与菌株1、2的差异表现在第87位氨基酸编码序列由gac突变为tac.进一步分析发现,菌株WJPE2-1在第91位及111位的突变均为同义突变,即密码子的变换没有引起氨基酸残基的改变.在诱导菌株中,1与2的gyrase的第83位氨基酸残基由Ser→Leu,菌株3、4的gyrase还在第87位氨基酸残基由Asp→Tyr.表明由于QRDR内碱基的改变,引起DNA旋转酶氨基酸的变化,导致大肠杆菌产生氟喹诺酮药物的耐药性.     

上海市猪源大肠杆菌耐药性监测

目的了解上海市猪场大肠杆菌耐药情况及耐药规律。方法按照常规方法分离培养细菌,应用HX-21细菌鉴定/药敏分析仪以及API20E鉴定系统进行了鉴定细菌,采用HX-21细菌鉴定/药敏分析仪测定了大肠杆菌对24种抗菌药耐药情况。结论本地区猪源大肠杆菌耐药性严重,其中对阿米卡星、多黏菌素敏感率高,对氨苄西林、卡那霉素、四环素、甲氧苄啶耐药性较高,耐药谱复杂,多重耐药性、交叉耐药性严重。     

中药消除大肠杆菌对氟喹诺酮类耐药性的作用研究

通过对重庆市部分养殖场分离到的120株致病性大肠杆菌进行了耐药谱的调查，并利用加有100μmol／1的黄连、丹参提取液的培养基进行感触培养，观察培养前后大肠杆菌对氟喹诺酮类药物耐药谱的变化。试验结果显示，经两种不同中药提取液感触培养后，8耐以上的菌株从72．5％分别下降到61.7％和54.2％.表明中药可部分逆转致病性大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药性。     

潍坊市肉鸭源大肠杆菌喹诺酮类药物耐药性的检测

为研究近年来山东省肉鸭源致病性大肠杆菌对喹诺酮类药物的耐药性,本研究将2010年以来分离自山东省潍坊市发病肉鸭的232株大肠杆菌进行了洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星等4种喹诺酮类药物的药敏试验,并对其进行了质粒介导喹诺酮类药物耐药基因的PCR检测。结果表明,山东省潍坊市肉鸭源大肠杆菌对4种喹诺酮类抗生素均产生了较高耐药性(54.31%~82.760%),质粒介导喹诺酮类耐药(PMQR)基因携带率达到58.19%(135/232),26.29%(61/232)的菌株携带两种产PMQR基因,1.72%(4/232)的菌株携带三种PMQR基因。未检测到qnr A、qnr B、qnr C、qnr D与Qep A基因,qnr S、oqx A和oqx B基因在山东省禽源致病性大肠杆菌中分布较为广泛,其检出率依次为19.83%(46/232)、41.81%(97/232)和26.29%(61/232)。     

猪源大肠杆菌耐药基因研究获突破

<正>抗生素的滥用造成对抗生素有耐药性和多重耐药性超级细菌的产生,这一现象已成为全球性难题。为了探究细菌耐药性的分子机制,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物细菌病研究团队开展了猪源大肠杆菌携带多重耐药基因分子机制的研究,并取得重要进展,为解析细菌多重耐药机制提供了理论依据,也为消除细菌耐药性提供了解决方案。自2000年首次在松鼠葡萄球菌中发现cfr基因至今,该基因曾一度被认为专属于阳性菌的多重耐药基因。动物细菌病研究团队的张万江博士     

猪源大肠杆菌质粒和染色体介导的喹诺酮类药的耐药机制

采用微量肉汤稀释法对31株猪源大肠杆菌进行6种喹诺酮类药物的敏感性测定,聚合酶链式反应检测质粒介导的喹诺酮类耐药（PMQR）基因qnr、qepA和aac（6′）-Ib-cr,并分析PMQR基因阳性菌株染色体gyrA、gyrB、parC、parE基因的喹诺酮耐药决定突变区（QRDRs）突变。结果显示,31株猪源大肠杆菌对兽医临床常用的氟喹诺酮类药物均呈现耐药。在31株猪源肠杆菌中共检测到2株携带qnrB10和4株携带qnrS1基因的大肠杆菌,未检测到qnrA、qepA和aac（6′）-Ib-cr。在PMQR阳性菌株gyrA基因的QRDRs中,低耐药菌株的gyrA基因出现83位S→W突变,高耐药菌株的gyrA基因同时出现83位S→L和87位D→N突变。而在parC基因的QRDRs中,大部分耐药菌株出现80位S→I突变,1株耐药菌株出现45位V→L突变。gyrB和parE基因的QRDRs未检测到突变。结果表明,本地区猪源大肠杆菌对兽医临床常用的氟喹诺酮类药物耐药严重,PMQR的出现和QRDRs的点突变可同时协同贡献对喹诺酮类耐药,而PMQR的出现加速了喹诺酮类耐药基因的快速传播。     

鸡源大肠杆菌质粒介导的氟喹诺酮类药物耐药基因qnrA的分子检测

对2005年~2007年从豫北地区临床分离的377株鸡源大肠杆菌进行生化鉴定,MIC值测定。被测菌株对氟喹诺酮类（FQs）药物恩诺沙星、环丙沙星和诺氟沙星均呈严重耐药,耐药率分别为94.9%、93.9%、94.9%。选取对恩诺沙星耐药（MIC>32 μg/ml）的235株大肠杆菌进行qnr基因的分子检测,结果显示仅有1株大肠杆菌（MIC=128 μg/ml）呈qnr基因阳性,经测序分析该基因命名为qnrA。     

贵州省猪源大肠杆菌对四环素类药物的耐药性及耐药基因检测

为考察贵州省猪源大肠杆菌对四环素类抗菌药的耐药情况和耐药基因的流行情况,本试验采用微量肉汤稀释法测定783株分离于贵州省8个地区规模化养殖场的猪源大肠杆菌对6种四环素类药物的敏感性,并通过PCR方法检测其携带四环素耐药基因情况。结果显示,猪源大肠杆菌对土霉素、四环素、金霉素、多西环素、米诺环素和替加环素的耐药率分别为97.3%、97.6%、96.6%、89.3%、48.0%和34.2%;土霉素和四环素的耐药水平最高,其MIC₅₀分别为256 和128 μg/mL,而MIC₉₀均为512 μg/mL,四环素的耐药倍数高于土霉素;米诺环素和替加环素的耐药水平最低,其MIC₉₀分别为32和4 μg/mL,耐药倍数相同;耐药基因tetA、tetB、tetC、tetD和tetM的检出率分别为92.60%、41.50%、58.75%、58.62%和70.10%;耐药菌株中主要以tetA基因为主,且大多数以携带复合基因的形式存在;大肠杆菌对土霉素、四环素、金霉素、多西环素和米诺环素的耐药性分别与耐药基因tetB和tetM呈极显著相关（P<0.01）,tetD基因分别与对米诺环素和替加环素的耐药性呈极显著相关（P<0.01）。贵州省猪源大肠杆菌对四环素类药物的耐药情况十分普遍,尤其是四环素和土霉素,金霉素和强力霉素有高度耐药的趋势;外排泵是四环素类药物主要的耐药机制;在兽医临床上越来越严重的耐药情况与耐药基因的广泛存在有很大关系。