平顶山市分离到一株鸡肾型传染性支气管炎病毒

最近我们从平顶山市某养鸡场的发病鸡群中分离到１株病毒（ＰＳ株）。分离毒经鸡胚传代后可使鸡胚出现死亡、卷曲胚或侏儒胚;不能直接凝集１％鸡红细胞,经１％胰酶处理后能凝集鸡红细胞;干扰试验表明分离毒有干扰ＮＤＬａＳｏｔａ株在鸡胚上生长的特性;中和试验表明分离毒与Ｍ４１株抗原性差异较大,而与Ｔ株抗原性基本一致,这与肾型ＩＢＶ一致;电镜观察到的病毒粒子具有典型的冠状结构;回归试验能使雏鸡死亡,出现肾脏肿大、肾小管和输尿管充满白色尿酢盐沉积等特征性病变。因此认为分离毒为肾型ＩＢＶ。分离到的ＰＳ株是从外地购买…     

乌骨鸡体内鸡肾传染性支气管炎病毒的分离鉴定

从具有鸡肾型传染性支气管炎临床病变特征的乌骨鸡体内分离到一株病毒。该病毒经鸡胚盲传代后，可引起４０％上鸡胚死亡，并出现典型的侏儒胚；人工感染雏鸡表现为肾肿大和尿酸盐沉积；能干扰新城疫ＬａＳｏｔａ株在鸡胚中的繁殖；病毒对氯仿和乙醚敏感，５６℃水浴３０分钟被灭活，而ＰＨ３和ＰＨ１１；不能直接凝集红细胞，但经１．５％胰酶处理后能凝集鸡红细胞（１；５２），这种血凝性可被传染性支气管炎病毒澳大利亚Ｔ株阳性血     

鸡肾型传染性支气管炎病毒BK株的分离与鉴定

通过ＳＰＦ鸡胚传代培养、ＳＰＦ鸡胚气管环组织培养和鸡胚肾原代细胞培养,从一起有明显呼吸症状且又表现严重肾病变的鸡传染性支气管炎病例中分离到一株肾型传支病毒ＢＫ株。电镜观察表明,病毒粒子呈球状,直径９０～１００ｎｍ,纤突长１５ｎｍ,为典型冠状病毒。在ＳＰＦ鸡胚上盲传至５代,在ＴＯＣ上测其ＣＤ５０为１０－６．２。动物回归试验结果,试验鸡出现典型“花斑肾”,表明ＢＫ株具有较强嗜肾脏致病性。     

鸡传染性腺胃炎病原的分离与鉴定

自泰安地区的腺胃炎病鸡群中分离到TA毒株,在SPF鸡胚稳定传至第6代,病毒具有致鸡胚规律性死亡和典型致胚胎病变特征。TA株感染鸡胚尿囊液提纯的病毒经负染后电镜观察:病毒粒子大小为80 nm~160 nm,有囊膜,表面有纤突,呈典型冠状病毒形态。病毒无直接血凝性,但经10 g/L胰酶处理后能凝集鸡红细胞。对病毒进行了ELD50测定、对NDV的干扰试验和致病性试验。结果表明,病毒均呈现冠状病毒的特性和与自然病例相似的病理症状。     

鸡传染性支气管炎肾型致病株的分离与鉴定

肾病变为主要特征的病雏中，采集典型病科，通过鸡胚接种、传代，分离到四株肾传支病毒（ＨＮ—Ｍ，ＨＮ—Ｚ，ＨＮ—Ｇ，ＨＮ—Ｃ）。该四株病毒均能适应鸡胚生长，并致鸡胚呈明显的卷曲胚和侏儒胚；其鸡胚适应毒能感用鸡胚肾细胞（ＣＥＫ），并致细胞病变（ＣＰＥ）；应用鸡脓毒或细胞毒回归雏鸡，可复制出与自然发病雏同样的特征性病变；每株无血凝性，以胰酶处理后可出现凝集价；经与７４国际标准毒单抗作细胞交叉中和试验及用克隆和标记的ＩＢＶ非编码区、非Ｓ１片段１０ｋｂ核酸探针作斑点杂交鉴定，确认ＨＮ－Ｍ株为澳大利亚Ｔ抹，另三株为Ｎ—１１５株。应用该四株分离毒制备的油乳剂灭活苗对河南近几年流行的肾型支气管炎起到了十分理想的防制效果．     

腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒变异株的比较研究

腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）变异株Ｈ９５提纯样品经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ,证明Ｈ９５株单抗ＤＥ７和Ｍ４１株单抗６ＤＨ８均能识别Ｈ９５株５４０００蛋白多肽。采用单抗、多抗介导间接ＥＬＩＳＡ试验表明,Ｈ９５毒株能与抗ＩＢＶＭ４１Ｎ蛋白单抗６ＤＨ８和ＩＢＶＭ蛋白单抗ＭＣ发生反应,也能与抗Ｍ４１、Ｇｒａｙ、Ｈｏｌｔｅ、Ｔ、Ｈ５２、Ｎ１１５和分离株Ｃ９００１、ＤＬＺ９１１１的多抗血清反应,同时抗Ｈ９５株的４株单抗、多抗血清也能与上述毒株反应。卵磷脂酶Ｃ处理的Ｈ９５株的血凝活性能被相应的Ｈ９５株的单克隆抗体和高免血清所抑制,也能被Ｍ４１单抗和高免血清所抑制。通过ＲＴ－ＰＣＲ获得了Ｈ９５毒株的免疫原基因Ｓ１,经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ和ＩＢＶ的Ｓ探针检测呈阳性。     

鸡传染性支气管炎病毒HZ13株的分离与鉴定

从浙江省某肉鸡养殖场发生疑似肾型传染性支气管炎的发病鸡群中采集病料,进行病毒分离。结果显示,经1%胰酶处理后,该病毒尿囊液可以凝集鸡的红细胞,而未处理的病毒尿囊液则无此凝集活性;该分离株对新城疫病毒(La Sota)株增殖具有明显的抑制作用;对10日龄鸡胚的致病变率达100%;通过鸡胚矮小化试验和动物回归试验,发现该分离株能引起鸡胚和病鸡典型的临床症状和病理变化;RT-PCR可扩增出768 bp片段,测序比对结果证实分离获得了1株肾型鸡传染性支气管炎病毒,命名为HZ13株。     

提高鸡传染性支气管炎病毒血凝抗原滴度途径及抗原灭活

将７株传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）标准株（Ｍ４１、Ｈ１２０、Ｈｏｌｔｅ、Ｇｒａｙ、Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ、Ｉｏｗａ６０９和Ｔ株）和６株分离株（ＮＩＢＶ、ＧＩＢＶ、Ｍ、ＳＨ、Ｊ和Ｈ株）分别接种于鸡胚，收获尿囊液，经浓缩后，用魏氏梭菌培养液处理，制备血凝抗原。其中，Ｈ１２０株血凝滴度最高，Ｔ、Ｍ、Ｊ和Ｈ株无血凝性。应用含有不同滴度ＩＢＶ母源抗体的鸡胚增殖病毒制备抗原，效价与用ＳＰＦ鸡胚增殖病毒制备的抗原效价一致。尿囊液经反复冻融后再制备抗原会使血凝价降低。抗原分别用甲醛、高碘酸钠、硼氢化钾和ＳＤＳ灭活，其中甲醛灭活效果最理想。抗原对氯仿敏感，对乙醚稳定。适宜浓度的Ｎａ＋、Ｍｇ２＋可显著提高抗原的血凝性     

鸡腺胃型IBV分离株血凝特性初探

从不同发病地区患鸡传染性腺胃病的鸡中分离出４株病毒，选择Ｈ９５和Ｓ９６两株流行株，采用胰蛋白酶和卵磷脂酶Ｃ处理，在不同条件下测定其血凝性，试验表明：用２％胰蛋白酶３７℃处理０．５小时后的病毒株对鸡的红细胞凝集价高达２１４，这种血凝性不能被抗Ｈ９５毒株的单克隆抗体、鼠、鸡特异性抗血清所抑制。经４单位／ｍｌ卵磷脂酶Ｃ３７℃处理３小时后血凝价可达２９，而能被相应的特异性单克隆抗体、鼠、鸡抗血清所抑制。     

鸡肾型传染性支气管炎病毒的分离与鉴定

从北京地区某鸡场有呼吸道症状及剖检可见肾肿大呈花斑状 ,并有尿酸盐沉积的病鸡中分离到一株病毒 ,该病毒在盲传中可使鸡胚出血并产生侏儒胚。病毒液不凝集鸡的红细胞 ,但经胰酶处理后可产生凝集。该病毒能在鸡胚中干扰新城疫C -30株的繁殖 ,电镜观察可见直径约 10 0nm圆形病毒颗粒 ;表面有纤状突起 ,动物回归试验再现自然发病症状。通过以上试验初步确定分离株为鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)。     

鸡传染性支气管炎病毒上海株的分离与鉴定

本研究对分离自上海某养鸡场的疑似鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)进行了分离和鉴定.所采用的方法有:鸡胚致病性试验、对鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的干扰试验、动物回归试验以及RT-PCR鉴定等.试验结果表明,该病原接种鸡胚后,48 h可引起鸡胚死亡,胚体呈侏儒样变化,对NDV感染有明显干扰作用;用分离的病毒接种SPF雏鸡可产生明显呼吸道症状,肾脏表现肿大和大量尿酸盐沉积等病理变化;用IBV特异性引物可以从分离物中扩增出IBV的N基因序列,测序结果表明,该毒株属于肾型IBV.综上所述,本研究在上海流行区域成功分离到一株IBV,将其命名为SH11株.     

鸡传染性支气管炎病毒CQ/01/2004株的分离与鉴定

2004年从重庆某肉用鸡场疑似鸡传染性支气管炎的病鸡中采集病料，按常规处理后接种9～10日龄鸡胚，通过鸡胚连续传代培养3代，并对该分离毒株的鸡胚致病性、血凝性和NDV的干扰特性进行检测．同时进行了动物回归试验。结果表明，该分离株具有IBV感染特征，可使鸡胚胚体出血、蜷缩、矮化；该分离毒株无直接血凝性，对NDV有明显的干扰作用；动物回归试验中有75％的感染鸡在10d内发病或死亡。剖检病死鸡可见肾苍白、肿胀，肾小管内充塞大量尿酸盐，支气管有出血点、有大量粘液。采用反转录．聚合酶链式反应（RT-PCR）技术对CQ／01／2004的纤突蛋白S1基因进行扩增、克隆和序列测定，结果表明该基因具有IBVSl基因的共有分子特征，将测序结果提交GenBank进行同源性检索，发现分离株CQ／01／2004和J株S1的同源性最高，核苷酸同源性为94％，氨基酸同源性为89．4％，与M41的核苷酸同源性为80．6％，氨基酸同源性为78．0％。试验结果表明，分离的病毒株CQ／01／2004为鸡传染性支气管炎病毒。     

鸡传染性支气管炎病毒LH2/01/10的分离鉴定

2001年在我国黑龙江省某鸡场疑似鸡传染性支气管炎的发病鸡群中，分离到一株病毒，将该病毒接种10日龄SPF鸡胚，取72h的尿囊液进行电镜观察并用1％胰酶处理，结果发现尿囊液中存在典型的冠状病毒，用胰酶处理过的尿囊液能凝集SPF鸡的红细胞，初步鉴定为鸡的传染性支气管炎病毒。将该病毒尿囊液再次接种10日龄SPF’鸡胚，通过病毒对鸡胚的致病作用、病毒超微形态特征以及病毒凝集鸡红细胞的特性等对该毒株进行研究，结果表明：经胰酶处理后的病毒尿囊液可凝集鸡红细胞。鸡胚的第二代病毒尿囊液(命名为LH2,／01／10)分别接种1日龄和15日龄的SPF鸡，发现对不同日龄的鸡表现不同的致病性，对1日龄接种鸡和同笼饲养的同居对照鸡致病力高，发病率为11／11，致死率分别为4／6和2／5；15日龄接种和同居感染鸡发病率为9／9，致死率分别为1／5和1／4。实验应用反转录一聚合酶链式反应技术对LH2／01／10的膜蛋白基因进行扩增、克隆和序列测定，结果表明该基因具有IBVM基因的共有分子特征．与IBV标准株M41的M基因核苷酸的同源性为90％，氨基酸的同源性为91％。这从分子水平进一步证实引起鸡群死亡的病毒为鸡传染性支气管炎病毒。     

禽白血病病毒分离鉴定

使用 SPF鸡胚成纤维细胞从蛋用种鸡的病料中分离到一株病毒.经禽白血病病毒（ALV） p-27抗原ELISA检测、病毒培养、反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）鉴定、群特异性抗血清中和试验和动物回归试验等证明,该株病毒属于禽白血病病毒.     

Pathogenicity of embryo-adapted serotype 2 OH strain of infectious bursal disease virus in chickens and turkeys

The pathogenicity of serotype 2 OH strain of infectious bursal disease virus (IBDV) to specific-pathogen-free (SPF) chicken embryos and 2-wk-old SPF chickens and turkey poults was investigated. The virus was pathogenic for chicken embryos after five passages as evidenced by pathologic changes in inoculated embryos. The embryo-adapted virus was not pathogenic for 2-wk-old SPF chickens and turkey poults as indicated by lack of clinical signs, gross or microscopic lesions in the bursa of Fabricius of inoculated birds. Bursa-to-body-weight ratios of the inoculated chickens and turkey poults were not significantly different from those of uninoculated controls. Virus-neutralizing antibodies to serotype 2 IBDV were detected in inoculated chickens and turkeys. Results of this study indicated that the embryo-adapted serotype 2 OH IBDV isolate that is pathogenic for chicken embryos is infectious but not pathogenic in chickens and turkeys.     

我国鸡传染性支气管炎病毒地方分离株生物学特性的研究

从我国新疆维吾尔自治区某鸡场发病症状及病理变化疑似鸡传染性支气管炎的病鸡有出血点病变的腺胃组织中分离病毒，在9－11日龄SPF鸡胚上连续传代9次，通过病毒对鸡胚的致病作用、病毒在电镜下的形态观察、病毒在鸡胚中的增殖动态变化、病毒在CEF中的增殖特性、凝集鸡红细胞的特性以及动物回归试验等来研究我国鸡传染性支气管炎病毒地方流行株的生物学特性。结果表明，该毒株的第一代尿囊液对鸡胚无肉眼可见的致病作用，当继代到第5代后，胚体严重病变；电镜观察该病毒为典型的冠状病毒；病毒在鸡胚中随着接种病毒时间的延长，其效价增高，96小时可达到48小时的1倍，该毒株可在CEF上生长，但不能形成明显的蚀斑；并且经1％胰酶处理后可疑集鸡红细胞；鸡胚的第4代尿囊液病毒回归动物体，可致鸡病变病死鸡肾脏病变尤为明显，呈典型的花斑肾，腺胃则未见肉眼可见的病变，接种鸡、同居鸡和对照鸡之间NDV疫苗免疫后其HI抗体水平无明显差异，但从发病症状来看，IBV对ND疫苗具有干扰作用。     

鸭源H9亚型禽流感病毒的分离及其生物学特性的研究

从南京某肉鸭养殖场用灭菌棉拭共采集肉鸭的泄殖腔样品20份,通过SPF鸡胚尿囊腔传代接种法分离到1株病毒。HA-HI试验表明:该病毒可凝集鸡红细胞,不能被ND、EDS-76阳性血清抑制,但能被H9阳性血清所抑制,为H9亚型AI。该分离株生物学特性研究结果表明,对鸡表现为弱致病性,而对鸭无致病性。能在小鼠体内良好的增殖,并且可引起发病和死亡。     

鸡传染性支气管炎嗜肾性W_(93)株活疫苗研究 Ⅰ.鸡传染性支气管炎嗜肾性病毒X株分离及鉴定

本研究的病毒分离物,是来源于天津地区某鸡场暴发的28日龄病鸡。此毒株对SPF雏鸡几乎100%感染发病,死亡率达30%～90%,此毒有很强的亲肾组织性,引起肾病变肿大、苍白、斑驳状,肾小管和输尿管有尿酸盐沉积。对SPF鸡胚感染率98%～100%,可致鸡胚侏儒化、卷曲等特征性病变。在10日龄SPF鸡胚连传10代后,其毒价可达106.5EID50/0.1ml。鸡胚毒不凝集鸡红细胞,可干扰NDV血凝素的生成,而其本身又可被AEV所干扰,能加速气管纤毛止动效应,电镜观察呈圆形或多样性,边缘不整,表面有纤突的病毒粒子,直径约100mm。病毒中和试验进行血清学鉴定,此毒对Gray株、Holte株和澳大利亚T株的中和保护率均低于50%,而对M41株则高于50%,此毒株具备冠状病毒的主要特征,定名为“鸡传染性支气管炎嗜肾性病毒X株”(NephropathogenicInfectiousBronchitisVirusStrainX)——NIBVX。     

鸵鸟新城疫病毒野毒株的分离及其生物学特性

用鸡胚从疑似鸵鸟新城疫的送检病料中分离到 2株病毒。 2株病毒均能凝集鸡红细胞 ,且能被抗新城疫病毒 ( NDV)阳性血清抑制 ;用抗 NDV单抗 PEG夹心 ELISA测定 2株分离毒均为阳性。对其中 1株作进一步生物学特性鉴定 ,按照国际上规定的 NDV毒力判定标准测定的该毒株最低致死量致死鸡胚的平均死亡时间 ( MDT)为 54h,1日龄雏鸡脑内接种致病指数 ( ICPI)为 1 .88,6周龄雏鸡静脉接种致病指数 ( IVPI)为2 .75。结果表明 ,本分离株为鸵鸟新城疫病毒强毒