两株禽腺病毒人工感染产蛋鸡后脏器组织中病毒分布及其含毒量的检测

分别采用H_(91-1)和Y_(81)G_1两株禽腺病毒通过滴鼻、口服和肌肉注射,人工感染SPF产蛋鸡、伊莎蛋鸡,在感染后第3～20天的不同时期,分别扑杀感染鸡,无菌采集各脏器组织,应用荚心ELISA和血凝(HA)试验检测病料及鸭胚分离病毒。结果表明,H_(91-1)和Y_(81)G_4两株禽腺病毒对SPF蛋鸡和普通蛋鸡的咽喉部、卵巢、输卵管(蛋白分泌部、峡部、子宫部)均有亲嗜性。最早在感染后第3天即能检出病毒,感染后第6～15天检出率最高,输卵管峡部是检测和分离病毒的最佳部位。     

禽腺病毒核酸的提取及分子量测定

通过接种鸭胚增殖病毒,采用聚乙二醇－硫酸铵沉淀法纯化病毒,从病毒纯化物提取核酸进行琼脂糖凝胶电泳的结果表明,ＨＳ－１,ＡＶ－１２７和ＧＣ２三株病毒各有一条明显的核酸带,不分节段,不同毒株的核酸电池迁移率非常相似,测定的分子量分别为３３．６,３４．２和３３．９ｋｂ。     

禽腺病毒江苏分离株的细胞培养特性

为进一步研究的生物学特性,应用鸡胚成纤维细胞(CEF)和鸡胚肾细胞(CEK)培养禽腺病毒江苏分离株,进行培养特性、血凝特性、理化特性、超薄切片观察和PCR检测.实验结果表明,CEF感染病毒后没有出现病变.CEK感染病毒后则表现出很强的聚集性并形成细胞团,有的成束状,最后脱落;Reed-Muench方法测得其TCID50为每0.1 mL 10-5.4.CEK核内存在大量70～80 nm、呈典型的晶格状排列的腺病毒颗粒.     

禽腺病毒江苏分离株的细胞培养特性

为进一步研究的生物学特性,应用鸡胚成纤维细胞(CEF)和鸡胚肾细胞(CEK)培养禽腺病毒江苏分离株,进行培养特性、血凝特性、理化特性、超薄切片观察和PCR检测。实验结果表明,CEF感染病毒后没有出现病变。CEK感染病毒后则表现出很强的聚集性并形成细胞团,有的成束状,最后脱落;Reed-Muench方法测得其TCID50为每0．1mL 10^-5.4。CEK核内存在大量70～80nm、呈典型的晶格状排列的腺病毒颗粒。     

湖北省蛋鸡I群禽腺病毒感染的病例诊断

2015年10月,湖北省某规模化鸡场产蛋鸡群相继发生某种疾病,日死亡率达2%。为了明确患病蛋鸡死亡的原因及确定病原,对临床送检患病蛋鸡开展了病理解剖、组织病理学观察、PCR检测和病毒分离等实验室诊断。结果表明,患病蛋鸡临床剖检可见心包内有淡黄色清亮液体,肝脏肿胀、脂肪变性和变色,肾脏肿大、尿酸盐沉淀较多;病理组织学观察发现肝细胞核内形成嗜碱性核内包涵体;病料样品及病料鸡胚接种尿囊液,PCR扩增产物测序结果与I群禽腺病毒hexon基因同源性为99%,表明分离到的病毒为I群禽腺病毒。     

人工感染小白鼠弓形虫病感染量测定

本文通过大量人工复制小白鼠弓形虫病，系统地观察了腹水内荷虫量变化，确定腹腔接种６５０－１１００个滋养体／只是人工感染小白鼠弓形虫病的适宜感染剂量。     

人工感染禽腺病毒血清1型对SPF鸡天然免疫反应的影响

试验旨在探究禽腺病毒血清1型（Fowl adenovirus serotype 1,FAdV-1）感染SPF鸡后产生的天然免疫反应及免疫调控机制。结果表明,感染FAdV-1后,观察组、感染组、对照组SPF鸡均无明显发病和死亡,剖检肌胃和腺胃可见轻微病变。感染初期小肠组织中Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)、5、7、21;禽β-防御素5(Avian β-defensins 5,AvBD5)、8;白细胞介素8(Inter leukin-8,IL-8)、18;MyD88(Myeloid differentiation factor 88,MyD88)、C-Rel及p65基因表达量显著升高（P<0.05）。TLR2、TLR5、AvBD8、IL-8、MyD88、C-Rel和p65在感染后36 h(hour post-infection,hpi)表达趋势一致。感染后期,部分组织中TLR15、AvBD10、AvBD12、IL-8基因表达量显著上调（P<0.05）。试验说明SPF鸡感染FAdV-1初期的先天免疫应答是小肠中通过TLR2、5-MyD88途径...     

禽网状内皮组织增殖病的组织病理学和超微结构的动态变化

一日龄雏鸡腹腔接种禽网状内皮组织增殖病病毒(REV),观察感染后不同时期肝、脾、心、脑、胸腺、腔上囊、腺胃、十二指肠、盲肠、胰腺和性腺等器官组织的肉眼,组织学和超微结构的变化。根据组织病理学和超微结构检查表明:禽网状内皮组织增殖病(RE)的典型病变是实质细胞坏死和网状细胞增生。本病的靶器官主要是肝脏,其次是心、脾、腺胃、腔上囊、胰腺和性腺等。本病增生的网状细胞,通过光镜和电镜观察,能区别于鸡马立克氏病和淋巴性白血病。此外REV可导致雏鸡发生生长抑制和腔上囊萎缩,因此对病畜的增重和其它禽病的免疲预防具有较大的影响。     

鸡DDX41基因克隆表达、细胞定位及其在禽腺病毒4型感染调控天然免疫中的作用

为获得鸡DDX41(chDDX41)的原核表达蛋白,探讨chDDX41的细胞定位及其在禽腺病毒4型(FAdV-4)感染引起的天然免疫中的作用。根据GenBank中chDDX41基因序列,设计特异性引物,以LMH细胞cDNA为模板扩增,将扩增序列连接至pET-32a、pCAGGS-HA、pCMV-3×Flag和pmCherry-C1空载体,构建重组质粒。将pET-32a-chDDX41转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达。利用激光共聚焦显微镜观察chDDX41在鸡肝癌细胞(LMH)和鸡巨噬细胞(HD11)中的亚细胞定位;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测在LMH细胞中过表达chDDX41对IFN-β等细胞因子表达量的影响。结果表明,克隆得到1 854 bp的chDDX41基因,共编码617个氨基酸。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白pET-32a-chDDX41主要以可溶性蛋白的方式在上清液中表达,经Western Blot鉴定,在90 ku左右有特异性条带,与预期结果一致;chDDX41在LMH和HD11细胞中主要定位在细胞核;FAdV-4感染过...     

黔东南小香鸡种群禽白血病、禽网状内皮组织增生症和鸡白痢感染情况检测与分析

为了解黔东南小香鸡种群禽白血病（AL）、禽网状内皮组织增生症（RE）和鸡白痢（PD）的感染状况,便于有效预防、净化疫病,更好地保护黔东南小香鸡的种质资源,从鸡群采集524份血清样品,采用ELISA检测禽白血病病毒p27抗原（ALV-p27）、禽网状内皮组织增生症病毒（REV）及鸡白痢感染抗体水平,采用PCR核酸检测进行禽白血病病毒A、B、J亚群（ALV-A、B、J）鉴定。结果表明：样品中ALV-p27抗原的阳性率为85.88%、ALV-J亚群的阳性率42.67%,REV抗体的阳性率为25.57%,鸡白痢抗体的阳性率为3.82%。根据检测结果,建议尽早对种群采取净化措施,以避免AL进一步发生及流行。     

鸡源禽腺病毒的LMH细胞传代及细胞传代毒株对SPF鸡的致病性

为建立禽腺病毒4型的禽源细胞感染模型,并考察细胞培养毒株对动物的致病性,将实验室2014-2017年间分离的5株血清4型禽腺病毒接种鸡肝癌细胞(leghorn male hepatocellular cells,LMH)并盲传,选取各病毒的LMH细胞培养物,按一定剂量经腿部肌肉注射接种4周龄SPF鸡;记录试验动物的发病情况,剖检采集发病或死亡鸡的脏器并制作病理切片,观察并分析病毒细胞培养物感染SPF鸡的组织病理变化。结果发现:5株血清4型禽腺病毒在LMH细胞上盲传至第4代时开始出现I群禽腺病毒所致的特异性细胞病变,提取培养物中病毒核酸并进行PCR鉴定,均能扩增出大小约564bp的特异性扩增片段,表明病毒能在LMH细胞上稳定增殖。选取各病毒第10代细胞培养物进行SPF鸡回归试验,发现细胞培养上清接种4周龄SPF鸡后第3天开始,有部分鸡开始精神沉郁,食欲消退、卧地不起瘫痪并迅速死亡,病理剖检及病理组织切片结果显示HB-1、HB-2、HB-3和SD-1毒株保持对4周龄SPF鸡的致病性,病死鸡中能观察到典型的组织病理学变化,而对照组不出现任何临床症状及病理变化。以上结果表明,LMH细胞可用于禽腺病毒增殖传代,是开展禽腺病毒分子致病机制研究的理想细胞模型。     

禽绦虫和组织滴虫混合感染的诊治

介绍了禽绦虫和组织滴虫混合感染的流行病学,临床症状,病理变化,诊断方法和经济适用的治疗措施。     

PCR和IFA测定猪圆环病毒2型半数细胞培养感染量的比较

采用聚合酶链式反应（PCR）和间接免疫荧光法（IFA）测定PCV2 SN07-1 2株的半数细胞培养感染量(TCID₅₀),初步比较两种方法测定病毒滴度的差异。参照Reed-Muench法计算TCID₅₀,并采用荧光定量PCR（Real-time PCR）法对试验结果进行验证。对于同一病毒样品,IFA法测出的TCID₅₀为10^6.5/mL,PCR法测出的TCID₅₀为10^5.0/mL,结果表明:IFA法比PCR法更敏感,更适宜用于测定PCV2的效价。     

传染性法氏囊病病毒人工感染SPF鸡胚诱导法氏囊细胞细胞凋亡的研究

鸡传染性法氏囊病是危害我国养鸡业发展的主要疾病之一。传染性法氏囊病病毒主要侵害鸡的法氏囊，导致法氏囊损伤和免疫抑制，使得鸡群对多种疫病的易感性增高，其免疫抑制机理尚不清楚。研究表明，IBDV能诱导体外培养细胞发生细胞调亡，并推测细胞调亡是传染性法氏囊病感染鸡群免疫抑制的机理。为了阐明传染性法氏囊病病毒导致免疫抑制的机制，以便更好地为IBD的防治提供新的方法和手段，我们对IBDV人工诱导SPF鸡胚法氏囊细胞细胞调亡进行了初步研究。种毒为中国农业大学生物学院提供的IBDV－H株，滴度为LD；。IO“”·mL－‘；S…     

禽组织滴虫病的症状与防治

禽组织滴虫病又称传染性盲肠肝炎或黑头病,是由火鸡组织滴虫寄生于禽类盲肠和肝脏引起的疾病。幼龄鸡易感,成年鸡多为带虫者。该病通过消化道感染,当暴发流行时,病禽粪便中的病原可污染饲料、饮水及土壤,健康家禽因采食而感染。一、临床症状组织滴虫病的潜伏期为7~20天,常在第11天出现症状。病鸡呆立,翅下垂,眼半闭,头下垂。下痢,粪便恶臭,呈淡黄色或淡绿色,急性炎症期间粪便带血或血便。部     

中药粗提物对鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染细胞能力的影响

将黄芪、连翘等八味中药的粗提物与鸡传染性法氏囊病病毒以三种顺序 (先加中药后加病毒、先加病毒后加中药、中药和病毒同时加入 )加入至培养 2 4 h、已长成完整单层的鸡胚成纤维细胞 (CEF)上 ,观察其对病毒感染细胞能力的影响。结果表明 ,在细胞安全浓度范围内 ,仅黄芪粗提物在先于病毒或与病毒同时加入时抑制 IB-DV病毒感染 ,且抑制作用与浓度和加药方式有关     

鸡支原体和大肠杆菌混合感染的诊治

禽支原体病是由支原体引起禽感染发病的一类疾病的总称。其特征性症状为呼吸道I罗音、咳嗽、气管炎、气囊炎、流眼泪、甩头等。而禽大肠杆菌病是由某些致病性大肠埃希氏菌引起的肠道非传染性疾病的总称,主要有败血型、肠道型、神经型、关节型、内脏型、脑型等,其中败血型、内脏型、脑型有不同程度的呼吸系统症状。两者混合感染是蛋鸡养殖中最常见的疾病之一。     

元宝鸡大肠杆菌与组织滴虫病混合感染的诊治

2011年9月,文登市天福山特种珍禽养殖园散养的1000只45日龄元宝鸡。鸡群发病,发病率为30％左右,5天死亡25只,死亡率为2．5％。病鸡精神不振,食欲减退,消瘦,腹泻,排绿色和黄绿色稀粪等症状。养殖户认为是大肠杆菌病,投喂新霉素、恩诺沙星等药物1周,病情不见好转,于是带着病死鸡前来就诊。