上海地区活禽批发市场H9亚型禽流感病毒调查

为弄清上海地区活禽批发市场中H9禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）的流行情况及鸡群的免疫情况,2009年对上海三大活禽批发市场进行了采样监测。采用HI试验检测H9 AIV抗体、荧光RT-PCR试验和鸡胚接种分离鉴定病毒。共采集110批次1 646份血样和喉头泄殖腔棉拭样品,平均抗体合格率为60.27%,分离到H9病毒134株,其中4-6月和9-11月为全年中病毒分离的2个高峰期（样品带毒率均超过了10.00%）,明显比其它月份要高（其他月份均低于5.00%）,样品带毒率平均为8.14%。不同市场、不同地区采集的样品其抗体合格率和样品的带毒率也存在一定的差异。在30批分离到病毒的样品中,13批次已免疫H9N2油乳剂灭活苗且抗体合格率均大于70.00%的样品中分离到45株病毒（45/195）,其中6批次抗体合格率达到100%的样品中也分离到了病毒（8/90）,但带毒率明显比未经疫苗免疫的样品（79/255）低。调查结果表明养殖户对肉鸡群H9N2油乳剂灭活苗免疫重视程度不够,鸡群中带毒现象较普遍。疫苗免疫后能产生较高的免疫抗体,且抗体能减轻临床症状,降低带毒率,但不能完全阻止病毒复制,存在高抗体下带毒现象。     

2021年云南省玉溪市活禽交易市场禽流感病毒监测

为了解云南省玉溪市活禽交易市场禽流感病毒污染情况,2021年对该市8个县（市、区）活禽市场进行采样检测。全年共采集63场次1 455份棉拭子样品（禽咽喉/泄殖腔双拭子860份、环境拭子317份、运输工具拭子278份）,采用荧光RT-PCR方法进行流感病毒A型、H5/H7/H9亚型流感病毒核酸检测。共检出A型流感病毒核酸阳性435份,未检测到H5和H7亚型病毒核酸阳性;除检出7份未分型阳性样品外,在44场次检出H9亚型病毒核酸阳性428份,场次阳性率为69.84%,样品阳性率为29.42%,其中活禽、环境、运输工具样品阳性率分别为32.56%、25.87%、23.74%,差异具有统计学意义（P <0.05）。一年四季均能检测到H9亚型病毒阳性,但3—6月份样品阳性率低于年均阳性率,1、2、7、10、12月样品阳性率明显高于其他月份,各月份间样品阳性率差异具有统计学意义（P <0.01）。各县（市、区）的场次阳性率存在差异（P <0.05）,但样品阳性率差异无统计学意义（P> 0.05）。结果表明：玉溪市活禽市场H5、H7亚型高致病性禽流感病毒的污染状况得到有效控制...     

我国长三角和珠三角地区活禽市场H9N2亚型禽流感流行病学调查

为了解目前我国活禽市场H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)流行和增殖情况,2014年在上海、江苏、安徽和广东随机选取58个活禽市场,采集12 635份活禽拭子样品进行病毒分离、RT-PCR和序列测定分析。结果:15.11%拭子样品和98.28%的活禽市场是H9N2亚型AIV阳性。鸡、鸭、鹅、鸽样品阳性率分别为22.98%(1730/7529)、3.62%(94/2594)、4.08%(67/1643)、2.09%(18/861);上海、江苏、安徽和广东的样品阳性率分别为24.11%(688/2853)、8.43%(284/3368)、15.27%(475/3110)、13.95%(461/3304)。活禽零售市场阳性率(34.40%)显著高于活禽批发市场感染率(12.24%)。随着家禽在批发市场内停留时间的延长,H9N2亚型AIV阳性率从11.45%(停留8 h内)上升到29.13%(停留48 h以上)。遗传进化分析表明:所检出的H9N2亚型AIV均属于2007年以来我国H9亚型AIV主要流行分支,即h9.4.2.5分支。这些流行病学调查结果提示我国长三角和珠三角活禽市场的家禽(尤其是鸡)H9N2亚型AIV感染率很高,并且随着活禽在批发市场内停留时间延长,以及向零售市场转移,H9N2亚型AIV存在一个显著增殖和扩散的过程。     

新疆乌鲁木齐市某活禽交易市场禽流感病毒污染状况调查

为了解新疆乌鲁木齐市活禽交易市场内禽流感病毒污染状况以及亚型分布情况,掌握活禽档口、活禽屠宰点及活禽运输车辆的禽流感病毒流行规律,对采集的437份棉拭子样本,采用实时荧光定量RT-PCR方法检测禽流感病毒核酸,再对阳性样品进行核酸分型。结果显示:473份样品中,检出禽流感病毒核酸阳性115份,阳性检出率为24.31%,其中H5亚型26份,阳性检出率为22.6%,H9亚型45份,阳性检出率为39.13%,未定型44份,阳性检出率为38.26%,未检出H7亚型;活禽运输车、活禽档口和活禽屠宰点的阳性检出率分别为29.69%、24.15%和21.74%;活禽档口中的污水(44.90%)、笼具(34.69%)、粪便(24.49%),活禽屠宰点的脱毛机(47.80%)、接血槽(34.78%),以及活禽运输车的装载笼具(56.25%)的阳性检出率较高。结果表明:该活禽交易市场禽流感病毒污染状况较为严重,污染范围较广,活禽运输车、活禽档口和活禽屠宰点均有污染;活禽档口中的污水、笼具、粪便,活禽屠宰点的脱毛机、接血槽,以及活禽运输车的装载笼具为禽流感病毒散播的关键风险点。结果提示,需加强市场日常管理及清洗消毒,降低禽源流感病毒通过活禽交易市场传播的风险。本调查为制定科学有效的活禽交易市场日常管理及消毒措施提供了技术支持。     

吉林省长春市城乡活禽市场H9N2亚型禽流感病毒的检测与分子遗传进化分析

H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)通过为其他流感病毒提供内部基因或直接跨越种间屏障感染人,而活禽市场是H9N2亚型AIV传播的主要传播途径之一。为了解吉林省长春地区城乡活禽市场H9N2亚型AIV流行特点和趋势,对2021年9月至2023年4月在4个城乡活禽市场分离到3株代表性H9N2亚型AIV进行了分子遗传进化分析。结果显示3株毒株HA蛋白裂解位点均为PSKSSR↓GLF,其受体结合位点的第226位氨基酸由Q突变为L,可与α,2-6唾液酸受体结合,具有感染人的特性。分子遗传进化分析显示3株毒株的HA基因归属于BJ-94谱系中h9.4.2.5亚分支;NA基因归属Y280谱系;PB2、M基因均属于G1谱系;剩余内部基因均属于F-98谱系。研究结论丰富当前国内H9N2亚型AIV的流行病学研究,提示需加强病毒变异监控和新疫苗研发。     

禽流感病毒H5、H9亚型的多重RT-PCR鉴别诊断

根据禽流感病毒H5、H9亚型的HA基因序列,设计了两对RT-PCR引物,同时对H5、H9亚型进行了多重RT-PCR扩增,得到了两条清晰的目的带.将目的带回收并进行测序,同源性比较结果证明其为禽流感H5、H9亚型的HA基因序列,作者对多重RT-PCR进行反应条件优化以及敏感性与特异性测定,证明该方法的敏感性和特异性都比较好.初步应用于30份临床病料,其检测结果与病毒的分离培养一致,比电镜和琼扩的检出率高,与其他NDV、IBV的病料无交叉反应,可用于禽流感病毒H5、H9亚型的鉴别诊断.     

H9N2亚型禽流感病毒疫苗研究进展

H9N2亚型禽流感病毒在世界范围内广泛存在,给养禽业造成巨大的经济损失,并危害人类健康。流感病毒抗原易发生漂移和转换,使流感病毒的防控变得困难。疫苗接种是防控禽流感最有效的手段之一,全病毒灭活疫苗保护效果好,制备简单,是流感病毒常用的疫苗,但该疫苗局部副反应大,并伴随生物安全问题。随着分子生物学技术的发展,活载体疫苗、核酸疫苗、亚单位疫苗等新型疫苗的开发,给H9N2亚型禽流感病毒的防控提供了新的手段。新型疫苗除具有传统疫苗的保护效果外,在生物安全和普遍防控方面具有广泛的优势,是流感病毒疫苗发展的新方向。     

H9亚型禽流感病毒的分离与鉴定

2012年10月,在江苏省已进行过禽流感疫苗免疫的某肉鸡养殖基地,出现了一种以严重呼吸障碍、气管栓塞、突发死亡为特征的疾病。取典型病例鸡脑、肺脏、脾脏、咽拭子和泄殖腔拭子,经过初步处理后,接种于9日龄SPF鸡胚,经过培养纯化,获得一株病毒。通过血凝试验、血凝抑制试验和分子生物学试验以及动物回归试验等研究,最终确诊该病为H9亚型禽流感,分离的病毒为H9亚型禽流感病毒。     

禽流感H9亚型病毒WD株毒种的纯化研究

采用鸡胚终点稀释法并结合ND抗血清中和法对禽流感H9亚型病毒WD株毒种进行了纯化。将纯化的WD株毒种在SPF鸡胚连续传12代，对各代次毒种进行了毒价测定，选择一定代次的毒种进行了免疫原性试验及外源病毒检验。结果表明，WD株在鸡胚中连续传12代，其HA价稳定在1：512—1：1024，毒价在10^7.0-10^8.3 EID50／0．1mL；不同代次毒种不含外源病毒，免疫原性均符合要求。由此可见，毒种的纯化方法是有效的，将WD株毒种限制在12代内是可行的，并建立了该毒种的种子批。     

H9N2亚型禽流感病毒的研究现状

H9N2亚型禽流感病毒已在世界范围内的禽类中分离确认,并被证实可以传播到人类和低等哺乳类动物。对于它存在的潜在危害已经越来越多地受到关注,相关的研究也相继开展。许多遗传进化的分析为禽或猪流感可以直接感染人提供了证据,通过在人体的适应或与人流感病毒基因重组,可以形成新的病毒株,引起人类流感疫情暴发。文章提示应当密切监控H9N2亚型禽流感病毒,防止人类流感大流行。     

新疆乌鲁木齐市某活禽交易市场禽流感流行病学调查

为了解冬季新疆乌鲁木齐市活禽市场交易禽类及市场外环境中禽流感病毒污染情况及其流行规律,对某交易市场内的鸡、鸭、鹅、鸽等活禽,采集85份活禽全血样本和143份棉拭子样本(103份活禽泄殖腔/咽喉棉拭子、40份环境棉拭子),分别采用血清学和实时荧光定量(rRT-PCR)方法,检测禽流感免疫抗体和禽流感病毒核酸,并对核酸阳性样品进行病毒亚型确定。结果显示:85份全血样本中,H5(Re-11)株免疫抗体合格32份,合格率为37.6%;H5(Re-12)株免疫抗体合格34份,合格率为40%;H7(Re-2)株免疫抗体合格46份,合格率为54.2%。143份棉拭子样本中,禽流感病毒核酸阳性36份,阳性率为25.17%。其中:活禽棉拭子阳性29份,阳性率为28.15%;交易区外环境棉拭子阳性7份,阳性率为17.5%。36份禽流感病毒核酸阳性样本中,H5亚型3份,阳性率为8.33%;H9亚型22份,阳性率为61.11%;未定型11份,阳性率为30.56%。结果表明:该市场交易活禽流感病毒感染率较高,且强制免疫的H5、H7亚型禽流感免疫抗体合格率较低,存在疫情发生和散播风险。结果提示,应加强活禽交易市场的消毒与管理,降低禽流感病毒通过活禽交易市场传播的风险。     

H9亚型HP株禽流感病毒繁殖规律的探索

为了研究H9亚型HP株禽流感病毒接种非免疫鸡胚后病毒的繁殖规律,试验用H9亚型HP株禽流感病毒接种非免鸡胚,记录不同时间段死亡的鸡胚数量,并分别收获各时间段死亡鸡胚的尿囊液,测定不同时间段尿囊液的病毒效价。结果表明,接种H9亚型HP株禽流感病毒后,非免鸡胚死亡高峰期出现在60～84 h,死亡数量占接种鸡胚数的80%以上,而该时间段死亡鸡胚尿囊液的病毒滴度也处于最高峰,最高到达10^9.63EID₅₀/mL,直到96 h病毒仍维持较高水平(10^9.50EID₅₀/m L),而96 h后病毒滴度开始衰减。     

H9亚型禽流感病毒分型单克隆抗体的研制及初步应用

禽流感(AI)是由A型流感病毒所引起的禽类(家禽和野禽)的感染和／或疾病综合征。禽流感病毒(AIV)的宿主谱很广，水禽类常可表现为显性感染，或为隐性感染而成为重要的传染源。不同亚型的AIV对家禽的致病性不同，H9亚型禽流感病毒主要引起肉鸡呼吸道症状和蛋鸡产蛋下降。目前禽流     

接种H5亚型禽流感疫苗对活禽禽流感荧光PCR检测结果的影响

禽流感是由正粘病毒科A型流感病毒引起的禽类烈性传染病,具有极高的死亡率,是威胁我国养禽业的主要疾病之一。当前及今后的相当长时间里,禽流感防控形势仍会不容乐观,快速检测与诊断、确诊疫情发生与否已成为整个工作的关键。但利用国家标准《H5亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方     

广州市活禽交易市场休市效果评估队列研究

[目的 ]了解目前广州市活禽交易市场每月休市一次(天)的实施效果,给人感染H7N9等流感病毒的科学防控提供技术依据。[方法 ]2015年3月,选择广州市某区1个活禽批发市场和2个活禽零售市场,分别于休市前、休市中,以及休市后的1、2、3、4、5、7、14、21和28天,采集市场内环境棉拭子和活禽口咽/泄殖腔棉拭子,共2 470份,进行通用型禽流感病毒荧光RT-PCR检测。[结果 ]研究发现,休市前、中、后各检测时点,环境样品中禽流感病毒阳性率分别为17.78%、10.00%、5.19%、29.63%、21.48%、22.96%、22.22%、45.93%、40.74%、47.41%和25.19%。虽然活禽交易市场在休市后禽流感病毒有非常明显的减少,但是阳性率在休市后第二天就开始显著升高,而且环境样品中病毒阳性率与活禽样品中病毒阳性率呈明显的统计学相关性(Pearson相关系数为0.82)。[结论 ]本研究是国内首次活禽交易市场(包括活禽批发市场和活禽零售市场)每月一次(天)休市效果的队列研究。研究显示,每月一次(天)的休市能迅速减少活禽交易市场内禽流感病毒的污染,但是随着市场的重新开放,感染禽流感病毒活禽的重新进入,市场内禽流感病毒阳性率再次迅速升高。推测仅仅依靠每月一次(天)的休市措施,无法从根本上降低本地区活禽交易市场内禽流感病毒的污染程度以及人感染禽流感的风险,需进一步调整防控策略,采取综合的防控措施。     

Dot-ELISA检测H9亚型禽流感病毒的研究

本研究采用兔抗H9亚型禽流感病毒（AIV）IgG包被于硝酸纤维素膜,酶标羊抗兔IgG作二抗,建立检测H9亚型AIV的Dot-ELISA法。经方阵试验确定兔抗AIV IgG工作浓度为1∶400,酶标羊抗兔IgG的工作浓度为1∶400。作者建立的Dot-ELISA对AIV的最小检测量为3.35×10-9g。Dot-ELISA与HA和HI、AGP及病毒分离法相比,检测63份临床疑似H9亚型AIV病料,Dot-ELISA检出32份(57.14%),HA和HI检出15份(23.81%),AGP检出11份(17.46%),病毒分离检出38份(60.30%)。用抗H9亚型AIV阳性血清可以阻断Dot-ELISA阳性反应,诊断膜片与鸡新城疫病毒、鸡传染性法氏囊病病毒、鸡传染性支气管炎病毒、产蛋下降综合征病毒不出现阳性反应,证明Dot-ELISA特异性好。分别置室温(25 ℃左右)、4 ℃和-20 ℃下保存1个月后,膜片诊断效果不变,对照反应均成立,该方法重复性好（重复符合率为93.9%）,操作简便（3 h内可完成）,不需要特殊检测仪器,结果客观,肉眼易于判断,是微生物和传染病及寄生虫病诊断标准化的新技术之一。     

蛋鸡大肠杆菌和H9亚型禽流感病毒混合感染的诊治

2014年1月,建水某蛋鸡养殖场发生一起以呼吸困难、产蛋下降、急性死亡为特征的病例.采集病料进行细菌和病毒的分离与鉴定,分离到的6株大肠杆菌,血清学试验结果显示,血清型为O78、O88.药敏试验结果显示,分离株对丁胺卡那霉素、环丙沙星等敏感,但对头孢氨苄、强力霉素、新霉素等药物有耐药性.分离到1株病毒,鸡胚尿囊液HA效价8log2～ 10log2,血凝抑制试验结果显示,分离病毒的血凝特性能被H9亚型禽流感标准阳性血清所抑制,表明从病料中分离出了H9亚型禽流感病毒,诊断为大肠杆菌与H9亚型禽流感病毒的混合感染.     

2017年上海市活禽市场H9N2亚型禽流感病毒全基因进化分析

为了解上海市活禽市场H9N2亚型禽流感病毒(AIV)分离株的遗传变异情况,本研究对2017年分离的6株H9N2 AIV的8个基因片段进行RT-PCR扩增、克隆和测序,并对获得的HA基因序列进行同源性和关键位点分析.结果显示:6个分离株的HA裂解位点均为RSSR↓GLF,符合低致病性AIV的分子特征;6株分离株均有8处糖基化位点;受体结合位点除198位和202位有变异外,其它位点均保守,226位氨基酸均为L,228位氨基酸均为G,因此具有与哺乳动物唾液酸α2-6受体结合的特征;所有分离株HA基因核苷酸同源性为93.4%~99.9%,氨基酸同源性为93.8%~99.5%,HA基因进化树显示上述6株分离株均属于近几年在中国鸡群中流行的h9.4.2.5分支;从8个基因片段组成方式分析这6个毒株属于G57基因型.本研究结果为H9N2亚型AIV的防控和疫苗研制提供了科学参考.     

H9亚型禽流感病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立

根据H9亚型禽流感病毒HA基因上的保守序列,设计合成引物,以阳性H9亚型禽流感病毒HA基因重组质粒为标准品做标准曲线,建立了荧光定量逆转录聚合酶链反应检测方法。结果表明:本试验建立的标准曲线循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的线性关系,相关系数为0.997,灵敏度约为6拷贝/μL,对新城疫病毒和其他禽病病毒无交叉反应,特异性好,重复性佳,对193份临床泄殖腔棉拭样品的检测,其结果与经典病毒分离方法符合率大于90.0%。该方法为H9亚型禽流感病毒检测提供了一种特异、敏感、快速、较便宜、高通量、生物安全性好的定量检测手段,将在禽流感病毒临床样品快速筛检、流行病学监测等方面显示良好的应用前景。     

支气管炎型H9亚型禽流感病毒的分离与鉴定

广东省某鸡场发生一起以严重呼吸困难、急性死亡为特征的病例,5000只鸡在1周内连续死亡400多只。通过病理剖检,几乎所有病死鸡支气管都充满干酪样物质,导致支气管严重阻塞,气管及支气管黏膜严重出血。采集病死鸡的肝脏、脾、肺和气管干酪样物质,病料经处理后通过SPF鸡胚绒毛尿囊膜接种获得一株病毒。通过琼脂凝胶免疫扩散(AGP)试验,该病毒能与禽流感标准阳性血清形成明显沉淀线,初步确定该病毒为禽流感病毒;通过血凝HA试验,该病毒能够凝集鸡红细胞,但此血凝现象不能被抗NDV血清、抗EDSV-76血清、抗H 5亚型流感单因子血清、抗H 7亚型流感单因子血清所抑制,而能被抗H 9亚型禽流感单因子血清所抑制,以及通过H 9亚型流感病毒的RT-PCR分子生物学诊断方法,最终确诊该病毒为H 9亚型禽流感病毒。动物回归试验,攻毒鸡表现与临床发病鸡一致的症状及典型病理变化,患鸡支气管被干酷样物严重阻塞,气管、支气管黏膜较严重出血,通过病料的病毒分离与鉴定,能再次分离到该病毒。