奶牛初乳与常乳乳蛋白变化的比较蛋白质组学研究

为分析初乳与常乳乳蛋白的表达变化,揭示乳蛋白分泌及乳腺易感疾病的机理,采用二维凝胶电泳结合液相色谱串联质谱的方法分析了产后第1天、第7天和第21天牛乳中蛋白表达变化。结果发现,相对于第7天和第21天牛乳蛋白的表达丰度,第1天牛乳蛋白中有5个蛋白表达量增加;而第7天与第21天牛乳蛋白表达无变化。且第1天牛乳蛋白表达量增加的是具有免疫活性的免疫球蛋白M和G以及运输功能的白蛋白和转铁蛋白等。结果表明由初乳向常乳转换过程中,这些乳蛋白表达量的降低可能与乳腺易感乳房炎等疾病相关。     

胎次对泌乳初期奶牛低丰度乳蛋白表达的影响

采用二维凝胶电泳结合液相色谱串联质谱的方法分析了第一胎和第三胎奶牛,产后第1天和第21天乳蛋白表达的差异.结果表明,与初产奶牛第1天乳蛋白表达模式相比,第三胎奶牛第1天的乳蛋白表达图谱上有4个蛋白表达量上调;而两个胎次第21天乳蛋白的表达模式无差异.这些差异表达蛋白包括具有免疫活性的免疫球蛋白G、免疫球蛋白M、乳铁蛋白...     

重组GSTA3蛋白对福美双诱导的肉鸡TD中抗凋亡基因BAG-3表达的影响

【目的】肉鸡胫骨软骨发育不良（TD）是肉鸡常见的一种骨骼性疾病,研究重组GSTA3蛋白对福美双诱导的TD肉鸡软骨细胞中抗凋亡基因BAG-3表达的影响,为治疗TD提供新的思路和方法。【方法】将120羽1周龄肉雏鸡随机分为6组（编号为A、B、C、D、E、F组）。A、B、C组为基础日粮对照组,D、E、F组为添加福美双日粮诱导TD组。试验饲喂福美双2 d诱发TD,在添加福美双第1、3、5、7天,腿部肌肉注射重组鸡GSTA3蛋白和磷酸盐缓冲液,A组与D组注射（100 μg·kg ^-1）磷酸盐缓冲液;B组与E组注射低剂量（100 μg·kg ^-1）GSTA3;C组与F组注射高剂量（200 μg·kg ^-1）GSTA3。试验历时23 d。添加福美双后1、2、4、6、10和15 d采集胫骨生长板。通过Real-time qPCR检测BAG-3基因的mRNA水平,利用免疫组化来检测BAG-3蛋白表达水平。【结果】Real-time qPCR结果显示,TD损伤修复期内,相比较于基础日粮对照组,福美双对照组肉鸡胫骨生长板中BAG-3 mRNA的表达水平基本都显著上调（P<0.05）;相比较于福美双对照组,E和F组在第2、4、10、15天都有显著差异,且在第10和15天显著低于福美双对照组（P<0.05）,表明与D组相比恢复较快。免疫组化结果表明BAG-3蛋白在肉鸡胫骨软骨细胞的增殖区和前肥大区无表达,只在肥大区细胞质中表达;福美双组与空白对照组相比,BAG-3蛋白表达增加;福美双高低剂量组与未注射蛋白的福美双组相比,重组GSTA3增加了肥大区的蛋白表达水平（第10和15天）。【结论】在福美双诱导肉鸡发生TD的过程中,GSTA3重组蛋白能够通过调控BAG-3表达参与凋亡途径,抑制细胞凋亡。在TD损伤修复期,注射GSTA3后使抗凋亡基因BAG-3蛋白表达增强,从而可参与细胞凋亡来缓解TD损伤,使得肉鸡TD生长板功能较快地恢复正常。     

重组鸡GSTA3蛋白对福美双诱导的TD肉鸡血清中Bax含量的影响

为研究谷胱甘肽硫转移酶A3(GSTA3)对胫骨软骨发育不良(TD)肉鸡血清中凋亡因子Bax的影响,试验将90羽1日龄AA肉仔鸡预饲7 d后,随机分为6组(A,B,C,D,E和F组),分别在8,9日龄对D,E,F组饲喂添加100 mg/kg福美双的日粮,将饲喂基础日粮组(A,B,C组)和添加福美双日粮组(D,E,F组)的肉鸡各分对照组(A,D组)、重组GSTA3蛋白低剂量(20μg/kg)注射组(B,E组)和高剂量(50μg/kg)注射组(C,F组),在试验第8,10,12天腿部肌肉注射重组GSTA3蛋白,对照组注射稀释用PBS。在饲喂福美双后第1,2,4天分别采集各组肉鸡血液、分离血清,利用ELISA方法测定肉鸡血清中Bax的含量。结果显示,低剂量的重组GSTA3蛋白显著降低第2天基础日粮(B)组肉鸡血清中Bax的浓度,同时显著降低第4天福美双处理(E)组肉鸡血清中Bax的浓度;高剂量的重组GSTA3蛋白显著降低第4天基础日粮(C)组和福美双处理(F)组肉鸡血清中Bax的浓度。低剂量的重组鸡GSTA3蛋白对降低TD肉鸡血清中Bax含量的效果较好,这一研究将为肉鸡TD的防治提供新的方向和研究基础。     

牛初乳、常乳和免疫乳乳清中主要蛋白的SDS-PAGE分析

采集荷斯坦奶牛初乳、常乳和免疫乳,通过SDS-PAGE电泳对其乳清中的主要蛋白进行分析.结果表明:从SDS-PAGE电泳图谱上可见有5个清晰的条带,自上而下分别为乳铁蛋白、牛血清白蛋白、IgG重链、β-乳球蛋白和α-乳白蛋白.其中32d免疫乳和0～3d初乳可见有IgG轻链,其他乳样IgG轻链条带较弱.0～7d初乳乳清蛋白含量随泌乳天数的增加而逐渐下降,0～5d初乳乳清蛋白含量差异显著,并维持较低水平.免疫乳15和32d各乳清蛋白含量均高于常乳.     

‘荷斯坦奶牛’产后期乳汁差异蛋白质组学研究

【目的】为了比较‘荷斯坦奶牛’产后期乳汁中蛋白质组表达的差异.【方法】应用双向电泳(2-DE)技术构建荷斯坦奶牛分娩当天,分娩后7d,分娩后15d,分娩后28d和分娩后35d乳汁二维凝胶电泳图谱,凝胶经考马斯亮蓝染色后,以3倍以上的表达变化用PDQuest 8.0分析.【结果】在这5个不同的时期共发现了8种差异蛋白,经MADIL-TOF-TOF串联质谱法分析发现这8种蛋白分别是:α-S2酪蛋白前体、β-酪蛋白、κ-酪蛋白前体、免疫球蛋白重链前体、白蛋白、血清白蛋白前体、cGMP磷酸二酯酶的α亚基、角蛋白I型细胞骨架10.【结论】根据这几种蛋白质的已有文献研究和蛋白含量在不同时期的变化趋势,表明这些蛋白可能与初乳的被动免疫、物质运输和泌乳有关.     

饲粮中柠檬酸对妊娠期和哺乳期母猪性能,钙、磷消化率,乳成分及免疫球蛋白的影响

试验旨在确定柠檬酸(CA)对妊娠后期、哺乳期母猪全消化道粗蛋白质(CP)、钙(Ca)、磷(P)表观消化率(CTTAD),血液生化指标、初乳和常乳成分和免疫球蛋白的影响。将48只母猪(长白×大白,3.82±1.00)随机分为4个处理组(每个处理12头猪),分别添加CA 0、5、10、15 g·kg-1。试验在妊娠第90天开始,到哺乳期24 d结束,共48 d。在妊娠第107天、哺乳期0 d(分娩)、24 d(断奶)采血。在哺乳期第0天(分娩)和第14天收集初乳和奶样品。在哺乳期第20和21天收集粪样。结果表明,CA 15 g·kg-1组的CP和P的CTTAD显著增加(P0.05)。CA 10和15 g·kg-1组Ca的CTTAD显著增加(P0.05)。各处理对母猪和产子性能无显著影响(P0.05),包括母猪的平均日采食量(ADFI)、母猪体重(BW)产子数、出生窝重和仔猪增重的变化。在整个试验中,CA 10 g·kg-1组的血浆中Ca的浓度显著增加(P0.05)。添加CA提高了妊娠第107天血浆中磷的浓度(P0.05)。CA 15 g·kg-1组分娩和断奶时期血浆中的总蛋白、初乳和常乳中的总蛋白显著提高(P0.05)。CA 10和15 g·kg-1组提高了母猪血浆中IgG和IgA的水平。与对照组相比,CA 15 g·kg-1组初乳和常乳中免疫球蛋白显著提高(P0.05),常乳中IgG除外。因此,在妊娠后期和哺乳期饲粮中补充CA对母猪和产仔性能无显著影响。添加CA 10和15g·kg-1可以增强母猪对饲粮中Ca、P和蛋白质的吸收,提高母猪血液免疫功能,并且可以改善初乳和常乳对仔猪有益。     

昆虫激素对家蚕血淋巴和体壁酚氧化酶活性及其基因表达水平的影响

[目的]研究外源昆虫激素对家蚕酚氧化酶活性及其基因表达水平的影响,明确昆虫激素对酚氧化酶的调控作用,为深入解析家蚕酚氧化酶的功能及基因表达调控机制提供参考依据.[方法]对五龄第3d发育良好的家蚕幼虫注射蜕皮激素20E和保幼激素JH,以注射等量0.1%二甲基亚砜(DMSO)为对照,分别在注射3、6、12和24 h后解剖家蚕幼虫采集血淋巴和体壁,检测分析家蚕酚氧化酶活性及其基因表达的变化情况.[结果]注射外源JH和20E均能促进家蚕血淋巴酚氧化酶原基因PPO1和PPO2的表达,有效增加酚氧化酶活性.家蚕血淋巴PPO1和PPO2基因对JH和20E的响应时间存在一定差异,其中,经JH处理后2个酚氧化酶原基因(PPO1和PPO2)仅在处理6和12 h时显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)上调表达;而经20E处理后PPO1和PPO2基因从3 h开始一直持续到12 h均呈上调表达趋势.JH和20E对家蚕体壁PPO1和PPO2基因的影响恰好相反,具体表现为:JH能有效抑制家蚕体壁PPO1和PPO2基因的表达,降低酚氧化酶活性;20E则促进家蚕体壁PPO1基因上调表达,但不影响PPO2基因表达.[结论]家蚕酚氧化酶原基因PPO1和PPO2表达受JH和20E的调控,且激素对酚氧化酶原基因表达水平的影响与其酶活性变化规律一致,提示酚氧化酶不仅参与昆虫激素的代谢,还与激素协同调控家蚕的蜕皮变态.     

柠檬酸对小鼠脑组织bcl-2表达的影响

为了探讨柠檬酸对机体的毒副作用,选用昆明系健康雄性小鼠40只,随机分成4组,每组10只,饲养1周后,腹腔注射一定剂量的生理盐水及低(180mg·kg-1)、中(270mg·kg-1)、高(360mg·kg-1)质量浓度的柠檬酸溶液.每周注射1次,连续注射3周,第3次注射后的第7天,所有小鼠均颈椎脱臼处死,采取小鼠的脑组织分别于液氨和-20℃各保存1份备用.通过RT-PCR法和ELISA法分别检测小鼠脑组织中bcl-2基因表达水平和蛋白表达量.结果显示,柠檬酸处理组与对照组相比,bcl-2基因表达水平均无统计学上的差异(P＞0.05)；中剂量柠檬酸处理时,bcl-2蛋白的表达量达到最高值,且与对照组呈现显著差异(P＜0.05),上升了23％,柠檬酸高剂量组与中剂量组相比,bcl-2蛋白的表达量呈显著降低(P＜0.05)；其它组间均无统计学上的差异(P＞0.05).说明腹腔注射270mg·kg-1的柠檬酸可显著提高小鼠脑组织bcl-2蛋白的表达量；但本试验设置的柠檬酸梯度对bcl-2基因表达水平无显著影响.     

运输前后奶牛血清蛋白质组的变化

【目的】从血清蛋白组研究运输对奶牛机体的影响,充分理解运输对奶牛的生理病理影响及其潜在的作用机制提供理论依据。【方法】采用二维凝胶电泳（2-DE）结合MADIL-TOF-TOF串联质谱的方法对运输前第7天、运输后3 h和第7天奶牛的血清进行蛋白质组分析鉴定。【结果】运输可引起奶牛血清中14个蛋白点的表达丰度发生变化,有12个蛋白点得到有效鉴定。与运输前第7天相比,血清白蛋白、IgG1 重链恒定区、类型II细胞骨架I和转甲状腺素蛋白在运输后3 h表达量降低,而α1-酸性糖蛋白、结合珠蛋白、nesprin-2、微管微丝交联因子1、酪氨酸蛋白激酶Fps85D、输出蛋白5和一个未知蛋白点在运输后3 h的表达量升高;在运输后第7天,除α1 酸性糖蛋白外,上述蛋白的表达量与运输前第7天无显著差异。【结论】运输引起变化的蛋白主要涉及机体急性期应答和免疫反应、物质运输以及细胞内多个代谢途径,表明运输引起了奶牛应激。     

iTRAQ quantitative analysis of plasma proteome changes of cow from pregnancy to lactation

Dairy cows undergo tremendous changes in physiological, metabolism and the immune function from pregnancy to lactation that are associated with cows being susceptible to metabolic and infectious diseases. The objective of this study is to investigate the changes of plasma proteome on 21 d before expected calving and 1 d after calving from dairy cows using an integrated proteomic approach consisting of minor abundance protein enrichment by Proteo Miner beads, protein labeling by isobaric tags for relative and absolute quantification, and protein identification by liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry. Nineteen proteins were changed around the time of calving. These proteins were associated with response to stress, including acute-phase response and defense response, based on the proteins annotation. In particular, three up-regulated proteins after calving including factor V, α2-antiplasmin and prothrombin were assigned into the complement and coagulation pathway. These results may provide new information in elucidating host response to lactation and parturition stress, and inflammatory-like conditions at the protein level. Differential proteins may serve as potential markers to regulate the lactation and parturition stress in periparturient dairy cows.     

奶牛头胎产犊日龄与305d泌乳量的相关分析

[目的]探讨奶牛头胎产犊日龄对其产奶量的影响。[方法]以宁夏平吉堡奶牛场一分场系谱资料比较完整的50头奶牛头胎产犊记录为资料,对奶牛头胎产犊日龄与305 d泌乳量进行相关分析。[结果]50头奶牛头胎产犊日龄与305 d泌乳量的相关系数为0.4482,达显著水平(P<0.05),即奶牛头胎产犊日龄与305 d泌乳量呈中等正相关。305 d泌乳量(y)与产犊日龄(x)之间的回归方程为y=8.173x+11.460。在744~887 d之间产犊的奶牛,其305 d泌乳量随头胎产犊日龄的增加而增大,可以预测该时期内奶牛的产奶量。[结论]奶牛头胎产犊日龄对其305 d泌乳量有较大影响。     

布鲁氏菌病对荷斯坦牛泌乳性能的影响

[目的]研究不同产犊季节、胎次及泌乳阶段布鲁氏菌病对奶牛泌乳性能的影响。[方法]收集南方地区某奶牛场297头奶牛2014年的DHI生产性能测定记录,采用多因素方差法分析布鲁氏菌病阴性与阳性奶牛不同产犊季节、胎次和泌乳阶段对奶牛泌乳性能(日产奶量、体细胞数、体细胞评分、奶损失、尿素氮、产奶高峰日、90 d产奶量)的影响。[结果]不同产犊季节、胎次和泌乳阶段对奶牛的体细胞数、体细胞评分、奶损失、高峰日的影响达到极显著水平(P0.01),而对其他泌乳性能无显著影响。布鲁氏菌病对荷斯坦奶牛的日产奶量、体细胞数、体细胞评分、奶损失、产奶高峰日具有极显著影响(P0.01),对尿素氮和90 d产奶量的影响达到显著水平(P0.05),不同产犊季节、泌乳阶段、胎次、测定季节等对奶牛的生产性能均有一定的影响。[结论]该研究结果可为提高奶牛的泌乳性能及牛奶质量提供可靠的理论依据。     

菌草灵芝菌糟对奶牛生产性能和血液生化指标的影响

选取10头产奶量、胎次、泌乳天数和体重基本一致的荷斯坦奶牛,按单因素试验设计,随机分为对照组和试验组。每组5头,对照组饲喂基础日粮,试验组在饲喂的基础日粮中用1．5k·头-1·d-1菌草灵芝菌糟替代1kg·头-1·d-1甜菜粕,研究菌草灵芝菌糟对奶牛生产性能和血液生化指标的影响．结果表明：对照组和试验组奶牛的产奶量分别比试验前降低16．85％和14．29％,表明以菌糟替代部分甜菜粕可延缓泌乳中期奶牛产奶量降低的趋势;两组间的乳常规成分,血液中葡萄糖、胆固醇的浓度,总蛋白、白蛋白、球蛋白、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（1gM）的含量,白蛋白／球蛋白,谷丙转氨酶活性差异均不显著（P〉0．05）,试验组的血液尿索氮浓度与对照组相比降低13．26％,差异显著（P〈0．05）;试验后两组间的牛奶IgG含量差异不显著（P〉0．05）,但试验组与对照组相比有较明显的上升趋势,提高56．67％;试验组每头奶牛每年可节约饲料成本529．25元,经济效益明显．     

围产期奶牛血清中阴阳离子状况的分析

为了解围产期奶牛机体主要阴阳离子水平及其变化,在黑龙江某3个集约化奶牛场分别选取荷斯坦经产奶牛8头,分别在产前21 d、14 d,7 d、分娩当天、产后7 d、14 d、21 d尾静脉采血,并测定Cl、Na、K、Mg、Ca、P等离子血清浓度.结果显示围产期奶牛血清Cl、Na、K、P含量在分娩后呈现降低趋势;Ca含量呈分...     

过瘤胃甜菜碱对奶牛泌乳性能和生产性能的影响

实验选取黑龙江省大庆市某集约化奶牛场年龄、胎次、体况及泌乳量相近的健康奶牛40头,随机分为4组,每组10头,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组日粮中每头每天添加5、10和20 g过瘤胃甜菜碱,Ⅳ组为过瘤胃甜菜碱对照组。试验期从产前14 d至产后42 d,通过对试验奶牛产后乳蛋白（LP）、乳脂率（BF）、乳糖（SL）的分析,研究过瘤胃胆碱和甜...     

高产奶牛适宜干奶期长度研究进展

为分析缩短或取消干奶期在高产奶牛生产中的可行性和经济性,本文主要分析了2003—2020年有关干奶期长度对奶牛的泌乳、健康、繁殖力和经济效益影响的研究文献。结果表明:1)缩短干奶期至30d或取消干奶期可导致下一周期泌乳量下降,但分娩前额外的产奶量可部分弥补产奶损失。2)缩短或取消干奶期可显著改善奶牛泌乳初期的能量负平衡问题,且缓解由能量负平衡导致的代谢紊乱,提高奶牛繁殖力。奶牛健康水平和繁殖力提高带来的收益,可部分弥补产奶量降低带来的经济损失。3)缩短或取消干奶期对犊牛健康水平无显著影响。目前该干奶策略在实际生产中推广和应用仍需要更多的研究数据支撑,未来研究可聚焦于30或0d干奶期相匹配的饲养管理策略研发,适宜干奶期长度预测模型的建立和干奶期乳腺退化和乳腺组织更新的分子机制探究,为将来奶牛适宜干奶期长度的研究提供参考,也为实际生产中奶牛干奶期长度选择提供依据。