红鳍东方鲀体表溃烂病优势菌的分离、鉴定及治疗

2021年11月,辽宁大连某养殖场红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)出现死亡。通过对患病红鳍东方鲀病灶部位进行细菌分离培养、细菌革兰氏染色、以及细菌16S rDNA序列分析,从患病红鳍东方鲀中共分离出3株优势菌且均为弧菌,分别为哈维弧菌(Vibrio harveyi)、大菱鲆源弧菌(V.scophthalmi)、费氏弧菌(Aliivibrio fischeri)。药敏检测结果表明,费氏弧菌对复方新诺明、氟苯尼考、多西环素3种抗生素敏感;大菱鲆源弧菌仅对恩诺沙星敏感;哈维弧菌对环丙沙星、复方新诺明、氟苯尼考、多西环素、恩诺沙星5种抗生素敏感。3种优势菌对16种抗生素的药物敏感实验结果表明3种优势菌均为多重耐药菌。结合药敏实验结果与相关研究,推荐联合多西环素与山苍子植物精油对红鳍东方鲀体表溃烂病进行防治。     

哈氏弧菌胞外产物对红鳍东方鲀的致病性

采用平板玻璃纸覆盖技术提取哈氏弧菌(Vibrio harveyi)H-06091菌株的胞外产物(ECP),通过肌肉和腹腔注射2种方式研究其对红鳍东方鲀(Fugu obscurus)的致病性。采用双层纸片法对其主要酶成份进行初步研究;测定其对绵羊红细胞和红鳍东方鲀红细胞的溶血活性;将哈氏弧菌在不同温度下(15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃)培养36h和25℃下培养不同时间(12h、18h、24h、36h、48h、60h、72h)后提取其胞外产物并对其蛋白质含量进行测定;经SDS-PAGE分离粗提胞外产物中蛋白成分,并用Dot-ELISA和Western-blot方法对其成分进行分析。实验结果显示,该胞外产物对红鳍东方鲀具有致病性;具有淀粉酶和酪蛋白酶活性,不具有卵磷脂酶、脂肪酶和明胶酶活性;对红鳍东方鲀红细胞有溶血活性,对绵羊红细胞无溶血活性;胞外产物蛋白质总含量在35℃培养36h后出现高值,与温度变化无明显相关性;25℃下培养24h、36h和48h的粗提胞外产物经SDS-PAGE分离,有3条蛋白质条带最明显,分子量分别约为31kD、38kD、60kD;其中分子量约为60kD蛋白条带,经Dot-ELISA和Western-blot方法证实其为半胱氨酸蛋白酶-1。根据以上结果认为哈氏弧菌H-06091菌株胞外产物含有多种毒力因子,与该菌的致病性密切相关。     

红鳍东方鲀与假睛东方鲀的养殖对比观察

1996年6月～1997年6月,在基本相同的条件下对红鳍东方与假睛东方的生长速度、饲养成活率、体型与体态和行为习性等方面的差异进行了对比观察试验。试验结果表明,红鳍东方的生长速度比假睛东方快,饲养成活率比假睛东方高13．2％－15．6％。外部形态色泽较稳定,而假睛东方变异较大。红鳍东方平均游速为0．5m／s,集群游动性较强,假睛东方平均游速为为0．33m／s,性较凶残,体型较丰满。二者都具有广盐性,但都不适于长期在纯淡水中生存。二者的最适水温均为16－23℃。     

红鳍东方鲀F_1代混养群体的基因型鉴定及QTL分析

利用微卫星标记的方法,分别对3个家系红鳍东方鲀的基因型进行鉴定,并通过此方法对3个家系混养后的混合群体进行区分,利用区分的结果与混合群体的生长性状指标进行QTL分析,结果为F0041中的基因型153/150,标记F0254中的基因型325/335,标记F0220中的基因型175/189,标记F0254中的基因型325/335与河鲀的体长、体质量表型值正相关,标记F0041基因型153/143,F0151标记中的250/250基因型,标记F0157中的基因型167/198,标记F0220中的基因型175/205与河鲀的体长、体质量表型值负相关.以期采用此方法能够为今后的亲子鉴定、个体识别及家系识别提供理论基础.     

通过性腺形状和颜色鉴定红鳍东方鲀的性别

随机采集体长18~20cm、体重200~250g的红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)44尾,解剖观察并记录性腺组织外观,然后利用组织切片技术鉴定个体的性别。结果表明:性腺为细长条状且呈乳白色的个体为雄性个体,而性腺为袋状且呈淡红色的个体为雌性个体,且样本群体中的雌雄性别比例为1∶1。本研究结果为通过性腺外观形状和颜色即可准确鉴定体长为20cm左右的红鳍东方鲀的性别提供了参考依据。     

福尔马林药浴防治红鳍东方鲀异沟虫病的研究

异沟虫是红鳍东方鲀常见寄生虫之一,对红鳍东方鲀养殖业危害极大.为有效防治异沟虫病,在观察异沟虫虫卵孵化规律的基础上,研究评价福尔马林药浴对异沟虫的杀灭效果及其对红鳍东方鲀的安全性,形成红鳍东方鲀异沟虫病的防治方案.试验结果发现,异沟虫虫卵的孵化过程大致可分为孵化初期、孵化中期、孵化后期和破卵4个阶段,在17～19℃条件...     

刺参与红鳍东方鲀的生态混养效果

为了丰富海参池塘养殖的混养种类,实验对刺参和红鳍东方鲀的生态混养效果进行了研究。结果显示,经过100 d的混养实验,红鳍东方鲀平均日增重率为1.07 g/d,特定生长率为4.06%/d,混养组与单养组红鳍东方鲀没有显著差异;但混养条件下刺参的生长状况显著优于单养条件下刺参的生长状况。与红鳍东方鲀混养组刺参平均日增重率为(0.11±0.04)g/d,特定生长率为(0.67±0.20)%/d。单养组刺参平均日增重率为(0.04±0.02)g/d,特定生长率为(0.35±0.19)%/d。研究表明,刺参池塘混养红鳍东方鲀模式下,红鳍东方鲀在正常快速生长的同时,可以有效促进刺参的生长,研究结果可以为刺参池塘的生态复合养殖提供参考依据。     

红鳍东方鲀异沟虫病的诊断与防治

2003年5月间,宁德市三都镇一家网箱养殖的2万多尾红鳍东方魨发生大量死亡,规格都在300克左右,病情发展十分迅速,从刚发病开始只有几百尾,经过2～3天,50％以上都发病,而且     

红鳍东方鲀3个白介素基因的序列特征及表达分析

本试验分析体质量(190.34±2.13)g的红鳍东方鲀白介素基因IL-1b、IL-8和IL-10的序列特征,检测其在红鳍东方鲀脑、鳃、心脏、肌肉、肝脏和脾脏中的表达,以及每尾红鳍东方鲀注射密度1×107 cfu/mL的哈维氏弧菌菌液0.1 mL后0、12、24、48 h在肝脏和脾脏中的表达.试验结果表明,IL-1b、...     

在循环水养殖系统中养殖密度对红鳍东方鲀应激反应和抗氧化状态的影响

养殖密度是影响养殖水体水质和鱼类生长性能的重要因素。通过红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)循环水养殖试验和硝酸盐氮急性处理试验,分别研究不同养殖密度(12.5~20.0 kg/m^3)和不同硝酸盐氮质量浓度(1.0、25.0、100.0和150.0 mg/L)对养殖水体水质、红鳍东方鲀生长性能、应激反应和抗氧化状态的影响。结果显示:不同养殖密度对红鳍东方鲀养殖水体的pH、氨氮和亚硝酸盐氮质量浓度无显著性影响,但较高密度会导致硝酸盐氮质量浓度显著升高,最高升至24.5 mg/L。在较高养殖密度条件下,红鳍东方鲀的生长性能(终体质量、特定增长率和饲料转化率)和抗氧化能力(总抗氧化能力、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶)较弱,但其脂质过氧化(丙二醛)和应激反应(葡萄糖、乳酸和皮质醇)较强。此外,在硝酸盐氮急性处理试验中,红鳍东方鲀未出现死亡。当硝酸盐氮质量浓度为100.0和150.0 mg/L时,红鳍东方鲀抗氧化能力较弱,而应激反应较强。综上,当养殖密度为16.5 kg/m^3时,红鳍东方鲀的生长和抗氧化状态较好,且应激压力较小,这表明在较高密度条件下,养殖水体硝酸盐氮质量浓度的升高不是引起鱼类生长抑制的主要原因。     

温室养殖暗纹东方鲀毛霉菌的鉴定、致病性和病理学研究

取温室养殖的1龄患真菌病暗纹东方(Takifagu obscurus)进行观察,患病暗纹东方体质量(25±3)g,体表出现点状白斑,变成黄棕色,形成环状苍白圈,病灶中心溃疡糜烂,可延伸至肌肉,死亡率达100%。病原菌分离和培养观察显示,菌丝粗大、无隔、分枝、革兰氏染色呈阳性的真菌菌丝,适宜培养条件为Sabouraud培养基37℃,24 h菌丝顶端有淡黄色球形孢子囊;72 h出现气生菌丝,孢子囊成熟,释放卵圆形孢囊孢子。根据Ainsworth(1973)真菌分类系统可初步鉴定为毛霉菌(Mucorsp.)。人工感染试验表明,该菌孢子可通过注射及创伤感染方式感染健康暗纹东方,出现与自然发病相同的症状,20 d死亡率达100%;对实验小鼠有较强的致病力。药敏试验以制霉菌素和两性霉素B最为敏感,抑菌质量浓度为6.0~24μg/mL;碘化钾和5-氟胞嘧啶其次。病理组织学检查显示,菌丝着色呈蓝色、分支、呈直角;菌丝侵入肌肉组织引起变性坏死、间质水肿;小血管有大量杆状或球状粗大菌丝,引起栓塞。     

暗纹东方纯非01霍乱弧菌的鉴定及毒力基因检测

在对养殖暗纹东方纯病害调查中，从呈典型症状病鱼腹腔和肠道粘液中分离到2株（J-1和H-3）菌株，经生化特性和血清型鉴定为非01群霍乱弧菌（Non-01 Vibrio choleroe）。注射、创伤和浸泡3种方式进行人工感染试验表现出较强的致病性，出现症状与自然发病鱼相同。为进一步确认分离菌株的分类地位，使用P1、P2引物，以非01群霍乱弧菌N92001菌株和01群霍乱弧菌N16961菌株为对照，对分离菌株进行阳t扩增，得到451bp的DNA片段。根据现有霍乱弧菌肠毒素ctxA基因序列设计引物P3，P4，以N16961菌株为阳性对照，阳t扩增结果均得到大小为400bp的DNA片段。在对H-3菌株的扩增片段进行纯化、克隆和测序，得到407bp序列，该菌株与N16961菌株中肠毒素ctxA基因序列的完全一致，证实该片段源于ctxA基因。进一步说明从暗纹东方纯体内分离到的J-1和H-3菌株具有霍乱肠毒素ctxA，有一定的致病力。     

暗纹东方鲀几种常见病原菌防治药物的筛选

为预防和治疗暗纹东方鲀养殖过程中出现的各类细菌性病害,从各地养殖的患病暗纹东方鲀的肝脏、脾脏等部位及腹水中分离出10株不同种属的病原微生物,分别属于豚鼠气单胞菌、温和气单胞菌、脆弱气单胞菌、嗜水气单胞菌、霍乱弧菌、海鱼弧菌、副溶血弧菌、梅氏弧菌、肺炎克雷伯菌、类志贺邻单胞菌。具有一定的普遍性和代表性。并对致病菌进行防治药物的筛选,药敏试验结果表明新霉素和氟嗪酸等对暗纹东方中存在的病原菌具有普遍的杀灭效果。     

多糖和益生菌对暗纹东方鲀免疫功能的调节

为了研究多糖、益生菌等免疫增强剂对暗纹东方的免疫调节作用,本试验随机将暗纹东方[(167.8±24.4)g]分为6组。其中阳性对照组为免疫功能低下组,投喂基础饲料、注射8mg.kg-1体重的环磷酰胺;阴性对照组为免疫功能正常组,投喂基础饲料、注射生理盐水;其余试验组分别用含有0.2%壳聚糖、0.1%益生菌、甘露聚糖与益生菌混合物、壳聚糖与益生菌混合物的饲料连续投喂30d,同时注射8mg.kg-1体重的环磷酰胺。测定各组暗纹东方的外周血白细胞数量及吞噬活性、肝胰脏溶菌酶活性、头肾与脾脏淋巴细胞转化、头肾与脾脏IFN-α含量、头肾与脾脏IgM含量进行免疫功能的比较。结果表明,多糖和益生菌对免疫功能低下的暗纹东方具有免疫调节作用。所检测的各项免疫指标均有不同程度的恢复,或处于免疫功能正常与环磷酰胺所致免疫抑制水平之间,或恢复至正常水平或超过正常水平。不同免疫增强剂对同一种免疫器官、免疫细胞或免疫分子的调节作用或同一种免疫增强剂对不同的免疫器官或免疫细胞或免疫分子的调节作用均存在差异。从整体效果看,在所研究的4种免疫增强剂中,甘露聚糖与益生菌混合物的免疫调节作用最弱。     

一株斜带石斑鱼（Epinephelus coioides）病原菌的分离与鉴定

2011年7月,福建省晋江某养殖场养殖的斜带石斑鱼( Epinephelus coioides )发病,病鱼体重3~10 g,症状为鱼体色变深,拒食,离群缓慢游动,背鳍下方局部鳞片脱落、表皮溃烂,肝脏点状发红。2011年7月从濒死病鱼肝脏、肾脏中分离到2株细菌,分别命名为201107-I与201107-II,经生理、生化指标和16S rRNA 基因鉴定,这两株均为哈维氏弧菌( Vibrio harveyi )。毒性实验发现这两株菌都能引起斜带石斑鱼表皮溃烂症,其中201107-II毒性较强,被用于后续感染实验。通过肌肉注射、腹腔注射与创伤浸浴3种方式进行回归感染实验,得到3种方式对石斑鱼的半致死量LD50分别为4．3×104、2．9×105和5．4×106 cfu/g鱼体重。从人工感染的石斑鱼肾脏中再次分离到该菌,经生理、生化指标和16 S rRNA 基因鉴定,为同株菌。药敏实验结果表明,该菌株对红霉素、大观霉素、氯霉素等16种抗生素高度敏感,对呋喃唑酮、克拉霉素、环丙沙星等9种抗生素中度敏感,对苯唑西林、青霉素G、万古霉素等13种抗生素不敏感。本研究对石斑鱼病害防治与健康养殖具有一定的指导意义。     

塘养一龄与二龄暗纹东方鲀鱼体的生化组成

对池塘养殖暗纹东方 (Fuguobscurus)的一龄鱼 (体重 40～ 80g)、二龄鱼 (体重 2 0 0～ 30 0g)鱼体的生化组成进行了比较分析。结果表明 :二龄鱼的粗蛋白含量低于一龄鱼 ,而粗脂肪含量则明显高于一龄鱼 ;在必需氨基酸中 ,二龄鱼除了赖氨酸、精氨酸含量明显高于一龄鱼外 ,其余氨基酸的含量几乎都低于一龄鱼 ,且它们的组成比例较接近 ,在非必需氨基酸中 ,一龄鱼、二龄鱼均以谷氨酸的含量为最高 ,分别占非必需氨基酸的 2 6 .5 4%和 2 6 .6 9% ;在脂肪酸的组成上 ,二龄鱼的单烯酸的含量都比一龄鱼高 ,尤其是C18∶1含量比一龄鱼高 12 .2 3 % ,而饱和脂肪酸、多烯酸的含量则一龄鱼比二龄鱼含量高 ,尤其是DHA的含量比二龄鱼高 4.43 % ;在测定的 14种矿物元素中 ,二龄鱼的Ca、Zn的含量明显高于一龄鱼外 ,其余元素的含量略低于或接近一龄鱼。     

暗纹东方鲀精、卵超微结构及精子入卵早期电镜观察

本文对暗纹东方精、卵结构和精子早期入卵进行了电镜观察。观察结果：精子为鞭毛型结构,头部两端呈椭圆长柱形,核凹窝较深,颈部含８个线粒体,尾部微管束为“９＋２”结构,双尾丝裸露;卵为圆球形,卵膜表层有许多嵴、沟、微孔和一个受精孔;受精方式为单精或多精入孔入卵,单精受精。本文还对受精方式、人工繁殖技术等进行了讨论。     

暗纹东方鲀卵巢氨基酸组成分析

本文采用美国WatersHPLCPicoTagTM氨基酸分析技术对暗纹东方卵巢的氨基酸组成进行了分析。结果表明暗纹东方卵巢含有18种常见氨基酸,其中含有人体必需氨基酸8种,占氨基酸总量的38．61％,谷氨酸含量最高．占总量的12．58％。     

花鲈弧菌病病原菌（哈维氏弧菌）的分离与鉴定

1999年4－5月，山东省青岛市胶南海区网箱养殖场花鲈（Lateolabrax japonicus)幼鱼发生暴发性传染病，死亡率达50％。从具有明显症状的病鱼的病灶组织分离到1株优势菌SF－1，经人工感染和从人工感染发病的花鲈再分离的SF－3菌株的再感染试验结果表明，所分离的菌株为此次花钙烂层病的致病菌，经形态、生理生化等64项特征指标鉴定，SF－1和SF－3均为哈维氏弧菌（Vibrio harveyi)。药敏试验结果表明，头孢噻肟，头孢三嗪，头孢孟多，呋喃妥因，氯霉素,氧哌嗪青霉素，磺胺类，复方磺胺、三甲氧苄氨嘧啶，多粘菌素E等10种药物对该菌株有明显的抑制作用。