PPARγ对猪血管内皮细胞增殖、迁移及小管形成的影响

试验旨在研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptors γ,PPARγ）对猪血管内皮细胞增殖、迁移及小管形成的影响,并探讨PPARγ在猪体外血管生成中的作用。设置PPARγ激动剂组（5、10、15、20 μmol/L罗格列酮）、抑制剂组（5、10、15、20 μmol/L T0070907）及对照组,通过iCelligence细胞功能分析、划痕试验和Matrigel基质胶三维培养,构建猪体外血管生成的模型,模拟猪体内血管生成的环境,分别对猪血管内皮细胞的增殖、迁移、小管形成能力进行测定,同时根据NCBI已有的相关序列,应用Primer Premier 5.0软件设计PPARγ基因特异性引物,利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测PPARγ基因mRNA相对表达量,对PPARγ的体外作用效果进行验证。结果显示,5、10 μmol/L罗格列酮能促进猪血管内皮细胞增殖、迁移及小管形成,T0070907的抑制效果在试验浓度区间内（5~15 μmol/L）随浓度升高而加强,较高浓度（20 μmol/L）的两种药物均由于药物毒性的影响对细胞活动产生干扰。此外,5~20 μmol/L罗格列酮和5~20 μmol/L T0070907能分别提高和降低PPARγ基因mRNA相对表达量,且浓度趋势与增殖、迁移、小管形成的试验结果一致。综上所述,通过激活PPARγ可以对猪血管内皮细胞的增殖、迁移及小管形成产生促进效果,提示其在猪体外血管生成中具有积极作用,可为研究PPARγ对猪胎盘血管发生的影响提供参考依据。     

氧化应激对猪前体脂肪细胞分化及PPARγ选择性剪接的影响

营养代谢、氧化剂等各种内外环境因素都可能破坏机体氧化还原平衡,引发氧化应激,影响脂肪细胞功能及代谢;PPARγΔ5是PPARγ mRNA前体选择性剪接产物,可能调控脂肪细胞分化。本研究通过分离培养猪前体脂肪细胞,用H₂O₂处理构建氧化应激细胞模型,采用油红O染色提取法检测细胞分化,实时荧光PCR检测成脂分化相关基因和PPARγΔ5 mRNA表达,研究氧化应激对猪脂肪细胞分化及PPARγ选择性剪接的影响。结果表明,H₂O₂诱导的氧化应激显著抑制猪前体脂肪细胞分化(P<0.05),极显著下调C/EBPα和PPARγ及其下游生脂基因FABP4和SCD的表达(P<0.01),极显著上调Txnip和LPL表达(P<0.01)。此外,H₂O₂处理极显著降低剪接因子SRSF1及PPARγΔ5表达(P<0.01)。综上所述,氧化应激可通过抑制转录因子C/EBPα和PPARγ表达及促进Txnip表达减弱猪前体脂肪细胞分化,并抑制PPARγ基因选择性剪...     

猪胎盘PPARγ编码序列的克隆、序列分析和表达

过氧化物酶增殖物激活受体r(peroxisome proliferator-activated receptor type gamma,PPARγ)对人和小鼠的胎盘形成起重要作用,但在猪胎盘中其编码序列和作用还不明确。为了掌握母猪胎盘PPARγ剪辑方式和准确的编码序列,分析其结构与功能的关系,应用高保真PCR技术从4个不同妊娠时期的7份胎盘样品(61个胎囊)克隆出了一致性的PPARγ目的片段(KM382175),其编码序列和预测蛋白序列与人、鼠、牛、羊的具有较高的相似性;同时发现胎盘PPARγ蛋白与猪卵巢来源和猪皮下脂肪来源PPARγ蛋白在配体结合区分别存在1个和2个氨基酸残基差异。构建pET28α(+)-PPARγ表达质粒,重组蛋白应用兔抗PPARγ和鼠抗His单克隆抗体2种抗体Western blot双重检测阳性。研究表明,妊娠期猪胎盘PPARγ剪辑方式一致(1 428bp),稳定的PPARγ结构对正常生理功能的维持具有重要意义,但配体结合区氨基酸的改变可能意味着组织差异性的存在;本研究同时实现了PPARγ的原核表达,将为进一步研究PPARγ对胎盘的作用及其与母猪产仔性能的关联性提供基础理论指导。     

玉米油与猪油调和油对小鼠肝脏PPARα、PPARγ、RXRα基因表达的影响

目的:探讨不同剂量玉米油与猪油的1∶1调和油对小鼠PPARα、PPARγ、RXRα基因表达的影响。方法:将24只KM鼠随机分为3组,分别饲喂不同油脂含量的饲料,即3.8%推荐摄入量组(B组)、6.5%实际摄入量组(C)及对照组(A)。持续饲养8周并于每周一上午9:00称量每只小鼠体质量,8周后,采集肝脏组织,测定肝脏中的PPARα、PPARγ、RXRαm RNA表达水平。结果:小鼠体增长率与调和油剂量呈正相关;推荐摄入量组和实际摄入量组PPARαm RNA表达量均极显著低于对照组;推荐摄入量组PPARγm RNA表达量极显著高于对照组,实际摄入量组PPARγm RNA表达量极显著低于推荐摄入量组,实验组RXRαm RNA表达量与对照组比较无显著性差异。结论:每天摄入25 g玉米油和猪油的1∶1调和油能促进PPARγm RNA的表达,有效抑制非酒精性脂肪肝的形成。     

miR-188对小鼠乳腺癌细胞增殖、迁移及凋亡的影响

【目的】探讨microRNA-188-5p(miR-188)在乳腺癌细胞增殖、迁移和凋亡过程中的调控作用,以期为乳腺癌相关治疗药物的研发提供理论依据。【方法】培养小鼠乳腺癌细胞(4T1),建立4T1细胞小鼠移植瘤模型,分离肿瘤组织和瘤旁组织,用实时荧光定量PCR法检测miR-188的表达情况;在4T1细胞中分别转染miR-188的模拟物(miR-188 mimics)、模拟物对照(mimics-NC)、miR-188抑制物(miR-188 inhibitor)及抑制物对照(inhibitor-NC),不转染的细胞为空白对照(Con),用实时荧光定量PCR法检测各组细胞miR-188的表达水平,CCK-8法检测细胞增殖能力,细胞划痕试验检测细胞的迁移率,流式细胞术检测细胞的凋亡率,Western blotting检测细胞相关凋亡蛋白的表达情况。【结果】瘤旁组织中miR-188的相对表达量显著高于肿瘤组织(P<0.05);细胞转染结果表明,与Con组相比,miR-188 mimics组miR-188的相对表达量显著上调(P<0.05),而miR-188 inhibitor组显著...     

牛PPARγ基因对脂肪细胞增殖分化的影响

取郏县红牛第6和第7肋骨间肌间脂肪组织为试验材料,分离并培养原代前体脂肪细胞。在诱导分化牛前体脂肪细胞过程中,添加终浓度为1μmol/L的吡格列酮对脂肪细胞进行药物干预,上调过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferations actirated receptorγ,PPARγ)基因的表达后,通过MTT检测牛前体脂肪的增殖;油红O提取比色法检测牛前体脂肪细胞分化过程中脂滴的分泌;利用real-time PCR技术检测PPARγ基因表达上调后其他参与脂肪分化相关基因的表达情况。结果显示:吡格列酮药物干预后,PPARγ基因表达明显上调(P0.01);PPARγ基因的表达上调后,牛脂肪细胞的增殖能力下降,分化能力增强;脂肪分化相关基因C/EBPA、SREBP11、FABPA、PLIN1、LPL和IGFBP2的表达量明显上调(P0.05),GATA2和FAS基因的表达量没有发生明显变化。结果表明:PPARγ基因的表达可显著影响脂肪细胞的增殖与分化,可能与肉牛脂肪沉积有一定的关系。     

PPARγ对炎症的调控作用

过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferators-activated receptors,PPARs)属Ⅱ型核受体超家族成员,PPARs的α、β和γ三种亚型参与机体的多种生理反应的调节。近年来关于PPARs与炎症反应关系的研究越来越受到人们的关注。本文综述了PPARγ的分布情况及其配体对炎症的调节作用,并在此基础上,提出了PPARγ对畜牧生产中广泛存在的免疫应激可能的调控作用。     

内毒素对微循环及血管内皮细胞功能影响的研究进展

大肠杆菌在繁殖或死亡过程中 ,所释放出的内毒素可对动物机体微循环和血管内皮细胞造成损害 ,引起微循环障碍和血管内皮细胞分泌大量细胞因子如内皮素、血栓调节蛋白、粘附因子、选择素、一氧化氮及血小板激活因子等 ,从而引起血管内皮细胞正常功能形态损伤和全身炎症的发生 ,为大肠杆菌病引起的感染、休克等综合征发生的主要病理基础。通过对大肠杆菌内毒素致病机制的研究 ,对有效防治大肠杆菌病具有重要意义。     

猪血管内皮细胞体外生长特性的研究

试验以体外分离培养的猪血管内皮细胞为材料，研究了细胞的生长曲线、不同基础培养基对细胞生长的影响及胰岛素在生长液中的适宜含量。结果表明，传代猪血管内皮细胞接种后有ld左右的滞留期，然后细胞进入对数生长期，可持续2d，第5d进入平台期，第8d细胞开始脱落死亡；与MEM相比，M-199更适合于用作培养猪血管内皮细胞的基础培养基；在不用贴附基质和内皮细胞生长因子(ECGF)的条件下，生长液中加入胰岛素，可明显促进细胞的生长和增殖，胰岛素的最适用量为8μg／mL。     

猪血管内皮细胞体外培养方法的建立

实验研究了猪血管内皮细胞体外培养方法并对培养的细胞进行了鉴定。获得了传代培养的猪血管内皮细胞。结果表明：用Ⅰ型胶原酶和胰酶消化分离，均可获得接种量的原代培养物，但Ⅰ型胶原酶消化效果更好；原代或早期传代培养物中有时混入的成纤维细胞可用柠檬酸胰酶有效清除。在不用贴附基质和内皮细胞生长因子(ECGF)的条件下，向生长液中加入胰岛素可成功的培养内皮细胞。该细胞在体外培养时贴壁生长，单层细胞呈“铺路石”状排列，细胞间存在接触抑制；第Ⅷ因子相关抗原免疫荧光染色阳性，证明培养的细胞为血管内皮细胞。     

猪脐静脉血管内皮细胞的分离及体外培养研究

为建立一种操作简单并且能获得大量猪血管内皮细胞的分离培养方法,本研究采集新生健康长白猪脐带,取其脐静脉血管,灌注0.1%的Ⅰ型胶原酶,于37℃水浴消化10 min后收集内皮细胞,培养于含20%胎牛血清的M199培养基中,长满单层后用胰酶消化传代培养。并对培养的细胞形态学、相关抗原和其他特征以及对病毒的易感性进行鉴定。结果表明,Ⅰ型胶原酶消化后可获得大量内皮细胞,细胞培养后的形态学观察显示细胞贴壁生长良好,呈典型的铺路石状排列;第Ⅷ因子相关抗原和细胞摄取乙酰化低密度脂蛋白均呈阳性,内皮细胞比率可高达100%。传3代后的生长曲线显示细胞传代后延迟期小于1 d,对数生长期约3 d,第5 d进入平台期,第7 d开始脱落死亡。病毒感染试验表明所获得的内皮细胞对猪瘟病毒高度易感,病毒生长与常用的PK-15没有区别。上述研究结果表明本研究建立的血管内皮细胞分离培养方法简便有效,为大量制备原代血管内皮细胞提供了可靠的方法。     

抑制剂T0070907对鸡PPARγ基因表达影响的研究

为了验证过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ选择性抑制剂T0070907对鸡PPARγ基因表达的促进作用,本研究利用荧光定量PCR检测了不同浓度T0070907对鸡成纤维细胞(DF-1细胞)中PPARγ基因mRNA转录水平的影响,结果显示,随着T0070907浓度的增加,鸡PPARγ基因的表达量逐渐升高,并且在T0070907浓度为5μmol/L时极显著高于对照组(p<0.01);利用western blot检测了T0070907对PPARγ蛋白表达的影响,结果显示,5μmol/L的T0070907对DF-1细胞中PPARγ2蛋白的表达有一定的促进作用;利用双荧光素酶报告基因技术检测了不同浓度T0070907对PPRE报告基因活性的影响,结果显示,随着T0070907浓度的增加,DF-1细胞中PPRE报告基因活性逐渐增强,并且在T0070907浓度为0.5μmol/L时该报告基因活性显著高于对照组(p<0.05),当T0070907浓度为2μmol/L、5μmol/L时,与对照组之间的差异达到极显著水平(p<0.01);利用双荧光素酶报告基因技术检测了T0070907和罗格列酮(Rosi)对PPRE报告基因活性的影响,结果显示,单独添加T0070907或Rosi均可显著增强PPRE报告基因活性(p<0.05),同时,添加T0070907并不能降低Rosi对PPRE报告基因活性的促进作用。本研究结果表明,作为PPARγ抑制剂的T0070907对鸡PPARγ基因的mRNA的转录水平、蛋白表达及其蛋白活性均具有促进作用,推测与哺乳动物不同,鸡PPARγ可能具有其独特的表达方式和调控机制。本研究结果对完善PPARγ抑制剂在生理学及药理学上的研究、为PPARγ功能研究选择准确的拮抗剂、预防和治疗炎症相关疾病等方面具有重要意义。     

γ-PGA对猪瘟、猪口蹄疫疫苗免疫及增重效果的影响

为了研究γ-聚谷氨酸(γ-PGA)对猪瘟、猪口蹄疫疫苗免疫及增重效果的影响,试验对试验组仔猪注射γ-PGA,同时设对照组,并用相同的免疫程序免疫猪瘟和猪口蹄疫疫苗,免疫21 d后分别应用正向间接血凝试验和间接ELISA方法测定体液免疫水平,称重并观察增重效果。结果表明:γ-PGA有增强猪瘟、猪口蹄疫疫苗免疫效果和促进仔猪增重的作用,可作为猪瘟、猪口蹄疫疫苗的免疫增强剂。     

复方中药对肉鸡腹水综合征肺组织血管内皮细胞源性增殖因子的影响

旨在研究肉鸡腹水综合征发生发展过程中的肺组织EGFL7、VEGF和VEGFR2等血管内皮细胞源性增殖因子表达量的变化和复方中药对其影响。275羽8日龄罗斯肉鸡随机分为空白组(常规饲养),模型组(9~11℃,饲料中添加3%猪油和4%鱼粉,饮水中添加0.12%NaCl),复方中药高、中、低剂量组(饲养同模型组,每天于饮水中分别给予2、1、0.5mL·kg-1复方中药),用荧光定量PCR和ELISA检测15、25、35、45日龄肉鸡肺组织EGFL7、VEGF、VEGFR2的基因和蛋白质表达量。结果表明:与空白组相比,模型组肉鸡腹水心脏指数极显著升高(P0.01),肺组织EGFL7、VEGF、VEGFR2的基因和蛋白质表达量显著增加(P0.01或P0.05);与模型组相比,复方中药高、中剂量组均能不同程度地改善肉鸡的精神状态、腹水、心包积液等症状,能显著下调腹水心脏指数和肺组织EGFL7、VEGF、VEGFR2的基因和蛋白质表达量(P0.01或P0.05)。腹水综合征肉鸡肺组织EGFL7、VEGF、VEGFR2的基因和蛋白质表达量升高,参与了肉鸡腹水综合征病理的发生发展;复方中药能下调其表达,保护肺组织血管内皮功能,有效防治肉鸡腹水综合征。     

PPARγ对胎盘发育作用的研究进展

PPARγ属于配体依赖性核受体转录因子,是调节目标基因表达的核受体转录因子超家族成员,对胎盘的发育及其血管的发生具有重要的作用。本文综述了近些年来人们在PPARγ与胎盘发育方面取得的研究进展,重点介绍了PPARγ的基本特性以及对胎盘发育及胎盘血管生成的调节作用。     

瘦素对绵羊子宫内膜上皮细胞增殖、迁移和凋亡的影响

试验旨在明确瘦素在妊娠和非妊娠绵羊子宫内膜组织中的定位特征,探究其对绵羊子宫内膜上皮细胞中胚胎附植的影响。使用免疫组化法检测瘦素及其受体在妊娠和未妊娠绵羊的子宫内膜上皮组织的表达及定位;利用组织块分离培养原代绵羊子宫内膜上皮细胞,CCK8法确定瘦素最适浓度,RT-qPCR和Western blot检测瘦素对绵羊子宫内膜上皮细胞凋亡的作用,细胞划痕试验检测瘦素对绵羊子宫内膜上皮细胞迁移的作用,RT-qPCR检测瘦素对胚胎附植相关因子血管内皮生长因子（VEGF）、白血病抑制因子（LIF）、白细胞介素-6(IL-6)、子宫内膜附植位点黏蛋白（Muc1）、基质金属蛋白9(MMP9)、白细胞介素-1β(IL-1β)、骨桥蛋白（OPN）、泛素样修饰因子（ISG15）等基因mRNA的表达情况。结果显示,瘦素蛋白主要表达在未妊娠绵羊子宫内膜的基质和上皮组织中,主要在妊娠绵羊子宫内膜上皮组织中表达,瘦素受体表达无明显变化;组织块法可成功获得具有典型上皮样细胞特征并表达角蛋白CK18的原代绵羊子宫内膜上皮细胞。250 mg/L瘦素促进绵羊子宫内膜上皮细胞增殖和迁移,并显著上调Bcl-2,下调BAX、Cas...     

大鼠血管内皮细胞的分离、鉴定及传代培养

为了获取大鼠血管内皮细胞供血管形成研究,建立了大鼠主动脉内皮细胞的分离培养方法。采用Wister大鼠主动脉植块法分离内皮细胞并传代培养,计数并绘制不同代次内皮细胞生长曲线。应用CD31免疫组化及内皮细胞的管形成试验对内皮细胞进行了鉴定。结果表明,主动脉植块法及传代培养获得的细胞具有内皮细胞"铺路石"样的典型特性,传代生长状态良好;CD31抗体免疫组化阳性、管形成能力良好。所建立的大鼠主动脉植块法分离及体外培养内皮细胞的体系是一种简便可行的获取内皮细胞的有效方法。     

γ-氨基丁酸对猪生产性能及激素水平影响

为探讨日粮中添加γ-氨基丁酸对猪的促生长效果及其与生长、摄食及代谢相关激素之间的联系。试验选用(34.07±0.01)kg的杜长大三元杂交猪60头,随机分到3个处理中,每个处理4个重复,每个重复5头猪。试验采用单因子设计,按日粮添加水平设基础日粮组(0 mg/kgγ-氨基丁酸)、基础日粮 50 mg/kgγ-氨基丁酸和基础日粮 100 mg/kgγ-氨基丁酸3个处理,试验期28 d。结果表明,γ-氨基丁酸对猪的促生长作用明显,但随生长阶段和作用剂量不同存在一定差异,主要体现在试验3~4周,以100 mg/kg的效果较为突出。100 mg/kg组试验猪第3周(P<0.1)、第4周(P<0.05)及0~4周(P<0.1)的ADG和第4周(P<0.01)、3~4周(P<0.1)的ADFI以及0~4周(P<0.05)的F/G都明显超过对照组。日粮中添加γ-氨基丁酸显著促进了试验猪体内生长激素(P<0.05)和褪黑素(P<0.05)的分泌,明显提高了小猪体内促甲状腺激素水平(P<0.1),这也与良好的生产性能吻合,但作用程度随试验阶段和激素种类不同而存在一定差别。总的看来,日粮中添加γ-氨基丁酸能够有效改善小猪生产性能,促进生长,但为获得理想结果必须考虑添加剂量与使用时间。     

饲喂青贮桑叶对陕北白绒山羊PPARγ、ADIPOQ、aP2 mRNA表达的影响

试验旨在研究日粮中添加不同水平的青贮桑叶对陕北白绒山羊脂肪组织(皮下脂肪、尾部脂肪、肾周脂肪)、肝脏、肌肉组织中PPARγ、ADIPOQ、aP2mRNA表达的影响。选取8~9月龄体重相近体况基本一致的陕北白绒山羊羯羊40只,随机分为4组,分别饲喂含青贮桑叶为0%(Ⅰ组),10%(Ⅱ组),15%(Ⅲ组),20%(IV组)的日粮,试验期70d,其中预试期10d,正试期60d;饲养试验结束后屠宰,取皮下脂肪、尾部脂肪、肾周脂肪、肝脏、背最长肌组织进行RT-PCR,检测上述基因mRNA表达量。结果如下,PPARγ、ADIPOQ、aP2 mRNA在陕北白绒山羊不同组织部位均有表达,PPARγ、aP2mRNA在皮下脂肪组织表达量显著高于所检测的其他组织(P0.05),ADIPOQ mRNA在脂肪组织的表达显著高于肝脏和肌肉组织(P0.05)。在皮下脂肪组织和肝脏,PPARγ、ADIPOQ、aP2mRNA的表达量I组显著高于其他组(P0.05),不同添加水平的青贮桑叶对其他组织部位PPARγ、ADIPOQ、aP2mRNA的表达量的影响不一致。结果表明,饲喂青贮桑叶能显著影响陕北白绒山羊脂肪代谢相关基因mRNA的表达,青贮桑叶可以作为潜在的具有降脂功效的饲料补充料添加到山羊饲料中以调节脂肪沉积改善肉品质。     

犬UC-MSC-Exo来源miRNA表达分析及其cfa-miR-34a/-143对血管内皮细胞增殖的影响

试验旨在分离鉴定犬脐带间充质干细胞分泌的外泌体（UC-MSC-Exo）,并研究犬UC-MSC-Exo来源miRNA的表达情况及其对血管内皮细胞（VEC）增殖的影响。采用超高速离心法从犬脐带间充质干细胞培养上清中分离外泌体,采用Western blotting、透射电镜和纳米颗粒跟踪分析法（NTA）进行鉴定。通过对犬UC-MSC-Exo中的miRNA进行测序,筛选出2个目标miRNA（cfa-miR-34a和cfa-miR-143）并合成相应的mimic和inhibitor,转染犬VEC;采用荧光显微镜和实时荧光定量PCR法检测mimic和inhibitor转染情况及其转染效率;CCK-8法检测转染mimic和inhibitor对犬VEC增殖能力的影响,并对其靶基因进行预测。结果显示,犬UC-MSC-Exo表达特异性的外泌体表面蛋白CD9、CD63和CD81,粒径集中在100~200 nm,电镜检测成典型的杯状。免疫荧光结果表明,miRNA mimic和inhibitor均已转染进细胞内,并且聚集于细胞质中;实时荧光定量PCR结果表明,转染cfa-miR-34a mimic和cfa-miR-143 mimic后,细胞内cfa-miR-34a和cfa-miR-143表达量分别升高约400和78倍;而转染cfa-miR-34a inhibitor和cfa-miR-143 inhibitor后,细胞内cfa-miR-34a和cfa-miR-143表达量分别降低了77%和83%;CCK-8检测结果表明,cfa-miR-34a和cfa-miR-143在体外可极显著促进血管内皮细胞的增殖（P<0.01）。cfa-miR-34a靶基因预测结果发现,共有195个保守靶位点,与miRDB预测结果共有69个交集靶基因;cfa-miR-143则有448个保守靶基因,其与miRDB预测结果有128个交集靶基因。本试验成功分离得到犬UC-MSC-Exo,且证实目标miRNA cfa-miR-34a和cfa-miR-143在体外可极显著促进VEC增殖。