我国对非洲猪瘟病毒的研究进展综述

非洲猪瘟病毒进入我国已4年有余,因其无法消除且传播方式多样而对我国的养猪业造成巨大威胁。研究非洲猪瘟 病毒的毒株蛋白和基因,解析其蛋白结构和功能是研发非洲猪瘟病毒快速检测试剂盒和非洲猪瘟疫苗的首要措施。本文通过对非洲猪瘟病毒蛋白基因的分析,发现非洲猪瘟病毒的一些基因可以作为诊断该病的目的基因,为非洲猪瘟病毒快速检测试剂盒的研发提供了参考;且随着对非洲猪瘟病毒蛋白基因的深入解析,发现有些基因可以为非洲猪瘟疫苗的研发提供帮助。文章对非洲猪瘟病毒的功能基因、致病基因、检测基因及疫苗研发基因进行总结分析,旨在为非洲猪瘟病毒快速检测试剂盒研发和疫苗研发提供参考。     

牛病毒性腹泻病毒在猪瘟疫苗中的污染情况及其检测方法的研究进展

牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)和猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)同属黄病毒科瘟病毒属,猪瘟疫苗中污染BVDV可引起免疫失败。但由于两者在病毒粒子结构、基因组结构和抗原特性等方面均很接近,在血清学上存在交叉反应,因此难以检测猪瘟疫苗中污染的BVDV。文章对BVDV在猪瘟疫苗中的污染情况和检测方法进行了论述,旨在为猪瘟疫苗污染BVDV的检测提供理论基础。     

不同检测方法对猪瘟病毒抗体检测比较研究

为了找出适用于不同级别畜牧兽医站检测猪瘟病毒抗体的方法，本文采用猪瘟病毒抗体ELISA检测法和猪瘟病毒抗体快速检测卡进行猪瘟病毒抗体检测，通过统计分析，结果表明，猪瘟病毒抗体ELISA检测法适用于县级兽医实验室检测，结果可靠、准确；猪瘟病毒抗体快速检测卡适用于乡镇畜牧兽医站或养殖场自行检测，方法简单，快速，易操作，但准确性较差，为不同级别和地方的猪瘟病毒抗体检测方法的选择提供重要参考。     

猪病酶联免疫诊断试剂盒简介

1 猪瘟病毒抗体酶联免疫诊断(ELlSA)检测试剂盒 猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒是用来检测猪血清或血浆中猪瘟病毒抗体的检测试剂盒.     

非洲猪瘟病毒检测技术研究进展

自2018年我国发生首例非洲猪瘟疫情以来,疫情迅速蔓延至我国的31个省份。随着疫情的发展,快速检测非洲猪瘟病毒技术成为养殖企业及时发现和防控非洲猪瘟疫情的一个手段。本文从非洲猪瘟病毒的核酸检测技术、完整病毒颗粒检测技术和抗体检测方法等3方面论述了当前我国在非洲猪瘟病毒检测方面的技术和方法。并列举了当前国内非洲猪瘟病毒诊断制品的注册批准情况,以期为养猪企业在排查（检测）非洲猪瘟病毒、选择诊断试剂方面提供参考。     

猪组织和猪瘟疫苗中猪瘟病毒的检测和比较

采用RT-PCR方法和荧光RT-PCR方法检测了疑似猪瘟病料、采自屠宰场的猪淋巴结和猪扁桃体、细胞源猪瘟疫苗、脾淋源猪瘟疫苗等样品中的猪瘟病毒。结果表明,两种方法的检测结果一致,并且都只从1份疑似猪瘟病料和细胞源猪瘟疫苗中检出猪瘟病毒,其余样品中未检出猪瘟病毒。     

用PCR技术快速检测非洲猪瘟病毒

选择编码非洲猪瘟病毒结构蛋白VP73的部分基因片段为模板，用PCR技术检测非洲猪瘟病毒DNA，电泳分离可见一条长的1kb的DNA扩增带。本方法具有安全、快速、敏感等特点。     

基于Taqman-MGB探针的猪瘟病毒野毒株荧光RT-PCR检测方法的研究

应用MGB荧光RT-PCR技术对猪瘟病毒野毒株进行实时定量检测,以实现对猪瘟病毒野毒株与疫苗株的鉴别诊断。以猪瘟病毒5’端非编码区为扩增靶区,通过鉴别诊断位点的筛选、引物、探针和反应条件的优化,建立了猪瘟病毒野毒株荧光RT-PCR检测方法。试验结果表明,该方法的检测灵敏度为10拷贝/反应或3.0 TCID50/反应;对猪瘟病毒野毒株的检测结果均为阳性,而对猪瘟病毒疫苗株和其他猪源病毒的检测结果均为阴性,表明该方法具有较好的特异性;对515份临床样品的检测结果表明,该方法与RT-nPCR测序法的检测符合率为98.3%;猪瘟病毒人工感染猪实验结果表明,猪瘟野毒感染猪发病前2-4天即可被检测出阳性,疫苗免疫株检测结果始终为阴性。     

用PCR技术快速检测非洲猪瘟病毒

选择编码非洲猪瘟病毒结构蛋白ＶＰ７３的部分基因片段为模板，用ＰＣＲ技术检测非洲猪瘟病毒ＤＮＡ，电泳分离可见１条长约１ｋｂ的ＤＮＡ扩增带。本方法具有安全、快速、敏感等特点     

非洲猪瘟病毒及诊断技术研究进展

非洲猪瘟病毒是非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属的唯一成员,病毒基因组庞大,能编码100种以上的蛋白质分子。20世纪20年代该病毒首次在非洲的肯尼亚被发现,经过几十年,已经在世界多个国家不断蔓延,我国于2018年8月首次发生非洲猪瘟疫情。目前,非洲猪瘟抗原检测方法有红细胞吸附试验、荧光抗体试验、PCR技术、荧光定量PCR技术、环介导等温扩增技术等。抗体检测技术主要是酶联免疫吸附试验、胶体金试纸条法等。根据非洲猪瘟疫情在我国的发生情况,中国动物疫病预防控制中心组织了非洲猪瘟现场快速检测评审,对各种检测方法进行了技术把关,为非洲猪瘟病毒的检测和防控提供了技术保证。     

非洲猪瘟血清学诊断技术研究进展

非洲猪瘟是一种病毒性、出血性、接触传播性疾病,具有极高的致死率。我国作为养猪大国,非洲猪瘟给我国造成巨大的经济损失。由于我国目前尚未有可用的商品化疫苗,只有尽早地发现非洲猪瘟并严格实施流行病学调查、消杀灭源才能有效防控非洲猪瘟。随着非洲猪瘟流行特征的变化,非典型临床病例、慢性感染猪逐渐增多,病毒血症不明显并且排毒不规律,仅靠病原学存在漏检可能,而血清学检测可作为病原学检测的补充,对于非洲猪瘟临床诊断具有重要意义。本文从流行病学、病毒结构、诊断标识以及现阶段常用的非洲猪瘟血清学检测方法进行综述,供非洲猪瘟血清学诊断研究以及疫情防控工作者参考。     

猪瘟病毒结构蛋白的研究进展

对猪瘟病毒结构蛋白进行了综述,进一步弄清了猪瘟病毒的结构,为猪瘟病毒的研究提供理论支撑。     

猪瘟病毒E2蛋白酵母表达及其免疫活性研究

猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,呈世界性分布,对养猪业危害严重。猪瘟病毒属于黄病毒科、瘟病毒属,在自然条件下只感染猪。E2蛋白是猪瘟病毒的重要结构蛋白,也是猪瘟病毒的主要保护性抗原。以猪瘟病毒E2蛋白胞外区基因为模板,构建毕赤酵母表达载体pPICZαA-E2,并通过电转获得毕赤酵母X-33阳性克隆,经SDS-PAGE、Western blot鉴定筛选出猪瘟病毒E2蛋白表达菌株。通过亲和层析技术纯化蛋白,并将蛋白免疫动物,进行免疫原性分析。结果表明,猪瘟病毒E2蛋白在毕赤酵母中成功分泌性表达,经纯化纯度达95%以上;动物试验显示,该蛋白具有良好的免疫原性,为猪瘟病毒亚单位疫苗及相关检测技术的开发奠定了基础。     

SYBR荧光定量PCR方法分析猪瘟石门强毒的组织分布

为研究急性感染期猪瘟病毒在组织中的分布,本试验建立了猪瘟病毒实时定量PCR检测方法,通过与普通PCR及套式PCR方法比较,发现实时定量PCR具有较高的灵敏度和特异性,能够用于猪瘟病毒的检测;以此方法为基础,对人工接种猪瘟石门强毒急性死亡猪体内病毒分布进行了检测,结果发现急性感染期猪瘟病毒主要集中在扁桃体、脾脏、淋巴结及回肠。本研究初步揭示了猪瘟强毒在急性感染期死亡猪体内的分布情况,为猪瘟致病机理及感染控制的研究奠定了基础。     

猪瘟快速诊断金标试纸条的研制及应用

运用胶体金免疫层析技术,建立一种操作简单、特异性好、灵敏度高、适合临床诊断的检测猪瘟病毒的方法。通过采用柠檬酸三钠还原氯金酸制备胶体金,选择15nm胶体金标记兔抗猪瘟病毒抗体,组装免疫层析试纸条。用试纸条对猪瘟可疑病料进行检测,结果显示,用试纸条检测猪瘟病毒,15min左右即可显示结果,并与荧光抗体检测方法加以比较,结果表明用此种方法可以检测猪瘟病。     

多重荧光PCR鉴别诊断猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒

为了建立一种快速、灵敏、特异的能够同时检测猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒的多重荧光PCR方法。根据GenBank中公布的猪瘟病毒基因序列,设计一套特异性的引物和探针,对猪瘟病料提取RNA,经RT—PCR扩增后将产物回收,克隆至pMDl8-T构建pMDl8-T—CSFV阳性质粒;非洲猪瘟的目的片段序列采用化学合成,构建pMDl8-T—ASFV阳性质粒。以两种阳性质粒为模板时建立的多重荧光PCR方法做特异性、灵敏度和重复性试验,结果表明该方法可以将猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒同口蹄疫病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪水泡病病毒、猪圆环病毒2型区分开,灵敏度可以达到10拷贝的数量级．而且方法稳定。对2份已知猪瘟阳性血清样品和120份猪内脏、猪鼻腔拭子及血清样品检测后．发现对已知阳性样品的检测结果符合预期目标。未知样品检出猪瘟病毒3份阳性,未检出非洲猪瘟病毒阳性。     

非洲猪瘟病毒p62蛋白单克隆抗体的制备及初步应用

为制备非洲猪瘟病毒（ASFV）p62蛋白的特异性单克隆抗体,并初步应用于感染组织样品中ASFV抗原的免疫组化（IHC）检测,本研究以杆状病毒表达的非洲猪瘟病毒重组p62蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合获得杂交瘤细胞。结果显示：基于纯化的p62蛋白建立的间接ELISA方法对杂交瘤细胞进行筛选和亚克隆,获得了18株可稳定分泌抗非洲猪瘟病毒p62蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经IFA检测,制备的单克隆抗体均与非洲猪瘟病毒反应,且不与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型等猪源常见病毒反应,特异性良好。抗体识别蛋白的鉴定结果显示,3株MAbs识别p35蛋白,15株MAbs识别p15蛋白。14株MAbs重链亚类为IgG1型,4株MAbs重链亚类为IgG2a,轻链均为κ链。利用18株MAbs对ASFV感染猪的肺、扁桃体、淋巴结等组织进行IHC检测,结果显示5株MAbs均能够与感染ASFV的组织发生特异性的免疫反应。本研究获得的非洲猪瘟病毒p62蛋白单克隆抗体可为非洲猪瘟病毒免疫学检测方法的建立及p62蛋白的结构功能等基础研究提供重要的生物材料。     

猪瘟病毒RT-PCR核酸检测与ELISA抗原检测试验应用研究

本试验根据NCBI公布的猪瘟病毒石门毒株E2基因序列,设计、合成了1对检测猪瘟病毒E2基因的PCR引物。以120份疑似猪瘟病料为试验材料,使用RT-PCR核酸检测与ELISA抗原检测2种方法,分别用这2种方法检测疑似病料,并且比较这2种方法在猪瘟病料检测中的实际差别。通过猪瘟病毒RT-PCR核酸检测结果及ELISA抗原检测结果相互印证,为云南猪瘟的诊断及防制提供了技术支持。     

规模化猪场蓝耳病变异毒株与其他疾病混合感染的诊断及综合防治

对3个规模化猪场送检病料进行蓝耳病病毒和猪瘟病毒PCR、RT-PCR检测和细菌的分离鉴定,其中A场送检的12份病料中检测到变异蓝耳病病毒8份、普通蓝耳病病毒3份、猪瘟病毒2份,分离到致病性大肠杆菌共2株,沙门氏菌1株;B场送检的13份病料中检测到变异蓝耳病病毒6份、普通蓝耳病病毒1份、猪瘟病毒2份,分离到致病性大肠杆菌共3株,巴氏杆菌1株;C场送检的15份病料中检测到变异蓝耳病病毒7份,未检测到普通蓝耳病病毒和猪瘟病毒,分离到致病性大肠杆菌共2株;对发病初送检的血清抗体检测结果显示,A、B、C 3个场的猪瘟和蓝耳病的抗体水平不高,分别为猪瘟65%、42%、64%,蓝耳病71%、53%、79%,说明抗体水平低不能保护猪群是感染病毒的主要原因.还检测到猪群存在圆环病毒病抗体.     

猪瘟病毒E0基因检测方法的建立及甘肃河西地区E0基因特征分析

为给甘肃地区猪瘟的防控和检测提供参考资料,本研究根据典型猪瘟病毒的E0基因设计引物,建立猪瘟RT-PCR检测方法,并评估其特异性,同时用该方法检测甘肃河西地区猪瘟的流行状况,通过基因测序分析E0基因序列特征。建立的猪瘟RT-PCR检测方法对猪瘟病毒c DNA检测为阳性,而对其他病毒c DNA检测为阴性,甘肃省河西地区猪瘟流行广泛存在,流行率为26.92%,且流行毒株核苷酸同源性为80.2%~96.3%;氨基酸同源性为73.0%~95.4%。结果表明本研究建立的猪瘟RT-PCR检测方法特异性强,且甘肃河西地区猪瘟的流行毒株E0基因进化高度保守。