仔猪腹泻致病性大肠杆菌分型鉴定及耐药性分析

为了解贵州省规模化养猪场腹泻仔猪致病性大肠杆菌流行情况及耐药性变化,本研究运用凝集试验、PCR和药敏纸片琼脂扩散法等方法对分离的78株致病性大肠杆菌进行血清型、毒力基因及耐药性分析。结果显示,78株致病性大肠杆菌以O138、O87血清型为主,占定型菌株的60.8%;其中62株致病性大肠杆菌检出毒力基因,检出率为79.5%,可分为8种毒力基因类型,分属肠致病性大肠杆菌（EPEC）、肠产毒性大肠杆菌（ETEC）和肠聚集性大肠杆菌（EAEC）,毒力基因eaeA、elt和escV检出率较高,分别为38.5%、28.2%和21.8%;分离到的致病性大肠杆菌对β-内酰胺类药物高度耐药,均为多重耐药株,耐药种类可达8种以上。结果表明,当前贵州省规模化养猪场腹泻仔猪致病性大肠杆菌的毒力基因检出率较高且基因型复杂,耐药性严重。本试验结果可为规模化养猪场防控仔猪腹泻提供基础资料及理论依据。     

双城地区规模化猪场仔猪大肠杆菌性腹泻毒力基因检测

仔猪腹泻是制约规模化猪场猪只生长速度和成活率的主要疾病,病原包括病毒、细菌和寄生虫等,其中,以致病性大肠杆菌引起的仔猪黄痢、仔猪白痢断奶仔猪腹泻最为常见。致病性大肠杆菌菌毛能够使菌体粘附在肠上皮细胞,促     

4 株致病性大肠杆菌致犊牛腹泻的分离鉴定及毒力与耐药性分析

[目的]为查明致北疆地区某牧场犊牛腹泻的病原,对脱水濒死10日龄新生犊牛进行剖检,无菌采集充血肠系膜淋巴结2 份。[方法]通过采用培养、染色镜检、生化特性考察、PCR鉴定等方法来分离鉴定致病菌,并对分离致病菌株进行相关毒力基因检测及药物敏感性试验。[结果]经分离鉴定分离出4 株大肠杆菌,毒力基因PCR检测结果K99、Sta、irp2、Eae基因分别在163 bp、314 bp、301 bp、552 bp处有清晰条带,与预期[目的]片段大小相符;药物敏感性试验结果表明,分离株对头孢哌酮、链霉素、庆大霉素敏感,对恩诺沙星、卡那霉素高度敏感。[结论]犊牛腹泻要以预防为主,治疗建议采用对因治疗,并配合提高抵抗力的中兽药进行。     

泰州地区致仔猪腹泻奇异变形杆菌鉴定及其毒力基因与耐药性检测

为了分析泰州地区致仔猪腹泻奇异变形杆菌致病性、毒力基因及耐药性,试验从泰州地区规模化养殖场采集腹泻仔猪粪便、肛拭子等114样品,分离得到42株奇异变形杆菌,采用PCR法和K-B药敏纸片法对分离的42株奇异变形杆菌进行毒力基因与耐药性检测。结果表明,42株奇异变形杆菌毒力基因zapA、pmfA检出率最高,检出率分别为95.2%、92.9%,毒力基因ureC、mrpA、atfC检测出率在40.5%～50.0%之间;42株奇异变形杆菌对阿莫西林、大观霉素、氨苄西林等11种药物耐药率在66.7%以上,对头孢噻呋、头孢噻肟、恩诺沙星等5种药物耐药率在11.9%～26.2%之间,说明了该地区分离的致仔猪腹泻奇异变形杆菌携带多种毒力基因,耐药性严重。本试验为该地区分离的致仔猪腹泻奇异变形杆菌感染的防控提供参考依据。     

河西走廊地区犊牛腹泻致病性大肠杆菌分离鉴定、毒力因子及耐药性检测

[目的]为了分析河西走廊地区犊牛腹泻致病性大肠杆菌携带毒力基因和耐药性情况,[方法]2020—2021年在河西走廊地区采集患腹泻病犊牛的粪便、肛拭子及肝脏等病料组织279份,采用人工感染试验动物、PCR方法和K-B药敏纸片法分别检测犊牛腹泻性大肠杆菌致病性、毒力因子和耐药性。[结果]结果表明,分离得到了126株大肠杆菌,其中79株犊牛腹泻性大肠杆菌能引起小鼠死亡;分离的79株致病性大肠杆菌的毒力基因crl、irp2、fimH、papC、K88、K99、stx1、stx2检测率在40.5%～100%之间,其他毒力基因检测率在15.2%～34.2%之间;分离的79株致病性大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、新霉素等8种药物的耐药率在49.4%～96.2%之间,对其他药物的耐药率在5.1%～32.9%之间。[结论]从河西走廊地区患腹泻病犊牛病料组织中分离得到79株致病性大肠杆菌,这些菌株携带多种毒力基因,对临床中常用的抗菌药物产生了耐药性。     

新疆地区腹泻仔猪源大肠杆菌的分群、血清型鉴定及耐药性分析

旨在了解新疆地区腹泻仔猪源大肠杆菌的系统进化分群、血清型及耐药性。本研究对154份腹泻仔猪粪便样品进行大肠杆菌的分离鉴定,采用多重PCR方法对分离株进行系统进化分群和O血清型鉴定,通过K-B纸片法对其进行药物敏感性检测并通过PCR方法进行耐药基因检测。结果显示：共分离到154株大肠杆菌,包括ETEC(n=24)、STEC(n=21)、EPEC(n=1)、EPEC/STEC(n=2)、ETEC/STEC(n=1)和ETEC/EPEC(n=1),其他104株。系统进化分群显示,多数菌株属于B1(37%)和A群(31%)。定型菌株44株,分别属于10种血清型,以O154、O12、O8、O141和O175为主要流行血清型。151株(98%)为多重耐药菌,对复方新诺明、四环素、氨苄西林、链霉素和氯霉素的耐药率为81%～100%,对阿莫西林/克拉维酸、头孢噻肟、庆大霉素、头孢曲松、环丙沙星和阿米卡星的耐药率为31%～66%,对左氧氟沙星、多黏菌素B、头孢他啶、头孢吡肟、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦和亚胺培南的耐药率为1%～19%。耐药基因tetA(88%)、tetG(60%)和cmlA(4...     

仔猪腹泻源大肠杆菌耐药性调查及耐药基因检测

对泰州地区分离的仔猪腹泻源大肠杆菌的耐药性及其携带的相关耐药基因情况进行检测,为养殖场今后合理用药提供科学依据。采用微量肉汤稀释法对分离的49株大肠杆菌进行8种抗菌药物的药敏试验;采用PCR方法对多黏菌素耐药基因mcr-1及超广谱β-内酰胺酶(ESBL)耐药基因blaCTX-M、blaSHV和blaTEM进行检测。药敏试验结果显示:大肠杆菌对氯霉素、氟苯尼考、氨苄西林、四环素、庆大霉素和恩诺沙星等的耐药率分别达到100%、97.96%、95.92%、89.80%、59.18%和51.02%;而对多黏菌素E和头孢噻呋的耐药率也达到44.90%和32.65%。进一步耐药基因检测结果显示:ESBL耐药基因中blaCTX-M的检出率最高,达到12.24%(6/49);其次为blaSHV,8.16%(4/49);有一株大肠杆菌携带blaTEM基因。其中一株同时携带blaCTX-M和blaSHV。多黏菌素耐药基因mcr-1的检出率达到30.61%(15/49),其中4株同时携带blaCTX-M基因。泰州地区分离大肠杆菌耐药情况和多重耐药现象较为严重,多黏菌素耐药基因mcr-1及ESBL耐药基因blaCTX-M、blaSHV和blaTEM的广泛分布表明这些耐药基因存在快速传播的风险。因此,有必要加强猪场细菌耐药性监测。     

羊源大肠杆菌血清型鉴定、毒力基因检测及耐药性分析

为分析内蒙古扎兰屯地区羊源大肠杆菌血清型分布、毒力基因及耐药性流行情况,采集患羊鼻腔拭子150份,分离大肠杆菌,并采用O血清型玻板凝集试验、PCR法和K-B药敏纸片法对分离的大肠杆菌致病菌株进行血清型、毒力基因及耐药性检测。结果显示, 45株大肠杆菌致病菌株分属10种血清型,以O111、O127、 O38为流行的优势血清型,分别占致病菌株的26.7%、22.2%和17.8%;分离菌株毒力基因irp2、fyuA、hlyA、hlyE、Ler、eaeA、Ehly检出率在33.3%以上,其他毒力基因检出率在4.4%～14.3%之间;分离菌株对氨苄西林、阿莫西林、新霉素9种药物耐药率在53.3%以上,对其他药物的耐药率在13.3%～26.7%之间。研究表明,内蒙古扎兰屯地区羊源大肠杆菌血清型复杂,携带多种毒力基因,耐药性严重。     

曲靖地区仔猪腹泻细菌性病原的分离鉴定与耐药性分析

为了解曲靖地区仔猪出现腹泻的细菌性病因,对5个养殖场148份出现仔猪腹泻症状的样品进行细菌分离培养及耐药性分析,结果显示,检出致病性大肠杆菌(E.coli)114份,阳性率为77.03%;沙门氏菌(Salmonella)26份,阳性率为17.57%,混合感染率为17.57%.致病性大肠杆菌和沙门氏菌对多种抗生素产生了耐药性,其中114株致病性大肠杆菌中97株呈多重耐药性,占总菌数的85.09%,26株沙门氏菌中20株呈多重耐药性,占总菌数的76.92%.结果表明,致病性大肠杆菌是导致当地哺乳仔猪腹泻的主要细菌性病原,部分仔猪继发感染沙门氏菌,两种细菌对多种抗生素产生了耐药性,多重耐药现象较严重.     

皖北地区仔猪源大肠杆菌毒力因子及HPI毒力岛的检测

我国皖北地区哺乳仔猪腹泻频发,临床直肠棉拭子培养物有34例符合大肠杆菌特征,并进行产肠毒素大肠杆菌(ETEC)毒力因子(STa、STb、LT、SLT-2e)和HPI毒力岛的PCR快速检测。结果,仅有10例表达STa和STb(29.41%),其中3例表达STa基因(8.82%),2例表达STb基因(5.88%),2例表达STa和STb基因,1例表达STa和irp2基因(2.94%),2例表达STa和STb及irp2基因,揭示HPI+大肠杆菌与ETEC混合感染共有3例(8.82%);未检测到LT和STL-2e毒力因子。有10例表达irp2基因(29.41%),其中7例独立表达irp2基因(20.59%)。STa、STb和Irp2的PCR产物测序结果分别与GenBank检索的目标序列比对,其同源性均达到100%。结果初步揭示了皖北地区致哺乳仔猪腹泻ETEC毒力因子及HPI毒力岛的分布情况。     

广东省仔猪腹泻大肠杆菌血清型鉴定

从广东省１２个猪场的１０７头腹泻仔猪的直肠和肠系膜淋巴结以及４个猪场的２２头母猪的泌尿生殖器官分别分离出１１８株和４０株大肠杆菌。分离菌的８６．０８％（１３６／１５８）对昆明系小鼠有毒力,２４．５％（２５／１０２）产生耐热肠毒素（ＳＴ）。经３４种大肠杆菌单价Ｏ抗原血清鉴定,１３４株分离菌中有２６种血清型,其中Ｏ１１９、Ｏ６０、Ｏ７５、Ｏ１４１、Ｏ２０、Ｏ８和Ｏ１０１为优势血清型。Ｏ１１９和Ｏ７５作为猪源致病性大肠杆菌优势血清型在我国较少报道。尚有２４株未能定型,占分离菌株的１５．２％（２４／１５８）。     

一规模化猪场断奶仔猪腹泻大肠杆菌毒力因子的检测

从疑似断奶仔猪腹泻的仔猪中分离、鉴定出15株病原性大肠杆菌。经O血清型鉴定,11株为0131、4株未定型,所有O131血清型菌株呈β溶血。多重PCR检测毒素基因(STa、STb、LT、SLT-2e)和大肠杆菌粘附素单抗(F4、F5、F6、F41、F18)检测菌毛,O131菌株的毒素为STa、STb、SLT-2e,表达F18粘附素,未定型菌株的毒素为STa,共表达F6和F18粘附素。对15株大肠杆菌用16种抗生素进行药敏试验,结果表明:分离株对阿米卡星、痢特灵、新霉素敏感,而对多种抗生素产生了不同程度的耐药性。运用本场大肠杆菌分离株灭活苗免疫猪群,取得良好效果。     

土鸡屠宰过程中大肠杆菌毒力基因检测及耐药性分析

为了解土鸡屠宰过程中大肠杆菌污染、毒力基因携带及耐药情况,2018年9月-2019年1月在重庆万州、开州、巫溪、奉节4个区县的12个土鸡屠宰地点采集了319份样品,通过菌落形态及显微镜观察、生化鉴定、PCR、药敏试验等方法鉴定分离的大肠杆菌,检测其毒力基因携带和耐药性情况。结果表明：大肠杆菌分离率为22.57%（72/319）,其中餐馆、活禽宰杀铺和定点屠宰点分离率依次为29.73%（22/74）、25.00%（24/96）和17.45%（26/149）,污水、地面、羽毛、用具和胴体分离率依次为75.00%（18/24）、21.62%（8/37）、20.54%（23/112）、17.65%（6/34）和15.18%（17/112）;11种毒力基因中除estA、estB、elt外均被检出,检出率为58.33%（42/72）,共检出14种组合型,有4株分离株4种毒力基因同时存在;分离株对阿米卡星、头孢噻肟最敏感,多重耐药比为90.28%（65/72）,以7~10重耐药居多。土鸡屠宰过程中致病性大肠杆菌污染风险高,多重耐药现象严重,应重视养殖合理用药及屠宰卫生环境。     

新疆维吾尔自治区和田地区规模化羊场腹泻羔羊源大肠杆菌的分离鉴定及毒力基因和耐药基因分析

[目的]了解新疆维吾尔自治区和田地区规模化羊场腹泻羔羊源大肠杆菌的毒力基因和耐药基因携带情况。[方法]从和田地区3个规模化羊场收集70份腹泻羔羊肛拭子,采用传统的细菌分离培养、染色镜检、生化鉴定以及细菌16S rDNA序列PCR扩增、测序等方法对样本进行大肠杆菌的分离鉴定,利用PCR法对分离菌株进行大肠杆菌系统发育群分型以及毒力基因、耐药基因检测。[结果]经形态学观察、生化鉴定、16S rDNA序列分析,从70份腹泻羔羊肛拭子中分离鉴定出38株大肠杆菌,分离率为54.3%(38/70)。系统发育群分型鉴定分析显示,分离菌株以B1群为优势群（68.4%,26/38）,其次是A群（26.3%,10/38）和D群（5.3%,2/38）,未检测出B2群。毒力基因检测结果显示,在8种大肠杆菌毒力基因中检测出4种,携带fimC基因的菌株比例最高,为92.1%(35/38);其次是irp2基因47.4%(18/38)、hlyF基因36.8%(14/38)和fyuA基因34.2%(13/38),未检测出eaeA、ST、LT和Stx1基因。耐药基因检测结果显示,在8种大肠杆菌耐药基因中检测到6种,以磺胺...     

广东屠猪肉样品中大肠杆菌耐药性与毒力特征的分析

为分析广东地区屠猪肉中大肠杆菌(E.coli)药物敏感菌株的血清型、毒力基因和系统进化背景,本研究从屠猪肉样品中分离出112株E.coli,采用玻片凝集法鉴定血清型,琼脂稀释法测定10种抗菌药的敏感性,PCR方法检测7种毒力相关基因,多重PCR方法进行系统进化背景判定。结果显示,112株E.coli中,定型菌株95株,分别属于15种血清型,其中O65、O131、O8和O158为优势血清型。几乎所有菌株对氟苯尼考、多西环素和四环素高度耐药,而对头孢曲松高度敏感,其中多重耐药菌株多数耐5种以上药物,常见的多重耐药表型是氟苯尼考/氯霉素/多西环素/四环素/氨苄西林。PCR鉴定结果表明,含有毒力基因的菌株中38%至少具有两个毒力基因,其中EAST1+Stx2e和hlyF+Stx2e比较常见。比较常见的毒力基因为Stx2e和EAST1,STb基因仅在一株菌中检测到。多重PCR鉴定结果显示,屠猪肉样品中E.coli主要分布为共生型的A组和B1组。本研究为大肠杆菌病的控制和合理使用抗生素提供实验依据。     

腹泻绵羔羊源大肠杆菌耐药性及LEE毒力岛部分相关基因的检测

为了解宁夏地区腹泻绵羔羊源大肠杆菌的耐药和肠细胞脱落位点(locus enierocyte effacement, LEE)毒力岛相关基因携带情况,试验从宁夏地区4个规模化羊场采集腹泻绵羔羊肛拭子样本120份,采用常规微生物分离培养方法对大肠杆菌进行分离培养,并进行16S rRNA基因PCR鉴定;对鉴定为大肠杆菌的分离菌株运用K-B纸片扩散法进行药敏试验,对分离菌株进行LEE毒力岛基因ler、eaeA PCR检测。结果表明：共分离得到87株大肠杆菌,分离菌株对恩诺沙星、复方新诺明、红霉素、四环素的耐药率分别为44.83%、29.89%、28.74%、27.59%,大于26.00%;对头孢唑啉、阿莫西林、氨苄西林、头孢拉定的耐药率次之,处于10.00%～18.00%之间;对链霉素、头孢氨苄、哌拉西林等12种药物的耐药率小于10.00%。LEE毒力岛基因ler、eaeA的检出率分别为83.91%和29.89%,二者同时检出率为25.29%。说明宁夏地区腹泻绵羔羊源大肠杆菌耐药率较低,携带LEE毒力岛可能是其条件性致病的原因之一。     

陕西地区羊源致病性大肠杆菌耐药性分析与毒力基因检测

旨在了解陕西省部分地区腹泻羊源致病性大肠杆菌(E. coli)耐药性及毒力基因携带情况,本研究从10个养殖场采集54份腹泻羊拭子样品,经分离纯化、生化鉴定及16S rRNA基因序列分析,共分离得到50株E. coli,对分离菌进行药敏试验、耐药基因及毒力基因检测。结果显示,分离菌对氨苄西林、氟苯尼考和磺胺异噁唑耐药率达90%以上,且98%(49/50)为多重耐药菌,对8~11种抗生素耐药的菌株占68%(34/50),仅对美罗培南敏感。所有菌株均携带1~6种不同的耐药基因,其中,Sul1(64%)、TetA(34%)、bla_CTX-M(32%)携带率较高,未检测到bla_SHV。有5株产ESBLs的E. coli携带mcr-1耐药基因。毒力基因检测结果显示,98%(49/50)的菌株携带毒力基因,其中,etrA检出率最高,为80%(40/50)。综上表明,陕西省羊源E. coli多重耐药情况严峻,β-内酰胺类耐药基因与耐药表型不符,提示可能存在其他耐药机制,同时,分离菌具有复杂的毒力谱。本研究为陕西省羊源致病性E. coli感染的防控提供科学依据。     

腹泻羔羊中大肠杆菌耐药性分析

从青海省达日县3个藏羊养殖场中采集到羔羊腹泻的粪便10份,将分离得到的细菌纯化培养后进行进一步的生化鉴定和药敏试验。研究结果表明,在10份粪便中共检测出大肠杆菌10株,发现分离得到的大肠杆菌对小鼠具有致病性。药敏试验发现分离得到的致病原对恩诺沙星、氟苯尼考2种抗生素高敏,对复方新诺明、头孢唑林、丁胺卡那霉素中敏,对常用的抗生素普遍具有耐药性,在疾病防治过程中,应指导养殖户科学用药,筛选出敏感抗生素对症治疗。该次所筛选的大肠杆菌具有致病性,筛选的敏感抗生素种类较少,对大多数抗生素都产生耐药性,在今后防控过程中需要指导养殖户科学用药、合理用药。     

猪源致病性大肠杆菌毒力基因检测及药敏试验

齐齐哈尔市周边某猪场发生了仔猪腹泻,为探究是何种病原体导致的仔猪腹泻,采集腹泻仔猪器官进行了细菌分离培养等试验,并对分离出的细菌进行毒力基因检测以及药敏试验.结果 表明从腹泻仔猪器官中分离到一株致病性大肠杆菌携带毒力基因K99,并且通过药敏试验得知该株致病性大肠杆菌对头孢曲松、环丙沙星以及阿奇霉素等药物敏感性强.     

仔猪大肠杆菌性腹泻

仔猪大肠杆菌性腹泻宋秉生王兴亚（中国农科院兰州中兽医所７３００５０）腹泻是引起哺乳及断奶仔猪发病和死亡的重要原因，常由一般或多种传染性因素所致，但肠致病性大肠杆菌是断奶前后仔猪腹泻的主要原因。大肠杆菌是仔猪肠道正常微生物区系的重要组成部分，其中某些菌...