1株羊源致病性屎肠球菌的分离与鉴定

鄂尔多斯市某羊场发生羊不明原因死亡的疫情,为了寻找病因并制定治疗方案和防治措施,本研究通过临床检查和实验室病理及分子生物学诊断方法确诊并提供治疗方案。试验以病死羊为试验材料,首先对其进行临床检查,包括尸体剖检和病理组织学采样。随后,采用常规无菌操作方法取回其脑组织至实验室,进行触片、染色镜检和分离细菌。病死羊剖检发现,肺脏淤血实变、心外膜点状出血、肾脏质地变软如泥、脑严重水肿等。选取脑组织制备病理切片,在镜下可观察到大脑皮质中性粒细胞浸润及中性粒细胞性血管管套现象;深层脑组织进行触片染色后,在镜下可见单个或成对排列的革兰氏阳性球菌,并分离出1株可疑细菌,命名为NEF1;采用Mega 6.0生物软件依据该分离株的16S rRNA基因而绘制的遗传进化树分析结果显示,分离株NEF1与屎肠球菌的国内分离株（MT197247.1）和伊朗分离株（KM495939.1）聚类在同一分支上,而与GenBank中其他屎肠球菌参考菌株遗传距离较远;药物敏感性试验结果表明,分离株NEF1只对环丙沙星呈现中度敏感,而对青霉素等其他选定的抗生素类药物均呈现明显的耐药性。本试验从病死羊脑组织中成功分离并鉴定了1株屎肠球菌NEF1,同时通过药物敏感性试验方法筛选出来的敏感药物有效控制了该病在发病羊场的进一步蔓延,为该地区羊细菌性疾病的有效防治提供了行之有效的试验数据。     

鸡源和兔源屎肠球菌的耐药性及相关基因分析

2020年4月,山东省某鸽场及某兔场发生腹泻情况,发病率较高.试验从病鸽及病兔肝脏中各分离到一株革兰氏阳性球菌,通过16S rRNA测序鉴定均为屎肠球菌.两株分离菌均未检测到cylA、gelE、ace等8种毒力基因.药敏试验和耐药基因结果显示,两个菌株都对β-内酰胺类耐药,耐药基因检测结果也一致.这些结果提示屎肠球菌或...     

一株鸡源屎肠球菌的分离及鉴定

为丰富可用作禽用微生态制剂的肠道益生菌株,研究选择7日龄健康雏鸡肠道内容物,利用KF链球菌琼脂培养基分离培养目标分离菌株,通过形态特征和培养特性、生理生化及16S r DNA分子鉴定法,最终确定1株分离菌为屎肠球菌,命名为HEW-A527,为后续禽类益生菌的益生功能及微生态制剂研究提供理论依据。     

保定地区羊源致病性粪肠球菌的分离鉴定及其毒力性与耐药性分析

为探究保定地区羊源致病性粪肠球菌的致病性与耐药程度,采集30只同时发生肺炎与腹泻的病羊肝脏、肺脏等内脏器官,进行病理学观察及病原体的分离培养、溶血性鉴定、16S rRNA测序、致病性试验、药敏试验、毒力基因与耐药基因的检测。结果显示,共分离到17株致病性粪肠球菌,分离率为56.67%(17/30)。在这些菌株中,检测出6种毒力基因,其中ace基因的检出率最高,检出率为100.00%(17/17)。分离菌对阿奇霉素、红霉素、庆大霉素、克林霉素4种药物的耐药率较高,为100.00%(17/17);对氨苄西林、阿莫西林、青霉素G等3种β-内酰胺类药物的耐药率较低,分别为11.76%(2/17),11.76%(2/17)和0.00%(0/17)。耐药基因中,大环内酯类ermB基因检出率为100.00%(17/17),未检出β-内酰胺类基因TEM。本研究为羊源致病性粪肠球菌的诊断、治疗和预防提供了依据。     

乌鲁木齐市宠物源粪肠球菌和屎肠球菌耐药性及耐药基因检测

为了解乌鲁木齐市宠物源粪肠球菌和屎肠球菌对临床常用抗菌药物的耐药性及其耐药基因携带情况,在乌鲁木齐市多家宠物医院、警犬基地、犬养殖基地采集宠物(犬和猫)直肠粪样449份进行粪肠球菌和屎肠球菌的分离鉴定,通过琼脂稀释法测定10种抗菌药物的最小抑菌浓度,利用PCR方法检测11种耐药基因.结果分离鉴定出宠物源粪肠球菌和屎肠球...     

一株黑叶猴源鸟肠球菌的分离鉴定及耐药分析

黑叶猴是我国一级重点保护动物,2018年11月贵州某动物园中黑叶猴出现死亡,为调查其原因,本研究采集病死黑叶猴的肺脏样品进行细菌分离纯化,并对分离菌进行革兰氏染色镜检、生化鉴定、16SrRNA基因序列鉴定、小鼠致病性试验及分离株的药敏试验和耐药基因检测.结果显示:经形态观察、培养特性鉴定以及16SrRNA的PCR鉴定,...     

动物源性肠球菌的分离鉴定及耐药性分析

了解肠球菌的耐药性,对控制该菌引起的感染,研制新一代抗菌药物具有重要价值。本试验从84种样品中分离鉴定出69株肠球菌,通过抗生素耐药性试验,发现肠球菌对多数抗生素表现出不同程度的耐药性,如青霉素耐药达52.2%、四环素达71.0%、万古霉素达85.5%。本文对肠球菌的分离与鉴定,药敏试验及风险分析三个方面作了分析和阐述。     

一株鸡源性肠球菌的鉴定及耐药机制分析

本试验旨在鉴定一株从肉鸡体内分离的广谱耐药菌,并从分子生物学角度对该株细菌的耐药机理进行探讨。根据《常见细菌系统鉴定手册》标准对该菌进行培养特性、生化试验鉴定,设计1对16S rDNA通用引物扩增其16S rDNA并测序鉴定;根据该菌的药物敏感性试验结果设计了12对引物扩增其基因组上耐药基因。细菌培养特性和生化试验结果显示该菌为一株肠球菌,PCR扩增出大小为1465 bp的目的片段,药敏试验显示该株细菌耐受多种抗生素,PCR扩增其耐药基因发现存在ant(6)-iv、OXA-10、tetM、CTX-M-1、TEM基因。最终鉴定该株细菌为一株肠球菌,耐药基因的存在是其产生耐药性的原因之一。     

牛源肠球菌的分离鉴定及毒力因子基因的检测

为探究牛源性肠球菌中6种毒力因子基因(ccf、asa1、ace、esp、cylA、gelE)的分布情况,采集了不同地区382份疑似隐形乳腺炎的奶样,常规分离纯化细菌,采用16SrRNA和16S~23SrRNA方法相结合的方法,共鉴定出了68株肠球菌并检测了其溶血特性和上述6种毒力基因的存在情况。结果显示,40株(58.82%)表现为α-溶血,10株(14.71%)为β-溶血,18株(26.47%)为γ-不溶血。68株(100%)携带asa1基因,49株(72.06%)携带gelE基因,43株(63.24%)携带ccf基因,12株(17.65%)携带ace基因,10株(14.71%)携带esp基因,6株(8.82%)携带cylA基因。54.41%的分离菌株同时携带gelE、ccf、asa1毒力基因,而青海民和分离株的esp与ace,gelE与ccf同时出现,有一定规律性;但溶血性基因cylA与14株溶血性肠球菌没有相关性。研究牛源肠球菌的溶血特性与毒力基因携带情况,对肠球菌性奶牛乳腺炎的防控具有指导意义,同时也为动物与人之间病原互相传播的研究提供试验依据。     

广东省养禽场肠球菌耐药性及毒力因子流行分布特征

旨在调查和分析广东省养禽场肠球菌的亚型屎肠球菌和粪肠球菌耐药性及其毒力因子流行分布特征,为控制禽源肠球菌耐药性传播、保障公共卫生安全提供理论依据。作者于2018年从广东省4个养禽场采集肠道样品493份,进行屎肠球菌和粪肠球菌的分离鉴定;采用琼脂二倍稀释法测定肠球菌的最小抑菌浓度（MIC）;PCR方法检测肠球菌的耐药基因和毒力基因。结果显示：1）共分离到125株肠球菌,其中粪肠球菌84株（鸡源66株,鸭源18株）;屎肠球菌41株,均来自鸡肠道样本。2）菌株对四环素、多西环素、红霉素几乎全部耐药,对氟苯尼考和氯霉素的耐药率高达89.60%和74.40%。屎肠球菌耐药率普遍高于粪肠球菌,而粪肠球菌对环丙沙星和利奈唑胺的耐药率高于屎肠球菌;鸭源粪肠球菌对利奈唑胺的耐药率（94%）显著高于鸡源粪肠球菌（39.4%）,屎肠球菌对利奈唑胺均敏感。从鸡分离的1株粪肠球菌对万古霉素耐药。3）耐药基因在屎肠球菌中的检出率高于粪肠球菌,鸭源分离株检出率高于鸡源。耐药基因tetL、fexA、ermB最为流行,检出率均高于90%。其次是optrA基因,检出率为73.60%,poxtA和fexB的检出率均低于20%。在3株鸭源粪肠球菌中检测出cfr基因。4）已检测的毒力基因中efaA的携带率最高,为63.04%（58/92）,其他依次为gelE（54.35%,50/92）、ace（47.83%,44/92）、asa1（44.57%,41/92）。对环丙沙星及高浓度氨基糖苷类耐药的菌株及携带cfr基因的菌株,大多携带agg、asal、gelE或ace。本研究显示养殖场禽源肠球菌耐药严重,鸭源肠球菌对利奈唑胺耐药率高,耐药基因和毒力基因流行且多样,且检测出人医临床重要抗生素耐药基因,应加强对养禽场肠球菌耐药性监测。     

Isolation,Identification and Drug Resistance Analysis of Pathogenic Enterococcus feacium of Sheep

To further identify the pathogenic strains and analyze their antibiotic resistance, the methods of pathogen isolating, the methods of Gram staining, biochemical tests and 16S rRNA PCR amplification, virulence tests, drug sensitive tests, virulence genes and resistance genes PCR amplification were used. The results showed that the strain was Gram-positive and revealed positive after reacting with 6.5% NaCl, melibiose, sucrose and etc., while revealed negative reactions with VP, hippurate, arabinose and etc.. It showed 100% similarity with Enterococcus feacium 16S rRNA gene sequence in GenBank after PCR amplification of 16S rRNA gene and BLAST alignment. It was found severe pathogenicity after virulence tests in mice. The strain was highly resistant to oxacillin, penicillin G of β-lactam antibiotics and norfloxacin, ciprofloxacin, levofloxacin of quinolones antibiotics and tetracycline, while was sensitive to antibiotics of erythromycin, vancomycin and clindamycin. It revealed that virulence factor genes Asal, cylA, acm and resistance genes TetM, ant(6)-Ⅰ, aac(6')-aph (2"), ermB showed positive. The results showed that the bacteria was Enterococcus feacium, it had a strong pathogenicity and severe drug resistance, which might be related to the highly positive rates of virulence genes and drug resistance genes.     

西藏那曲市羊源大肠杆菌分离鉴定及耐药性研究

为了解西藏那曲市羊大肠杆菌的耐药情况,指导临床进行合理用药,本试验从那曲市采集羊新鲜无污染腹泻物92份,进行大肠杆菌显色培养基分离、革兰氏染色镜检、生化鉴定、分子生物学鉴定、致泻性大肠杆菌生化鉴定、药敏试验及耐药基因检测。结果显示,分离菌株在大肠杆菌显色培养基上呈蓝色菌落、革兰氏染色为粉红色的短杆菌,通过生化鉴定及23S rRNA的PCR检测得到26株羊源大肠杆菌,分离率为28.3%;其中25株符合致泻性大肠杆菌生化特性,致泻菌株分离率为27.2%。药敏试验结果显示,所得25株羊源大肠杆菌对氨苄西林的耐药性较高,耐药率为24.0%;对羧苄西林、卡那霉素的耐药性次之,耐药率为8%;对哌拉西林、头孢呋辛、庆大霉素、四环素、米诺霉素等药物耐药率为4%;对诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星等药物极为敏感,可作为临床用药。5种耐药基因检测结果显示,bla_TEM基因检出率为100%,表明分离菌均含有相应的耐药基因。以上结果表明,西藏那曲市羊源大肠杆菌对多种药物耐药,提示在临床实践过程中应注重合理用药、联合用药,减缓大肠杆菌耐药性的产生。     

杂交鲟维氏气单胞菌的分离鉴定及其耐药性分析

试验旨在对贵州省某养鱼场发病杂交鲟体内分离的优势菌株进行鉴定、致病力探究及耐药性分析。本试验通过革兰染色、生化鉴定、细菌16S rDNA基因分析、动物回归试验、药敏试验、部分毒力基因检测与耐药基因检测。结果显示:分离菌为革兰阴性短杆菌,细菌16S rDNA扩增测序与比对,得大小为1 477 bp的片段,其片段基因序列与GenBank中的维氏气单胞菌序列相似度达99.00%,药敏试验显示:分离菌对环丙沙星、氟苯尼考、头孢哌酮等药物敏感,对四环素、磺胺异唑、苯唑西林药物出现耐药,耐药基因检测显示:分离菌含有耐磺胺基因(Sul1,sul2)、Ⅰ类整合子(Intl1)3种耐药基因,毒力基因检测显示:分离菌含有气溶素(Aer)和粘附素(Aha)两种毒力基因。综合本试验结果,分离菌为维氏气单胞菌(A.veronii),含有毒力基因,并对环丙沙星、氟苯尼考、头孢哌酮等药物敏感。本试验对贵州地区鲟发病流行的病因做出准确诊断,为该地区细菌性鱼病预防与合理用药提供依据。     

湖羊乳房炎病原菌的分离鉴定及其耐药性分析

为分析湖羊场临床乳房炎病原菌种类及其耐药特征,对患病湖羊乳样中病原菌进行分离鉴定及耐药性分析.根据形态学和分子生物学鉴定结果,分离得到3种乳房炎病原菌,共计28株,其中金黄色葡萄球菌14株,大肠杆菌10株,粪肠球菌4株;耐药试验结果显示,3种病原菌均对左氟沙星、庆大霉素、氯霉素、环丙沙星、诺氟沙星敏感,对青霉素、红霉素...     

羊源沙门氏菌的分离鉴定及致病性和耐药性分析

【目的】 分离张家口某地区羊源沙门氏菌并检测其血清型、毒力基因、耐药性及耐药基因,分析分离株表型和基因的相关性和差异性。【方法】 将样品用选择培养基增菌并纯化培养,挑选疑似的沙门氏菌单菌落进行革兰氏染色、镜检和生化鉴定。根据沙门氏菌属特异性基因invA的核苷酸序列进行PCR和血清型鉴定。利用SPF昆明小鼠对分离株进行致病性试验并测定其半数致死量。PCR扩增毒力岛基因hilA、avrA、sseL、ssaQ、mgtC、siiD和sopB,肠毒素基因stn,质粒毒力基因spvR。采用Kirby-Bauer纸片扩散法进行药敏试验,PCR扩增β-内酰胺酶耐药基因bla_TEM、bla_CMY和bla_OXA,氟喹诺酮耐药基因qnrS、oqxA和oqxB,磺胺类耐药基因sul1、sul2和sul3,四环素类耐药基因tetB及氨基糖苷类耐药基因aadA1。根据PCR检测结果,将扩增的毒力基因和耐药基因进行测序,并与NCBI中相应的参照基因进行BLAST比对分析。【结果】 分离得到4株羊源沙门氏菌,血清型鉴定均为鼠伤寒沙门氏菌。分离株对小鼠具有致病性,4株分离株的半数致死量为5.67×10⁷~6.45×10⁷ CFU。分离株可检出毒力岛基因hilA、avrA、sseL、ssaQ、mgtC、siiD和sopB,肠毒素基因stn及质粒毒力基因spvR,检出率均在50%以上。分离株对复方新诺明、利福平、林可霉素、青霉素、氨苄西林耐药,对庆大霉素、环丙沙星敏感。分离株可检出β-内酰胺类耐药基因bla_TEM、氟喹诺酮耐药基因qnrS、磺胺类耐药基因sul1和sul2。【结论】 本研究分离的羊源沙门氏菌的毒力表型与染色体和质粒携带的毒力基因有关。分离菌株携带β-内酰胺类、磺胺类耐药基因,与耐药表型相符,临床上可将庆大霉素和环丙沙星作为首选药。     

Isolation,Identification and Drug Resistance Analysis of Interstinal Pathogenic Escherichia coli and Salmonella Isolated from Diarrhea Piglets

In order to find out the serotype, resistant phenotype and genotype of Escherichia coli (E. coli) and Salmonella in piglets, this study collected 128 samples of diarrhea piglets from seven large-scale pig farms in five cities in Guizhou province, and the E. coli and Salmonella were isolated and identified. The pathogenicity of the strain was identified by animal test. The drug resistance of the main pathogen was tested by drug susceptibility paper. The resistance gene of each pathogen was detected by PCR. The drug resistance and genotype correlation of the bacterial were analyzed. The results showed that 78 strains of pathogenic E. coli and 21 strains of Salmonella were isolated and identified in this study. The serotypes of pathogenic E. coli were predominantly O138 and O87. Salmonella Typhimurium and Salmonella Enteritidis were predominant serotypes. The susceptibility test showed that the resistant strains of 78 strains of E. coli were more than 80% resistant to β-lactams and more than 40% for other antibacterials. The resistance rate of 21 strains of Salmonella to aminoglycosides was more than 50% and more than 20% to other types of antibacterials; 12 and 10 kinds of drug resistance-related genes of E. coli and Salmonella were detected, respectively; The coincidence rate of resistant genotype and phenotype of two kinds of bacteria were above 60%, and both were multiple drug resistance. This study provided a theoretical basis for comprehensive prevention and control of piglets diarrhea.     

腹泻仔猪肠道致病性大肠埃希氏菌和沙门氏菌的分离鉴定与耐药性研究

为探明仔猪细菌性腹泻肠道致病性大肠埃希氏菌和沙门氏菌流行的血清型、耐药表型及耐药基因型,本试验采集了贵州省5个地（州）市7个规模化养猪场的128份腹泻仔猪肠道样本,并对采集的样本进行了大肠埃希氏菌和沙门氏菌分离与鉴定,通过动物试验鉴定菌株的致病性,利用血清学方法鉴定其血清型,并通过药敏纸片法对主要致病菌进行耐药性研究,采用PCR技术检测各致病菌株耐药相关基因,分析细菌耐药表型和耐药基因型相关性。结果显示,本研究共分离鉴定到78株致病性大肠埃希氏菌与21株沙门氏菌,致病性大肠埃希氏菌血清型以O138、O87为主,沙门氏菌血清型以鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌居多;药敏试验结果表明,本试验分离到的78株致病性大肠埃希氏菌对β-内酰胺类药物耐药率达80%以上,对其他种类的抗菌药耐药率均超过40%,分离鉴定的21株沙门氏菌对氨基糖苷类药物耐药率达50%以上,对其他种类的抗菌药耐药率均达20%以上;本试验分离鉴定的致病性大肠埃希氏菌共检出12种耐药相关基因,沙门氏菌共检出10种耐药相关基因,两种细菌耐药基因型与耐药表型符合率均达60%以上,且均为多重耐药。本研究为仔猪腹泻的综合防控提供了理论依据。     

Isolation,Identification and Drug Resistance Analysis of Avian Salmonella in Anhui

In order to investigate the situation of predominant strain and antibiotic resistance of avian Salmonella in Anhui province, 42 strains Salmonella were isolated and identified from 116 suspected samples by culture characteristics, microscopic examination, biochemical test, PCR and serological identification,then drug resistance was analyzed by Kindy-Bauer method. There were 5 groups of 11 serotypes in 42 strains Salmonella, of which 30 strains belonged to B serogroup, 2 strains to A serogroup, 7 strains to D serogroup, 2 strains to C₁ serogroup, 1 strain to C₂ serogroup, and Salmonella Typhimurium of B serogroup were the predominant serotypes. All Salmonella isolates resistant rates to amikacin, levofloxacin and ciprofloxacin were less than 20%, and the resistance rates to ampicillin, streptomycin, furazolidone, spectinomycin, cotrimoxazole and doxycycline were more than 50%, while resistance rate to ampicillin was 97.62%, and 41 isolates had multiple drug resistance. The results showed that Salmonella Typhimurium was the predominant serotypes of avian Salmonella in Anhui, and isolates showed multiple drug resistance. This study would provide the data basis for the comprehensive prevention and treatment of clinical medicine of avian Salmonella.     

竹鼠源绿色气球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了查明造成贵州某竹鼠养殖场竹鼠死亡病因,本研究从送检竹鼠体内分离到1株细菌（GZ-S1）,通过形态学观察、生化试验、16S rRNA基因序列分析、药敏试验及耐药基因检测、细菌致病性试验等方法对该分离菌进行鉴定。结果显示,该分离菌在鲜血琼脂平板上长出凸起、表面光滑、白色、呈α-溶血的革兰氏阳性球菌;生化试验显示该分离菌对蔗糖、果糖、葡萄糖、硝酸盐还原试验、靛基质试验、枸橼酸盐试验等均为阳性,半乳糖、甘露糖、硫化氢试验、VP试验、MR试验、赖氨酸脱羧酶接触试验等均为阴性;经16S rRNA基因测序及BLAST比对、系统进化树分析发现,分离菌株GZ-S1与气球菌菌株201707CJKOP-Y31（MG593595.1）、绿色气球菌菌株Mnlv2（GQ246745.1）等12株参考菌株在同一分支上。细菌药敏试验结果显示,分离菌株对苯唑西林、羧苄西林、头孢曲松3种药物敏感;对阿莫西林、氧氟沙星、复方新诺明、磺胺异噁唑、多黏菌素B、氟苯尼考、头孢拉定7种药物中敏;对恩诺沙星、卡那霉素、妥布霉素、新霉素、多西环素、四环素6种药物耐药。耐药基因检测结果显示,该分离菌株携带5种耐药基因：tetA（1 031 bp）、tetB（513 bp）、tetD（326 bp）、aadd（146 bp）、aac（6'）Ⅰb（655 bp）,与药敏表现型相符。人工感染试验结果显示,该分离菌有致病力。本研究对某竹鼠养殖场竹鼠发病的原因作出了准确诊断,为该养殖场细菌性竹鼠病的预防和合理用药提供参考。