贵州地方黄牛不同组织中PPARγ基因表达水平研究

试验旨在研究威宁牛、思南牛、关岭牛和黎平牛不同组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferators-activated receptors γ,PPARγ）基因mRNA的表达差异。以这4个贵州地方品种黄牛为试验动物,提取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪和背最长肌组织的总RNA,设计PPARγ基因的实时荧光定量引物,以牛GAPDH基因为内参,应用实时荧光定量PCR技术检测PPARγ基因在4个品种不同组织中mRNA的相对表达量。结果显示,PPARγ基因在4个品种黄牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪和背最长肌组织中均有表达,但在脂肪组织中的表达量高于其他组织,且差异极显著（P<0.01）,在脾脏和肺脏中也有较高表达,而在肾脏、肝脏、心脏和背最长肌中表达量较低;不同品种PPARγ基因的表达在部分组织中存在差异。研究表明,PPARγ基因在不同组织中的表达量存在差异,可能与其在不同组织中的功能有关,而品种对于PPARγ基因的表达影响不大。     

MSTN基因在贵州地方黄牛不同组织中mRNA表达量的研究

为了研究贵州地方黄牛不同组织中肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因mRNA的表达差异和表达规律,以4个品种贵州地方黄牛(关岭牛、思南牛、威宁牛和黎平牛)为试验动物,分别提取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪和背最长肌的总RNA,设计MSTN实时荧光定量引物,以牛GAPDH基因作为内参,应用实时定量PCR技术检测MSTN基因在4个品种黄牛不同组织中mRNA的相对表达量,同时利用MAS3. 0在线软件分析MSTN基因功能。结果显示:MSTN基因在4个贵州地方黄牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪和背最长肌中均有表达,在背最长肌中的表达量显著高于其他组织(P0. 05),不同品种之间MSTN基因在部分组织中的表达存在差异,且所分析的通路与机体生长发育和转录调控存在关联。研究表明MSTN基因在背最长肌中的表达量最高,品种对于MSTN基因的表达影响不大,而在不同组织中的表达量存在差异。     

牦牛、犏牛和黄牛组织中TSPY基因表达水平研究

为了进一步研究TSPY基因与雄性不育的关系,试验采用荧光定量和免疫组化技术对黄牛、犏牛和牦牛不同组织TSPY基因进行定量分析。结果表明:TSPY基因在睾丸组织中高表达。在睾丸组织中,犏牛、黄牛TSPY基因相对表达量均显著高于牦牛(P0.05),犏牛与黄牛间差异不显著(P0.05)。说明TSPY基因拷贝数与犏牛雄性不育可能存在一定联系。     

HSL和PPARγ基因在湘西黄牛不同组织中的发育性表达

比较分析HSL和PPARγ基因在湘西黄牛不同组织中的发育性表达规律,以探讨HSL和PPARγ基因与湘西黄牛脂肪酸代谢的关系。利用实时荧光定量PCR技术检测HSL和PPARγ基因在6,18,30月龄湘西黄牛的肝脏、肌肉组织(背最长肌)、脂肪组织(皮下脂肪和腹腔脂肪)中mRNA的相对表达量。结果表明:HSL基因在湘西黄牛肝脏、背最长肌、皮下脂肪和腹腔脂肪的4个部位中的表达量随月龄增长依次极显著减少(P0.01),而PPARγ基因正好相反。6月龄时,肝脏中HSL基因的表达量显著高于其他3个组织(P0.05),PPARγ基因皮下脂肪表达量显著高于肝脏(P0.05); 18月龄时,HSL基因在4个组织中的表达量按大小关系依次为肝脏≈背最长肌皮下脂肪腹腔脂肪; PPARγ基因在4个组织中的表达量按大小关系依次为皮下脂肪肝脏≈腹腔脂肪背最长肌; 30月龄时,HSL基因在4个组织中的表达量按大小关系依次为肝脏背最长肌皮下脂肪≈腹腔脂肪; PPARγ基因在4个组织间的表达呈现两两差异显著(P0.05),其表达量依次为肝脏皮下脂肪腹腔脂肪背最长肌。30月龄的粗脂肪(EE)含量和饱和脂肪酸(SFA)含量显著高于6月龄和18月龄的(P0.05),18月龄和30月龄湘西黄牛肉多不饱和脂肪酸(PUFA)含量显著高于6月龄的(P0.05); 30月龄时单不饱和脂肪酸(MUFA)的含量较高,但显著低于18月龄的(P0.05)。由此可见,HSL和PPARγ基因在湘西黄牛不同部位脂肪组织和肌肉组织中均有表达且随月龄与部位的不同表达不同,存在月龄和组织差异性,且二者的表达规律呈负相关。在动物生产应用中,建议湘西黄牛在30月龄左右再屠宰食用,口感及营养价值更好。     

抑制剂T0070907对鸡PPARγ基因表达影响的研究

为了验证过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ选择性抑制剂T0070907对鸡PPARγ基因表达的促进作用,本研究利用荧光定量PCR检测了不同浓度T0070907对鸡成纤维细胞(DF-1细胞)中PPARγ基因mRNA转录水平的影响,结果显示,随着T0070907浓度的增加,鸡PPARγ基因的表达量逐渐升高,并且在T0070907浓度为5μmol/L时极显著高于对照组(p<0.01);利用western blot检测了T0070907对PPARγ蛋白表达的影响,结果显示,5μmol/L的T0070907对DF-1细胞中PPARγ2蛋白的表达有一定的促进作用;利用双荧光素酶报告基因技术检测了不同浓度T0070907对PPRE报告基因活性的影响,结果显示,随着T0070907浓度的增加,DF-1细胞中PPRE报告基因活性逐渐增强,并且在T0070907浓度为0.5μmol/L时该报告基因活性显著高于对照组(p<0.05),当T0070907浓度为2μmol/L、5μmol/L时,与对照组之间的差异达到极显著水平(p<0.01);利用双荧光素酶报告基因技术检测了T0070907和罗格列酮(Rosi)对PPRE报告基因活性的影响,结果显示,单独添加T0070907或Rosi均可显著增强PPRE报告基因活性(p<0.05),同时,添加T0070907并不能降低Rosi对PPRE报告基因活性的促进作用。本研究结果表明,作为PPARγ抑制剂的T0070907对鸡PPARγ基因的mRNA的转录水平、蛋白表达及其蛋白活性均具有促进作用,推测与哺乳动物不同,鸡PPARγ可能具有其独特的表达方式和调控机制。本研究结果对完善PPARγ抑制剂在生理学及药理学上的研究、为PPARγ功能研究选择准确的拮抗剂、预防和治疗炎症相关疾病等方面具有重要意义。     

鸡脾脏中IFN-γ和IL-2的基因表达水平研究

为了解鸡在胚胎期以及出壳后的机体免疫状态,本研究采用SYBRGreenI实时荧光定量RT-PCR方法,检测鸡在胚胎时期和出壳后(1日龄～35日龄)脾脏中IFN-γ和IL-2mRNA表达水平,并研究鸡脾脏免疫功能的建立情况。研究发现:鸡脾脏中IFN-γ和IL-2的基因表达最早于13胚龄被检测到,随后迅速升高,分别于出壳后7日龄和10日龄达到峰值。出壳后,鸡脾脏中同一种细胞因子的基因表达水平显著高于胚胎时期。研究还表明:IFN-γ和IL-2的基因表达模型与出壳后鸡脾脏的发育以及T细胞的迁移定殖情况相一致。该研究对从分子水平,进一步了解鸡在胚胎时期和出壳后,脾脏免疫功能的建立情况具有重要意义。     

贵州地方黄牛肉质的营养特性与氨基酸模型研究

为了探索贵州地方黄牛肉质的营养特性,分别于贵州关岭黄牛、思南黄牛、黎平黄牛、威宁黄牛、务川黑牛的中心产区每个品种选取5头品种特征明显、膘情中等的青年公牛屠宰,测定肉质常规成分、能量、氨基酸、脂肪酸并建立贵州地方黄牛生长的氨基酸模型。结果表明:贵州地方黄牛鲜肉的蛋白质含量为(23.31±0.77)%,脂肪含量为(4.87±1.04)%。蛋白质中除色氨酸被水解破坏外,含有其他8种人体必需氨基酸,氨基酸组成与人体氨基酸需要模型非常接近,富含风味氨基酸,谷氨酸和天门冬氨酸含量高达239.5 mg/g;脂肪中除关岭黄牛外,均以形成肉香味和有利于心血管健康的单不饱和脂肪酸油酸含量最高。必需氨基酸与总氨基酸比(EAA/TAA)为41.82%,高于FAO/WHO理想食物蛋白质中EAA/TAA约为40%的推荐比例,不饱和脂肪酸与总脂肪酸比例(UFA/TFA)为44.13%,是理想的膳食肉蛋白质来源,贵州地方黄牛生长的小肠可消化氨基酸模型为赖氨酸100、苏氨酸50、缬氨酸48、异亮氨酸44、亮氨酸90、蛋氨酸32、组氨酸55、苯丙氨酸42、精氨酸82、色氨酸14、蛋氨酸+胱氨酸45、苯丙氨酸+酪氨酸78。     

西门塔尔牛与贵州地方黄牛的改良进展

随着改革开放的深入,我省养牛业获得了持续稳定的发展.1994年,全省牛存栏630.24万头,比1978年净增294万头,其中黄牛274万头,占总存栏数的65.7 %,能繁母牛237万头,占总存栏数的37%,当年产活犊84万头,繁殖成活率为32%,1994年共出栏牛54万头,生产牛肉5.32万吨.牛群结构趋于合理,肉牛生产技术普及及丰富的饲草资源,为改良我省地方黄牛发展商品牛生产创造了条件.     

贵州地方黄牛品种遗传分化的分子评估

选用联合国粮农组织(FAO)和国际动物遗传学会(ISAG)推荐的23对微卫星引物,采用荧光标记-多重PCR技术检测了4个贵州地方黄牛品种的遗传分化。结果显示,思南牛、关岭牛、威宁牛、黎平牛平均杂合度分别为0.71、0.69、0.69、0.65,23个位点多态信息含量在0.38~0.84之间,高度多态位点21个,中度多态位点2个。检测结果为贵州省本地黄牛品种分类提供了分子水平的科学依据。     

贵州地方黄牛GH基因多态性及生物信息学分析

为分析贵州地方黄牛GH基因多态性,筛选出对本地黄牛生长性状有显著影响的SNPs位点,本研究以贵州4个地方牛种(关岭牛、思南牛、威宁牛、黎平牛)为研究对象,采用直接测序法检测贵州地方黄牛GH基因多态性,利用生物信息学软件对贵州黄牛GH基因进行分析。结果显示:4个地方牛种中共发现2个SNPs,分别为Exon5-G1570C和Exon5-A1720C,Exon5-G1570C为错义突变,Exon5-A1720C为同义突变;其中黎平牛仅存在1个SNPs位点(Exon5-A1720C),其余3个品种均有2个SNPs位点;生物信息学分析表明,牛GH蛋白相对分子质量为27 385.45,理论等电点为6.90,疏水值最大为3.133,亲水值最小为-2.767,属于跨膜蛋白,稳定性较高;突变前后GH基因mRNA二级结构发生改变,Exon5-G1570C位点mRNA自由能升高,稳定性降低;Exon5-A1720C位点mRNA自由能降低,稳定性升高。本实验成功筛选出贵州地方黄牛GH基因的多态位点,可为筛选贵州地方黄牛与生长相关的分子遗传标记奠定理论基础。     

肉鸭不同组织中铁元素沉积规律和关键基因表达水平研究

以樱桃谷鸭为对象,分析不同日龄和不同组织中铁元素的沉积规律以及相关基因的mRNA表达水平。采用原子吸收分光光度法测定0、21、35、49、56日龄樱桃谷鸭的胸肌、腿肌、肝脏、胫骨、被皮组织中铁元素含量,并且通过荧光定量分析不同日龄的肝脏组织中FTH1基因表达水平及其与铁元素沉积之间的关系。结果显示:樱桃谷鸭五个不同组织中铁元素的沉积量依次为肝脏胫骨胸肌腿肌被皮,胸肌、腿肌、肝脏组织中铁元素的沉积规律为持续上升趋势;胫骨组织中铁元素的沉积规律为先上升后下降的趋势;被皮组织中铁元素的沉积规律为先上升再下降后再上升,21日龄是樱桃谷鸭组织中铁元素沉积的一个关键时间节点。樱桃谷鸭肝脏中铁元素含量和FTH1 mRNA表达有一定相关性。研究结果为优质肉鸭出栏日龄提供理论依据。     

中国地方黄牛PPARα exon7基因多态性与生长性状的关联研究

[目的]以期为我国地方黄牛生长性状分子育种提供理论依据。[方法]本研究以南阳牛、郏县红牛、鲁西牛和秦川牛4个品种共计424头中国地方黄牛为材料,以与牛脂肪代谢相关的基因PPARα为目标基因,利用生物信息学、PCR-RFLP结合DNA池测序等技术,对其第7外显子(PPARα_exon7)进行遗传特征分析,检测SNPs,并分析该序列的多态性与试验黄牛生长性状指标的相关性。[结果]发现在PPARα基因(AC_000162.1)exon7的164bp处发现了一处SNP(C/T),检测出CC和CT两种基因型。群体遗传分析显示,该位点在试验牛群体中均属于中度多态(0.25PIC0.5);关联分析结果显示,该位点在体斜长指标上,两种不同基因型的个体之间有显著的差异(P0.05)。[结论]表明该位点有可能作为黄牛生长性状辅助选择的标记之一,应用于中国地方黄牛的分子遗传育种工作中。     

朗德鹅填饲后不同组织PPARγ基因mRNA表达量差异的初步研究

本研究采用荧光定量PCR检测了填饲、未填饲朗德鹅肝脏、皮下脂肪、腹脂和肌肉组织PPARγ基因mRNA的表达水平,并与谷丙转氨酶等6种血清生化指标进行了相关性分析。结果表明：在肝脏组织中,填饲组PPARγ 基因mRNA的表达量极显著高于对照组中该基因的表达量（P〈0.01）;肝脏组织PPARγ 基因mRNA表达水平与肝脏指数、血清谷丙转氨酶含量呈显著正相关（P〈0.05）,腹脂PPARγ基因mRNA表达水平与肝脏指数、血清谷丙转氨酶含量呈显著正相关（P〈0.05）,皮下脂肪PPARγ基因mRNA表达水平与肝脏指数、血清谷丙转氨酶含量呈极显著正相关（P〈0.01）。结果表明肝脏、皮下脂肪、腹脂组织PPARγ基因mRNA的表达水平与朗德鹅肥肝形成有一定的关系。     

贵州地方黄牛种业现状、存在问题及对策

贵州优良黄牛种资源丰富,包括关岭黄牛、威宁黄牛、黎平黄牛、思南黄牛、务川黑牛5个优良地方品种。近年来黄牛种业发展较好,带领着当地人推进脱贫攻坚战。但在美好的景象之下我们也要看到它存在着品种退化、管理技术落后、技术人员不足等问题。本文就贵州地方黄牛种业现状、存在问题展开论述,进一步探讨了贵州地方黄牛种业发展方向,为其持续发展提供了详细对策。     

玉米油与猪油调和油对小鼠肝脏PPARα、PPARγ、RXRα基因表达的影响

目的:探讨不同剂量玉米油与猪油的1∶1调和油对小鼠PPARα、PPARγ、RXRα基因表达的影响。方法:将24只KM鼠随机分为3组,分别饲喂不同油脂含量的饲料,即3.8%推荐摄入量组(B组)、6.5%实际摄入量组(C)及对照组(A)。持续饲养8周并于每周一上午9:00称量每只小鼠体质量,8周后,采集肝脏组织,测定肝脏中的PPARα、PPARγ、RXRαm RNA表达水平。结果:小鼠体增长率与调和油剂量呈正相关;推荐摄入量组和实际摄入量组PPARαm RNA表达量均极显著低于对照组;推荐摄入量组PPARγm RNA表达量极显著高于对照组,实际摄入量组PPARγm RNA表达量极显著低于推荐摄入量组,实验组RXRαm RNA表达量与对照组比较无显著性差异。结论:每天摄入25 g玉米油和猪油的1∶1调和油能促进PPARγm RNA的表达,有效抑制非酒精性脂肪肝的形成。     

PPARα和PPARγ基因在不同脂尾型绵羊脂肪组织中的发育性表达研究

为研究PPARα和PPARγ基因在不同脂尾型绵羊脂肪组织中的发育性表达规律,以探讨这2个基因与绵羊脂肪代谢的关系。本研究以2个具有显著尾型差异的绵羊品种(广灵大尾羊和小尾寒羊)为研究对象,用实时荧光定量方法研究PPARα和PPARγ基因在2、4、6、8、10和12月龄个体的7种脂肪组织(大网膜、小网膜、尾部脂肪、皮下脂肪、肠系膜、肾周脂肪、腹膜后脂肪)中的mRNA的表达。结果表明,PPARα和PPARγ在各脂肪组织中都有表达。总体而言,浅层脂肪组织中的表达量低于深层脂肪组织。作为主效应,品种和月龄基本不影响2个基因的mRNA表达。尽管性别对PPARα的表达无显著影响,但在广灵大尾羊母羊中PPARγ的低表达导致性别本身及其与品种的互作达显著水平。鉴于组织间和年龄间的表达差异,这2个基因的表达具有明显的空间性,但时间性不明显。尽管二者在调节脂肪代谢方面的功能相反,但是存在协同作用。     

东北地区黄牛不同组织中HBsAg.HBeAg分布情况调查

用ELISA方法检测43头东北黄牛血清、肝脏和肌肉中乙型肝炎的HBsAg和HBeAg结果表明,同一动物不同组织中两种抗原分布不同,HBsAg阳性:肝脏27.9％、肌肉9.3％、血清2.3％;HBeAg阳性:肝脏11.6％而肌肉和血清均为阴性。实验结果说明:在检测动物乙型肝炎时,应测试两种指标,在动物与人类乙型肝炎相关性研究中,动物肝脏应当引起人们的高度警觉。     

东北地区黄牛不同组织中HBsAg.HBeAg分布情况调查

用ＥＬＩＳＡ方法检测４３头东北黄牛血清，肝脏和肌肉中乙型肝炎的ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ结果表明，同一动物不同组织中两种抗原分布不同，ＨＢｓＡｇ阳性：肝脏２７．９％，肌肉９．３％，血清２．３％；ＨＢｅＡｇ阳性：肝脏１１．６％而肌肉和血清均为阴性。实验结果说明：在检测动物乙型肝炎时，应测试两种指标，在动物与人类乙型肝炎相关性研究中，动物肝脏应当引起人们的高度警觉。     

贵州盘江黄牛发展中存在的问题

本文对贵州盘江黄牛发展中资源利用、保种、加工、销售及饲养方面存在的问题进行了阐述，并提出了解决措施。     

不同乳脂率德宏奶水牛乳腺组织中LPL基因表达研究

为了研究脂蛋白脂肪酶(lipoprotein lipase,LPL)基因在不同乳脂率德宏奶水牛乳腺组织中的表达情况,试验选取216头德宏奶水牛,采集乳样,用乳品分析仪测定乳脂率,德宏奶水牛的乳脂率大部分为(7.5±0.5)%,将其确定为中乳脂率组(M组),而乳脂率8.0%的确定为高乳脂率组(H组),乳脂率7.0%的确定为低乳脂率组(L组)。根据乳脂率测定结果,选择同一养殖小区中饲养条件及胎次相同、年龄相近、处于泌乳盛期的不同乳脂率的健康德宏奶水牛各3头,采集乳样,用乳成分分析仪测定乳脂率,采用气相色谱法测定脂肪酸含量;采集乳腺组织,采用实时荧光定量PCR法检测LPL基因mRNA表达水平,采用蛋白免疫印迹法检测LPL蛋白表达水平,并与德宏奶水牛乳中的乳脂率和脂肪酸含量进行相关性分析。结果表明:H组乳脂率、总脂肪酸和长链脂肪酸含量均极显著高于M组和L组(P0.01),M组显著高于L组(P0.05);H组不饱和脂肪酸含量极显著高于L组(P0.01),显著高于M组(P0.05),而M组与L组间差异不显著(P0.05)。LPL基因mRNA和蛋白相对表达量均为H组极显著高于L组(P0.01),而H组与M组、M组与L组间均差异不显著(P0.05)。乳脂率与乳中总脂肪酸、长链脂肪酸和不饱和脂肪酸含量间呈极显著正相关(P0.01);LPL基因mRNA表达水平与乳脂率、总脂肪酸含量、长链脂肪酸含量均呈显著正相关(P0.05),而与不饱和脂肪酸含量无显著相关性(P0.05)。说明LPL基因在乳脂合成过程中对脂肪酸的摄取和转运具有重要的调控作用。