产β-甘露聚糖酶内生菌的筛选、鉴定及酶学性质研究

试验从萌发的花魔芋实生种子中筛选出一株产β-甘露聚糖酶的内生菌,对该菌株进行鉴定并研究所产β-甘露聚糖酶的酶学性质。采用透明圈法初筛,DNS法测酶活力,摇瓶发酵复筛获得产酶最高的菌株,利用16S rDNA序列分析对该菌株进行鉴定并对所产酶的基本酶学性质进行研究。结果显示,该高产β-甘露聚糖酶的内生菌株与路德维希肠杆菌（Enterobacter ludwigii）同源性达99%。所产β-甘露聚糖酶的最适温度为60℃,在30~50℃条件下较稳定;最适pH为6.0,在pH 4.0~9.0的条件下较稳定;Zn²⁺（117.84%）、EDTA（115.80%）、Cu²⁺（113.76%）对β-甘露聚糖酶有较强的激活作用,Mn²⁺（22.02%）对其有强烈的抑制作用;以魔芋粉为底物时,Km值为26.65 mg/mL。该菌摇瓶发酵72 h后,β-甘露聚糖酶酶活力达9.48 U/mL,具有良好的酶学性质,在动物饲料工业中具有广阔的应用前景。     

β-甘露聚糖酶的酶学性质研究

采用DNS法对黑曲霉产的β-甘露聚糖酶的酶学性质进行了研究。研究结果表明：该酶的最适反应温度为65℃;具有较强的耐热性,在温度为80℃和90℃处理10min仍有超过90％的活性;最适pH值为4．0,在pH值2．0—7．0的范围内,相对酶活保持在80％以上。该酶在最适反应温度、稳定性能等方面表现优良,适于作饲用添加剂。     

β-甘露聚糖酶的酶学性质研究

采用3,5-二硝基水杨酸法(DNS)对β-甘露聚糖酶的酶学性质进行了研究,研究结果表明:酶的最适反应温度为55℃;最适反应pH为6.5,在pH 5.5～10有较大的活性区间;有较强的耐碱性,在pH 6～10处理2 h仍有超过85%的活性;金属离子和螯合剂对酶活无明显的激活或抑制作用;该酶抵抗胃蛋白酶和胰蛋白酶的能力比较强.     

一株产甘露聚糖酶的真菌鉴定及酶学性质研究

甘露聚糖酶是战略性新兴产业重点研发产品之一。微生物是工业生产应用甘露聚糖酶的主要来源。树叶覆盖的腐殖土壤蕴含丰富的微生物资源。研究从腐殖污泥中分离得到一株真菌,经过ITS序列分子鉴定分析,该菌株SD02属于枝孢菌属。枝孢菌属专性营养型或半腐生型的生活方式决定其具有木质纤维素降解的能力,而关于枝孢菌来源的甘露聚糖酶的报道极少。试验对液体发酵枝孢菌SD02分泌胞外甘露聚糖酶及其粗酶液的酶学性质进行研究。结果表明:其最适温度为50℃;最适pH值为5.5和10.0,并且在2个最适pH值之间均能维持较高的酶活力;同时,具有较宽的pH稳定范围。枝孢菌SD02发酵上清液中含有甘露聚糖酶、葡聚糖酶和α-半乳糖苷酶。但是,枝孢菌SD02来源的葡聚糖酶和α-半乳糖苷酶不能有效地协助甘露聚糖酶降解甘露聚糖。枝孢菌来源的甘露聚糖酶具有较宽的pH值活性范围和稳定性,该酶在饲料、食品和造纸等领域具有应用潜力。     

产β-甘露聚糖酶菌株的筛选及产酶条件优化的研究

采用筛选培养基透明圈法从土壤中筛选到1株高效分泌β-甘露聚糖酶的细菌,经形态和生理生物化学鉴定,确定为枯草芽孢杆菌.试验对该菌株的液体摇瓶产酶发酵条件进行单因素的优化,优化后的产酶发酵条件:碳源为2.5％魔芋精粉,氮源为0.5％硝酸钠,在250 mL三角瓶中装料量为30 mL,起始pH为7.3 ～7.5,接入1 mL种龄为20 h的种子液,190 r/min,35℃下培养48 h.在此条件下,β-甘露聚糖酶酶活可达375 U/mL.     

产β-甘露聚糖酶内生菌最适发酵条件的优化

植物内生菌是一类种类丰富、生物学功能多样的微生物。试验研究将黄豆中筛选出的1株酶活力较高的枯草芽孢杆菌内生菌HD-1,在摇瓶发酵培养水平,对发酵pH值、温度、转速、接种量、发酵时间及培养基成分进行优化。结果表明,发酵最适培养条件为:温度35℃、pH值7.0、转速200 r/min、发酵72 h、接种量5%;发酵最适产酶培养基组成:魔芋粉3%、(NH4)2SO40.375%;最优的离子浓度分别为FeSO40.001%、NaCl 0.5%、MgSO40.01%,此时HD-1的产酶水平达到98.3 U/ml,约是初始酶活力的1.8倍,发酵罐验证试验得到酶活高达193.12 U/ml。     

甘露聚糖酶的酶学性质研究

<正>甘露聚糖酶是一种半纤维素水解酶,以内切方式降解β-1,4糖苷键,降解产物的非还原末端为甘露糖,其作用底物包括葡萄甘露聚糖、半乳甘露聚糖及β-甘露聚糖等。它不仅能够降低肠道粘度,促进营养物质的消化和吸收,而且还可消除豆类中富含的β-     

芽孢杆菌所产β-甘露聚糖酶性质研究

本文通过硫酸铵沉淀、透析带以及聚乙二醇6000对粗酶液进行浓缩分离．获得较为纯净的β-甘露聚糖酶,然后通过常规方法对其进行性质研究。结果发现,该酶在pH4-8和60℃以下稳定．作用最适条件是pH5．0和60℃：另外对金属离子以及EDTA对该酶活力的影响也进行了研究．发现Cu^2＋和Co^2＋对酶有比较显著的激活作用．Ba^2＋只有微弱的激活作用,Hg^2＋对酶有强烈的抑制作用,Al^3＋、Mn^2＋、Fe^2＋、Zn^2＋、Ag^＋、Fe^3＋对酶有一定的抑制作用,EDTA、Ca^2＋、Mg^2＋、K^＋、Na^＋对酶活性影响不大。     

产β-甘露聚糖酶菌株筛选及制备甘露寡糖产物分析

从河南省济源市猪场仔猪粪便中筛选得到1株产β-甘露聚糖酶的菌株,通过外观形态学分析、生理生化结果分析、16S rDNA序列分析及构建系统发育树结果,鉴定该菌株为沙福芽孢杆菌（Bacillus safensis）,命名为WBT0011。通过β-甘露聚糖酶和魔芋胶、瓜尔豆胶制备甘露寡糖,发现魔芋胶和瓜尔豆胶降解为多种甘露寡糖产物,说明二者水解较为完全,本研究旨在为β-甘露聚糖酶的应用及进一步工业化生产甘露寡糖的工艺优化提供帮助。[关键词] β-甘露聚糖酶|筛选|沙福芽孢杆菌|甘露寡糖     

复合型β-甘露聚糖酶酶学性质、稳定性和酶解效果的体外评估

试验旨在探究酸、中性β-甘露聚糖酶组合后的酶学性质、稳定性和酶解效果.试验将两种β-甘露聚糖酶按照1∶0、7∶3、5∶5、3∶7和0∶1的酶活力比混合,采用DNS法测定5种配比下的酶学性质、对饲料制粒温度和猪胃肠消化液的稳定性、对饲料原料的酶解情况.结果 显示,酸性甘露聚糖酶最适pH值为3.5,耐受动物胃肠道pH值,热...     

芽枝状枝孢菌棕榈粕发酵产甘露聚糖酶的酶学性质研究

棕榈粕是一种优质饲粮,但棕榈粕中抗营养因子甘露聚糖含量高。β-甘露聚糖酶可降解甘露聚糖,改善饲料营养价值。真菌是甘露聚糖酶的主要来源之一,但目前所查阅的文献中,未见枝孢菌来源甘露聚糖酶的报导。芽枝状枝孢菌SD01可在棕榈粕为唯一碳源的培养基中生长,并在发酵上清液中检测到甘露聚糖酶活性。本试验旨在用棕榈粕作为唯一碳源的培养基发酵芽枝状枝孢菌(Cladosporium velox)SD01生产甘露聚糖酶,并对其酶学性质、底物特异性和降解产物进行研究。结果表明:芽枝状枝孢菌SD01来源甘露聚糖酶最适pH 4.5;最适温度75℃;在pH 4.0~6.0及50℃以下条件稳定;对侧链分支频率低的甘露聚糖的降解活性较高。本研究制得了枝孢菌属来源的甘露聚糖酶,并对其相关酶学性质进行研究。     

椰果内生枯草芽孢杆菌YZ-21甘露聚糖酶基因的克隆、表达及酶学性质研究

为了提高β-甘露聚糖酶的活性及稳定性,通过基因克隆技术克隆并表达了一株分离自椰果的内生枯草芽孢杆菌YZ-21(Bacillus subtilis YZ-21)β-甘露聚糖酶基因ManA,并使用3,5-二硝基水杨酸法(DNS)测定了酶活性及稳定性。结果表明：β-甘露聚糖酶基因ManA序列全长1 104 bp,与相同来源的β-甘露聚糖酶同源性高达97.56%,具有ManA保守结构域,符合糖苷水解酶家族GH26的典型特征。将ManA连接到pET-32a表达载体上,构建重组表达质粒pET-ManA,并导入大肠杆菌BL21(DE),经诱导获得了β-甘露聚糖酶基因ManA的高效表达。表达产物经过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)凝胶电泳分析,显示条带大小约为56.07 ku。重组酶活性为372.86 U/mL,酶学性质研究发现其最适反应温度为40℃,最适pH为7.0,最佳反应底物是瓜豆胶,酶活性能够达到392.54 U/mL。在55℃处理120 min后,酶活仍保留69.8%,pH为4.0～9.0时处理30 min后酶活性均能保留60%以上,且金属离子Ca²⁺、Co     

β-甘露聚糖酶研究进展

β-甘露聚糖酶是水解以β-1,4-D-吡喃甘露糖为主链的甘露寡糖、甘露多糖的内切水解酶。β-甘露聚糖酶能够消除β-甘露聚糖的抗营养作用,在动物饲粮中添加β-甘露聚糖酶能够促进饲料转化效率、提高机体免疫机能。本文从β-甘露聚糖酶的来源、提纯方法、酶学性质、作用机理及应用等方面,对β-甘露聚糖酶做一简要介绍。     

耐碱性β-甘露聚糖酶产生菌的分离鉴定及发酵条件优化

研究旨在高产β-甘露聚糖酶饲用益生芽孢杆菌的筛选及培养条件优化。用透明圈法筛选得到一株产β-甘露聚糖酶活力较高的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WMYB-2,通过单因素实验、Box-Behnken实验及响应面分析对该菌的产酶培养基及培养条件进行了优化,并对其酶学性质进行了初步研究。结果表明,该菌株产酶的最佳培养基及发酵条件为:魔芋微粉10.0 g/l,大豆蛋白胨10.0 g/l、CaCl_2 0.6 g/l、K_2HPO_4 0.8 g/l、MgSO_4·7H_2O 1.0 g/l,pH三角瓶,37℃、220 r/min发酵36 h,酶活力达355.75 U/ml,是初始酶活力的3.5倍。该酶的最适反应温度和pH值分别为55℃和5.5。在45～55℃内酶活力稳定,55℃保温30 min和3 h后其相对酶活力保留92%和57%;在pH值5.0～10.0内酶活力稳定,在pH值9.0和10.0的环境下处理2 h其相对酶活力保留95%和81%。Li~+和K~+对该酶具有一定的激活作用。该酶具有良好的耐碱特性及应用潜力。     

β-葡聚糖酶产生菌的分离、筛选及鉴定

采用刚果红平板筛选法从动物粪便中分离和筛选高产β-葡聚糖酶的菌株,选取水解圈直径与菌落直径比值较大的菌株进行酶活力的测定,得到一株酶活力较高的菌株T-4-3,酶活力达到21.9 U/mL。对该菌株进行形态观察和生理生化特征分析,初步鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus sp.),将其16S rDNA序列与GeneBank中已知标准菌株的16S rDNA序列进行比对,并用Neighbor-joining方法构建菌株T-4-3进化树,结果表明,T-4-3与标准菌株CP000560 Bacillus amyloliquefaciens聚于同一分支,同源性高达100%。     

木聚糖酶产生菌的筛选盆鉴定及酶学性质研究

采用富集培养和透明圈平板筛选的方法,从长期堆放青贮饲料的土壤中分离到7株木聚糖酶产生菌。选取透明圈最大的木聚糖酶产生菌X7作为基础菌,对其进行16S rRNA部分序列PCR扩增测定,经基因序列比对(BLAST)同源性分析确定X7为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis strain GD3b,Genebank编码:HM055602.1)。然后将X7进行发酵产酶并对其酶学性质进行初步研究,结果表明:在温度37℃、摇床转速200 r/min和发酵2~3 d所产的木聚糖酶酶活可达13.47 U/mL;其相应粗酶液酶促反应的最适pH为6,酶促反应的最适温度为55℃。     

β-甘露聚糖酶及甘露寡糖生产技术

技术成果：本成果来源国家“863”高技术课题，该技术提供一种高活性的甘露聚糖酶，及其高密度发酵生产方法，以及含有该甘露聚糖酶的动物饲料。重组酵母中甘露聚糖酶的表达量达到200000U／mL发酵液，比现有甘露聚糖酶的产量高，生产成本低。此甘露聚糖酶用于制备甘露寡糖，制备的甘露寡糖用于动物饲料。     

产β-葡萄糖苷酶芽孢杆菌Z-1的筛选、鉴定及其酶学特性研究

试验筛选得到了一株产β-葡萄糖苷酶的枯草芽孢杆菌Z-1。利用七叶苷和柠檬酸高铁铵为底物,通过显色反应,在土壤中初筛得到15株产β-葡萄糖苷酶的菌株,复筛得到5株产酶活性较高的菌株,其中Z-1活性相对最高。对菌株进行生理生化和16S r DNA序列同源性比较分析,鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌。采用DNS法对粗酶液的酶学特性进行了测定。     

黑曲霉AS6034酸性β-甘露聚糖酶的性质研究

对黑曲霉AS6034菌株所产酸性β-甘露聚糖酶的重要酶学性质进行了研究,该酶最适pH为3.2、在pH3.8左右保存2h稳定性较好,最适温度为45℃,在50℃和60℃恒温水浴中存放160min后,酶活力无明显变化,最适底物浓度为1.0%,并对该粗酶液反应动力学进行了研究,得到了以角豆胶为底物的动力学参数V_m为2.85μmol/(g·min)、Km为2.21mg/mL。