UPLC-PDA法测定甘草浸膏中甘草苷和甘草酸的含量

建立超高效液相色谱(UPLC)测定甘草浸膏中主成分甘草苷和甘草酸的含量。采用反相高效液相色谱法对甘草苷和甘草酸进行色谱分离和快速定量测定。以ACQUITY UPLC^TM T 3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm)为分离柱,柱温:35℃;以乙腈-水(0.1%冰乙酸+5 mmol/L醋酸铵)进行梯度洗脱;流速:0.35 mL/min;进样量:1μL;检测波长为232 nm。通过光谱图、保留时间和峰面积参数对甘草苷和甘草酸进行定性定量检测。甘草苷在1~20μg/mL范围内线性关系良好(R^2>0.999),方法检出限为0.5μg/mL,定量限为1μg/mL;甘草酸在10~200μg/mL范围内线性良好(R^2>0.999),方法检出限为5μg/mL,定量限为10μg/mL,完全满足检测需求。该方法色谱分离较好,分析速度较快,前处理简单,适用于甘草浸膏中甘草苷和甘草酸的定性定量检测。     

不同采收期对甘草中甘草苷、甘草酸及甘草多糖含量的影响

目的:建立测定甘草中甘草苷、甘草酸及甘草多糖的方法,并比较不同采收时期甘草中甘草苷、甘草酸及甘草多糖的差异。方法:采用HPLC法测定甘草中甘草苷和甘草酸含量,色谱柱为Kromasil C_(18)柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液,梯度洗脱;体积流量为1 m L/min;检测波长为252 nm、276 nm;柱温为28℃;进样量为10μL,并采用紫外吸收光谱法测定甘草中甘草多糖。结果:甘草苷和甘草酸获得良好分离,在0.116 8-1.168 0μg及0.039 3-0.235 0μg与峰面积积分值呈良好线性关系,平均加样回收率分别为98.45%、98.34%,RSD分别为1.52%、1.78%,重现性试验RSD分别为0.35%、0.59%。甘草多糖分离良好,其重现性、稳定性亦良好,回收率较高。结论:本方法操作简便、结果准确、精密度好、分离度良好,为甘草药材的合理应用及其质量控制提供了依据。     

甘草颗粒特征图谱及其质量相关性研究

建立甘草颗粒中甘草苷、甘草酸铵含量检测方法并进行指纹图谱研究。采用高效液相色谱法,色谱柱为Eclipse Plus C₁₈柱(4.6 mm×250.0 mm,5μm),检测波长237 nm,以乙腈(A)-0.05%磷酸(B)为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,进样量10μL。结果显示,10批样品有12个共有峰,相似度大于0.901。经对照品比对,指认甘草苷和甘草酸铵两个指标性成分并对其进行定量分析,线性关系良好(R²>0.999 8),平均加样回收率为99.67%～102.42%。该方法操作简单、快捷,结果准确,可以甘草颗粒中甘草苷、甘草酸铵含量的测定对甘草颗粒进行质量评价。     

HPLC法同时测定复方蒲公英颗粒中秦皮乙素和咖啡酸的含量

为了建立复方蒲公英颗粒的可控质量标准,建立了同时测定复方蒲公英颗粒中秦皮乙素和咖啡酸含量的高效液相色谱法,并测定样品中两种成分的含量。采用Wonda Cract ODS-2(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.6%冰醋酸水溶液(20∶80)为流动相,体积流量为1.0 m L/min,检测波长为326 nm,柱温为25℃。结果表明,秦皮乙素和咖啡酸分别在0.02~0.32 mg/m L和0.004~0.064 mg/m L浓度范围内与峰面积呈现良好的线性关系(R2=0.9999),平均加样回收率分别为100.08%和99.69%,RSD分别为0.98%和0.84%。本方法准确、灵敏、可靠,重现性好,可用于复方蒲公英颗粒产品的质量控制。     

乳房炎康复液质量标准研究

采用高效液相色谱法(HPLC)定量测定乳房炎康复液中主药苦参中苦参碱的含量,用薄层层析法定性鉴别处方中主药蒲公英的主要成分咖啡酸;对乳房炎康复液各主药的化学成分和质量标准进行研究,从而为乳房炎康复液的临床应用和生产提供理论依据。结果显示,薄层层析法可以定性鉴别出处方中的主药蒲公英;HPLC法检测结果显示,苦参碱进样量在0.02 867 mg/mL～0.43 mg/mL范围内与峰面积具有良好的线性关系(R~2=0.999 9),标准曲线回归方程为y=107x-111 716(R~2=0.999 9,n=6)。苦参碱的平均回收率为100.27%,回收率范围在70%～110%之间,RSD=2.95%(n=6)。显示薄层鉴别法可以鉴别主药蒲公英中的主要成分咖啡酸且专属性强;高效液相色谱法准确、灵敏、分离度高、重现性好。所建立的方法可用于乳房炎康复液的质量控制。     

仔泻康口服液的质量标准研究

为了研究仔泻康口服液质量标准,以便控制产品质量,采用薄层色谱法(TLC)对制剂中黄芪、黄芩、黄连、白头翁进行定性鉴别;用高效液相色谱(HPLC)法对制剂中黄芩苷、盐酸小檗碱进行含量测定。结果 TLC鉴别分离度好,简单、灵敏、专属性强。黄芩苷线性范围在0.12～0.75μg(R2=0.9975),平均回收率为97%,RSD=1. 46%(n=6);盐酸小檗碱线性范围在0. 125～0. 75μg(R2=0.9929),平均回收率为93.33%,RSD为2.21%(n=6)。对黄芪、黄芩、黄连的定性鉴别及黄芩苷、盐酸小檗碱的含量测定,方法简单、准确、可靠,所建的标准可用于仔泻康口服液的质量控制。     

蜘蛛香胶囊的质量标准研究

对蜘蛛香胶囊进行质量研究,为其质量标准制定提供依据。采用显微鉴别和薄层色谱(TLC)法对蜘蛛香胶囊进行定性鉴别,按照《中国兽药典》检查蜘蛛香胶囊的水分、装量差异、崩解时限和微生物限度等项目;采用高效液相色谱(HPLC)法测定蜘蛛香胶囊中橙皮苷含量。薄层鉴别斑点清晰,专属性强。蜘蛛香胶囊的各检查项均符合国家相关质量要求。含量测定方法简便、可靠、灵敏、重复性好,橙皮苷在0.16～6.4μg范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.9999),平均回收率为97.6%,RSD为1.3%,6批次蜘蛛香胶囊中的橙皮苷平均含量为2.08 mg/粒。研究结果表明蜘蛛香胶囊质量可靠,质控方法可行。     

贞莲增免口服液质量标准研究

目的:建立贞莲增免口服液质量标准。方法:采用薄层色谱(TLC)法对贞莲增免口服液中淫羊藿、墨旱莲进行定性鉴别;采用高效液相色谱(HPLC)法对制剂中特女贞苷和淫羊藿苷进行含量测定。结果:定性鉴别分离度较好,专属性强;特女贞苷的含量测定线性范围为9.9644~249.1110μg·m L~(-1)(r=1),平均加样回收率为100.27%(RSD=1.45%,n=9);淫羊藿苷的含量测定线性范围为10.1362~253.4050μg·m L~(-1)(r=0.9997),平均加样回收率为99.51%(RSD=0.76%,n=9)。结论:本文所建立方法准确可靠、灵敏度高、专属性强,可用于贞莲增免口服液的质量控制。     

大戟海藻芫花和甘遂与甘草配伍对甘草主要成分的影响观察

为检测"十八反"中大戟、海藻、芫花和甘遂不同配伍对甘草中主要药理成分含量的影响,采用HPLC测定异甘草素、甘草苷、甘草酸单铵盐和甘草次酸4个主要药理成分。结果显示,大戟与甘草配伍对异甘草素、甘草酸单铵盐和甘草次酸的含量影响极显著,甘草酸单铵盐的含量提高了2.9%,异甘草素和甘草次酸的含量分别降低了3.6%和24.0%;海藻与甘草配伍对甘草酸单铵盐和甘草次酸的含量影响极显著,甘草酸单铵盐的含量提高了26.3%,甘草次酸的含量降低了21.2%;芫花与甘草配伍对异甘草素、甘草酸单铵盐和甘草次酸的含量影响极显著,异甘草素和甘草酸单铵盐的含量分别提高了39.0%和6.8%,甘草次酸的含量降低了66.0%;甘遂与甘草配伍对异甘草素、甘草苷和甘草次酸的含量影响极显著,分别降低了5.2%、6.1%和30.2%。表明"十八反"中大戟、海藻、芫花和甘遂不同配伍对甘草中的异甘草素、甘草苷、甘草酸单铵盐和甘草次酸等主要药理成分含量均有不同程度的影响。     

HPLC波长切换法同时测定四黄止痢颗粒中5种成分的含量

为了建立和完善四黄止痢颗粒的质量标准,建立HPLC波长切换法同时测定四黄止痢颗粒中大黄素、大黄酸、黄芩苷、甘草酸铵、(R,S)-告依春5个成分的含量方法。采用WondaSil C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈(A)-0.05%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速1 mL/min,变换波长检测[0～10 min,245 nm测定(R,S)-告依春;10～25 min,278 nm测定黄芩苷;25-45 min,254 nm测定甘草酸铵、大黄酸、大黄素]。各待测组分分离度良好;(R,S)-告依春、黄芩苷、甘草酸铵、大黄酸、大黄素5个成分的进样量分别在0.0475～0.475μg(r=0.999 3)、0. 067 8～0. 678μg(r=0.999 0)、0.229 0～2.290 0μg(r=0.999 4)、0.016 5～0.165 0μg(r=0.999 8)、0.015 2～0.152 0μg(r=0. 999 5)与峰面积呈良好的线性关系;加样回收率分别为98.2%(RSD=1.6%)、100.7%(RSD=1.0%)、99.5%(RSD=1.1%)、100.5%(RSD=0.8%)、99.3%(RSD=1.0%)。说明该方法可用于四黄止痢颗粒中多指标成分的质量控制。     

Study on Quality Standard of Ruxiankang Injection

The aim of this study was to establish the quality standard of Ruxiankang (RXK) injection. According to the relevant requirements of the Chinese Pharmacopoeia (2015 edition), TLC identification,related substances examination and heavy metal examination method of RXK injection were established and the limits were determined. HPLC method was used to establish the content determination method of liquiritin, ammonium glycyrrhizinate, hesperidin and caffeic acid, and determined the limit. The specificity of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma, Citri Reticulatae Pericarpium and Taraxaci Herba was strong. Liquiritin in 0.0459 to 0.7340 μg, ammonium glycyrrhizate in 0.0661 to 1.0580 μg, hesperidin in 0.0592 to 0.9470 μg, caffeic acid in the 0.0384 to 0.6140 μg concentration showed a good linear relationship with peak area. The correlation coefficients were 0.997,0.9990,0.9999 and 1.000,respectively. The average recoveries were 101.25%, 99.87%, 98.39% and 103.49%,respectively. The RSD values were 4.82%, 3.63%, 2.94% and 0.85%,respectively. The contents of liquiritin, ammonium glycyrrhizinate, hesperidin and caffeic acid of RXK injection were not less than 88.90, 138.48, 136.50 and 21.54 μg/mL,respectively. According to the maximum daily dose of RXK injection, Pb,Cd, As, Hg and Cu should not exceed 23,3,6,2 and 150 μg, respectively. The quality standard established in this study could provide reference for controlling the quality of RXK injection.     

HPLC波长切换法结合化学计量学对不同厂家四黄止痢颗粒中5种成分的比较分析

建立一种四黄止痢颗粒中(R,S)-告依春、黄芩苷、盐酸小檗碱、甘草酸铵、大黄素5个指标性成分的HPLC测定方法,同时结合化学计量学评价四黄止痢颗粒的质量。采用Inertsil ODS-3-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.3%三氟乙酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速1 mL·min^-1,柱温30℃;采用波长切换检测(0~10 min,245 nm测定(R,S)-告依春;10~22 min,278 nm测定黄芩苷;22~25 min,266 nm测定盐酸小檗碱;25~30 min,249 nm测定甘草酸铵;30~45 min,254 nm测定大黄素)。采用聚类分析、偏最小二乘判别分析等方法对不同厂家的四黄止痢颗粒进行质量评价。(R,S)-告依春、黄芩苷、盐酸小檗碱、甘草酸铵、大黄素5个指标性成分在45 min内能够达到完全分离,进样浓度分别在0.071~0.71μg·mL^-1、14.03~140.3μg·mL^-1、3.11~31.1μg·mL^-1、0.116~1.16μg·mL^-1、0.0049~0.049μg·mL^-1范围内线性关系良好;平均加样回收率分别为102.7%、99.3%、101.1%、98.0%、97.3%。20批四黄止痢颗粒聚为4类;小檗碱、(R,S)-告依春和大黄素是影响不同厂家四黄止痢颗粒质量贡献较大的3种成分。该方法稳定性好,重复性好,精密度高,可用于四黄止痢颗粒中5种指标成分的同时测定。     

利用RP-HPLC指纹图谱技术评价中草药添加剂的质量研究

为寻求控制一种新的防控猪高热综合征中草药饲料添加剂质量的有效方法,本研究采用反相高效液相色谱指纹图谱技术评价中草药添加剂质量,并对其主要成分定量分析方法进行探讨。液相色谱的条件为:Agilent HC-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)和Agilent保护柱,柱温25℃,流速1 mL/min,以乙腈-0.2%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长为280 nm。通过对黄芩苷、橙皮苷、甘草苷对照品和12批次中草药饲料添加剂RP-HPLC指纹图谱的分析,建立了该中草药添加剂RP-HPLC指纹图谱,获得包括有甘草苷、橙皮苷和黄芩苷等相对稳定的15个共有特征峰。定量分析表明每克中草药添加剂样品中平均含量黄芩苷为(8.488±1.084)mg,橙皮苷为(6.321±0.379)mg,甘草苷(0.218±0.157)mg。本研究建立的定性和定量检测方法可用于新的中草药添加剂的质量检测。     

芪板青颗粒质量控制研究

为建立芪板青颗粒中绿原酸、咖啡酸和黄芪甲苷含量测定的方法。测定绿原酸和咖啡酸采用Agilent Eclipse XDB-C18 250 mm×4.6 mm 5μm色谱柱,流动相为0.05%磷酸溶液-乙腈(92∶8,V∶V),进样量10μL,柱温30℃,流速为1.0 m L/min,在190 nm～400 nm范围进行扫描,记录327 nm色谱图;测定黄芪甲苷采用Waters symmetry C18 5μm 4.6 mm×250 mm色谱柱,进样量10μL,漂移管温度35℃,雾化器温度35℃,气流速度1.2 L/min,流动相为水-乙腈(65∶35,V∶V),柱温30℃,流速1.0 m L/min。绿原酸在3.611～72.23μg/m L范围内线性关系良好,r为0.99999,平均加样回收率97.1%;咖啡酸在3.060～61.20μg/m L范围内线性关系良好,r为0.99999,平均加样回收率96.2%;黄芪甲苷在1.0～10μg范围线性关系良好,r为0.9997,平均加样回收率为98.0%。该方法定性、定量准确,适用于芪板青颗粒含量测定。     

HPLC法同时测定金叶清瘟散中绿原酸和咖啡酸的含量

为了建立一种同时测定金叶清瘟散中绿原酸和咖啡酸的高效液相色谱法,选用Agilent C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,乙腈∶0.4%磷酸溶液（12∶88）等度洗脱,进样量10μL,流速1 mL/min,波长为328 nm进行检测。结果显示,被测物质能与样品中杂质有效分离,绿原酸和咖啡酸分别在5.0~500μg/mL和2.5~250μg/mL的范围内呈良好线性关系,两种药物的添加回收率均高于95%,RSD小于2%。该方法简便、快速、准确,适用于金叶清瘟散中绿原酸和咖啡酸的同时检测。     

伊维菌素微乳中伊维菌素的含量测定方法研究

为建立伊维菌素微乳中伊维菌素含量的高效液相色谱（HPLC）测定方法,选用Hypersil ODS2 （5 μm,4.6 mm×250 mm）色谱柱,流动相为甲醇∶乙腈∶水为35∶60∶5（V/V/V）,检测波长为244 nm,柱温为30 ℃,流速为1 mL/min进行测定。结果显示,伊维菌素在该色谱条件下,系统适应性良好,在80~320 μg/mL浓度范围内线性关系良好,回归方程为：Y=22 700X+2 510,R²=0.9998,总平均回收率为101.90%±2.94%,RSD为2.88%,对中试生产的3批伊维菌素微乳进行含量测定,RSD为1.86%。表明该含量测定方法准确可靠,重现性好,可用于伊维菌素微乳中伊维菌素含量的测定,并为该新型制剂的质量标准的制定和质量评价提供依据,也为后期的临床安全应用提供可靠的参考。     

Content Determination of Ivermectin in the Ivermectin Microemulsion Injection

In order to establish the determination method of ivermectin (IVM) in the ivermectin microemulsion injection by high performance liquid chromatography (HPLC), Hypersil ODS2 colunm (5 μm,4.6 mm×250 mm) was used in this study. The mobile phase composed of methanol, acetonitrile and water (35:60:5,V/V/V) at a flow rate of 1 mL/min. The detection wave length was set at 244 nm and the column temperature was 30 ℃. The results showed that the HPLC system suitability of IVM was good. A good linear correlation of IVM was observed within the concentration range 80 to 320 μg/mL, and the average recovery rate was 101.90%±2.94% with RSD was 2.88%, the regression equation was Y=22 700X+2 510 (R²=0.9998). The RSD of IVM content in ivermectin microemulsion injection was 1.86%. The method was accurate and reliable,reproducible,easy to operate, which could be used in new type of ivermectin microemulsion injection. The method could be used as the basis of quality control and establishing a quality standard, and to provide basis for quality evaluation, also can provide reliable reference for safe veterinary clinical application in the future.     

复方乳腺康膏治疗奶牛乳房炎临床试验观察

本试验进行了复方乳腺康膏对奶牛临床型和隐性乳房炎的疗效观察。结果表明,该药对奶牛临床型和隐性乳房炎的治愈率分别为95．21％和95．73％．高于对照药物如意金黄膏。经定期抽取奶样进行乳品质量检测,复方乳腺康膏比如意金黄膏更能快速、有效地提高牛奶品质,说明复方乳腺康膏对奶牛临床型和隐性乳房炎都具有较好的疗效。     

UPLC-MS/MS法同时测定牛奶中替米考星、地塞米松、氟苯尼考和氯霉素残留

试验旨在建立一种同时测定牛奶中替米考星（tilmicosin）、地塞米松（dexamethasone）、氟苯尼考（florfenicol）和氯霉素（chloramphenicol）的超高效液相色谱-串联质谱（ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS）法。牛奶样品经乙腈提取后,将提取液通过Oasis PRiME HLB固相萃取小柱净化,净化后的样液经氮吹浓缩后,用样品稀释液溶解并用正己烷进一步除去脂肪获得待分析样品,进行UPLC-MS/MS分析。采用CAPCELL PAK C18 MGⅢ-H色谱柱（2 mm×100 mm,3 μm）进行液相色谱分离,以甲醇（A）-含0.01%甲酸的0.1 mmol/L甲酸铵溶液（B）为流动相进行梯度洗脱：0~1.0 min,90%至60% B;1.0~3.0 min,60%至30% B;3.0~4.4 min,30%至20% B;4.4~4.5 min,20%~90% B;4.5~6.0 min,90% B。在多反应监测（multiple reaction monitoring,MRM）模式下进行质谱测定,以基质匹配标准溶液外标法定量。结果显示,替米考星、地塞米松、氟苯尼考和氯霉素在1.0~100.0 μg/L范围内均具有良好的线性关系（r>0.999）。方法的最低检测限（limits of detection,LODs）为0.1~0.2 μg/kg,定量限（limits of quantity,LOQs）为0.2~0.5 μg/kg,当4种化合物在牛奶中的添加水平为0.5、5.0和25.0 μg/kg时,回收率为78.6%~94.7%,相对标准偏差（relative standard deviations,RSDs）为2.4%~10.1%。本试验建立的UPLC-MS/MS方法简便、灵敏、准确,适用于牛奶中替米考星、地塞米松、氟苯尼考和氯霉素的同时测定。