高抗根结线虫病海洋链霉菌的初步筛选

由根结线虫(Meloidogynespp.)引起的植物根结线虫病在全球范围内普遍发生,严重威胁蔬菜、烟草、花生等各种农作物的生长[1,2]。根结线虫在无寄主植物存在的条件下,仍可存活3年之久。当气温达到10℃以上时,孵化出的二龄幼虫伺机从根毛或根部皮层侵入植物根部,从而危害植物的生长,并能刺激寄主细胞加速分裂,使受害部位形成根瘤或根结[3]。至今已发现了90余个杀线虫菌物毒素,包括来自子囊菌、担子菌、半知菌、接合菌及其生物活性代谢产物[4]。海洋具有丰富的微生物资源,因此,从海洋中筛选高抗根结线虫病的海洋链霉菌,从其发酵液中提取大量具有…     

青霉菌Snef1216发酵液诱导番茄抗南方根结线虫研究

 通过Snef1216发酵液处理番茄根系和包衣种子,研究番茄抗南方根结线虫的组织病理学变化和作用方式。结果显示:处理番茄根系且接种15 d,应答根系内根结线虫的数量减少47.5%,且巨细胞出现空泡;包衣番茄种子,接种4、8和12 d,根系内2龄幼虫分别减少54.1%、3.4%和41.7%,接种10、20和30 d,根系内2龄、3龄、4龄幼虫和雌虫的数量也均比对照组番茄明显减少。表明Snef1216发酵液诱导了番茄对南方根结线虫的抗性。     

石榴枯萎病菌拮抗放线菌对南方根结线虫的毒力

从云南蒙自万亩石榴园、建水石榴园采集的土样中分离筛选得到对石榴枯萎病菌有较强拮抗活性的放线菌,其中菌株JS1对石榴枯萎病菌的室内抑菌半径为11mm。测定了菌株JS1发酵液对南方根结线虫的抑杀活性,结果表明,50%JS1菌株发酵液处理南方根结线虫卵6d,卵孵化率与对照相比降低了51.67%;50%JS1菌株发酵液处理南方根结线虫2龄幼虫72h,2龄幼虫的校正死亡率增加了88.10%;菌株JS1兼有拮抗石榴枯萎病菌及抑杀南方根结线虫的活性。结合菌株JS1在鉴定培养基上的培养特征、形态学观察及16SrDNA序列分析,将JS1初步鉴定为壮观链霉菌(Streptomyces spectabilis)。     

茶炭疽病拮抗链霉菌的筛选鉴定与拮抗能力测定

茶炭疽病是茶树的一种重要叶部病害,发生时严重影响茶叶产量和品质,给茶叶生产带来经济损失。为获得对茶炭疽病菌刺盘孢菌Colletotrichumcamelliae具有良好拮抗效果的链霉菌,采用稀释涂布平板法从茶园根际土壤中分离放线菌菌株,利用平板对峙法筛选具有较高拮抗活性的菌株;结合其形态特征、培养特征、生理生化特性和分子生物学对其进行种属鉴定;采用扫描电镜观察菌株JS4-F对茶炭疽病菌的生长抑制作用,离体叶片法和盆栽防效测定其发酵液对茶炭疽病的室内防治效果,平板对峙法测定其抗菌谱。结果表明,分离筛选获得一株对茶炭疽病菌具有较好拮抗作用的菌株JS4-F,根据该菌的形态特征、生理生化特性初步将其鉴定为链霉菌属,通过联合16S rRNA、gyrB、ropB、recA、trpB基因测序结果构建系统发育树,JS4-F菌株被鉴定为藤黄生孢链霉菌Streptomyces luteosporeus。菌株JS4-F对茶炭疽病菌的拮抗效果达75.59%,扫描电镜表明其能使茶炭疽菌菌丝畸形、皱褶、菌丝之间相互缠绕;氮源利用试验表明,菌株JS4-F能利用L-精氨酸、L-甘氨酸、L-丙氨酸、L-色氨酸,能在6%...     

根结线虫拮抗放线菌的筛选及菌株HA10002的鉴定与活性物质分析

为了筛选获得对根结线虫具有拮抗能力的强活性放线菌菌株,并从菌株中发现新的杀线虫活性化合物,从海南东寨港红树林采集海泥样品9份,从五指山原始森林等地采集土壤样品51份,用平板稀释法对海泥和土壤样品进行分离;以南方根结线虫2龄幼虫为靶标线虫,采用24孔细胞培养板液体线虫法进行初筛和复筛;根据形态特征、培养特征、生理生化特征和16S rDNA序列对复筛出的活性菌株进行鉴定;菌株发酵液经溶媒萃取、硅胶柱层析、Sephadex LH 20凝胶过滤和制备薄层板层析,采用活性跟踪法从中分离纯化杀线虫活性化合物;化合物经光谱及波谱分析和文献对照,进行结构鉴定。从60份样品中分离得到356株菌落形态有差异的放线菌。初筛得到16株对根结线虫校正死亡率在80%以上的菌株,复筛获得3株线虫校正死亡率在95%以上的菌株,其中分离自海泥样品中的菌株HA10002抗线虫活性最强,发酵原液的校正死亡率达100%。HA10002经鉴定为白浅灰链霉菌,从其发酵液中分离获得2个活性化合物,其中A26 3为Nocardamine,A22 1的结构正在进一步鉴定中。上述结果表明,筛选出的放线菌HA10002能合成2种以上杀根结线虫的活性代谢产物,是一株遗传稳定且具有开发潜力的活性菌株。     

南方根结线虫生物防治研究进展

本文对南方根结线虫生防因子食线虫真菌、细菌、放线菌、杀线植物的种类,及其生防因子对线虫的作用方式等进行概述。     

拮抗南方根结线虫PKS基因的筛选及活性评价

土壤环境中蕴藏着巨大的微生物资源,而99%的土壤微生物不能用传统的纯培养。本研究基于西藏米拉山高寒草甸土壤微生物宏基因组Fosmid文库,采用PCR方法从文库中筛选PKS基因,以南方根结线虫(Meloido-gyne incognita)为靶标测定其杀线活性,并验证温室盆栽防效。从Fosmid文库中筛选得到2个含PKS基因的克隆K99和K82。K99属于Ⅰ型PKS,K82属于杂合PKS/NRPS;K99发酵液、热处理发酵液浸泡南方根结线虫J2 12 h后,杀线活性为100%。温室盆栽防效结果表明,K99的发酵菌液对南方根结线虫的防效为89%。K99能产生一种外分泌有杀线活性的物质,其热稳定性好,具有重要的开发利用价值。     

陕西省蔬菜根结线虫拮抗真菌的分离与初步鉴定

为了了解陕西省内的根结线虫生防资源,筛选更好的根结线虫生防菌,在陕西省9个县市采集了118份感染根结线虫的蔬菜植株根部样品,采用直接分离法从根结线虫卵、卵囊及雌成虫体上共分离到199株拮抗真菌.除43株不产孢及疑难种未鉴定外,其余分属于镰刀菌属、拟头孢霉属、芽枝霉属、拟青霉属、链格孢属、掘氏梅里霉属、单顶孢属、青霉属等22个属.其中镰刀菌属、拟头孢霉属及芽枝霉属真菌出现频率较高,约占总分离数的53%,且不同地区间拮抗真菌的种类与数量也存在较大差异.     

根结线虫幼虫致病细菌的筛选

根结线虫 ( Meloidogynespp.)是危害农作物的重要病原之一 ,半个多世纪以来 ,对根结线虫病的防治均以化学为主。但由于多年来连续使用化学杀线剂 ,线虫抗药性增强 ,虫口密度回升快 ,因此 ,根结线虫的生物防治越来越受到重视。作者从 1 995年起 ,开展了根结线虫幼虫致病细菌的筛     

防治南方根结线虫的根瘤内生细菌的筛选及鉴定

根结线虫的严重发生给农作物生产造成巨大经济损失,生物防治是控制该病的一种安全有效措施。本研究从448株根瘤内生细菌分离株中筛选出3株对南方根结线虫有较好防效的生防细菌Sneb1994、Sneb1995和Sneb2000,3个菌株发酵滤液对南方根结线虫2龄幼虫（J2）均有高毒杀活性,处理24 h校正死亡率达85%以上,同时对卵孵化具有抑制作用,并可促进番茄种子生长。盆栽试验结果表明,3个菌株发酵液灌根处理均能显著减少根结数和卵囊数,相对防效为37.95%~44.51%,同时促进番茄植株的生长。经形态特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析,鉴定菌株Sneb1994、Sneb1995和Sneb2000分别为氧化微杆菌Microbacterium oxydans、油菜假单胞菌Pseudomonas brassicacearum和蜡样芽胞杆菌Bacillus cereus。氧化微杆菌为首次报道对根结线虫有效的生防菌株。这些根瘤内生细菌菌株的发掘,为植物线虫病害的生物防治提供了新的微生物资源。     

有机酸类化合物对南方根结线虫的生物活性

采用室内离体测定方法,测试了15种有机酸对南方根结线虫(Meloidogyne incognita) 2龄幼虫致死率和卵孵化抑制率。结果表明,甲酸和丙酸对2龄幼虫和卵的生物活性最高,明显优于其他供试有机酸,但是活性低于对照药剂阿维菌素。对生物活性结果及有机酸化学结构进行比对发现,小分子量化合物对南方根结线虫具有较高生物活性。     

毒杀南方根结线虫的木霉种类鉴定及活性研究

木霉是国际上研究与应用非常普遍的生防真菌之一,具有重要的科研价值和广阔的应用前景。本研究采用形态学鉴定、ITS和β-tubulin序列分析法对4株具有杀线虫活性的木霉菌株进行种类鉴定,结果显示FT311和FT312为绿色木霉(Trichoderma viride),FT1937和FT85为哈茨木霉(T.harzianum)。利用贝氏皿浸没法测定,4株木霉发酵滤液均能显著降低南方根结线虫卵的孵化和2龄幼虫(J2)的活性,其中FT1937和FT85对卵孵化抑制率和J2致死率均达到85%~92%,而FT311能够达到80%~85%,但FT312毒性较低,仅达40%~60%;2株哈茨木霉的活性好于2株绿色木霉;同时观察到发酵液对线虫卵和幼虫体壁有消解作用、抑制和延迟卵孵化,并使幼虫体内空泡化。本研究为根结线虫病害的生防防治提供了更多的木霉资源信息。     

10种植物提取物对南方根结线虫毒杀活性研究

采用触杀法研究了10种植物干材料无水乙醇提取物、乙酸乙酯提取物和石油醚提取物对南方根结线虫2龄幼虫的毒杀活性。结果表明,这10种植物材料的3种有机溶剂提取物对根结线虫都有不同程度的毒杀活性。其中,牡丹皮、丁香、八角茴香、何首乌和地肤子的无水乙醇和乙酸乙酯提取物的毒杀活性最强,48h校正死亡率均大于90%;八角茴香石油醚提取物也表现出较高毒杀活性,48h校正死亡率也达到了80%以上。     

七株黄瓜内生真菌对南方根结线虫二龄幼虫的不同作用

本文研究了7株黄瓜内生真菌对南方根结线虫Meloidogyne incognita的不同作用方式。结果表明,枝顶孢Acremonium sp.菌株Ac985、毛壳菌Chaetomium sp.菌株Ch1001和拟青霉Paecilomyces sp.菌株Pa972的PDB培养滤液对南方根结线虫J2具有致死作用,48h暴露后致死率分别达到100%、98.5%和100%;叶点霉Phyllosticta sp.菌株Ph511培养滤液对J2具有击倒作用,但击倒的虫体在清水中能恢复活性。木霉Trichoderma sp.菌株Tr882和菌株Ac985、Ch1001的培养滤液对J2的活动有趋避作用。镰刀菌Fusarium spp.菌株Fu234、Fu654和菌株Pa972、Ch1001、Ph511的菌丝可以穿透J2体壁并消化虫体。Ch1001、Fu654、Ph511三菌株孢子悬浮液处理黄瓜种子后,能诱导黄瓜萌发的主根对J2从其根尖伸长区穿透的抗性。     

聚多曲霉Snef210对南方根结线虫毒性的研究

蔬菜根结线虫病在我国乃至世界危害日益严重,安全防控该病害成为目前急需解决的农业生产问题。本研究筛选到一株可毒杀南方根结线虫Meloidogyne incognita的生防真菌Snef210,经形态学和分子生物学鉴定为聚多曲霉Aspergillus sydowii(Bain.et Sart.) Thom et Church。该菌株发酵液对南方根结线虫2龄幼虫(J_2)具有很强的毒杀作用,原液处理24 h后校正死亡率达90.1%,处理3 d后对卵孵化的抑制率达92.8%。盆栽试验中,与对照相比,菌株发酵液10倍稀释液土壤处理对番茄根部的根结减退率为66.7%。聚多曲霉代谢产物丰富,多用于抗菌和抗肿瘤的研究,本文首次发现其对南方根结线虫有效,是一类潜在的控制植物线虫病害的新型生防因子。     

产生几丁质酶的交枝顶孢(Acremonium implicatum)对南方根结线虫生防潜力

 由于化学杀线剂给环境带来了污染问题,寄生线虫的生防真菌成为研究热点。为进一步鉴定和筛选高效食线虫真菌,从山东日照五莲烟草北方根结线虫卵中分离到1株较高应用潜力菌株WLE1。根据形态学和rDNA-ITS序列分析方法鉴定该菌为交枝顶孢Acremonium implicatum。该菌是1株能够产生几丁质酶的食线虫真菌,在第4天几丁质酶活性到达高峰,为18.49 μmol·h^-1·mL^-1 ,直到第16天依然维持较高活性;活性电泳测定其几丁质酶分子量分别为98.0、82.9、70.2和35.9 kDa;交枝顶孢几丁质粗酶液处理南方根结线虫卵,第7天卵的孵化抑制率为80.17%。该菌能够寄生南方根结线虫卵、2龄幼虫和雌虫。第6天卵和2龄幼虫的寄生率分别为82.11%和73.97%。说明具有高效产生几丁质酶特性且能寄生南方根结线虫不同生活史阶段的交枝顶孢WLE1对南方根结线虫具有巨大生防潜力。     

南方根结线虫对生姜生长及内源激素的影响

 试验结果表明,南方根结线虫侵染生姜后,首先损伤根系,进而显著降低生姜植株的株高、地上鲜重、根系鲜重和根茎重,减产47.96%。南方根结线虫侵染可使生姜叶片中赤霉素(GA)、吲哚乙酸(IAA)、玉米素核苷(ZR)含量显著降低,感病生姜的脱落酸(ABA)则表现为前期降低,后期增加的趋势,并促使叶片中GA/ABA的迅速下降,严重影响了生姜的生长,使感病植株矮小、叶片黄化,提前衰老。感病生姜根茎GA、IAA、ZR、ABA的变化规律与叶片相似,但9月份ZR、IAA含量的迅速上升,与根结线虫建立侵染据点、形成巨型细胞,从而造成根茎的局部疣裂有关。南方根结线虫侵染可引起病株根系GA/ABA升高以及GA含量在生长后期上升,促进营养物质向根部运输,从而造成根系的补偿性生长;但IAA和ZR含量的下降不利于根结线虫建立侵染据点,不能在根系中形成过多的根结。     

铵类化合物对南方根结线虫2龄幼虫存活的影响

在实验室内寄主体外测定了铵类化合物对南方根结线虫2龄幼虫（Meloidogyne incognita J2）存活的影响。结果表明：供试的8种化合物在不同浓度下对南方根结线虫J2有不同程度的致死作用,并且随着浓度的升高致死效果均显著增加。其中NH4HCO3对J2作用最为敏感,浓度为0.025 mol/L（25 ℃,pH 7.95）时校正死亡率达53.5%,浓度达到0.05 mol/L（25 ℃,pH 8.20）时校正死亡率可达100%,而其他化合物只有在高浓度时致死效果才显现出来。致死浓度由低到高的顺序为：NH4HCO3＜(NH4)2SO4＜NH4CNS＜NH4NO3 ＜NH4H2PO4＜NH4Cl＜(NH4)3PO4•3H2O＜(NH4)2HPO4。同时测定了南方根结线虫J2的酸度适应范围是pH4.1~11.0。     

温湿度对南方根结线虫卵孵化和二龄幼虫的影响

根结线虫病害是世界上最难防治的蔬菜病害之一,是否可以通过控制生态条件经济有效地防治根结线虫病害值得深入研究。本文利用室内纯培养技术研究了温湿度单因素和双因素对南方根结线虫（Meloidogyne incognita）2龄幼虫(J2)的致死率和卵囊中卵孵化率的影响。试验结果表明,该线虫对温度敏感,40 ℃以上高温和5 ℃以下低温即可抑制J2存活和卵囊中卵孵化,15～30 ℃是线虫的适宜温度;该线虫对湿度不十分敏感,只有干旱（含水量低于1%）和高湿（含水量高于30%）时,对线虫才有一定抑制作用。低温（5 ℃以下低温、含水量5%以上湿度）和高温高湿（35 ℃以上温度和30%含水量）抑制卵囊中卵孵化和J2的存活。本数据的获得将为设施园艺中生态控制南方根结线虫病害提供理论指导和数据支持。