牛卵母细胞体外受精和体外成熟技术

文章从卵母细胞的来源、精子体外获能、卵母细胞体外成熟、体外受精和体外受精早期胚胎培养五个方面综述了牛卵母细胞体外受精和体外成熟技术的研究进展.同时指出了影响精子体外获能的因素、影响卵母细胞成熟培养的因素、体外受精存在的问题及解决办法等.并且对影响该技术的主要因素进行了系统分析.     

牛体外受精时老化卵对受精率与染色体异常发生的影响

通过延长体外培养时间得到牛老化卵，对其体外受精率与染色体的异常发生进行了研究，体外受精48h后的受精率，46h培养组与22h和34h培养组之间差异显著（P＜0．05），随着老化时间的延长，受精率及胚胎发育速度明显降低。染色体分析结果表明，46h组的受精卵的染色体异常发生率为61．6％，22h组44．6％，2组之间差异显著（P＜0．05），单倍体（n=31)的发生率也随着老化时间的延长而增加，这些单倍体的性染色体的构成表明，含有X－性染色体的胚的出现率显著高于含有Y－染色体的胚的出现率（P＜0．05）。单倍体的发生是由卵的老化而引起单一配子的孤雌发生，体外培养时间的延长对正常的2倍体的性别无明显影响。     

牛卵泡卵体外成熟及其受精能力的研究

本试验主要研究了牛卵泡卵体外成熟、体外受精及其受精过程的发生。从屠宰场收集800枚牛卵泡卵进行体外成熟培养,并用体外获能的精子体外受精。在用m-TCM199培养21、22、24、26、28h后,达到中期Ⅱ的卵母细胞比例分别为33.89％、74.16％、77.78％、86.67％、85.71％;25h后,如果继续培养,成熟的卵母细胞比例不再显著增加。卵母细胞的自身形态显著地影响其成熟效果,A、B、C级卵培养24h后分别有94.60％、55.43％、31.25％的卵母细胞达到中期Ⅱ。卵泡卵在体外滞留8h后,其成熟率(47.11％)明显地低于45min(77.92％)或4h(74.60％)。肝素和钙离子载体A 23187都能诱发牛精子获能,二者在受精效报上差异不显著(P>0.05),并且都有多精入卵现象发生。授精后6h精子进入卵内,精子入卵后2～3h头部膨大,6h后出现早期原核,最早发生卵裂是在授精后30h。     

In vitro Fertilization of Bovine Oocytes Exposed to Bovine Herpesvirus 1 (BHV-1)

Contents: Cumulus-oocyte complexes were matured for 24 hours in the presence or absence of bovine herpes virus-1 (BHV-1, 10⁶ TCID₅₀/ml), fertilized in vitro and then co-cultured on oviductal cells to the blastocyst stage. The percentages of oocytes which cleaved were 48% (n = 905) for oocytes matured in the presence of BHV-1, and 51% (n = 1004) for the control oocytes. Comparing BHV-1-treated to control, the percentages of cleaved oocytes which developed to the blastocyst stage were 29% and 31%, respectively (p > 0.05). Embryos produced from the experimental group of oocytes tested positive for BHV-1.     

牛卵母细胞体外成熟和体外受精技术的研究进展

论述牛卵母细胞体外成熟和体外受精的最新研究进展,包括卵丘卵母细胞复合体、卵母细胞的体内、体外成熟,以及体内、体外的异常成熟和卵母细胞的体外成熟方法,无蛋白质、无血清系统的限定性培养液的研究进展,卵母细胞体外成熟状态与标志的某些理论上的突破;体外受精中精子供体的选择、精子活力和正常形态的选择、冷冻解冻精液的体外获能、精子的体外受精力,以及体外的异常受精;还论述了牛卵母细胞体外成熟和体外受精技术在家畜育种和胚胎克隆等方面的应用前景     

β-巯基乙醇或牛磺酸对牛体外受精后早期胚胎的影响

对屠宰黄牛的卵母细胞经体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)后的早期胚胎,在β-巯基乙醇(-βME)或牛磺酸等添加物的胚胎培养液中的后续发育进行了研究,并探讨了其影响因素,以期筛选出最佳的体外培养条件。试验结果表明:4~8细胞期添加-βME可显著提高胚胎桑椹胚、囊胚发育率和囊胚细胞数,但不能改善孵化囊胚的质量。在体外发育培养液中添加7mM牛磺酸可显著提高桑椹胚率和囊胚率(P<0.05),并且在4~8细胞期添加牛磺酸最为合适。     

不同尿素水平氨化稻草体外培养发酵的产气规律

本试验旨在研究不同尿素水平氨化稻草的体外培养发酵产气规律。选用2头安装有永久性瘤胃瘘管、平均体重为240 kg的西门塔尔牛作为瘤胃液供体,分别使用0(加等量水)、2%、4%、6%和8%的尿素比例(尿素重量∶稻草重量)和80%的水(水重量∶稻草重量)对稻草进行氨化处理,另设未处理稻草作为对照。采用体外产气法测定氨化稻草在体外培养发酵2、4、8、12、24、36、48 h的产气量。结果表明:随着尿素水平的升高,氨化稻草的产气量逐渐升高。2%组48 h产气量与未处理组差异不显著(P>0.05),4%、6%和8%组48 h产气量均极显著高于未处理组(P<0.01)。0%组的48 h产气量均显著低于其他各组(P<0.01)。各组的理论总产气量之间差异不显著(P>0.05),稻草氨化处理以尿素使用量为稻草干物质的4%～6%为宜。     

十二指肠灌注不同必需氨基酸溶液对生长育肥羔羊氮平衡及血浆尿素氮的影响

试验旨在探究实际饲养条件下由十二指肠瘘管灌注不同必需氨基酸溶液对哈萨克羊羔羊氮平衡及血浆尿素氮（plasma urea nitrogen,PUN）的影响。选取5只体况良好、4月龄、体重为（29.40±1.76） kg的哈萨克羊公羔羊,安装永久性十二指肠近端瘘管,代谢笼内单笼饲养。采用5×5拉丁方设计,即不含氨基酸组（对照组）、包含8种必需氨基酸的全灌注组（8EAA）、剔除赖氨酸组（-Lys）、剔除精氨酸组（-Arg）及剔除蛋氨酸组（-Met）,处理组采用随机过程进行分配,每期7 d。结果显示,与对照组相比,8EAA组粪氮排出量差异不显著（P>0.05）,而尿氮、氮表观消化率、氮沉积和PUN浓度都显著升高（P<0.05）。与8EAA相比,-Arg、-Met、-Lys组氮沉积均显著降低（P<0.05）,分别降低30.62%、11.56%、12.99%,日增重分别下降13.89%、7.78%、6.58%,但差异不显著（P>0.05）,PUN浓度也有升高的趋势。结果表明,实际育肥条件下Arg、Met、Lys对哈萨克育肥羔羊有限制性作用。     

Effects of Duodenal Infusions of Essential Amino Acid on Nitrogen Balance and Plasma Urea Nitrogen of Growing-finishing Lambs

This study was aimed to explore the effects of duodenal infusions of essential amino acid (EAA) on nitrogen balance and plasma urea nitrogen (PUN) of growing-finishing lambs.Five Kazakh male lambs with (29.40±1.76) kg body weights and 4 months old were chosen,fitted with duodenal cannulae and raised in metabolic cage individually. The 5×5 Latin square design was used in this experiment and 7 d for per period. The duodenal infusions in control group contained no EAA,that in 8EAA group contained 8 kinds of EAA,while that in -Arg,-Lys and -Met groups were contained 8 kinds of EAA without Arg,Lys and Met,respectively. The results showed that the fecal N excretion in 8EAA group was no significant difference compared with control group (P>0.05),while the urinary N,N retention,N apparent digestibility and PUN concentration were significantly increased (P<0.05).Compared with 8EAA group,the N retention in -Arg,-Lys and -Met groups were significantly decreased by 30.62%,11.56% and 12.99% (P<0.05),and the daily gain were decreased by 13.89%,7.78% and 6.58% (P>0.05),respectively. PUN concentration was increased in response to the removement of Met,Arg and Lys. In conclusion,Arg,Met and Lys had restricted effect to Kazakh lamb in actual fattening conditions.     

配子共孵育时间对水牛卵母细胞体外受精的影响

试验对比了配子共孵育17h、18h、20h、21h、22h、23h和24h对卵裂率的影响。结果表明,延长精卵共孵育时间使卵裂率有下降的趋势,卵裂率最高的共孵育时间为18h,在17～24h的共孵育时间内,卵裂率具有明显的波动。     

屠宰牛卵母细胞体外成熟和体外受精研究

对采集到的卵巢采取抽吸法、割破法回收卵母细胞,割破法得到的A级卵母细胞显著高于抽吸法。把有黄体和无黄体的卵巢卵母细胞进行培养比较,无黄体的卵巢卵母细胞的成熟率为84．33％,显著高于有黄体卵巢卵母细胞的74．32％。本试验中卵泡卵母细胞和深层卵母细胞体外成熟率均能达到75％以上．卵巢表面卵泡卵母细胞的卵裂率为54．76％,高于深层卵母细胞的卵裂率,但二者无显著差异。IVM时添加卵丘细胞、IVC时添加输卵管上皮细胞是比较理想的培养系统。     

含尿素饲粮中添加果寡糖对幼兔氮利用、血液尿素氮向盲肠微生物氮转移的影响

本试验旨在研究含尿素饲粮中添加果寡糖(FOS)对荷兰幼兔氮利用、血液尿素氮向盲肠微生物氮转移的影响。试验1：选择3月龄左右的幼兔10只,随机分为2组,每组5个重复,每个重复1只。2组分别在基础饲粮中添加10 g/kg尿素+50 g/kg葡萄糖(对照组)和10 g/kg尿素+50 g/kg FOS(试验组)。预试期3 d,正试期5 d。试验2：选择3月龄左右的幼兔12只,随机分为2组,每组6个重复,每个重复1只。2组分别饲喂与试验1相同的饲粮。试验期为9 d。屠宰前2 h试验动物分别口服2 g葡萄糖或FOS与40 mg¹⁵N-尿素混合的3 mL水溶液。所有的试验动物于08:00—09:00麻醉,并剖腹由背大动脉抽取动脉血处死。结果显示：1)试验组的氮沉积、基于摄入量的氮沉积和基于表观消化量的氮沉积均显著高于对照组(P<0.05)。2组之间营养物质表观消化及摄入氮、粪氮和尿氮均无显著差异(P>0.05)。2)试验组的盲肠内容物重量和盲肠内容物重量/体重显著高于对照组(P<0.05),试验组的盲肠内容物丙酸浓度显著高于对照组(P<0.05),试验...     

奶牛体外受精胚胎的性别控制研究

为加速母牛胚胎的生产,实现性控制胚胎产业化和体外扩繁优质品种的奶业工程发展,本研究在体外受精技术（in vitro fertilization,IVF）不断成熟和完善的基础上,通过对牛非性控IVF胚胎与常规人工受精体内胚胎移植的妊娠成功率及其两者出生后牛的性别比例进行比较分析,结果发现,两组妊娠成功率基本相同,且IVF胚胎出生的公牛比例高于体内胚;采用性控和非性控精液进行IVF试验,并对非性控IVF胚胎及性控IVF胚胎用牛Y染色体性别决定特异基因（SRY）核心序列进行分子生物学性别鉴定,结果显示,性控IVF胚胎的公牛比例显著低于普通IVF胚胎;此外,作者还比较了性控IVF与普通非性控IVF的囊胚发育率,结果显示两者并无显著差异。以上研究结果证明,体外扩繁优质良种母牛的奶业工程必须依靠性别控制体外授精技术来提高其效率和有效性。     

白藜芦醇对奶牛性控冻精品质和体外受精能力的影响

本研究旨在探究不同浓度白藜芦醇处理对奶牛性控冻精品质和体外受精能力的影响。在解冻后的奶牛性控冻精中分别添加0、10~(-3)、10~(-4)、10~(-5) mol/L的白藜芦醇,各组精子在受精液中获能孵育1.5 h后,测定精子质量和体外受精能力。结果表明:添加白藜芦醇均可有效降低性控冻精中活性氧(ROS)含量、提高顶体完整活精子比例(P0.05),其中10~(-3)、10~(-4) mol/L的白藜芦醇处理对降低ROS含量最为显著;10-4 mol/L的白藜芦醇处理可显著降低丙二醛(MDA)含量并提高性控冻精的卵裂率和囊胚率(P0.05)。综上所述,白藜芦醇作为一种外源性天然抗氧化剂,通过降低性控精液中过量的ROS水平、抑制精子脂质过氧化反应、保护顶体完整性,从而提高性控精子质量和体外受精能力。     

Effect of α-Tocopherol on Bovine In Vitro Fertilization

The objectives of this work are to determine if exogenous supplementation with α-tocopherol increases the in vitro fertilization (IVF) rate of bovine oocytes and improves viability of selected spermatozoa after 'swim-up'. The percentage of fertilized oocytes was significantly but negatively correlated ( r  = −0.941, p < 0.01) with the concentration of α-tocopherol. The control resulted in 95% of fertilized oocytes, which decreased as follows: 25 μM α-tocopherol (α25) 86%, 50 μM α-tocopherol (α50) 74%, 100 μM α-tocopherol (α100) 66% and 200 μM α-tocopherol (α200) 56%. Relatively to sperm viability after 'swim-up' with α-tocopherol supplementation, this antioxidant proved to have a beneficial effect as its concentration increased up to α50, decreasing for the concentrations of α100 and α200. Control resulted in 83% of live cells and 16% of dead cells; α25 resulted in 88% of live cells and 12% of dead cells; α50 resulted in 91% of live cells and 9% of dead cells; α100 resulted in 67% of live cells and 33% of dead cells; and finally α200 resulted in 57% of live cells and 42% of dead cells. In summary, the present study allows to conclude that, in our conditions, supplementation with the antioxidant α-tocopherol in IVF of bovine oocytes has a detrimental effect on fertilization rates. Nevertheless, exogenous supplementation with α-tocopherol at a concentration of 50 mM in the sperm-TALP media during the 'swim-up' technique has a significant beneficial effect on the selected spermatozoa viability.     

生物频谱对牛胚胎体外生产效率的影响

利用可调式周林生物频谱发生器对牛卵母细胞体外成熟、体外受精和体外培养过程实施辐射,以提高牛胚胎体外生产效率。频谱发生器与培养材料的距离为５ｃｍ,辐射强度根据辐射温度加以调节。结果表明,辐射温度控制在３９℃时,入孵卵母细胞的卵裂率（６３％）与对照组６１（％）无显著差异（Ｐ〉０．０５）,而囊胚发育率（３９％）显著高于对照组（１９％）（Ｐ〈０．０５）;当辐射温度达到４０℃时,试验组的卵裂率仅为１４％,囊