副猪嗜血杆菌多价平板凝集抗原的研制

为了建立副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)平板凝集抗体检测方法,试验采用方阵试验方法对15种HPS菌体抗原和阳性血清的交叉凝集反应性进行了研究,从中筛选出能与所有血清型HPS血清发生凝集反应的多价抗原,并测定其特异性。结果表明:各血清型HPS抗原抗体之间均存在不同程度的交叉凝集反应,但没有任何一种血清型的HPS能与全部15种血清型抗体发生凝集反应,由各血清型的交叉凝集谱可见,血清1型、6型、7型等三个血清型抗原能覆盖全部15个血清型抗体,据此选择这三个菌株作为多价抗原生产菌株。将其接种于含NAD的TSA平板上,于37℃培养18 h,用pH值为7.2的PBS洗下菌苔并将菌液浓度分别调整至8×10~9cfu/m L,三种菌液用甲醛灭活后等体积混合即为HPS平板凝集多价凝集原,其能与15个血清型HPS抗体发生75%及以上的凝集反应,能凝集HPS的感染抗体和免疫抗体,不与猪传染性胸膜肺炎等被检的无关疫病的阳性血清发生反应。说明试验制备的多价平板凝集抗原能用于HPS抗体的检测和血清流行病学调查。     

布病牛诊断中值得推广应用的酸性平板抗原凝集反应

酸性甲板抗原凝集反应(Card test)具有克服非特异性反应的优点,抗原以醋酸处理的菌体制成。特别是对牛的检查优于平板凝集反应。方法简便易掌握,在群体牛布病检疫、考核,净化中值得推广应用。1.抗原制备以5毫升平板凝集抗原加入0.4毫升的冰醋酸,即获得 pH4.0的酸性平板抗原。2.操作方法     

在显微镜下观察微粒凝集反应对猪地方性肺炎的诊断和鉴定猪肺炎支原体的研究

显微镜下观察猪肺炎支原体纯培养物与56℃灭活30分钟的待检血清混合,经在37℃培养24—48小时,涂片,以瑞氏染色后镜检。试验的方法有二:〈1〉无菌小试管中装0.4毫升纯培养旺盛的猪肺炎支原体,加0.1毫升灭活待检血清,加橡皮塞,混合培养。〈2〉适宜猪肺炎支原体生长的液体培养基0.36毫升,种入生长旺盛的、纯粹的猪肺炎支原体新鲜培养物0.04毫升,加灭活待检血清0.1毫升,加橡皮塞,混合培养。第〈1〉法凝集较快些,但凝集粒内菌体清晰度不如第〈2〉法。第〈2〉法凝集慢些,但菌体多系新增殖的,故在凝集粒内较为清晰。人工感染54只猪,在经X射线透视发现病变阴影后8天,可出现血清凝集阳性。一个月后达到高峰,並维持六周左右,其后逐渐下降,直至五个月,纵然病变完全消失(X射线透视阴性),仍有可见的阳性凝集反应。经采集野外感染猪群的猪血清共116份,X射线透视阳性者100份,作微粒凝集反应出现阳性者82份,符合率为82％。X射线透视阴性者16份,微粒凝集反应阴性者12份,符合率为75％。所以有此出入,盖因血清中凝集素的出现较X射线透视出现病变阴影为慢,又当病变消失,X射线透视转为阴性时,尚有一段时间凝集反应仍为阳性之故。     

鸡志贺氏菌凝集抗原及其标准血清的研制

利用分离鉴定的鸡鲍氏和鸡痢疾志贺氏菌,分别经细菌培养、灭活、浓度调整等方法研制诊断用鸡志贺氏菌凝集抗原,并用鸡志贺氏菌疫苗免疫清洁级小白鼠研制鸡志贺氏菌标准血清.结果显示,制备细菌抗原的最佳培养基是1%葡萄糖营养琼脂,抗原最佳灭活温度和时间为121℃和120 min,凝集抗原合适浓度为40亿/mL,最佳稀释液为pH 7.2的0.5%石炭酸生理盐水.制备的鸡鲍氏和鸡痢疾志贺氏菌阳性血清经效价测定分别可达8 log2和10 log2,阴性血清与鸡志贺氏菌凝集抗原作用无凝集反应发生.通过研究同时确定了平板凝集试验反应的合适温度为20～35℃,结果判定时间为3～5 min.研制的凝集抗原及其标准血清具有特异性强、稳定性好、使用方法简便、便于保存和检测结果准确可靠等优点,便于在基层生产单位推广应用.     

以血清代替全血作平板凝集试验能提高中雏白痢的检出率

以鸡白痢多价抗原进行全血平板凝集试验诊断鸡白痢,具有快速、方便、准确等优点。然而,对中雏白痢的检出率却很低。今年四月份,一养鸡户送来3只40日龄京白Ⅲ系品种的病鸡,从临床、剖检变化诊断为鸡白痢,但用全血平板凝集反应检查,除3号病鸡有细小的凝集颗粒外,另2只看不到凝集颗粒。用3只病鸡的血清代替全血再作平板凝集试验,按血清、抗原各取1滴的量进行操作,同时设阳性血清对照。结果在2分钟内3份血清均与抗原发生不同程度的凝集。其中3号血清的凝集几乎与阳性对照一样,具有较大的凝集块,另     

微型平板凝集抑制法检测伪结核棒状杆菌

将伪结核棒状杆菌用含犊牛血清的平板培养后,刮取菌落,用营养肉汤稀释,经56℃30分钟灭活制备抗原。然后用已知标准血清、高免血清、待检阳性血清及阴性血清对比进行微型平板菌体凝集抑制试验。结果:标准血清、高免血清与待检阳性血清均抑制了菌体的凝集,呈现无圆形沉淀点,或仅有分散的絮状颗粒,即阳性反应;阴性血清不能抑制菌体的凝集,均呈现明显圆形成团的沉淀点即阴性反应,未出现非特异性即假阳性反应。本试验操作简便,敏感特异适用于山羊伪结核棒状杆菌病的诊断。     

奶牛隐性乳房炎奶样中埃希氏大肠杆菌共同性抗原初探

用LMT的方法对新疆8个奶牛场采集的1020份奶样进行隐性乳房炎的检测,并对阳性样品进行了大肠杆菌的分离与鉴定。从不同牛场分离菌株中挑选8株用家兔制备免疫血清,用试管凝集对从乳房炎奶样分离出的其它21株大肠杆菌进行共同性抗原的筛选。结果显示,免疫血清效价达1∶2560～1∶5120,85.7%的待检菌株与其中3种血清凝集反应呈阳性。对制备血清的8株菌进行SDS-PAGE电泳分析,菌体蛋白图谱显示在20~84 ku处存在大量相同或相似的蛋白条带;用制备的免疫血清进行免疫印迹分析,与8株菌的菌体蛋白在70 ku处呈现明显的抗原抗体反应。说明这些菌株存在共同性抗原。     

猪传染性萎缩性鼻炎自制诊断抗原与日本“北研”抗原的比较

以自制的猪传染性萎缩性鼻炎(AR)诊断抗原与日本北里研究所的诊断抗原比较试管凝集反应和平板快速凝集反应的敏感性和相特异性。三种抗原对健康猪血清均呈阴性反应;对支气管炎博德特氏菌Ⅲ相菌抗血清均呈O不凝集性,具有相特异性;方阵滴定三种抗原的最适使用浓度,试管凝集反应均为50亿/ml,平板快速凝集反应为2500亿/ml,但自制的两种抗原均比“北研”抗原的试管K凝集价高一个滴度,平板凝集反应的敏感性也略高。对AR猪群,自制抗原比“北研”抗原的试管阳性检出率多20～21％,平板阳性检出率多17～18％。试管凝集价≥1:160的检出数多7倍,屠宰肥猪试管阳性反应与鼻甲介骨萎缩病变的符合率高14～15.8％。“北研”抗原检出为阳性而自制抗原检出为阴性的猪血清只发现一例(占阳性例的0.6％)。对Ⅰ相菌人工感染仔猪,三种抗原的试管及平板阳性检出率以及试管阳性反应与鼻甲介骨萎缩病变的符合率均相同,但试管凝集价≥1:160的检出数,自制抗原均比“北研”抗原多3倍多。两种自制抗原的特异性和敏感性相同。     

自体红细胞凝集试验及其在动物传染病诊断中的应用

<正>自体红细胞凝集试验(autologous erythrocyte agglutination,AGEN)由澳大利亚学者Kemp等[1]于20世纪80年代末期首次提出,是一种针对血液中被检物快速筛查的方法,已成功应用于人类艾滋病病毒Ⅰ型抗体、的检测。自体红细胞凝集试验的反应原理还是基于抗原抗体的特异性结合,能够和凝集反应一样,出现肉眼可见的颗粒凝集。但是,它     

乐都县牦牛犊布氏杆菌病调查

1991年6—8月,笔者对乐都县4个乡1102头2岁以内牦牛犊进行了布氏杆菌病血清学调查。 (一)材料和方法:布氏杆菌阴性血清(批号:9004),布氏杆菌阳性血清(批号:9002),布氏杆菌试管凝集抗原(批号:9001),均为成都药械厂生产。被检血清采自乐都县引胜、芦化、达拉、共和四乡的牦牛犊。检验采用试管凝集反应,操作方法和判定标准均按部颁规程进行。     

用四种血清学反应诊断双峰驼布病的比较试验与布病正常凝集价的测定

1984年6—7月,我们在海西州莫河畜牧场检疫骆驼布氏杆菌病(以下简称布病)时,以血清试管凝集反应为基本诊断方法,比较血清平板凝集反应、补体结合反应和虎红试验的检出率,并对比了阳性符合率。同时,也测定了双峰驼的布病正常凝集价。现将测定方法和结果叙述如     

应用各种血清学反应診断馬付伤寒性流产的比較試驗

以大批地发生过馬流产的某些畜牧場的馬血清226头分,应用平板凝集反应試管凝集反应和补体結合反应进行了比較診断試驗,另外并对补体結合反应的操作及抗原制作做了某些改进,将其結果摘要如下。(一) 血清学反应阳性結果者平板凝集反应为82头分占被检头分的36%、試管凝集反应为85头分占37.1%、补体結合反应为68头分占30.1%,疑似結果者平板凝集反应为7头分占3%、試管凝集反应为16头分占7.1%、补体結合反应为4头分占1.8%;余下均为阴性。(二) 对診断馬付伤寒性流产的补体結合反应做了以下几項試驗;首先,抗原是利用低摻透压,振蕩、冷浸漬及离心沉淀等程序处理純培养物获得的,通过效价測定,确定本抗原的工作效价为1:60;其次,应用耐热力試驗,毒性試驗和色反应的检查結果証明,本抗原具有內毒素的特性;最后,将226头分血清的每一分均以四种用量进行了对比检查,結果认为进行本試驗时血清用量以0.05毫升为适宜。     

鸭疫里默氏菌6型、12型与16型之间的交叉反应

鸭疫里默氏菌6型和12型仅在玻片凝集试验中存在较弱的交叉反应，这一交叉反应可经血清吸收试验得到消除；12型和16型在玻片凝集试验和试管凝集试验中均表现较强的双向交叉反应，但在琼扩试验中表现为较弱的单向交叉反应；6型和16型之间没有交叉反应。12型和16型之间的交叉反应和交叉沉淀反应均可经血清吸收后得以消除，但经过16型参考菌株吸收过的12型抗血清，还与6型菌株存在交叉凝集反应，只有同时用6型和16型菌株吸收，12型抗血清才具有血清型特异性。血清吸收对6型和12型抗血清的同型凝集反应能力和沉淀反应能力没有影响，但对16型抗血清的同源凝集能力和沉淀反应能力均有较大的影响，经、2型参考菌株吸收后，16型抗血清与同型抗原之间的凝集效价下降2个滴度，而且不再形成清晰的沉淀线。结果表明，6型和12型之间、12型和16型之间均存在ab-bc的抗原关系。     

猪萎缩性鼻炎凝集反应抗原的制备及应用

为快速地诊断猪萎缩性鼻炎及监测其免疫状况,本试验在对支气管败血波氏杆菌保存菌种进行复苏和全面鉴定的基础上,制备了猪萎缩性鼻炎凝集反应抗原,经凝集反应试验表明,该抗原在PBS中不发生自凝,与猪传染性胸膜肺炎、猪喘气病和猪瘟的阳性血清均无凝集反应,而对猪萎缩性鼻炎标准阳性血清的凝集效价高达1∶10 240以上,具有较高的特异性和敏感性;对20份免疫母猪所产仔猪血清样本进行检测,检出率为95%.     

免疫血清学技术及其在蚕病诊断上的应用

<正> 第四部份——微粒子病血清学诊断法微粒子原虫是大颗粒性抗原,与各种病毒病原——小颗粒性抗原在血清学的诊断技术上有所不同。诊断微粒子病血清学方法是:一、凝集反应:利用凝集反应诊断家蚕微粒子病,有直接凝集反应如玻片凝集,用于在显微镜下检查微粒子孢子;间接凝集反应如炭素、胶乳凝集反应,用于肉眼检测微粒子孢子的可见反应。     

布氏杆菌病室温与温箱试管凝集反应的比较试验

在室温下进行试管凝集反应具有很大的实践意义,我们以简化试管凝集反应的操作程序以及使此反应有可能在野外条件下普遍应用为目的,几个月来曾陆续在不同的室温温度下进行了室温试管凝集反应与温箱试管凝集反应的比较试验,试验结果证明室温试管凝集反应可以代替温箱试管凝集反应。现将试验结果简要报导于下,以供参考。为了比较室温和温箱凝集反应的结果,在每一次检疫时,抽出一部分被检血清按照规定方法同时     

应用微量凝集反应检查牛布病的初步试验

应用试管凝集反应检查布病用器械多、血清用量大、采血也较困难,从1984年11月起,我们应用微量凝集和试管凝集作对照诊断布病,结果墓本一致。现将试验情况报告如下:一、材料①96孔V型反应板②微量加样器(购成品或自制),本站自制的微量加样器是用4支全量0.25ml的微量注射器,用有机玻璃板连成一排,前端接塑料吸头,后端有弹簧及螺丝以调节刚量,至每吸压一次为0.05ml ③75—2型微型振荡器④采血器械,三棱针,内径3mm聚氯乙烯塑料细管(每根长约6—8cm)⑤试管凝集抗原,标准阴,阳性血清⑥被检牛血清的分离制备:在牛耳静脉明显处剪毛消毒,用三棱针刺破血管,待血流成滴后引流至塑料细管的2/3处,将无血端在酒精灯上烤封,胶布标号室温静置,分离血清备用。     

血凝和血凝抑制试验及易出现问题的原因分析

某些病毒能够与动物的红细胞发生凝集,即为红细胞凝集反应（HA）。这种凝集反应易被加入的特异性血清所抑制,即为红细胞凝集抑制试验（HI）。在禽病中目前这2种方法较常用作新城疫病毒、禽流感病毒等的诊断和血清学监测。     

马传染性贫血病琼脂凝胶免疫扩散试验常见问题浅解

正兽医实验室中,常利用琼脂凝胶免疫扩散试验对马传染性贫血病进行诊断和检疫。1定义与原理将可溶性抗原与相应的抗体混合,当两者的比例合适,并有盐类存在时,即有沉淀物出现,这种现象叫做沉淀反应。沉淀反应中的抗原叫沉淀原,与沉淀原起反应的抗体叫沉淀素。主要是采用双向双扩散试验,即用已知抗原、阳性血清、待检血清在琼脂凝胶中进行免疫双扩散,室温下作用24小时,当已知抗原和阳性血清间出现明显沉淀线,抗原和待检     

乳胶凝集试验诊断猪囊虫病

采用新鲜痘猪囊内液体，离心，取上清作为抗原原液，加乳胶颗粒，经处理，制成致敏原。分别同患猪血清和脑脊液标本，应用乳胶玻片凝集反应和补体结合试验，检查赤峰地区部分养猪场、肉类联合加工企业采取的371份患猪血清和138份脑脊液，诊断猪囊虫病。以待检血清出现“ ”以上凝集者，对照不凝集判为阳性。通过试验，两者的符合率为86.9%（血清），94.7%（脑脊液）。