柞蚕蛹虫草水提物对人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响

研究柞蚕蛹虫草水提物（Aqueous extract from cordycep militaris of antheraea pemyi,AEoAPC）对人乳腺癌细胞MCF-7生长抑制与凋亡的作用.将不同浓度的AEoAPC分别作用于人乳腺癌细胞MCF-7 24、48、72 h后,应用倒置相差显微镜观察人乳腺癌细胞MCF-7的形态变化,噻唑蓝比色法测定细胞生长抑制效应,流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡率.结果表明：AEoAPC能显著抑制人乳腺癌细胞MCF-7的增殖,且在一定的浓度范围内呈时间和浓度的依赖性;形态学观察发现,细胞形状不规则、变暗、皱缩;FCM检测结果显示,作用72 h后G0-G1期（DNA合成前期）的细胞分布有所增加,使细胞阻滞于G2期（DNA合成后期）和S期（DNA合成期）;0.8g/L AE0-APC在24、48、72 h凋亡率分别为8.65％、14.20％、26.30％,其凋亡程度与时间呈正相关.说明AEoAPC能明显抑制人乳腺癌细胞MCF-7的生长,诱导其细胞凋亡.     

利用一化性柞蚕蛹培育蛹虫草的生产技术

河南省柞蚕区利用一化性柞蚕蛹可常年培育蛹虫草。介绍了培育蛹虫草所需的基础设施要求,概述了菌种的制备过程和蛹虫草的培育技术。     

利用一化性柞蚕蛹培育蛹虫草的试验初报

河南省是一化性柞蚕的适生地,柞蚕蛹资源丰富,可常年培育蛹虫草。试验表明,利用一化性柞蚕的滞育蛹培育蛹虫草,蛹体僵化的快慢与菌种的形态、菌液的稀释倍数、接种剂量有关;蛹体僵化和子实体生长的适宜温度18～27℃。     

不同品种柞蚕蛹培育蛹虫草其性状与成分含量比较

选择5个不同品种柞蚕蛹培育蛹虫草,通过观察检测柞蚕蛹虫草的生产性状、主要成分含量及SOD酶活力,为培育高品质的柞蚕蛹虫草筛选出更适宜的柞蚕品种提供依据。不同品种柞蚕蛹培育的蛹虫草其生产性状、主要成分含量及SOD酶活力均有差异,其中582和抗大的僵化率均在95%以上,子实体数量及鲜草重也明显高于其他品种(P<0.01),分别为23.7根和9.15 g, 22.36根和9.07 g;氨基酸总量和必需氨基酸质量分数从高到低依次为抗大、582、9906、青一、988;虫草素含量最高的是582,达到1 435 mg/kg,其次是9906,为1 320 mg/kg;腺苷含量最高的是988,达到1 070 mg/kg,其次是抗大,为1 021 mg/kg;虫草酸含量由高到低依次为582、抗大、988、青一、9906;虫草多糖含量最高的是抗大,9906品种最低;582品种的蛹虫草中SOD酶活力最高,达到394.0 U/g,其次是抗大,为313.0 U/g, 988最低,为274.0 U/g。初步认为,培育柞蚕蛹虫草最好选择582、抗大或9906柞蚕品种,可以生产出更高品质的蛹虫草。     

柞蚕蛹虫草的研究进展

蛹虫草作为一种药食两用的虫生真菌被深入研究,目前以柞蚕为寄主,人工栽培蛹虫草已经产业化.结合国内外研究现状,在人工培养、活性成分、药理作用及产品开发等方面,概括了柞蚕蛹虫草的研究进展.     

一化性柞蚕蛹虫草有效成分分析

测定了利用一化性柞蚕蛹培育的蛹虫草的部分营养成分及生理活性物质含量,并与野生冬虫夏草和野生蛹虫草进行了对比,结果表明：一化性柞蚕蛹虫草中氨基酸的含量高于野生冬虫夏草和野生蛹虫草,其主要的有效活性物质含量较高,重金属含量在国家规定的安全范围以内,并且不合铅元素,完全可以替代野生冬虫夏草或野生蛹虫草,可利用一化性柞蚕的蛹人工工厂化培育蛹虫草,以缓解市场的供需矛盾.     

河南一化性柞蚕蛹虫草产业化发展的可行性分析

讲述了蛹虫草的药用价值。从河南的资源条件、河南一化性柞蚕蛹虫草的营养成分、目前的培育技术、预期经济效益、现实社会所需和近年的产品开发等方面分析了河南一化性柞蚕蛹虫草实行产业化发展的可行性以及产业化发展所应克服的问题。     

采用固相分离与反相色谱法制备柞蚕蛹虫草虫草素

虫草素是蛹虫草中具有药用功能的活性成分。采用超声波技术获得柞蚕蛹虫草虫草素萃取液后,利用固相萃取柱对虫草素进行预分离,再利用反相制备型高效液相色谱监测制备虫草素。试验结果表明,采用固相萃取柱可以高效地分离柞蚕蛹虫草萃取液中的虫草素,虫草素洗脱液中的虫草素质量分数达47.05%,经反相高效液相色谱监测制备的虫草素样品纯度达到99%以上,其萃取、分离、制备工艺简单,具有实用价值。     

柞蚕蛹虫草在非产区的人工规模培育工艺的研究

对柞蚕蛹在非产区的人工规模培育条件进行研究,结果显示：在解决好柞蚕蛹的运输前提下,运用家蚕蛹虫草成熟的培育技术,完全可以在非产区实现规模培育,而且,在培育工艺方面,主要是培育容器和培育管理,有了进一步的改进。     

不同培育时期柞蚕蛹虫草的主要成分及其生物活性分析

对不同培育时期柞蚕蛹虫草的主要成分及生物活性进行比较分析,结果表明,在柞蚕蛹虫草的培育过程中,总氨基酸和总脂肪含量呈现减少的趋势,其中脂肪质量分数由22.5%降为1.7%,降幅达到92.4%;蛋白质质量分数则呈增加趋势,培养到第60天时蛋白质质量分数最高为72.54%;腺苷含量呈现先增加后降低的趋势,在第50天时达到最高;虫草酸、虫草多糖、虫草素和喷司他丁含量则呈增加趋势,第60天时达到最高;超氧化物歧化酶(SOD)活力到第40天时达到394 U/g,而后呈下降趋势;对DPPH自由基的清除能力亦在第40天时达到最高,清除率为95.83%;对羟基自由基的清除能力则在第50天时最高,清除率为89.63%。说明不同培育时期柞蚕蛹虫草的主要成分的合成和积累存在明显差异,对其生物活性可产生明显影响。     

蛹虫草多糖对注射环磷酰胺小鼠抗氧化功能的影响

试验旨在阐明蛹虫草多糖（CMP）对小鼠抗氧化活性的影响。选取90只雄性BALB/c小鼠,体重18~20 g,随机分为6组,3个CMP组（低、中、高CMP组）,模型对照组（CY组）、阳性对照组（PC组）及空白对照组（BC组）各1个。CMP组和CY组分别腹腔注射80 mg/kg环磷酰胺,连续3 d,然后3个CMP组分别灌胃给予17.5、35.0、70.0 mg/kg体重的CMP,BC组和CY组给予生理盐水,PC组灌胃给予70 mg/kg体重的CMP,持续18 d。于最后一次给药24 h后,采集小鼠内脏,测定心脏、肝脏及肾脏匀浆液中T-AOC、MAD、CAT、SOD和GSH-Px水平。结果显示,与CY组相比,3个CMP处理组小鼠内脏匀浆液中的SOD和T-AOC活性均极显著增加（P<0.01）,MDA水平极显著降低（P<0.01）;低剂量CMP组心脏CAT无显著变化（P>0.05）,中、高剂量CMP组心脏CAT水平分别显著（P<0.05）、极显著（P<0.01）提高;除低剂量CMP组肝脏GSH-Px活性显著增加（P<0.05）外,其余CMP组内脏GSH-Px活性均极显著增加（P<0.01）。本试验中CMP可以有效提高小鼠心脏、肝脏及肾脏的抗氧化活性,这为抗氧化新药的研发提供了借鉴。     

The Effect of Cordyceps Militaris Polysaccharides on the Antioxidant Function in Mice Injected With Cyclophosphamide

To investigate the antioxidant effects of the Cordyceps militaris polysaccharides(CMP),90 male BALB/c mice were randomly divided into six groups, three experimental groups (CMP groups), model control group (CY group), blank control group (BC group) and positive control group (PC group). The mice in CMP and CY groups were given cyclophosphamide at 80 mg/kg via intraperitoneal injection for 3 d. Then the CMP groups were administrated 17.5, 35.0 and 70.0 mg/(kg·BW) CMP via gavage, respectively, BC and CY groups were given physiological saline, and PC group was orally administered 70 mg/(kg·BW) CMP, lasting 18 d. At 24 h after the last administration, heart, liver and kidney were collected to measure the levels of MAD, CAT, SOD, GSH-Px and T-AOC in the homogenate.SOD and TAOC activity of three CMP groups increased significantly (P<0.01), and the level of MDA decreased significantly (P<0.01) compared with CY group. As for CAT activity of heart, the value in low-dose CMP group had no significant change (P>0.05), while in middle and high-dose groups had significant (P<0.05) and extremely significant(P<0.01) increase respectively. Except that the hepatic GSH-Px activity increased significantly (P<0.05) in low-dose CMP group, the rest values of GSH-Px activities in all CMP groups increased extremely significantly (P<0.01). The results indicated that CMP could effectively improve the antioxidant function of mice and had the potential to be a good resource of new antioxidant drugs.     

人工培养蛹虫草与冬虫夏草的主要活性成分比较

蛹虫草为珍稀中药材,基于为培养出含有类似天然冬虫夏草主要活性物质的蛹虫草提供基础依据的目的,对人工培养蛹虫草及菌丝体、子实体和冬虫夏草及菌丝体中的氨基酸、多糖、虫草素等活性物质含量与组成进行了测定,结果表明:人工培养蛹虫草与冬虫夏草在氨基酸种类上完全一致,但人工培养蛹虫草中赖氨酸、酪氨酸含量显著升高,组氨酸则显著降低;二者组成的多糖基本一致,但冬虫夏草特有一个分子质量约100 kD的组分,该组分占多糖总量的1.38%,人工培养的蛹虫草的虫草素含量显著高于冬虫夏草。以上成分的细微变化是否是造成二者药理活性差异的原因还有待研究。     

蛹虫草多糖提取及其免疫功能研究进展

蛹虫草多糖作为一种生理活性物质,能促进T淋巴细胞、巨噬细胞、白细胞的增殖分化,产生各种免疫活性因子,发挥免疫调节作用;还具有保护肝脏、肾脏、降血糖、抗衰老等作用,近年来日益受到人们的重视。本文概述了蛹虫草多糖的提取方法及其免疫功能的研究状况。     

蛹虫草中虫草素、腺苷综合提取工艺研究

以蛹虫草为材料,采用超声波水提法、超声波醇提法、水热回流法和醇热回流法4种提取方法,选择虫草素和腺苷的最优提取方法,并用正交试验方法考察超声波水提法中提取温度、提取次数、提取时间、料液比4个因素对虫草素、腺苷综合提取效率的影响,确定虫草素、腺苷综合提取最佳工艺。结果表明,超声波水提法是综合提取虫草素和腺苷的最优方法,其最佳工艺条件为:用10倍量的水于60℃超声波提取2次,每次40min。     

蛹虫草的人工培育、有效成分及药理作用研究进展

蛹虫草是由蛹虫草真菌(Cordyceps militaris)寄生在鳞翅目昆虫蛹或幼虫体上所形成的菌虫复合体。作为一种药用真菌,可作为冬虫夏草(Cordyceps sinensis)的代用品。就蛹虫草的生物学特性、培育技术、有效成分及其主要药理作用进行了综述,为有效地开发利用蛹虫草资源提供科学依据。     

蛹虫草培养残基中虫草素的水热回流提取及含量测定

【目的】 探究水热回流法提取蛹虫草培养残基中活性成分虫草素的最佳工艺参数。【方法】 选取液料比、提取次数、提取温度、提取时间4个因素进行单因素试验和正交试验,并通过高效液相色谱法（HPLC）测定虫草素含量,确定水热回流法提取蛹虫草培养残基的最佳工艺参数。【结果】 方法学验证结果表明,蛹虫草培养残基中虫草素含量的HPLC测定方法精密度、重复性、稳定性相对标准偏差（RSD）均<2%,准确度RSD为2.64%,标准曲线线性相关性高。正交试验结果显示,影响水热回流法提取效果的因素依次为提取时间、提取次数、液料比、提取温度,其中提取时间和提取次数对提取物虫草素含量均有显著影响（P<0.05）,提取温度和液料比影响不明显（P>0.05）。单因素试验和正交试验结果表明,蛹虫草培养残基的最佳提取工艺参数为：液料比25：1、提取次数5次、提取温度70 ℃、提取时间60 min,该提取条件下测得蛹虫草培养残基中虫草素含量为1.48 mg/g。【结论】 采用本研究确定的水热回流法最佳工艺参数能有效提取蛹虫草培养基活性成分,且操作简单实用,提取物活性成分得率稳定,为后续蛹虫草培养残基产品开发提供参考依据。     

Effects of Interference and Overexpression of DDR1 on Proliferation and Apoptosis of Mammary Epithelial Cells in Dairy Cows

The aim of this study was to investigate the effect of discoidin domain receptor 1 (DDR1) gene on the proliferation, apoptosis and cell cycle of dairy cow mammary epithelial cells through interfering and overexpressing DDR1. The small RNA interference fragment of DDR1 gene and overexpression vector pcDNA3.1-DDR1 were transfected into dairy cow mammary epithelial cells, qRT-PCR and Western blot were used to detect the interference and overexpression efficiency of DDR1; CCK-8 was employed to detect cell proliferation; Flow cytometry was performed to detect the changes of cell cycle and apoptosis (early apoptosis and late apoptosis). qRT-PCR was used to detect the expression of genes related to proliferation and apoptosis. After interfering DDR1 gene in dairy cow mammary epithelial cells, mRNA and protein expression levels of DDR1 were down-regulated by 94% and 30%, respectively; While after overexpressing DDR1 gene, its mRNA and protein expression were up-regulated 68.24 and 1.38 times, respectively. Interfering DDR1 extremely significantly inhibited the proliferation of cells (P<0.01), the ratio of early and late apoptotic cells was extremely significantly increased (P<0.01); the ratio of G1 phase cells in the interference group was extremely significantly increased (P<0.01), and the proportions of S and G2 phase cells were significantly decreased (P<0.01 and P<0.05), which suggested that the cells were blocked in G0/G1 phase. Conversely, overexpression of DDR1 could significantly promote cell proliferation (P<0.05), significantly inhibit the late apoptosis of cells (P<0.05), the proportion of G1 phase cells was extremely significantly decreased (P<0.01), and the proportion of S phase cells was extremely significantly increased (P<0.01), suggesting the enhancement of transition from G1 to S phase. The results of qRT-PCR detection showed that after interfering DDR1, the expressions of BAX and Caspase9 genes were significantly up-regulated (P<0.05), and the expressions of P53 and FAS genes were extremely significantly up-regulated (P<0.01), while the expressions of PCNA and CyclinB1 genes were significantly down-regulated (P<0.05). After overexpression of DDR1, the expressions of Cytc and BAX genes were significantly (P<0.05) and extremely significantly down-regulated(P<0.01), respectively, and the expression of CyclinB1 gene was extremely significantly up-regulated (P<0.01). In summary, DDR1 can regulate the proliferation, apoptosis and cycle of dairy cow mammary epithelial cells, this result will provide a reference for elucidating the molecular mechanism of DDR1 involved in the growth and development of dairy cow mammary epithelial cells.     

DDR1对奶牛乳腺上皮细胞增殖与凋亡的调控作用

旨在通过干扰或过表达盘状蛋白结构域受体1（DDR1）基因,探讨其对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡及周期的影响。本研究将DDR1基因小干扰RNA片段和过表达载体pcDNA3.1-DDR1转染奶牛乳腺上皮细胞,采用qRT-PCR和Western blot检测细胞中DDR1的干扰和过表达效果;利用CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡（早凋、晚凋）的变化;利用qRT-PCR检测增殖与凋亡相关基因的表达情况。结果,在奶牛乳腺上皮细胞中干扰DDR1基因后,其mRNA和蛋白表达分别下调94%和30%,而过表达DDR1基因后,其mRNA和蛋白表达分别上调68.24和1.38倍;干扰DDR1极显著抑制细胞的增殖（P<0.01）,细胞早凋与晚凋比例极显著上升（P<0.01）;干扰组G1期细胞比例极显著上升（P<0.01）,S期细胞比例极显著下降（P<0.01）,G2期细胞比例显著下降（P<0.05）,提示细胞阻滞在G0/G1期。相反,过表达DDR1能显著促进细胞增殖（P<0.05）,显著抑制细胞晚期凋亡（P<0.05）,G1期细胞比例极显著下降（P<0.01）,S期细胞比例极显著上升（P<0.01）,促进细胞由G1期向S期的转换。qRT-PCR检测结果显示,干扰DDR1后显著上调BAX、Caspase9基因的表达（P<0.05）,极显著上调P53、FAS基因的表达（P<0.01）,且显著下调PCNA、CyclinB1基因的表达（P<0.05）;过表达DDR1后,分别显著和极显著下调Cytc与BAX基因的表达（P<0.05,P<0.01）,并极显著上调CyclinB1基因的表达（P<0.01）。综上可见,DDR1能够调控奶牛乳腺上皮细胞的增殖、凋亡和周期,可为阐明DDR1参与奶牛乳腺上皮细胞生长发育的分子机制提供参考。