梯度洗脱HPLC法同时测定4种解热镇痛类药物的含量

建立梯度洗脱HPLC法同时测定4种解热镇痛类药物的含量方法。采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-0.05 mol/L醋酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长254 nm。结果表明,在该色谱条件下,对乙酰氨基酚、安乃近、安替比林、氨基比林分离良好;对乙酰氨基酚在50～500μg/mL范围内线性良好,R=0.999 8,平均回收率为99.2%(n=9),RSD为0.6%;安乃近在10～250μg/mL范围内线性良好,R=0.999 8,平均回收率为100.6%(n=9),RSD为0.8%;安替比林在10～100μg/mL范围内线性良好,R=0.999 6,平均回收率为99.4%(n=9),RSD为1.0%;氨基比林在10～250μg/mL范围内线性良好,R=0.999 7,平均回收率为98.9%(n=9),RSD为0.8%。本测定方法操作简便,结果准确、可靠,可用于同时测定以上4种解热镇痛类药物的含量。     

高效液相色谱紫外法同时检测鸡蛋中5种青霉素类药物残留的研究

试验旨在建立一种同时检测鸡蛋中5种青霉素类药物残留的高效液相色谱紫外检测法。鸡蛋经乙腈提取、正己烷脱脂、旋转蒸发浓缩和衍生化后,采用高效液相色谱法分离检测。结果显示,氨苄西林（ampicillin,AMP）、氯唑西林（cloxacillin,CLO）、苯唑西林（oxacillin,OXA）、阿莫西林（amoxicillin,AMO）及普鲁卡因青霉素（penicillins G procaine,PRO）在10~1 000 μg/kg呈良好线性关系,R²>0.999;检测限为1.5 μg/kg（S/N=3）,定量限为5.0 μg/kg（S/N=10）,添加平均回收率为62.04%~93.13%,相对标准偏差为3.91%~13.69%,批内相对标准偏差为3.98%~14.71%,批间相对标准偏差为4.26%~12.71%。表明本试验建立的高效液相色谱紫外法重复性和灵敏度较高,适用于鸡蛋中的5种青霉素类药物残留检测。     

高效液相色谱法测定替加氟血药浓度

目的:建立一种高效、准确、快捷的人体血浆中替加氟浓度检测方法。方法:色谱柱:Pronaos EP-C18柱;流动相:甲醇-乙腈-水(10∶5∶85);流速:1.0 mL/min;进样量20μL;柱温25℃;检测波长:λ=270 nm。结果:本法在替加氟浓度(X)为0.415~166μg/mL(r=0.999 9)内线性关系良好。低、中、高3种不同浓度(8.3μg/mL、41.5μg/mL、207.5μg/mL)相对回收率分别为99.64%、97.78%、99.41%,日内、日间精密度的RSD均小于5%。结论:此法用血量少,血浆处理方法简单,具有专一性,适用于临床替加氟血药浓度的监测。     

伊维菌素微乳中伊维菌素的含量测定方法研究

为建立伊维菌素微乳中伊维菌素含量的高效液相色谱（HPLC）测定方法,选用Hypersil ODS2 （5 μm,4.6 mm×250 mm）色谱柱,流动相为甲醇∶乙腈∶水为35∶60∶5（V/V/V）,检测波长为244 nm,柱温为30 ℃,流速为1 mL/min进行测定。结果显示,伊维菌素在该色谱条件下,系统适应性良好,在80~320 μg/mL浓度范围内线性关系良好,回归方程为：Y=22 700X+2 510,R²=0.9998,总平均回收率为101.90%±2.94%,RSD为2.88%,对中试生产的3批伊维菌素微乳进行含量测定,RSD为1.86%。表明该含量测定方法准确可靠,重现性好,可用于伊维菌素微乳中伊维菌素含量的测定,并为该新型制剂的质量标准的制定和质量评价提供依据,也为后期的临床安全应用提供可靠的参考。     

顶空气相色谱法检测羟基甲硝唑中的残留溶剂

建立羟基甲硝唑中残留溶剂甲醇和丙酮的顶空气相色谱测定方法。采用Agilent-DB624石英毛细管色谱柱(30 m×0.53 mm,1.0 μm);以氮气为载气,氢火焰离子化检测器为检测器,进样口温度为200 ℃,检测器温度为250 ℃;以起始温度30 ℃,保持5 min,20 ℃/min升温至200 ℃,保持2分钟为程序升温方法;以顶空瓶平衡温度80 ℃,平衡30 min为顶空条件。结果表明,在该色谱条件下甲醇和丙酮与其他物质分离良好。甲醇在2~360 μg/mL范围内线性关系良好,检测线为1.0 μg/mL;丙酮在1~600 μg/mL范围内线性关系良好,检测限为0.5 μg/mL。甲醇回收率为98.0%~102.4%,RSD为0.6%~0.9%;丙酮回收率为97.0%~99.6%,RSD为0.6%~1.0%。本方法操作简单,准确度高,重复性好,可用于羟基甲硝唑中残留溶剂的检测。     

采用HPLC法测定双峰驼血浆咪达唑仑浓度

旨在建立测定双峰驼血浆咪达唑仑浓度的高效液相色谱紫外检测法(HPLC-UV),为后续的特异性探针药物法研究双峰驼CYP3A酶体内活性提供方法学支撑。首先采用乙腈沉淀血浆样品蛋白,离心后经022μm有机针孔滤膜过滤,采用色谱柱为Sigma C18柱(46 mm×150 mm,5μm),流动相为乙腈:001 mol·L-1PBS缓冲溶液=60∶40(V/V),流速为05 mL·min~(-1),柱温为30℃,检测波长为254 nm等色谱条件进行样品检测。结果表明:咪达唑仑的保留时间为1324 min,峰形良好、无杂峰干扰,并在039~25μg·mL~(-1)浓度范围内线性关系良好(r2=0999,n=7)。高、中、低3个浓度的相对回收率与绝对回收率均符合检测要求。因此,本试验建立的测定双峰驼血浆咪达唑仑浓度的HPLC紫外检测方法灵敏度高,稳定性好,分离完全,峰形良好。     

UPLC-MS/MS法同时测定牛奶中替米考星、地塞米松、氟苯尼考和氯霉素残留

试验旨在建立一种同时测定牛奶中替米考星（tilmicosin）、地塞米松（dexamethasone）、氟苯尼考（florfenicol）和氯霉素（chloramphenicol）的超高效液相色谱-串联质谱（ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS）法。牛奶样品经乙腈提取后,将提取液通过Oasis PRiME HLB固相萃取小柱净化,净化后的样液经氮吹浓缩后,用样品稀释液溶解并用正己烷进一步除去脂肪获得待分析样品,进行UPLC-MS/MS分析。采用CAPCELL PAK C18 MGⅢ-H色谱柱（2 mm×100 mm,3 μm）进行液相色谱分离,以甲醇（A）-含0.01%甲酸的0.1 mmol/L甲酸铵溶液（B）为流动相进行梯度洗脱：0~1.0 min,90%至60% B;1.0~3.0 min,60%至30% B;3.0~4.4 min,30%至20% B;4.4~4.5 min,20%~90% B;4.5~6.0 min,90% B。在多反应监测（multiple reaction monitoring,MRM）模式下进行质谱测定,以基质匹配标准溶液外标法定量。结果显示,替米考星、地塞米松、氟苯尼考和氯霉素在1.0~100.0 μg/L范围内均具有良好的线性关系（r>0.999）。方法的最低检测限（limits of detection,LODs）为0.1~0.2 μg/kg,定量限（limits of quantity,LOQs）为0.2~0.5 μg/kg,当4种化合物在牛奶中的添加水平为0.5、5.0和25.0 μg/kg时,回收率为78.6%~94.7%,相对标准偏差（relative standard deviations,RSDs）为2.4%~10.1%。本试验建立的UPLC-MS/MS方法简便、灵敏、准确,适用于牛奶中替米考星、地塞米松、氟苯尼考和氯霉素的同时测定。     

检测牛乳κ-酪蛋白的间接竞争ELISA法与间接ELISA法比较

试验旨在建立一种快速简单检测牛乳κ-酪蛋白（κ-CN）含量的酶联免疫吸附（ELISA）方法,为解决牛乳蛋白掺假问题提供一定的技术支持。以牛乳κ-CN为包被抗原,以酶标抗体（HRP-IgG）为检测抗体分别建立间接竞争ELISA法和间接ELISA法,并对两种检测方法进行分析比较。结果表明：对于间接竞争ELISA法,κ-CN抗原包被浓度为2.5 μg/mL,线性范围为62.5~1 000.0 ng/mL,变异系数< 2%,回收率在98.46%~101.68%;对于间接ELISA法,κ-CN抗原包被浓度为1.56 μg/mL,线性范围为0.098~3.125 μg/mL,变异系数< 1%,回收率在99.10%~101.06%。比较两种检测方法,间接竞争ELISA法检测耗时较短,抗体应用量较少,而间接法不需要包被成本较高的目标标准蛋白,相关系数也较高,但其检测体系组成成分较多,且需包被待测样品,较难组成ELISA试剂盒体系,不宜用于现场检测。因此,大规模制备ELISA试剂盒体系用于快速检测蛋白含量时可采用间接竞争法,不仅抗体应用量少、节约成本且快速、简单,可更好地用于科研实践。     

GC法测定马香苓口服液中百秋李醇含量研究

试验旨在建立测定马香苓口服液中百秋李醇含量的研究方法。本研究采用气相色谱法,其色谱条件是使用色谱柱HP-5毛细管柱;柱温采用程序升温（初始温度150 ℃,保持18 min,以50 ℃/min速率升至280 ℃,保持5 min）;进样口温度为280 ℃;载气：高纯氮气;流速1 mL/min;进样量1 μL,分流比20：1;检测器为氢火焰离子化检测器,温度为280 ℃;氢气流速40 mL/min,空气流速370 mL/min;分别进行系统适用性试验、专属性试验、线性范围考察、检测限和定量限的确定、精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加样回收率试验、耐用性试验,并对10批样品进行了含量测定。结果显示,专属性溶液中的溶剂峰、药液的杂质峰与主成分峰能达到有效分离且分离度符合要求（R ≥ 1.5）,表明该方法系统适用性良好;阴性对照溶液未检出色谱峰,表明样品中其他成分不干扰测定;百秋李醇定量限和检测限分别为2.842和0.812 μg/mL;百秋李醇检测质量浓度在15.86~1 015 μg/mL范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系（y=0.869x-10.45,R²=0.999,n=7）。精密度试验、稳定性试验（日内和日间精密度）、重复性试验的平均RSD分别为0.90%、1.63%和1.83%、2.90%,其RSD均在可控范围内（RSD ≤ 3%）;平均加样回收率为95.36%,RSD=2.82%（n=6）,表明所建立的气相色谱法检测百秋李醇的含量回收率良好;进行耐用性试验,最终验证所建立的色谱方法可以稳定检测百秋李醇的含量。经方法学验证,该方法准确稳定,简便可行,能够作为马香苓口服液君药广藿香中百秋李醇的含量控制方法,同时也为该制剂质量控制提供了一种有效的检测方法,暂定本品中广藿香药材按百秋李醇计不少于47.53 μg/mL。     

马香苓口服液中白术内酯Ⅲ含量测定方法的建立

为建立高效液相色谱法(HPLC)测定马香苓口服液白术内酯Ⅲ含量的方法,用色谱柱为ZORBAX SB-C18,以水和甲醇为流动相梯度洗脱,流速0.8 mL/min,柱温25℃,检测波长223 nm,进样量30μL。结果显示,白术内酯Ⅲ检测质量浓度在0.57μg/mL～73.00μg/mL范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系(y=1.356 7x+0.857 6,R~2=0.992,n=6),精密度、重复性、稳定性试验的平均相对标准偏差(RSD)分别为2.00%、8.58%和6.00%;加样平均回收率为98.04%,RSD=11.89%,回收率良好。该方法准确稳定,简便可行,能够很好的控制马香苓口服液白术内酯Ⅲ的含量,也为该制剂质量控制提供了一种有效的方法。     

Determination of Acetaminophen in Bactrian Camel Plasma by RP-HPLC

To establish the reversed phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) method for determination of plasma concentration of acetaminophen in Bactrian camel, the chromatography was carried on a C18 column (150 mm×4.6 mm,5 μm).The mobile phase was composed of methanol-water (20:80),the flow rate was 0.5 mL/min,and the detection wavelength was set at 248 nm for acetaminophen.The retention time of acetaminophen was 6.5 min, and was not disturbed by other miscellaneous peaks.The calibration curve was linearity in the range of 0.08 to 10.24 μg/mL (R²=0.9997),and the quantitation limit of acetaminophen was 0.10 μg/mL.Both the inter-day and intra-day RSD were under 7.0%, the absolute recovery of the method was 80.39% to 93.56%,the relative recovery of the method was 94.66% to 104.73%.Therefore, the established method was simple, reproducible and accurate,which could be used for determination of plasma acetaminophen concentration and in vivo activities of CYP1A enzyme in Bactrian camel.     

双峰驼CYP2D6酶体外孵育体系的建立与优化

为了研究双峰驼CYP2D6酶体外活性,建立双峰驼肝微粒体孵育体系并对孵育体系中探针底物浓度、肝微粒体蛋白浓度和孵育时间等进行优化研究。首先采用改良差速离心法制备双峰驼肝微粒体、BCA法测定双峰驼肝微粒体蛋白浓度、CO还原差示光谱法检测CYP总酶含量,然后采用HPLC法跟踪检测孵育体系中CYP2D6酶特异性底物的主要代谢产物去甲右美沙芬含量进而优化孵育条件。结果表明,双峰驼肝微粒体蛋白浓度为5.565 0mg/mL±0.519 7mg/mL,CYP总酶含量为0.177 7nmol/mg±0.050 3nmol/mg;肝微粒体孵育体系的最适底物浓度为250μg/mL,肝微粒体蛋白浓度为5.565 0mg/mL,最适孵育时间为40min。所制备的双峰驼肝微粒体各项指标和优化后的肝微粒体孵育条件均能满足后续对双峰驼CYP2D6酶体外活性研究的基本要求。     

Content Determination of Ivermectin in the Ivermectin Microemulsion Injection

In order to establish the determination method of ivermectin (IVM) in the ivermectin microemulsion injection by high performance liquid chromatography (HPLC), Hypersil ODS2 colunm (5 μm,4.6 mm×250 mm) was used in this study. The mobile phase composed of methanol, acetonitrile and water (35:60:5,V/V/V) at a flow rate of 1 mL/min. The detection wave length was set at 244 nm and the column temperature was 30 ℃. The results showed that the HPLC system suitability of IVM was good. A good linear correlation of IVM was observed within the concentration range 80 to 320 μg/mL, and the average recovery rate was 101.90%±2.94% with RSD was 2.88%, the regression equation was Y=22 700X+2 510 (R²=0.9998). The RSD of IVM content in ivermectin microemulsion injection was 1.86%. The method was accurate and reliable,reproducible,easy to operate, which could be used in new type of ivermectin microemulsion injection. The method could be used as the basis of quality control and establishing a quality standard, and to provide basis for quality evaluation, also can provide reliable reference for safe veterinary clinical application in the future.     

HPLC法测定猪体内双氯芬酸的血药浓度

建立猪血浆中双氯芬酸含量的HPLC测定法。猪血浆中双氯芬酸采用正己烷-异丙醇混合溶液(90∶10,V/V)提取,HPLC紫外检测器检测。色谱柱为C18柱,流动相为甲醇-15g/L乙酸水溶液(80∶20,V/V),测定波长为276nm。外标法定量。结果表明,血浆中杂质不干扰双氯芬酸的测定,双氯芬酸血药浓度在0.025μg/mL~20.0μg/mL范围内线性关系良好(R2=1),最低定量限为0.05μg/mL,高、中、低空白血浆添加样品浓度的日内变异系数和日间变异系数分别小于4%和6%,回收率为85%~97%。结果表明,该方法适用于猪血浆中双氯芬酸含量的测定,可用于含双氯芬酸钠的制剂在猪体内的药物代谢动力学和生物利用度研究。     

HPLC法检测家兔血浆中地克珠利含量

建立了快速、稳定的家兔血浆中地克珠利提取方法,为进一步研究家兔组织中地克珠利的残留量提供基础。采用HPLC法以妥曲珠利为内标,N,N-2甲基甲酰胺及乙腈联合沉淀法提取家兔血浆中地克珠利,色谱柱为Hypersil ODS（2.5μm,250 mm×4.6 mm）,流动相为乙腈∶水∶三乙胺∶冰乙酸=55∶45∶0.2∶0....     

芪板青颗粒质量控制研究

为建立芪板青颗粒中绿原酸、咖啡酸和黄芪甲苷含量测定的方法。测定绿原酸和咖啡酸采用Agilent Eclipse XDB-C18 250 mm×4.6 mm 5μm色谱柱,流动相为0.05%磷酸溶液-乙腈(92∶8,V∶V),进样量10μL,柱温30℃,流速为1.0 m L/min,在190 nm～400 nm范围进行扫描,记录327 nm色谱图;测定黄芪甲苷采用Waters symmetry C18 5μm 4.6 mm×250 mm色谱柱,进样量10μL,漂移管温度35℃,雾化器温度35℃,气流速度1.2 L/min,流动相为水-乙腈(65∶35,V∶V),柱温30℃,流速1.0 m L/min。绿原酸在3.611～72.23μg/m L范围内线性关系良好,r为0.99999,平均加样回收率97.1%;咖啡酸在3.060～61.20μg/m L范围内线性关系良好,r为0.99999,平均加样回收率96.2%;黄芪甲苷在1.0～10μg范围线性关系良好,r为0.9997,平均加样回收率为98.0%。该方法定性、定量准确,适用于芪板青颗粒含量测定。     

鸡血浆中黄芩苷及绿原酸的HPLC法建立

建立了测定鸡血浆中复方慢呼抗口服液主要成分黄芩苷和绿原酸的高效液相色谱法.流动相为乙腈、1％冰醋酸,梯度洗脱30 min,黄芩苷和绿原酸的波长分别为280、327 nm,流速1 mL/min.分别采用高氯酸法、甲醇乙腈法、正丁醇法处理血浆,选取最优方法进行考察.甲醇乙腈法处理血浆,方法专属性好,回收率较高,线性关系良好,精密度及准确度较高,可用于药代动力学研究.     

HPLC法测定兽用中药散剂中非法添加利巴韦林的方法研究

建立了高效液相色谱法检测白龙散、黄连解毒散、苍术香连散等7种兽用中药散剂中非法添加利巴韦林的方法。用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱,以水（用稀硫酸调节pH值至2．5±0.1）为流动相,检测波长207nm,流速1．0mL／min,进样量20μL。结果显示,利巴韦林的线性范围为1.016～20.32μg／mL,线性方程为Y=5．68×10X-5．61×10^-2（r=0．9999,n=6）,本方法的回收率为81．28％～119．46％,RSD为0．88％～1．65％。结果表明,本方法准确、可靠,适用于兽用中药散剂中非法添加利巴韦林的检测。     

高效液相色谱法测定烯丙孕素微囊中烯丙孕素的含量

建立了烯丙孕素微囊中烯丙孕素的高效液相色谱含量测定方法,采用Kromasil 100-5C18 (250 mm ×4.6 mm,5μm)色谱柱,以流动相水-乙腈(30∶70,V/V)、检测波长236 nm、流速1.0 mL/min、柱温30℃、进样量20 μL为色谱条件,无水乙醇为溶剂对微囊进行加热超声提取.结果 表明...