奶牛布鲁氏菌的PCR鉴定

采集内蒙古某地区的可疑感染布鲁氏菌病奶牛的乳样及奶牛流产胎儿的肺、肝、脾等相关病料,分离并培养出11株病原菌,经BCSP31-PCR、VirB8-PCR、多重PCR及AMOS-PCR4种PCR方法鉴定,证实11株病原菌均为布鲁氏菌,并将11株菌定型为牛种5,6,9或3b型.     

新疆巴州地区布鲁氏菌流行株分子生物学鉴定

为新疆制定布病综合性防控措施提供科学依据和技术支撑,本研究应用分子生物学方法辅助鉴定了新疆巴州地区畜间布病流行分离株。2014年从新疆巴州地区收集流产羊胎儿21份,体内分离出疑似布鲁氏菌8株,采用分子分型方法(AMOS-PCR)和生物学分型方法对分离株进行进一步鉴定,结果表明8株分离株均为羊种布鲁氏菌,传统细菌分类学鉴定8株布鲁氏菌均为羊种生物3型。应用AMOS-PCR方法可以安全、快速对布鲁氏菌流行株进行种型鉴定,以期为新疆布病的综合防控措施的制定提供科学依据。     

一株犬种布鲁氏菌的分离与鉴定

对从一只流产贵宾犬全血中分离到的一株布鲁氏菌进行了形态结构、培养特性、生化特性研究以及凝集试验鉴定和多种属聚合酶链式反应(AMOS-PCR)鉴定.结果表明,分离菌为革兰氏阴性菌,在胰际琼脂培养基生长并呈典型的粗糙型布鲁氏菌菌落,菌落能被结晶紫溶液染成紫色.分离菌在琉瑾和复红培养基上生长,不产生H2S,与粗糙型布鲁氏菌阳性血清凝集,与光滑型布鲁氏菌阳性血清无凝集.用AMOS-PCR方法对分离菌进行鉴定,该分离菌具有犬种布鲁氏菌特有条带.鉴定结果表明分离菌符合犬种布鲁氏菌特性,将其命名为B.canis GB1.     

奶牛布鲁氏菌分离与鉴定

为查明甘肃省永靖县奶牛感染布鲁氏菌病的菌种和类型,为该地区布病科学防控提供技术支撑,2016年9月,对永靖县3份疑似感染布鲁氏菌病奶牛脾脏进行了病原的分离与鉴定。结果表明:PCR从3份样本均检测出布鲁氏菌;细菌分离培养,15 d内,3份样本中只有1份样本生长菌落,其余2份样本培养无细菌菌落出现;分离的1份菌株用AMOS-PCR获得流产布鲁氏菌特征的扩增条带;分离菌株的opm25基因测序结果与流产布鲁氏菌高度吻合。     

甘肃省永靖县奶牛布鲁氏菌病监测与病原分离鉴定

为查明甘肃省永靖县奶牛布鲁氏菌病流行情况、感染菌种和类型,2013—2017年对永靖县8月龄以上奶牛进行了布鲁氏菌病监测,对2016年检出的3份疑似感染布鲁氏菌奶牛的脾脏进行了病原分离与鉴定。结果显示:2013—2014年检测奶牛444头,未检出阳性;2015—2016年检测奶牛706头,检出阳性63头,个体阳性率为8.92%;3份脾脏样本均为布鲁氏菌PCR检测阳性,细菌分离培养15 d,只有1份生长菌落;将分离菌株用AMOS-PCR进行检测,获得流产布鲁氏菌特征的扩增条带,且分离菌株的omp25基因测序结果与流产布鲁氏菌高度吻合。本监测和细菌分离鉴定结果为该地布鲁氏菌病防控提供了技术支撑。     

3株非典型羊源布鲁菌的基因分型研究

[目的]探讨采用基因分型方法对非典型布鲁菌鉴定的实用性,为非典型菌株的鉴别提供参考。[方法]采用常规鉴定方法和VITEK 2.0全自动细菌鉴定分析系统对菌株进行初步鉴定,利用AMOS-PCR进行种型鉴定,应用多位点可变数目串联重复序列分析方法(MLVA)确定菌株的基因型。[结果]常规鉴定结果显示试验菌株为疑似布鲁菌;VITEK 2.0全自动细菌鉴定系统显示3株试验菌株均为布鲁菌;AMOS-PCR扩增表明试验菌株均为羊种菌,MLVA聚类分析表明试验菌株与羊种2型布鲁菌紧密地聚为一类,属东地中海基因型,并在Panel 2B中发现了新的基因型(4-4-3-7-5),命名为CN2B-45。[结论]MLVA基因分型方法对非典型布鲁菌具有极高的分辨力,是非典型布鲁菌分型鉴别的最佳策略。     

一株扭角羚弗格森埃希菌的分离鉴定及药敏试验

从四川省某自然保护区2014年5月送检的一只死亡青年扭角羚的肝脏中分离到1株杆菌,并对该分离株进行了生化试验和药物敏感试验。菌株纯培养后,通过菌落PCR方法扩增16SrDNA,并测定PCR产物序列,结合16SrDNA测序结果及生化特性,确定该分离株的生物学分类,然后利用药物敏感试验确定了该菌的耐药情况。将该菌株16SrDNA测序结果在NCBI数据库中Blast同源性比较分析,发现它与弗格森埃希菌相似度超过99%,结合菌株生化试验结果,确定该菌株为弗格森埃希菌。药物敏感试验结果显示,此分离株对环丙沙星、氟苯尼考、头孢他啶、丁胺卡那等敏感,对氨苄西林耐药。     

猪亚利桑那菌的分离与鉴定

从陕西关中某猪场分离到一株革兰氏阴性杆菌,经细菌学方法分离鉴定为猪源亚利桑那菌,对小白鼠有很强的致病作用。药敏试验结果表明:该菌株对氯霉素、链霉素、丁胺卡那霉素等抗生素高度敏感,对青霉素、氨苄青霉素、环丙沙星等抗生素不敏感。     

河南省鸡源沙门菌新近流行株的分离鉴定及其耐药性分析

旨在了解河南省鸡沙门菌临床分离株血清型分布及药物敏感情况。从河南省各地区养鸡场共采集了沙门菌可疑病料617份,按常规方法进行分离,经生化、PCR及血清型鉴定,共分离出98株鸡源沙门菌,其中血清型定型82株,主要为肠炎沙门菌(62.24%)、鸡白痢沙门菌(18.37%)。进一步Kindy-Bauer(KB)法检测分离菌株对22种药物敏感性表明,所有分离菌株对多粘菌素B、阿米卡星、庆大霉素、萘啶酸较为敏感,对阿齐霉素和氨苄西林耐药率在60.00%～70.00%之间,对红霉素和青霉素表现为极高的耐药性,耐药率高达100.00%。三重以上耐药菌株高达96.94%,七耐以上的菌株为56.12%,耐药最多的菌株可耐18种抗生素。由此可见,河南省禽类沙门菌的感染流行主要以肠炎沙门菌和鸡白痢沙门菌为主,多重耐药十分严重,严重影响了禽类沙门菌病的诊治与预防。     

布鲁氏菌病VirB8-PCR诊断试剂盒的特异性评价

使用VirB8-PCR诊断试剂盒对布鲁氏菌标准株、疫苗株及新疆分离株共7株布鲁氏菌的VirB8基因序列扩增、克隆并与Genbank中发表的VirB8基因序列(AF226278)进行比较和分析,发现:该基因非常保守,7株布鲁氏菌的同源性在99.2%以上,其中A菌与Rev1基因序列100%同源,B菌与Genbank发表的基因序列100%同源;牛种(544A、A19)和羊种(M5、Rev1)分别各自在相同部位发生了相同的碱基突变,因此VirB8基因有可能做为布鲁氏菌疫苗菌的鉴定分类基因。VirB8基因在布鲁氏菌中高度保守,可作为布鲁氏菌检测模板,VirB8-PCR诊断试剂盒特异、敏感,检测结果可靠。     

奶牛布鲁氏菌病的病原分离与鉴定

本试验对疑似布鲁氏菌病的样本进行了病原分离,采用血清学试验、染色镜检、PCR和基因克隆测序对分离菌株进行了鉴定。结果表明,4株分离菌株均为布鲁氏菌属细菌,与布鲁氏菌参考菌株的核苷酸同源性为99.52%~100%。采用AMOS PCR对4株分离菌株进行种特异性鉴定,结果显示,1株为猪种布鲁氏菌,3株为牛种布鲁氏菌。     

犬源铜绿假单胞菌的分离与鉴定

为了确定一株从犬子宫蓄脓的脓汁中分离的细菌的属性及致病性和敏感药物,试验采用病原分离培养、生化试验、动物致病性试验、药敏试验及16S rRNA基因鉴定方法对该菌株进行研究。结果表明:分离菌为铜绿假单胞菌,具有较强的致病性,对环丙沙星、氧氟沙星、头孢类抗生素敏感,对其他抗菌药物如青霉素、阿奇霉素、四环素、万古霉素等耐药。     

西藏牦牛乳房炎病原菌的分离鉴定及耐药性分析

2017年6月份,西藏林芝市某地牦牛突然出现乳房炎症,表现出红肿热痛等的炎性变化,为了掌握牦牛乳房炎发病原因,试验采用细菌学方法对西藏林芝地区6头临床症状疑似乳房炎牦牛进行了金黄色葡萄球菌的分离,通过对其进行培养特性、形态学特征及生理生化特性分析确定病原菌,随后对分离菌株进行了兔血浆凝固酶试验、动物试验和药敏试验。结果表明:分离到2株金黄色葡萄球菌,其血浆凝固酶试验阳性,且试验动物也出现相关病理变化,说明分离菌株为致病菌;2株分离菌均对头孢他啶耐药,1株对呋喃妥因中度敏感,对其他所选药物均高度敏感。     

猪源鼠伤寒沙门菌的分离鉴定与耐药性分析

为确定江西2个规模养猪场患病死亡仔猪的病因,通过病理剖检、常规细菌学检查,从采集的病料中进行病原菌的分离鉴定,并利用动物试验和药敏试验,确定分离菌的致病性和敏感药物。结果表明,6株分离菌均符合鼠伤寒沙门菌的生物学特性,分离菌可在48h内致死小鼠,分离菌的耐药性较强,对阿米卡星、卡那霉素、头孢噻肟较敏感,对另外9种抗生素低敏或耐药。确定2个猪场仔猪发病的主要致病菌是鼠伤寒沙门菌。     

强力菌病消对禽大肠杆菌的药敏试验

选用强力菌病消、环丙沙星、盐酸氟哌酸、复方敌菌净、强力霉素、氯霉素等药物.对所分离的30株致病性大肠杆菌进行药敏试验。结果如下: 1 材料和方法 1.1 菌株 致病性大肠杆菌30株,分别从北京、新疆、陕西、山东、河南、湖北、广东、四川、天津、浙江、江苏11个省市的鸡场发病鸡病料中分离所得。我院传染病教研室作了细菌学鉴定和血清型检测。     

副猪嗜血杆菌的分离与鉴定

从福建省龙岩市l例临床症状、病理剖检变化疑似副猪嗜血杆菌病的患病猪的关节液中分离到1株革兰氏染色阴性可疑菌株,经卫星现象、生化鉴定等实验室诊断,进一步以副猪嗜血杆菌的16S rRNA基因设计特异性引物进行PCR鉴定,确定该分离菌为副猪嗜血杆菌。药敏试验结果表明,分离株对环丙沙星、卡那霉素、强力霉素、氨苄西林、阿米卡星、庆大霉素药物敏感;对泰妙菌素、诺氟沙星有抵抗力。     

广东省部分猪场副猪嗜血杆菌的分离与鉴定

从广东部分猪场发病猪的肺脏、气管和扁桃体分离细菌并培养,获得3株可疑菌株。根据发病猪的临床症状、剖检病理变化以及菌落的形态、菌体特征和生化试验结果,初步鉴定所分离的3株菌株为副猪嗜血杆菌。在细菌学鉴定的基础上,同时结合特异性PCR检测方法进行鉴定,结果3株菌株均扩增出822bp的特异性目的条带,进一步证实了所分离的3株菌株均为副猪嗜血杆菌。     

对布鲁氏菌血清学试验的异常阳性反应牛的调查研究

对血清学上呈阳性反应但不认为被流产布鲁氏菌感染的50头牛进行了研究。结论是仅有一头牛被感染,因为细菌学检查,只获得一株流产布鲁氏菌分离物(19号菌株),原牛群没有任何一群在以后表现有布鲁氏菌病。在15头牛的膝关节液中检出抗体,这是在有活力的病原体消灭以后,持久存在于胶原组织中的19号菌株抗原刺激牛体而产生的。     

西藏布鲁氏菌分离鉴定和菌型特点的初步探讨

为摸清我区布鲁氏菌病的分布和流行规律,掌握各菌种的菌型特性、菌株变异和菌型分布、宿主及其转移等问题,为制订合理的防治措施提供科学依据。我们分离和收集了全区不同疫区的布鲁氏菌59株,进行了菌种菌型鉴定。现报告如下。     

布鲁氏菌种荧光定量PCR快速检测方法的建立

根据荧光定量PCR原理和技术,通过与Gene Bank数据库中布鲁氏菌基因组进行序列比对,选择不同种属布鲁氏菌的特异性位点,设计3对引物和Taqman荧光探针。将3对引物进行独立的种特异荧光定量PCR实验优化,最终实现在1次荧光定量PCR反应中完成对牛种、羊种、猪种布鲁氏菌的鉴别和定量。该检测方法特异、敏感、快速,既能实现对布鲁氏菌的分种,又能实现定量快速检测,对于布鲁氏菌病的流行病学调查和防治都具有重要意义。