基于转录组测序的兴国红鲤微卫星标记筛选

采用Illumina高通量测序技术,对兴国红鲤(Cyprinus carpio var.singuonensis)垂体和性腺等组织进行转录组测序分析,筛选微卫星标记并分析其组成及特征。结果显示:共获得13 652个微卫星标记,对所得位点进行分类,单核苷酸重复类型占47.86%,二、三、四、五、六核苷酸重复类型所占比例分别为34.43%、16.32%、1.25%、0.12%以及0.02%。随机选取30个SSR位点进行PCR验证,有20对可以扩增出清晰稳定的条带。在24个兴国红鲤个体中对上述位点进行多态性分析,结果表明,具有多态性的微卫星引物为9对。不同位点得到的等位基因范围为2~4,平均等位基因数为3.111 1±0.993 8,观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)以及多态信息含量(PIC)平均值分别为0.597 2±0.233 2、0.539 7±0.178 0和0.467 2±0.172 1。9个微卫星位点中,有4个显著偏离哈代-温伯格平衡(Hardy-Weinberg equilibrium,HWE)(P0.05)。Illumina高通量测序提供了一种直观、高效开发微卫星标记的方法,所选兴国红鲤群体遗传多样性维持较好。     

赣昌鲫(日本白鲫♀×兴国红鲤♂)及其双亲同工酶的研究

采用不连续聚丙酰胺凝胶电泳法,研究了赣昌鲫(Carassius cuvieri♀×Cyprinus carpio var. singuonensis ♂)及其双亲的肌肉、肝脏、肾脏、心脏、脑、晶状体6种组织在超氧化物歧化酶(SOD)、苹果酸脱氢酶同工酶(MDH)、乳酸脱氢酶同工酶(LDH)、酯酶(EST)四种同工酶酶谱表达上的遗传差异。结果显示:赣昌鲫的SOD酶谱表达在6种组织中与母本一致;心脏、肝脏、肾脏的MDH表达酶带数与母本相同,且具偏母遗传特性,肌肉的MDH表达谱带数与父本肌肉相同,具偏父遗传特性;LDH、EST在各组织中的酶带表达形式则多数特征偏向于父本,部分与母本相似;LDH同工酶的表达显示出新杂种酶带特异性,EST同工酶在肾脏中也表达了自身特有的杂种酶带。结果表明,属间杂交的后代遗传物质上也存在着变异,存在可选育的性状。     

金边鲤群体的遗传结构及个体间遗传差异的QTL标记分析

为了评估金边鲤(Cyprinus carpio var.Jinbian)群体的遗传组成,制定合理的繁殖配组策略,本研究用24个QTL标记分析了金边鲤亲本群体的遗传结构及雌、雄个体间遗传距离.结果显示:在192尾样本中共检测到184个等位基因,群体平均等位基因数(No)、有效等位基因数(Ne)、观测杂合度(Ho)、期望杂...     

建鲤MHC class Ⅰ基因全长cDNA的克隆与序列分析

采用同源克隆和末端快速扩增(RACE)方法克隆了建鲤(Cyprinus carpio var.jian)MHC class Ⅰ基因全长cD-NA并进行了序列分析.结果显示:实验得到了1914 bp的建鲤的MHC class Ⅰ全长cDNA序列;建鲤MHC class Ⅰ基因包括1044 bp的开放阅读框(ORF),11...     

玻璃红鲤MHCⅡ类基因多态性与组织表达分析

以cDNA为模板进行PCR扩增和克隆分析,从7尾玻璃红鲤(Cyprinus carpio var.wananensis)的70个有效克隆中,获得长度为624 bp的MHC IIα/β不同编码序列25/31个,分属于7/10个不同等位基因,揭示玻璃红鲤MHC II类基因的多态性仍较丰富。其中Cyca-DXA17*01和Cyca-DAB1*1201、Cyca-DAB1*1301、Cyca-DAB3*1901、Cyca-DAB3*2001、Cyca-DAB3*2101、Cyca-DAB3*2201为新发现的7个基因。分析表明,α1/β1结构域的核苷酸/氨基酸变异位点数明显高于α2/β2结构域;α1、β1结构域抗原结合位点(PBR)的ω值(ω=dN/dS,5.209和1.703)都大于1,揭示玻璃红鲤MHC II类基因在进化过程中受到正向选择作用。半定量分析显示,玻璃红鲤MHC II类基因在肾和脾中有较强表达,中等程度表达于胃、肝和肠,而鳃、心和眼的表达较弱。     

津新红镜鲤肌肉和鱼皮营养成分分析与品质评定

对津新红镜鲤(Cyprinus carpio var. Jinxin red mirror)肌肉和鱼皮营养成分进行了测定分析。结果显示,津新红镜鲤肌肉(鲜样)中蛋白质含量为18.00 g/100 g、脂肪含量为7.40 g/100 g;肌肉中含有18种氨基酸,总量(TAA)为15.74 g/100 g,其中8种人体必需氨基酸(EAA)的含量为6.49 g/100 g,4种鲜味氨基酸的含量为5.86 g/100 g,分别占氨基酸总量(TAA)的41.23%、37.23%,必需氨基酸(EAA)与非必需氨基酸(NEAA)的比值为70.16%,符合FAO/WHO理想蛋白源评价标准;肌肉中富含镁、锌、硒等元素;肌肉中含有23种脂肪酸,饱和脂肪酸(SFA)占脂肪酸总量的25.41%,不饱和脂肪酸(UFA)占脂肪酸总量的74.59%,EPA和DHA的含量分别为0.132 g/100 g和0.360 g/100 g。津新红镜鲤鱼皮中β-胡萝卜素含量为0.861μg/100 g。     

铜在鲤体内的蓄积及毒性的研究

采用半静态法将鲤(Cyprinus carpio)暴露于不同浓度的铜溶液中,研究了铜在鱼体中的吸收富集及毒性。结果表明:铜在鲤肝、肾、鳃和肌肉中的积累量均随着铜浓度的升高而增加。鲤各部位对铜的蓄积能力依次是肝、肾、鳃、肌肉,且肝、肾中铜的积累量明显高于鳃和肌肉,鲤对铜具有较强的蓄积毒性。中毒鱼体色变黑,生长受到抑制,临死前出现神经症状;鳃小片上皮增生、变性、坏死;肝细胞和肾小管上皮细胞空泡变性、溶解性坏死。     

锦鲤成熟系数及个体生殖力的研究

对锦鲤(Cyprinus carpiod)的成熟系数和个体生殖力进行了研究。结果显示:雌、雄锦鲤成熟系数变化规律基本一致,成熟系数在5月下旬达到最高值。2+~5+龄锦鲤个体绝对生殖力F与其年龄A、体长L、体重W呈直线相关,回归方程分别为:F=67054A+61567(R2=0.8419,P<0.01),F=8588.4L+24969(R2=0.9217,P<0.01),F=315.33W-9688.8(R2=0.9631,P<0.01)。     

彭泽鲫♀×兴国红鲤♂杂交四倍体子代倍性鉴定及染色体核型分析

为了解彭泽鲫(Carassius auratus var.pengsenensis)♀×兴国红鲤(Cyprinus carpio var.singuonensis)♂杂交四倍体子代的细胞遗传特性,本研究以彭泽鲫♀×兴国红鲤♂杂交四倍体子代为研究对象,以彭泽鲫雌核发育子代为内参,采用流式细胞仪测量其DNA相对含量,并对彭...     

微卫星QTL标记分析豫选黄河鲤群体遗传结构及生长性状相关性

用35个镜鲤微卫星QTL标记评估了豫选黄河鲤(Cyprinus carpio var.haematopterus)群体的遗传结构,并评估了不同基因型与生长性状(体重、体长、体高和体厚)的相关性,筛选了在群体中具有性状优势的基因型。35个微卫星标记在288个豫选黄河鲤个体中的扩增结果显示,各标记等位基因数为3~13,平均每个标记6.828 6个;平均有效等位基因数为4.520 8;平均观测杂合度为0.603 0;平均期望杂合度为0.701 9;平均多态信息含量为0.665 6,群体整体处于高度多态水平(PIC0.5)。利用SPSS19.0的GLM模型分析标记与性状的相关性,共17个微卫星标记与性状表现出不同程度的相关性,其中HLJ2456、HLJ2387和CA1677 3个标记与相应的性状相关性达极显著水平。用Duncan氏多重比较找到了每个微卫星标记具有生长性状优势的基因型,下一步可根据优势基因型指导豫选黄河鲤家系配组,开展基于QTL结果的分子聚合育种研究。     

两种稻田养殖模式下青田田鱼与本地鲤鱼生长对比

2009年在贵州省遵义市湄潭县天城乡和黔东南州雷山县西江镇,比较了稻田传统养鱼模式和沟坑养鱼模式青田田鱼和贵州本地鲤鱼的生长情况.结果表明:经过三个月的养殖,在传统的养殖模式下,青田田鱼鱼苗平均末重为175.3 g/尾;本地鲤鱼平均末重为150.7 g/尾;在沟坑养殖模式下,青田田鱼的平均末重为230.3 g/尾,本地...     

建鲤和黑龙江野鲤自交以及正反交子代生长比较

以建鲤和黑龙江野鲤为亲本,建立黑龙江野鲤自交群体(HH)、建鲤自交群体(JJ)、黑龙江野鲤♀×建鲤♂群体(HJ)以及建鲤♀×黑龙江野鲤♂群体(JH)。于养殖198 d和588 d时测量体重、体长、体高和体厚4个生长参数。对生长性状、增重率、肥满度以及生长指数进行方差分析和LSD多重比较。结果表明,不同交配组合在这些指标上均有极显著差异(P0.01)。养殖198 d和588 d时,4个群体体重和体长大小顺序均为JHHHHJJJ。4个群体的绝对增重率和特定增重率均随养殖时间而减小。4个群体中,HJ在不同养殖时间内,特定增重率均为最大,JJ群体均为最小;而JH在不同养殖时间内,绝对增重率均为最大,198 d时JJ群体最小,588 d时HH群体最小,说明杂种群体生长性能优于自交群体。在不同的养殖时间内,JJ群体的肥满度均大于其他群体,随养殖时间增加,HH、JJ及HJ群体肥满度不断增大,而JH群体恰恰相反。4个群体的生长指数随养殖时间而增大,并均以JH群体生长指数最大。杂种优势分析表明,HJ群体体型介于黑龙江野鲤和建鲤中间,并随着养殖时间的增加,体型逐渐接近黑龙江野鲤。JH群体在养殖第588天时体高和体厚超黑龙江野鲤杂种优势出现了负值,其余数值均为正值,表现出显著的杂种优势。不同养殖时间,4个群体588 d与198 d体重间的相关系数均达到极显著水平(P0.01),JH群体558 d体长和198 d体长、558 d体高和198 d体高;HH群体558 d体厚和198 d体厚间的相关系数也达到了极显著水平(P0.01)。     

间甲酚对瓯江彩鲤早期发育总ATP酶活性的影响

在水温(20±2)℃条件下,设置7 mg/L、13 mg/L、19 mg/L的间甲酚(m-cresol)浓度梯度,研究了瓯江彩鲤(Cyprinus carpio var.color)早期发育过程中总ATP酶活性变化及间甲酚对总ATP酶影响。结果表明,瓯江彩鲤总ATP酶活性在成熟卵和受精卵中无显著差异(P0.05);各浓度组总ATP酶活性表现为良好的剂量-效应和发育时期-效应关系;总体上看,瓯江彩鲤早期发育从原肠胚期开始,总ATP酶活性随着发育时间的延长和暴露浓度的增加而降低。     

建鲤遗传改良的初步研究

用单养和混养法，对建鲤（Cyprinus carpio var.jian)后代选育群体和未选育群体；建鲤和黄河鲤（C.carpio)，建鲤和荷包红鲤（C.Carpio Var,wuyuanensis)的杂交种，亲本黄河鲤和荷包红鲤自后代6个试验组进行生长对比，结果表明，建鲤选育效果明显，品质提高；建鲤与黄河鲤杂交具有杂种优势，生长快且生长性能进一步提高。     

铅在建鲤幼鱼组织中的积累与净化研究

采用半静态暴露染毒方式探讨了建鲤(Cyprinus carpio var.Jian)幼鱼肝胰脏、肠、鳃和肌肉中重金属铅的积累和净化特征,暴露水体含铅量为0.506μg/L。结果表明,不同部位中铅的积累量差异显著(P<0.05),积累量为肝胰脏>鳃>肠>肌肉。建鲤移入清水后,随着净化时间的延长,不同组织中铅的含量均逐渐降低,但变化趋势不同。肠中的铅被迅速净化;肝胰脏中铅的净化速度初期较快,之后变化缓慢,呈现波浪式起伏;鳃中的铅净化缓慢,肌肉中的铅含量下降缓慢,但在净化期其铅含量均低于国家标准。     

瓯江彩鲤配套选育系繁殖性状的配合力测定与杂交优势分析

以瓯江彩鲤(Cyprinus carpio var.color)5个配套选育系进行双列杂交产生的F1的数据为分析对象,利用统计学和数量遗传学方法对6个繁殖性状(雄鱼性腺指数、雌鱼性腺指数、绝对繁殖力、相对繁殖力、受精率和孵化率)进行了配合力测定和杂交优势分析。结果发现,不同组合间的繁殖性状存在较大差异,但以"麻花"作母本的交配组合的平均雌鱼性腺指数和孵化率最高,以"全红"作母本的交配组合的绝对繁殖力和相对繁殖力最高,以"粉花"作母本的交配组合的所有繁殖性状参数均较差;雌鱼性腺指数与绝对繁殖力、相对繁殖力之间均存在显著的表型相关(r=0.411～0.847,P=0.01～0.04),绝对繁殖力与相对繁殖力之间存在极显著的表型相关(r=0.847,P<0.01);雌鱼性腺指数、绝对繁殖力和相对繁殖力3个性状检测到显著的特殊配合力;通过遗传效应预测,10个杂交组合均存在特殊配合力与杂交优势预测值,其雄鱼性腺指数、雌鱼性腺指数、绝对繁殖力、相对繁殖力和孵化率的杂交优势与特殊配合力均呈极显著相关(r=0.959～0.985,P<0.01)。本研究结果为瓯江彩鲤配套系育种提供了参考数据。     

蓝色鳞鲤(Cyprinus carpio blue var)同工酶分析

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳法对蓝色鳞鲤(Cyprinus carpio blue var)进行同工酶分析。结果表明:在蓝色鳞鲤的眼睛、肌肉、肝脏、心脏、肾脏5种组织中,14种酶(LDH、ADH、GDH、MDH、G-6-PDH、EST、POD、SDH、FDH、SOD、α-AMY、CAT、COX、ME)的同工酶谱均存在明显的组织特异性。14种酶共记录出33个基因位点,其中α-Amy-2、Cox-2、Est-1、Ldh-1、Mdh-1、Mdh-2和Sod-1为多态位点。蓝色鳞鲤群体的多态位点百分数为21.21%(P0.99),平均预期杂合度和平均实际杂合度分别为0.1079和0.2121,遗传偏离指数(d)值为正。平均有效等位基因数(Ne)为1.24。实验表明,目前蓝色鳞鲤群体的种质资源状况尚好,表现出明显的杂交优势。     

建鲤新品系的选育

设计并采用家系选育、系间杂交和雌核发育技术相结合的综合育种技术培育成功的鱼类新品种建鲤,具有生长快、体型好、青灰色、肉质肉味好、饲料转化率高、适应性抗逆能力强等优点。为进一步提高建鲤的生长速度、遗传稳定性和抗逆能力,选用超大的亲本群体和选择强度、快速世代更新及低温繁育筛选等方法,对建鲤进行了3代选育和生产验证,而育成的建鲤新品系,较选育前的建鲤群体增重快13.6%～15.1%,日增重快13.7%～15.48%;青灰色、长体型等表型性状的一致性由选育前的96.2%和95%左右,提高到近乎100%。新品系体型增长,体色一致,群体整体性、美观性有明显提高,体长/体高比值平均增加0.37,增长13.8%,标准差减少11.4%,扩大了推广,进一步验证了建鲤的适应性和抗逆能力。表3参30     

Use of supplemental amino acids on the success of reducing dietary protein levels for Jian carp (Cyprinus carpio var. Jian)

A feeding trial was conducted to investigate the effects of essential amino acids (EAA) supplementation on the success of dietary protein reduction for Jian carp (Cyprinus carpio var. Jian). Five diets were formulated including a positive control (Diet 1, 378.4 g/kg protein), a negative control (Diet 5, 289.8 g/kg protein) and three test diets (Diet 2‐Diet 4, 340.4–299.0 g/kg protein supplemented with EAA). No significant decline of growth performance in fish fed decreased dietary protein with EAA supplementation, which were significantly higher than the negative control. The apparent digestibility coefficients (ADC) of protein and most EAAs were not significantly affected by the dietary treatments. Dietary treatments did not affect whole‐body composition, but influenced protein and EAAs retentions. Total ammonia nitrogen (TAN) excretion decreased with the decreasing dietary protein, and the highest plasma ammonia content was observed in fish fed Diet 5. Plasma glucose concentration increased with the decreasing dietary protein reduction, while other plasma parameters were not affected by dietary treatments. These results indicated that low‐protein diets (299.0 g/kg) supplemented with EAA can maintain protein, EAA digestibility and retention in Jian carp, and also has benefit in the reduction of TAN excretion.