火鸡禽流感新城疫免疫试验

目的:观察禽流感和新城疫免疫疫苗对相同日龄的成年火鸡和本地土鸡产生免疫抗体效价的差异。方法:采用血凝抑制试验方法。结果:火鸡和本地土鸡对禽流感和新城疫疫苗的使用剂量上存在差异。结论:火鸡由于个体巨大,禽流感和新城疫免疫疫苗应比正常土鸡量加大1倍方能取得较为合理的免疫效果。     

禽流感血凝和血凝抑制试验的质量控制

禽流感血凝—血凝抑制试验是目前我国各地动物卫生监督机构和养殖场监测禽流感疫苗抗体水平的常用试验方法。该方法具有操作简易、能同时进行大量样品分析、结果灵敏快速等特点,在疫病流行病学调查、抗体监测、免疫程序制定等方面发挥了重要作用。但该方法在操作中受较多的因素影响,容易造成试验结果出现偏差。现结合基层实验室具体情况,对该试验方法操作中的影响因素进行了归纳分析。     

鸵鸟禽流感免疫程序的制定与应用

鸵鸟AI母源抗体及疫苗免疫后抗体消长动态的检测结果：雏鸟的AI-H5母源抗体在1日龄时高达7.9log2,且较整齐,在14日龄内能维持在8.8log2以上,至30日龄已衰减为4.6log2;雏鸟一免或二免后40天内抗体效价维持在（4.3～5.0）log2以上,三免后2个月内可维持5.8log2以上;种鸟经一次免疫后4个月内维持在5.2log2以上;二免后,6个月抗体效价仍能维持在6.8log2以上。据此,提出了鸵鸟场AI的免疫程序。     

抗禽流感病毒H9亚型血凝素特异性单克隆抗体的研制

以H9亚型禽流感病毒免疫Balb／C小鼠，细胞融合后用血凝抑制试验检测细胞培养上清，结果获得3株阳性细胞株，分别命名为6E6、6B6、5B4。经2次亚克隆后，所有杂交瘤细胞保持了分泌抗禽流感H9亚型特异抗体的能力。特异性试验证明，3株单克隆抗体仅与试验的H9病毒株反应，与H5亚型禽流感病毒、鸡新城疫病毒和鹅源腺病毒等不反应。间接免疫荧光试验(IFA)结果表明，3株单克隆细胞的上清均能与感染H9亚型病毒的鸡成纤维细胞呈特异性绿色荧光反应。实验性病毒检测结果表明，IFA方法检测H9禽流感比鸡胚接种分离病毒的效果好、灵敏度高，是一种经济实用的方法。获得的单克隆抗体可在禽流感流行病学的监测及预警预报中发挥重要作用。     

2018—2019年运城市鸡高致病性禽流感和鸡新城疫抗体监测与分析

为了降低动物疫病传播风险,推动禽类养殖业健康安全发展,为禽类综合疫病防控提供科学依据,2018—2019年对山西省运城市13个县市207个养殖场采集5081份血清样样品,通过血凝抑制试验进行高致病性禽流感和鸡新城疫免疫抗体检测。结果显示：2018—2019年,禽流感H₅亚型免疫抗体群体合格率分别为93.33%、76.36%,个体合格率分别94.83%、76.86%;禽流感H₇亚型免疫抗体群体合格率分别为100%、95.92%,个体合格率分别为100%、94.31%;鸡新城疫免疫抗体群体合格率分别为100%、92.73%,个体合格率分别为99.70%、87.64%。在全市13个县市中,9个县市禽流感H₅、H₇亚型、新城疫场群合格率均在70%以上,4个县市禽流感H₅亚型场群合格率不达标,3个县市禽流感H₅亚型个体合格率不达标。结果表明,虽然运城市鸡高致病性禽流感和鸡新城疫整体免疫效果较好,但是发生疫情的风险依然较大,应继续加强落实强制免疫,科学指导养殖户规范免疫程序,强化养殖户主体责任,提升整体防控能力。     

利用流式细胞术检测H4亚型禽流感病毒感染细胞

以不同稀释度的H4亚型禽流感病毒(AIV)感染MDCK细胞,分别在添加与不添加TPCK-胰酶的培养基中培养36 h后收集细胞。经固定后,加入抗H4亚型AIV的单抗2C11,继续加入荧光标记的抗鼠Ig抗体,用流式细胞仪(FCM)分析不同条件下病毒感染的细胞,并用血凝(HA)试验检测细胞培养上清中病毒的HA效价。FCM结果表明:不论加TPCK-胰酶与否,均能引起病毒的感染,且随着感染剂量的增加,含有病毒细胞的比率增加。相比而言,加胰酶后,低剂量感染便可引起病毒在MDCK细胞内大量增殖,并能检测到细胞上清中的病毒。FCM与HA试验相比,FCM试验更敏感,更能反应病毒在感染早期的增殖情况。     

广东清远H9亚型禽流感的分离及初步鉴定

在本次试验中,从清远养鸡场采集疑似感染H9亚型禽流感病毒鸡群的口腔及泄殖腔拭子进行病毒分离,使用血凝及血凝抑制试验进行初步鉴定,提取病毒RNA,使用针对H9亚型禽流感病毒HA基因的特异性鉴定引物对该分离株进行RT-PCR检测,回收特异性目的片段后进行测序分析,结果显示,该毒株属于H9亚型禽流感病毒。     

禽流感血凝抑制试验的影响因素分析

血凝抑制试验是检测禽流感抗体效价的一种常用方法,具有简便、快速、灵敏、准确等特点,被区县级动物疫病预防控制中心化验室所广泛应用。但由于试验中不规范的操作和细节注意不够,从而导致不正确的检测结果,而影响试验的准确性。     

浅析禽流感抗体检测HI试验方法

自1997年香港发生禽流感并引发人类感染事例和当前H7N9禽流感浸染人类事例被报道后,高致病禽流感已成为我国疾控中心和役控中心重点检疫管控的禽病之一,也是当前我国强制免疫的传染病之一,搞好免疫接种是防止禽流感疫情发生的重要措施和管控手段,禽流感抗体检测是防止禽流感疫情发生的关键环节。微量血凝抑制试验由于其特异性好、方便快捷、结果准确又能进行大量样品分析、节省试剂、易于操作等优点,在禽流感病毒亚型鉴定和抗体检测等方面应大力推广和应用。     

禽流感疫苗免疫鸡群后HI抗体消长规律及免疫保护临界值的测定

禽流感病毒(Avianinfluenzavirus,AIV)SD-1株(H5N2亚型)接种10日龄SPF鸡胚,收获24h后死亡的鸡胚尿囊液,按照《兽医生物制品规程》制备油乳剂灭活苗,并对200只14日龄雏鸡进行免疫,免疫后每隔1周抽取20只鸡测定HI抗体,并分别选择HI抗体水平为3log2、4log2、5log2、6log2和7log2时进行攻毒。结果表明,疫苗免疫鸡群后第8周抗体达到高峰(8log2),而后逐渐下降,第16周抗体降至5log2。攻毒试验表明,能够抵抗致死剂量AIV攻击的HI抗体临界值为5log2。     

禽流感的研究进展

主要从禽流感病原学、流行病学、诊断技术以及疫苗研制等几个方面综述了禽流感的研究进展,分析了禽流感防制工作目前存在的问题,提出了解决这些问题的措施。     

汉中地区鸡禽流感母源抗体与免疫抗体的监测及免疫程序的建立

[目的]为禽流感免疫程序的建立提供依据。[方法]从汉中市某规模化养鸡场采集罗曼蛋鸡的血清样品,检测不同时期的抗体水平。接种禽流感油乳剂灭活苗后,检测用不同剂量的疫苗免疫后雏鸡血清中抗体水平。[结果]1d雏鸡平均母源抗体效价为8.9,在19d降到4.3。免疫36d后,平均抗体效价达6.37,保护率为100%。免疫85d后,抗体达最高值。免疫9周后,平均抗体水平降至4.17,保护期约为2个月。禽流感的首免时间应在出生后19～22d。首次免疫85d后,HI抗体水平逐渐降至临界值。建议在3月龄左右进行第2次免疫,剂量可增大到0.5ml/只。[结论]鸡场应建立抗体效价监测手段,应对抗体水平偏低或空白的鸡群及时再接种。     

禽流感免疫预防风险评估

疫苗接种是当前预防和控制AI疫情的有效手段之一。由于影响AI免疫预防效果的因素众多,会给免疫预防带来风险。对这些风险因子进行识别,并分析其所引起的风险程度的高低,进而采取针对性的风险管理措施,能有效提高免疫预防的效果。本研究通过对免疫预防风险进行综合分析,得出结果:管理不良、接种操作不规范以及缺乏实验室跟踪监测等是免疫预防的高风险因素,并针对这些高风险因素,提出了相应的预防措施。     

农凤鸡新城疫与禽流感母源抗体的衰减规律研究

[目的]研究农凤鸡新城疫和禽流感母源抗体的衰减规律,为农凤鸡新城疫(ND)和禽流感(AI)的预防提供依据。[方法]通过血凝抑制(HI)试验对1~37日龄的农凤鸡进行新城疫和禽流感(H5和H9)母源抗体水平的检测,研究农凤雏鸡ND和AI母源抗体的衰减规律。[结果]AI H5母源抗体水平较低,AI H9和ND的母源抗体水平相对较高,但都在3~5日龄出现高峰,此后随着日龄的增长,抗体水平逐渐下降。[结论]农凤鸡AI H5的首免日龄推荐为5~8日龄,AI H9和ND的首免日龄推荐为7~12日龄。     

鸭禽流感疫苗免疫程序研究报告

为了科学制定鸭的禽流感疫苗免疫程序,进行了以下三方面的试验:①不同品种雏鸭母源抗体消长情况测定.结果表明,5～7日龄雏鸭AI-HI抗体可维持较高水平,15～17日龄下降至4.0log2以下.②疫苗首免后抗体检测.结果表明,鸭首次免疫后2周可测出AI-HI抗体,4周时达到高峰;抗体水平持续4周后开始下降.肉鸭免疫一次抗体水平差异较大,不能完全预防禽流感的发生.③肉种鸭及蛋种鸭免疫程序及抗体消长规律的测定.结果表明,7～14日龄初免,60日龄二次免疫和120日龄加强免疫(三次免疫),种鸭的AI-HI抗体水平最高分别可达到9log2、11 log2,二次免疫后8个月其AI-HI平均抗体水平为5.6 log2,三次免疫后10个月其AI-HI平均抗体水平为7.6 log2以上.     

禽流感灭活疫苗免疫鹌鹑效力试验

禽流感灭活疫苗对鹌鹑首次免疫试验结果表明,20日龄、28日龄和35日龄的鹌鹑首次免疫禽流感疫苗2周后,部分鹌鹑能测定到AI-HI抗体,3周时抗体水平达到高峰,AI-HI抗体为5 log2以上,但维持时间很短,4周时开始下降,5周时降至3 log2以下;二次免疫2周后抗体达到7.6 log2,3周时抗体开始下降,6周时降至3 l0g2以下;不同免疫途径免疫效果比较,皮下注射抗体水平明显高于肌肉注射抗体水平;试验同时设鸡免疫试验为对照,相同剂量二次免疫后鸡的抗体水平明显高于鹌鹑,且维持时间可达6周以上;疫苗的安全性试验表明,免疫鹌鹑未见任何不良临床反应,精神、食欲和体重均正常.     

禽流感H5、H9亚型灭活油乳剂疫苗的免疫效果评价

对采自成都市牧星蛋鸡场免疫鸡群的2943份血清样品进行了H5、H9亚型禽流感抗体免疫接种试验。结果表明,在2943份血清样品中,tt5、H9亚型HI效价≥410g2的样品数量分别为2455、2738份,免疫合格率分别为83-4％、93．1％,免疫后抗体高峰维持7log2以上的时间达63d以上。超过蛋鸡场免疫合格标准,可...     

免疫金探针快速检测禽流感病毒研究

本试验将兔抗禽流感H5、H9亚型病毒抗体纯化后,分别与制备的胶体金研制成免疫金探针,用改良的渗滤法安全快速地检测被检材料中禽流感H5、H9亚型病毒。试验表明,该法对禽流感H5、H9亚型病毒的检测灵敏度分别为1.62μg.ml-1和1.25μg.ml-1。对阳性样品进行重复性试验3次检测结果完全相同。阻断试验和交叉试验表明该法有很高的特异性。对禽流感H9亚型病毒人工发病鸡的病毒检测阳性率为70%,与临床疑似病例禽流感病毒分离的阳性符合率为100%。     

H5型高致病性禽流感免疫抗体监测及免疫效果分析

[目的]为了评估目前临床上大量免疫高致病性禽流感疫苗的免疫效果和质量。[方法]利用翅静脉法在127个养鸡场2、2个养鸭场、2个养鹅场1、个养鸽场采集血样,通过血凝抑制试验对H5型高致病性禽流感抗体进行监测,并分析免疫效果。[结果]5个养鸡场免疫不合格,8个养鸭场免疫不合格(主要为肉鸭场),2个养鹅场和1个养鸽场均免疫合格。抗体合格率为88.05%,免疫合格场达91.40%[。结论]雏鸡的最佳首免时间应为2周左右。经2次免疫接种的禽类保护力很高,免疫有效期可达4~6个月。     

H5亚型禽流感疫苗免疫效果研究

对大庆地区H5亚型禽流感油乳剂灭活疫苗免疫的两个蛋鸡场进行抗体消长情况的调查,了解生产实践中禽流感疫苗免疫工作方面存在的问题。应用血凝抑制(HI)试验跟踪检测免疫后鸡群的抗体水平。初次免疫后15d抗体达到保护临界值,28d抗体水平达到峰值,再次免疫后,抗体水平在一周上升到最高峰,二免有效期可达180d。两个鸡场的免疫效果比较理想,但存在着初免时间不确定和两次免疫间隔时间较长等问题。