利用批次培养法研究植物精油对瘤胃体外发酵的影响

采用4×5二因子试验设计,研究肉桂油和留兰香油对瘤胃体外发酵和饲粮降解参数的影响.结果表明:随发酵时间的延长,添加0、100、500mg/L发酵液的肉桂油和留兰香油处理组的氨态氮(NH3-N)浓度持续升高,添加1 500mg/L处理组的NH3-N浓度几乎没有变化,而添加500、1 500mg/L肉桂油处理组的微生物蛋白(MCP)浓度先下降后上升.与对照组相比,添加100mg/L留兰香油处理组的MCP浓度有升高的趋势,添加1 500mg/L留兰香油却降低了MCP浓度(P<0.05).添加100mg/L留兰香油处理组在发酵后期(48、72h)总挥发性脂肪酸(TVFA)、乙酸和丙酸的浓度显著升高(P<0.05),而添加500、1 500mg/L肉桂油和留兰香油处理组的TVFA、乙酸和丙酸浓度均显著下降(P<0.05).分别添加500、1 500mg/L这2种植物精油处理组的体外干物质降解率(IVDMD)显著下降(P<0.05).综合分析,肉桂油和留兰香油的添加量为100mg/L时有利于调控瘤胃微生物发酵,当添加剂量大于500mg/L时对瘤胃发酵不利.     

高精料条件下薰衣草精油对体外瘤胃发酵和甲烷产量的影响

[目的]研究发酵底物精粗比为7∶3时不同剂量薰衣草精油对体外瘤胃发酵及甲烷产量的影响.[方法]以5只装有永久性瘤胃瘘管的哈萨克公羊为试验动物,采用瘤胃体外培养方法,设对照组和薰衣草精油添加量为100、150、250 μL/L的试验组,每个处理三个重复.[结果]薰衣草精油添加量为150和250 μL/L体外培养24h时降低甲烷产浓度分别为9.72;和24.23;(P＜0.05);添加不同剂量薰衣草精油显著提高累计产气量、TVFA、乙酸摩尔比例和NH3 -N浓度(P＜0.05),降低戊酸、丁酸和BCVFA摩尔比例(P＜0.05).[结论]适当剂量的薰衣草精油对甲烷产生有抑制作用.     

3种挥发油对肉牛体外瘤胃发酵、甲烷生成和微生物种群的影响

为研究不同挥发油对肉牛体外瘤胃发酵及微生物种群的影响,试验首先分析了不同水平的大蒜油、肉桂油和牛至油对瘤胃产气量及甲烷生成的影响,并筛选可降低甲烷生成量、但产气量变化不显著的挥发油添加水平(即大蒜油50 mg/L、肉桂油100 mg/L和牛至油200 mg/L)。进一步分析不同挥发油处理对瘤胃液p H值、VFA、NH_3-N和MCP浓度等发酵参数以及微生物种群数量的影响。结果显示:除了200 mg/L牛至油使VFA显著下降外(P0.05),其余的p H值、挥发性脂肪酸、NH_3-N和微生物粗蛋白浓度等发酵参数变化不显著(P0.05);上述剂量的3种挥发油对真菌和原虫影响不显著(P0.05),对古菌抑制极显著(P0.01)。所以,大蒜油、肉桂油和牛至油可以有效的降低瘤胃的甲烷产量而不影响其发酵,具有开发反刍动物瘤胃降甲烷微生态制剂的潜在应用价值。     

苏子油对瘤胃体外发酵模式、脂肪酸组成及甲烷生成的影响

为探讨苏子油对瘤胃体外发酵的影响,采用人工瘤胃技术分析不同添加水平的苏子油对瘤胃发酵模式、发酵参数和瘤胃脂肪酸代谢的影响.结果表明:添加不同剂量苏子油对发酵液pH值和氨氮(NH3-N)含量无显著影响(P0.05);与对照相比较,随着苏子油添加量的增加干物质降解率、中性洗涤纤维降解率、酸性洗涤纤维降解率、发酵底物单位产气量显著降低(P0.05),甲烷产量呈下降趋势(P0.05);对TVFA无显著影响(P0.05),丙酸含量显著增加(P0.05),乙酸含量和乙酸丙酸比例显著降低(P0.05);C18:1、c9,t11-CLA和总的长链脂肪酸浓度均明显升高(P0.01).表明在粮中添加一定量的苏子油,可改变瘤胃发酵类型、降低甲烷产量、调节瘤胃液脂肪酸组成.     

产气法评价纳豆芽孢杆菌对瘤胃液体外发酵的影响

【目的】评价纳豆芽孢杆菌对瘤胃液体外发酵的影响。【方法】采用瘤胃液体外发酵产气法,以不添加纳豆芽孢杆菌为对照,动态观测基础日粮中纳豆芽孢杆菌添加量分别为1.5×108/g(处理Ⅰ)和7.5×108/g(处理Ⅱ)对瘤胃液体外发酵产气量、pH值、NH3-N质量浓度和各挥发性脂肪酸浓度的影响。【结果】与对照相比,处理Ⅱ产气量提高了11.89%(P<0.05),瘤胃pH值显著降低(P<0.05),NH3-N质量浓度提高了16.07%(P<0.05),乙酸、丙酸和总挥发性脂肪酸浓度分别提高了10.43%,50.35%和20.70%(P<0.05);处理Ⅰ除丙酸浓度显著高于对照(P<0.05)外,其他各指标均与对照无明显差异(P>0.05)。【结论】纳豆芽孢杆菌培养物在基础日粮中的添加量为7.5×108/g时,能促进瘤胃液对饲料底物的降解代谢。     

不同精粗比底物时添加大蒜油对体外瘤胃微生物发酵的影响

体外法研究了底物精粗比(m(干草)∶m(精料))分别为10∶0、7∶3、5∶5、3∶7时,向发酵液中添加大蒜油(0、30、300和3 000 mg.L-1)对瘤胃微生物厌氧发酵24 h的影响。结果显示:24 h产气量随着大蒜油浓度的增加而降低(P<0.05),每隔3 h产气量的动态变化显示大蒜油延缓发酵的进行。大蒜油降低总挥发性脂肪酸(VFA)浓度(P<0.05),但是30 mg.L-1和300 mg.L-1之间没有显著差异(P>0.05);30 mg.L-1和300 mg.L-1大蒜油降低乙酸比例和乙酸/丙酸(P<0.05),增加丙酸和丁酸比例(P<0.05)。3 000 mg.L-1大蒜油增加pH值(P<0.05),而30 mg.L-1和300 mg.L-1时对pH值没有影响(P>0.05)。氨态氮(NH3-N)和菌体粗蛋白浓度从大到小分别依次是对照组、300 mg.L-1、30 mg.L-1、3 000 mg.L-1和30 mg.L-1、对照组、3 000 mg.L-1、300 mg.L-1。相对于其他发酵底物,在高精料时,30 mg.L-1和300 mg.L-1大蒜油的24 h产气量和总VFA浓度的降低较小,而NH3-N浓度、乙酸比例和乙酸/丙酸的降低以及丙酸比例的增加比较明显。结论:大蒜油抑制体外发酵存在剂量依赖效应,具有延缓发酵进程的特点,高精料时中等水平大蒜油对发酵的抑制作用较小,对发酵的优化作用更明显。     

叶酸浓度对肉牛瘤胃体外发酵和养分消化率的影响

[目的]本文用体外法研究日粮补充不同水平叶酸对肉牛产气量、瘤胃发酵和饲粮营养物质消化率的影响。[方法]试验采用双因素试验设计,分别在日粮中添加0、1.8、3.6、7.2、14.4 mg·kg~(-1)的叶酸,通过体外培养4、8、12、24、48h测定培养液产气量、pH值、挥发性脂肪酸(VFA)和氨态氮(NH_3-N)浓度,以及干物质(DM)和中性洗涤纤维(NDF)体外消化率,分析叶酸对产气量、瘤胃发酵和养分体外消化率的影响。[结果](1)日粮中补充3.6、7.2 mg·kg~(-1)叶酸显著提高了培养液产气量、TVFA浓度、DM和NDF体外消化率(P<0.05),显著降低pH值和NH_3-N浓度(P<0.05);(2)随着发酵时间的延长,瘤胃TVFA和NH_3-N浓度显著增加(P<0.05),瘤胃pH值显著降低(P<0.05),但瘤胃乙酸/丙酸比和各种挥发酸摩尔比无显著变化(P>0.05)。叶酸和时间互作效应对所有测定指标的影响均不显著(P>0.05)。[结论]日粮补充3.6 mg·kg~(-1)和7.2 mg·kg~(-1)的叶酸可以显著促进瘤胃发酵,提高产气量和养分消化率。     

产气量法研究不同植物提取物对瘤胃体外发酵的影响

为研究植物蜕皮甾酮、大蒜提取物、苍术提取物、桑叶提取物和牛蒡子提取物对瘤胃体外发酵的影响,试验利用体外产气量法设对照组(未添加组)和5个试验组,每种植物提取物的添加水平为1.5%,测定了发酵24和48h的DM消化率以及发酵96h的发酵参数。结果显示:1)和对照组相比,各试验组24hDM消化率无显著性差异(P0.05),植物蜕皮甾酮和大蒜提取物组48h的DM消化率显著高于对照组(P0.05);2)各植物提取物对96h产气量、理论最大产气量以及产气速率均无显著性影响(P0.05);3)各组之间pH无显著性差异(P0.05);植物蜕皮甾酮、桑叶提取物和苍术提取物组的NH3-N浓度显著低于对照组(P0.05);植物蜕皮甾酮和桑叶提取物显著降低了总挥发酸浓度(P0.05),而牛蒡子提取物显著提高了总挥发酸浓度(P0.05);各提取物均降低乙酸摩尔比,升高了丙酸的摩尔比,但差异不显著(P0.05)。添加上述提取物能够降低体外发酵NH3-N浓度、提高48hDM消化率,可以一定程度的改善瘤胃发酵模式。     

半胱胺对山羊瘤胃微生物体外发酵的影响

利用来自4头装有永久性瘤胃瘘管本地成年山羊的瘤胃液，以0．7g草粉和0．3g精料（由70％玉米＋30％豆粕组成）为底物，在体外厌氧条件下，研究了不同浓度的半胱胺（10mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L和500mg/L)对瘤胃微生物体外发酵的影响。结果表明：当培养液中半胱胺浓度为50mg/L时，培养液中氨氮浓度比对照组降低5．7％（P＜0．05），而微生物蛋白浓度、总挥发性脂肪酸浓度、丙酸比例和体外发酵总产气量分别比对照组提高66％（P＜0．05）、56％（P＜0．05）、6％（P＜0．05）和11．4％（P＜0．05），发酵总产气量和总挥发性脂肪酸浓度开始高于对照组，微生物蛋白在发酵5h后开始高于对照组。结果显示，半胱胺可促进山羊瘤胃微生物发酵。     

不同三聚氰胺添加量对高精混合饲料体外瘤胃发酵理化指标的影响

采用短期人工瘤胃发酵结合持续动态累积产气量记录技术,分析评价了不同三聚氰胺添加剂量对瘤胃微生物体外发酵的影响。采集西门塔尔×鲁西黄牛杂交肉牛瘤胃液,以高精饲料为底物,发酵72 h后测定对照组(0mg/kg)及试验组(2、6、18、54、162和486 mg/kg)的发酵液理化指标和发酵气体组合等。结果表明,添加2和6mg/kg三聚氰胺便可显著降低NH3-N、氨基酸态氮的产量(P<0.05),同时会显著降低挥发性脂肪酸产量(P<0.05),但对各脂肪酸组分含量影响不大,三聚氰胺可不同程度降低发酵总产气量,同时显著提高甲烷产生比例(P<0.05)。以上结果表明添加三聚氰胺,对NH3-N及氨基酸态氮的产生没有影响,结合挥发性脂肪酸指标可以看出其对微生物的代谢活动具有抑制作用,此外,它还促进了温室气体甲烷的产生,不仅浪费了饲料能量且不利于环境保护,因此,三聚氰胺不适宜作为反刍动物的非蛋白氮饲料添加剂。     

植物精油对尿素氮在瘤胃内容物中分布的影响

【目的】揭示尿素氮在奶牛瘤胃内容物中的分布特点,阐明精油对尿素氮分布和瘤胃发酵的影响。【方法】在含瘤胃液和15N尿素的发酵瓶中,加入终浓度为300 mg•L-1大蒜精油、茶树精油和尤加利精油,发酵后检测微生物中15N的丰度和瘤胃发酵指标,并利用DGGE刻画细菌群落变化。【结果】随着发酵时间的增加,瘤胃液中的尿素氮逐渐降低,而瘤胃固相和液相微生物中的尿素氮逐渐升高,发酵24 h 三者中的尿素氮基本持平。发酵24 h时,与空白对照组相比,大蒜精油处理组瘤胃固相和液相微生物尿素氮丰度分别降低了22.60%和18.75%,发酵液pH和氨氮浓度分别降低了3.02%和17.80%,异丁酸和乙酸/丙酸值有所升高。茶树精油和尤加利精油则显著降低了发酵液pH（P＜0.05）,提高了异丁酸和乙酸/丙酸值。DGGE图谱显示,发酵24 h时,3种植物精油可改变瘤胃细菌的群落结构。【结论】瘤胃尿素氮逐渐由瘤胃液向微生物中富集,大蒜精油可减缓尿素氮富集速度,改变细菌群落的组成,抑制氨氮生成。     

丁香油和MS-222对大泷六线鱼幼鱼的麻醉效果

为研究丁香油和MS-222麻醉剂对大泷六线鱼Hexagrammos otakii的麻醉效果,选择体质量为(83.3±7.8)g的大泷六线鱼幼鱼进行试验,根据大泷六线鱼被麻醉和复苏时的行为特征,将整个麻醉过程分为10期,其中麻醉6个时期,复苏4个时期。结果表明:丁香油浓度在50~100 mg/L、MS-222浓度在50~70 mg/L时鱼体均可在3 min内入麻并均可在5 min内复苏;当丁香油浓度≥100 mg/L、MS-222浓度≥70 mg/L时,鱼体在麻醉液中浸浴15 min后部分鱼体出现休克死亡;用丁香油麻醉鱼时,整个麻醉过程中鱼体的呼吸频率呈下降趋势,而用MS-222麻醉鱼时,鱼体在达到4期阶段后呼吸频率明显加快,但仅见鳃盖后缘小幅度张合;鱼体进入深度麻醉以后在空气中暴露时间越长,鱼体复苏所需时间就越长,用丁香油或MS-222麻醉的鱼体可在空气中分别暴露7、5 min。研究表明,丁香油和MS-222均对大泷六线鱼幼鱼有良好的麻醉效果,具有入麻时间短、复苏快的特点,两者均可作为大泷六线鱼理想的麻醉剂。     

添加不同水平烟酰胺对泌乳奶牛体外发酵的影响

采用体外发酵法,研究烟酰胺(NAM)添加水平对泌乳奶牛瘤胃体外发酵指标的影响,探讨NAM影响生产性能的机理.选取3头装有永久性瘤胃瘘管的泌乳荷尔斯坦奶牛作为体外培养的瘤胃液供体,采用单因素随机试验设计,共有5个处理,每种处理均设3个重复.其中,A组为对照组,仅以基础日粮为发酵底物,B、C、D和E组在基础日粮基础上分别添加3、6、9和12 mg/100 g NAM.结果表明,发酵4h内,pH值没有显著的变化(P＞0.05),发酵8h后,对照组和添加12 mg/100 g NAM组显著下降到正常水平下(P＜0.05).从原虫蛋白浓度来看,添加9和12 mg/100 g NAM组显著低于对照组,而添加3和6 mg/100 g NAM组数值上高于对照组,但是差异不显著(P＞0.05).综合分析得出结论:添加6 mg/100 g NAM,能够维持正常的pH值,促进瘤胃微生物生长,特别是瘤胃原虫的生长,这可能是生产中添加NAM能提高生产性能的原因.建议促进瘤胃体外发酵的烟酰胺的适宜添加剂量为6 mg/100 g.     

棉酚对瘤胃真菌和细菌体外发酵稻草活力的影响

体外研究了不同质量浓度5、20、40 mg/L棉酚对瘤胃厌氧真菌和瘤胃细菌发酵稻草活力的影响。瘤胃真菌发酵试验中,各处理组的底物消失率均显著低于对照组(0)(P<0.05)。产气量结果表明,20、40 mg/L两试验组的发酵明显滞后于其它各组,且发酵24 h和48 h的累计产气量显著低于对照组及51、0 mg/L试验组(P<0.05),说明20 mg/L和40 mg/L的棉酚可显著抑制瘤胃真菌的发酵。在瘤胃细菌发酵试验中,51、0 mg/L棉酚处理组的底物消失率与对照组(0)无明显差异,而20和40 mg/L棉酚处理组的底物消失率显著低于对照组(P<0.05)。累计产气量结果表明,各浓度水平的棉酚对瘤胃细菌发酵无明显的滞后效应。因此,瘤胃真菌对棉酚较为敏感,而瘤胃细菌对棉酚有较强的耐受能力,但高浓度的棉酚对细菌发酵活力有一定的抑制作用。     

特定氨基酸缺省底物对体外培养混合瘤胃微生物及其发酵的影响

 【目的】研究特定氨基酸在人工瘤胃体外培养条件下如何影响瘤胃微生物群系特征及其发酵。【方法】研究中以3只瘘管山羊作为瘤胃液供体,采用底物去除技术,底物设计分别为：全量必需氨基酸组（TEAA）,组氨酸、赖氨酸、蛋氨酸和支链氨基酸（BCAA）的缺省组。【结果】底物对培养液pH均值没有显著性影响,但各组pH值随时间的变化模式有所不同;培养液氨氮浓度较高,在10.99～30.51 mg/100 ml范围变动,各组氨氮浓度随时间的变化模式也有明显的不同;特定氨基酸缺省对微生物蛋白产量限制程度不同,以BCAA缺省对微生物蛋白产量的限制最大,相对于全量组混合微生物蛋白下降了44.52%。研究还发现底物对微生物区系也有一定的影响,原虫与细菌比值以赖氨酸缺省组最低（89.12%）,BCAA缺省组最高（127.60%）（P＜0.01）。另外,微生物的PCR-SSCP图谱显示微生物区系内的种属也因底物变化而发生了改变。【结论】底物氨基酸对瘤胃混合微生物群系及其发酵有一定的影响作用,支链氨基酸是瘤胃混合微生物生长所必需的氨基酸。     

双单倍体南瓜后代子叶离体再生植株研究

【目的】探索一种快速扩繁南瓜双单倍体植株的技术,以扩大双单倍体植株的数量,提高其育种效率。【方法】以双单倍体南瓜后代子叶为外植体,在MS培养基中分别添加不同质量浓度的6-BA（1.0,4.0 mg/L）和NAA（0.05,0.1,0.2,0.5,1.0 mg/L）,筛选最佳组合;在此基础上,继续添加不同质量浓度的2,4-D（0.5,1.0,1.5,2.0 mg/L）,筛选3种激素的最佳组合。在MS＋6-BA 4.0 mg/L＋NAA 0.2 mg/L的不定芽诱导培养基上,研究其对不同苗龄子叶的诱导效果。将不定芽接种在含不同质量浓度NAA (0.05, 0.1, 0.2, 0.5 mg/L)的MS生根培养基上,比较生根率和根系生长势。【结果】在诱芽培养基中,添加2种激素时,以6-BA 4.0 mg/L＋NAA 0.2 mg/L的MS培养基诱导率最高,为66.67％,分化系数为3.89;添加3种激素时,以6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L＋2,4-D 1.5 mg/L的MS培养基诱导率最高,达80.95％,分化系数为4.12。当子叶展开后苗龄为3 d时,不定芽诱导率相对较大,为77.42％。不定芽在MS+0.1 mg/L NAA培养基上生根效果最好,根系生长健壮,生根率达100%。【结论】双单倍体南瓜后代子叶离体再生的适宜激素质量浓度组合为MS＋6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+2,4-D 1.5 mg/L;以展开后3 d苗龄的子叶作为外植体诱导效果最好;MS+0.1 mg/L NAA是不定芽诱导生根的最适培养基。     

Effects of Limiting Amino Acids on Rumen Fermentation and Microbial Community In vitro

Three goats fitted with cannula were used to provide rumen liquor to investigate the effects of limiting amino acids on rumen fermentation and microbial community in vitro. The removal method was used in the current experiments. Treatments are total essential amino acid （TEAA）, His-removal, Lys-removal, Met-removal, and branch chain amino acid （BCAA）- removal. Results indicated that, pH-value ranged between 5.9 and 6.8, with the highest mean value for the group with BCAA-removal （6.54） in the culture. Concentration of NH3-N ranged between 10.99 to 30.51 mg 100 mL^-1, with the group of TEAA recording the highest average NH3-N concentration （17.85 mg 100 mL^-1）. Yields of microbial protein and limiting degree on microbial growth varied with treatments （P 〈 0.01）, and the lowest accrued in treatment with BCAA-removal （0.1389, 0.1772, and 0.3161 mg mL^-1 for bacteria, protozoa, and mixed microbes, respectively）, compared to the group with TEAA, microbial production of mixed microbes decreased by 44.52%. As for micro-flora, protozoa to bacteria ratio was the lowest for the group with Lys-removal （89.12%）, while the highest for the group with BCAA-removal （127.60%） （P 〈 0.01）. Furthermore, PCR-SSCP analysis revealed that, microbial profile subjected to substrates within bacteria and protozoa groups. It was therefore concluded that, dietary amino acid influenced both rumen fermentation and microbial characteristics.