甘蓝品种的AFLP指纹鉴别图谱分析

本试验采用AFLP技术分析了来自全国9个栽培地区的44个甘蓝主栽品种,共筛选了40对E 3/M 3引物组合,多态性条带的数量从0条到15条不等。其中引物组合E-AAC/M-CTA是甘蓝品种中多态性最高的引物,有15条多态性条带,多态性条带的百分率为30%,但该引物不足以区分44个供试的甘蓝品种。同时筛选了11组E 2/M 3对引物组合,其中引物组合E-AG/M-CTC产生了13条清晰的多态性条带。以E-AAC/M-CTA和E-AG/M-CTC这两对引物组合的多态性条带构建了44份甘蓝品种材料的指纹图谱,此指纹图谱可以将供试的44份材料一一区分。     

检测方法对甘蓝和大白菜品种RAPD标记鉴别多态性的影响

分析了琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳2种检测方法对甘蓝和大白菜品种RAPD标记鉴定多态性水平的影响.用12个随机引物扩增了14个甘蓝品种,琼脂糖凝胶电泳检测的结果为平均每个引物产生4.5条扩增带,其中1.5条具有多态性,多态性频率为33.3％.同时对产生条带最多的引物(S149)所扩增的产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,结果检测到了30条清晰可见的扩增带,其中19条具有多态性,为前者的6倍,可以完全鉴别14个甘蓝品种.用5个随机引物扩增了23个大白菜品种,用两种检测方法同时检测了扩增结果.结果表明,琼脂糖凝胶电泳检测的平均多态频率为30％,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测平均多态频率为61％,后者为前者的两倍.因此,在使用RAPD标记进行甘蓝和大白菜品种鉴别时,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测方法能大大提高检测效率.     

分子标记在大白菜遗传育种中的应用

大白菜是我国起源的特产蔬菜,利用分子辅助育种手段进行大白菜遗传育种越来越受到育种家的关注。本文对已构建的二十多张大白菜遗传图谱和白菜类蔬菜间的亲缘关系进行了分析,同时也从芜菁花叶病毒病等抗病分子标记、春化、抽薹和雄性不育相关的分子标记、其它农艺性状标记及种子纯度鉴定等方面阐述了分子标记技术在大白菜遗传育种中的应用。分子标记整合、比较与国际接轨及试验材料的选择都可能成为分子标记今后的研究方向。     

甘薯AFLP分子标记体系建立

AFLP是目前最常用的几种标记之一。本文以甘薯为材料,通过DNA提取、酶切、PCR扩增、凝胶电泳等系列程序摸索和优化,建立了甘薯的AFLP分子标记体系。优化的甘薯AFLP分子标记体系的程序如下:将4μl100ng/μl的甘薯DNA用EcoRⅠ酶、MseⅠ酶各5U进行双酶切,在37℃下酶切3h后再在65℃下酶切3h;然后加入10μl连接混合液在22℃下连接3h后在16℃下连接10h;取连接产物5μl,10μmol/LEcoRⅠ预扩引物和10μmol/LMseⅠ预扩引物各1.5μl,PCR缓冲液25μl,ddH2O17μl进行预扩增;取5μl稀释20倍后的预扩增产物,50ng/μlEcoRⅠ选扩引物和50ng/μlMseⅠ选扩引物各1μl,PCR缓冲液10μl,ddH2O3μl,进行选择性扩增。本研究为甘薯黑斑病和其他真菌性病害的分子标记克隆及抗病育种的辅助选择提供了有力工具。     

利用AFLP分子标记预测水稻杂种优势

杂种优势是生物界普遍存在的现象,通过测定两个亲本之间的遗传距离可进而预测水稻杂种优势.迄今已提出了许多预测方法,从表型预测、生化预测,到现在的分子标记预测,DNA分子标记的发展为杂种优势预测提供了新的手段.Lee等[1]和Smith等[2]研究发现RFLP遗传距离与F1杂种优势的表现存在高度的相关性,可用于杂种优势的预测.     

大白菜抗根肿病基因位点CRa和CRb的分子标记鉴定

利用大白菜抗根肿病基因CRa和CRb分子标记(SC2930和KBr H129J18R)引物组,对78份大白菜材料进行抗根肿病分子标记鉴定。结果表明,在这78份材料中,有34份材料含有SC2930-T(CRa抗病标记)标记,其中杂合抗病位点材料17份,纯合抗病位点材料17份。有37份材料含有KBr H129J18R抗病标记,其中纯合抗病位点材料15份,杂合抗病位点材料22份。有20份材料不含有CRa和CRb所对应的抗病标记,23份材料含有2个抗病标记。该研究初步明确了78份参试大白菜材料所含抗根肿病基因CRa和CRb类型,为大白菜抗根肿病育种提供材料选择依据。     

东亚甘薯品种AFLP标记遗传差异研究

甘薯是世界上重要的粮食、饲料、工业原料和新型能源作物,由于遗传背景知识的缺乏,甘薯遗传改良受到限制,东亚是世界上甘薯种植最集中的区域,因此有必要了解东亚甘薯品种的遗传多样性程度和遗传差异。本研究利用AFLP标记对43份来自东亚地区的甘薯育成品种遗传多样性进行了分析。10对AFLP引物扩增出307条谱带,其中多态性谱带占71．7％,平均每对引物扩增22．0条多态性带,表明AFLP标记是一种甘薯遗传多样性分析的高效方法。供试品种间遗传距离为0．0938-0．3359,平均为0．2302,利用UPGMA法可以将供试品种聚为5个组群,表明供试品种遗传多样性程度丰富,东亚甘薯育成品种之间具有较明显的遗传差异。不同国家或地区品种间的遗传距离高于国家或地区品种内的遗传距离。韩国品种与其它东亚国家或地区品种间遗传距离较远。供试品种中,中国大陆品种平均遗传距离最小。作者认为我国甘薯品种改良,应注重与韩国资源的交换,同时在亲本组配中避免少数品种人为过度利用,以保持甘薯品种的遗传多样性,提高甘薯品种改良进度。     

利用RAPD技术鉴定大白菜主栽品种及品种间遗传多样性分析

采用随机引物扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术分析了２１个大白菜主栽品种。用１３个引物共扩增出８７个清晰可重复的ＤＮＡ片段,其中３９条带具有多态性,多态性条带的频率为４４．８％。ＯＰＥ０１是多态性频率最高的引物,它可区分１５个大白菜品种,再与引物ＯＰＨ０３和ＯＰＨ１２配合,即可将２１个大白菜品种区别开。     

菜心ISSR分子标记技术初步研究

以菜心为研究对象,初步建立起菜心的ISSR分子标记技术体系,包括DNA提取、退火温度、循环次数和引物筛选等.对退火温度进行优化,确定最佳退火温度为48℃,最优循环次数为45次.共筛选了49条引物,其中11条引物能扩增出多态性带,选择4个条带清晰的引物对6个品种进行扩增,共检测出32条带,其中多态性带为22条,多态性比例为68.80%,6个品种的遗传相似性系数为0.19～0.77.说明ISSR标记能够揭示材料间较高的遗传多样性,本试验为菜心的种子纯度鉴定和新品种选育提供理论依据.     

AFLP分子标记应用于白菜品种鉴定

采用AFLP技术，用混合的模板DNA从数对引物中筛选出6对带型分布均匀、多态性丰富且分辨能力强的引物，对市场上经营的两份大白菜杂交种样品586和587所扩增出的AFLP指纹图谱进行分析，根据数据分析得到了两份大白菜样品与标准样品之间的欧氏距离系数。6对引物对两份大白菜样品和标准样品扩增所得到的指纹图谱分析的结果表明，587与标准样品存在显著的差异，其中多态性位点占总扩增位点的31．7％，欧氏距离系数为3．87，样品587与标准样品不是同一个品种；而样品586与标准样品之间欧氏距离系数近于0，而据此得知此样品与标准样品之间没有明显的差异，判断为同一个品种。本研究采用AFLP技术很好地鉴别了两份样品的不同。这对应用AFLP技术鉴定大白菜品种的真伪，保护品种繁育者、生产者和种子使用者的利益提供了有效技术体系的依据。     

白菜类蔬菜种子纯度SSR分子标记鉴定

种子纯度是种子质量的核心指标,是保障优良品种增产的关键因素。为了鉴定白菜种子纯度,本研究利用72对SSR分子标记检测种子纯度并结合田间植株形态观察,鉴定了5个白菜类优势品种的种子纯度,分别是‘珍绿6号’‘、津夏3号’‘、津研快绿1号’‘、速俊228’‘、速俊316’。结果表明,从72对SSR引物中筛选出5对具有多态性的引物,能够将父母本与杂交种区分开。试验中SSR分子鉴定结果虽略低于田间形态学鉴定结果,但利用统计学进行显著性分析,发现两者间无显著性差异。说明SSR分子标记可以用于白菜种子纯度的鉴定并通过本研究建立了一套准确、有效的品种纯度鉴定体系。     

中国白菜AFLP分子遗传图谱的构建

以白菜高抗TuMV白心株系91 112和高感TuMV桔红心株系T12 91为亲本建立的小孢子DH系作为图谱构建群体,以AFLP标记来构建白菜连锁图谱。通过对64对AFLP引物组合的筛选,利用20对引物得到了263个AFLP多态性位点。经Mapmaker/EXP3.0软件处理,构建了1张含255个标记位点,10个连锁群,覆盖长度为883.7cM的连锁图。255个AFLP位点中偏离孟德尔遗传的比率(P<0.05)为15 0%和27 5%(P<0.01)。     

青麻叶大白菜种质资源遗传多样性的AFLP分析

利用AFLP分子标记技术,对42份青麻叶大白菜品系间的遗传多样性与亲缘关系进行分析。5对引物组合在42份品系中共获得124条带,其中多态性条带89条,多态性比例为71.8%。计算42份品系间的相似系数范围为0.469~0.977,平均0.707。聚类结果可划分为4组,第一组大部分来源天津市津南区和塘沽地区;第二组基本上都来自津南区;第三组大多来源天津西青区;第四组来源于天津各个地区及河北省。聚类结果与材料的来源地有一定的相关性,较好地反映了42份青麻叶大白菜品系间的遗传背景及亲缘关系。     

利用RAPD标记鉴定大白菜杂交种纯度的研究

应用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）标记鉴定大白菜杂种商品种子的纯度。用５０个随机引物检测了２个杂交种北京５７号和北京１０６号及其亲本,引物ＯＰＥ－２０在北京５７号杂交种中产生了有别于双亲的特殊标记,引物ＯＰＨ－０６及ＯＰＨ－０７在北京１０６杂交种中产生了有别于双亲的特殊标记,能清楚地区分杂交种及其双亲,并将这些引物应用在北京５７号和北京１０６号杂交种样品的纯度检测中。这个结果显示了ＲＡＰＤ标记在大白菜杂交种商品种子纯度检测上的实际用途。