几种中药粗提物对鸡胚成纤维细胞生长的影响

为筛选抗IBDV方剂的主药,采用组织培养方法,测试了黄芪、连翘等8种中药粗提物在体外鸡胚成纤维细胞(CEF)上的最大安全浓度及其对CEF增殖、存活时间的影响。结果显示,黄芪对CEF基本无毒性作用,最大安全浓度为25mg/ml,而连翘等其余7种中药粗提物则表现出较大的毒性作用,最大安全浓度极低,同时,黄芪对CEF还具有较强的促生长和延长存活时间的作用。因此,筛定黄芪作为抗IBDV方剂的主药。     

板蓝根多糖对鹅胚成纤维细胞增殖的影响

将6种不同浓度的板蓝根多糖(IRPS)分别加入经培养24 h形成单层的鹅胚成纤维细胞(GEF)中,加药培养12、24、36、48、60和72 h后.分别用四唑盐法研究IRPS对GEF增殖的影响.结果表明:IRPS含量为100～1 000μg·mL~(-1)能够显著促进GEF增殖,且呈一定的量效和时效关系.     

16种四川道地药材对鸡胚成纤维细胞生长的影响

该实验通过MTT法观察丹参、川木香、菊花、川郁金、川黄柏、川佛手、川牛膝、川莪术、川明参、川续断、川麦冬、川白芷、川芎、杜仲、川党参和乌梅等16种四川产道地药材对体外培养的鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全体积质量分数,并观察各种中药提取液对CEF增殖的影响.结果表明以上各种药材的最大安全体积质量分数:川黄柏为3.907mg/L,丹参、川木香、川续断和川党参均为7.813mg/L,菊花为15.625mg/L,杜仲、川佛手、川麦冬、川芎和白芷均为31.25mg/L,川郁金、杜仲、川乌梅和川牛膝均为62.5mg/L,川明参为1 000mg/L.当川郁金在1.954～31.25mg/L,川牛膝在3.907～31.25mg/L,川明参在1.954～500mg/L,川续断在1.954～3.907mg/L,川麦冬在1.954～15.625mg/L,杜仲在1.954～31.25mg/L的体积质量分数范围内可显著促进细胞生长.     

12种藏药对鸡法氏囊病毒感染鸡胚成纤维细胞能力的影响

藏医藏药有着独特的理论体系,在世界医学中独树一帜,是仅次于中医中药而有系统理论的民族医药.     

siRNA对鸡胚成纤维细胞中GAPDH基因表达的抑制作用

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是通过短双链RNA(small interference RNA,siRNA)介导的特异性抑制相应基因表达的新技术。作为研究基因功能的有效手段,该技术已在线虫、果蝇、斑马鱼和鼠等动物中进行了应用。本研究利用体外转录合成的短双链干扰RNA(siRNA),针对鸡的管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH),在鸡胚成纤维细胞中对其表达进行干扰。结果显示siGAPDH能有效阻断GAPDH基因在鸡胚成纤维细胞中的表达,而不相关的siRNA则对该基因的表达没有影响,证明在鸡细胞中也存在RNA干扰现象,为利用RNAi技术对鸡的基因功能研究奠定了一定基础。     

鸡胚成纤维细胞培养的组织块贮存时间测试

鸡胚成纤维细胞培养的组织块贮存时间测试王立群，聂晶（东北农业大学生物工程系哈尔滨１５００３０）（哈尔滨市职工医学院）宣世纬（东北农业大学生物工程系哈尔滨）ＴＥＳＴＯＮＤＵＲＡＴＩＯＮＯＦＳＴＯＫＩＮＧＴＩＳＳＵＥＦＯＲＣＵＬＴＵＲＩＮＧＣＨＩＣＫＥＮ...     

中药复方抗鸡新城疫病毒作用研究

[目的]探讨中药复方抗鸡新城疫病毒（NDV）的作用机理,为临床合理使用抗病毒性药物提供科学的理论依据。[方法]以白花蛇舌草、金银花、黄芪和甘草组成中药复方,制备成中药复方流浸膏并配制成不同浓度梯度的药液;测定中药复方对鸡成纤维细胞（CEF）最大无毒浓度,并测定NDV在CEF上半数感染力（TCID50）;设中药复方不同浓度组,正常细胞和NDV感染细胞对照组,采用3种不同的作用方式作用于各组以检测中药复方抗NDV活性,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法（MTT法）测定OD值,以治疗指数为评价指标。[结果]中药复方对CEF的最大无毒浓度为2-6g/ml,NDV对CEF的TCID50为10-7.3;第①种作用方式中药复方的最小有效浓度是2-10g/ml,第②种作用方式为2-8g/ml,第③种作用方式为2-7g/ml。[结论]第①种作用方式对病毒的灭杀作用最强,第②种作用方式次之,第③种对病毒的灭杀作用最弱。表明中药复方不仅具有细胞外直接杀灭病毒作用,而且还具有抑制病毒吸附、穿入、复制和成熟的某一环节,为研究中药抗病毒的作用机理及临床应用提供了可靠的试验依据。     

聚肌胞诱导鸡胚成纤维细胞和鸡胚及肉鸡抵抗新城疫病毒感染的研究

为探讨多聚核苷酸(聚肌胞)对新城疫病毒(NDV)的抑制作用,本研究通过聚肌胞对感染NDV的鸡胚成纤维细胞、SPF鸡胚和肉鸡进行了病毒抑制试验.结果显示:125和250 靏穖L-1的聚肌胞溶液能明显抑制100倍 TCID50的NDV在鸡胚成纤维细胞上的繁殖;5 mg·mL-1的聚肌胞溶液(每个胚0.1 mL)能明显抑制NDV在SPF鸡胚中的繁殖,减轻NDV对鸡胚生长的抑制作用,降低病毒血凝效价和鸡胚死亡数.聚肌胞对肉鸡抵抗NDV感染试验结果显示,肌肉注射0.01 mg·kg-1的聚肌胞注射液能明显提高治愈率和显效率.但反映细胞活性状态的中性红染色(D570值)随着聚肌胞浓度的增大而变小的结果说明,聚肌胞对鸡胚成纤维细胞的增殖有一定程度的抑制.     

8种硫酸化多糖对新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞能力的影响

用氯磺酸-吡啶法修饰当归多糖(CAPS)和枸杞多糖(LBPS),得到4种硫酸化当归多糖sCAPS0.6、sCAPS1.1、sCAPS1.9、sCAPS2.2和4种硫酸化枸杞多糖sLBPS0.7、sLBPS1.1、sLBPS1.5和sLBPS1.9。分别以CAPS和LBPS为对照,采用MTT法比较了这8种硫酸化多糖对新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞能力的影响。结果表明:硫酸化修饰能显著提高当归多糖和枸杞多糖的抗病毒活性,且与硫酸基取代度有一定的相关性。sCAPS2.2、sLBPS1.5、sCAPS1.9和sLBPS1.9的活性较好,可以作为进一步研究的材料。     

紫苏叶注射液在鸡胚成纤维细胞体系中安全浓度的测定

采用体外细胞培养法,将紫苏叶注射液与鸡胚成纤维细胞(Chick embryo fibroblast,CEF)共同培养,测定紫苏叶注射液在鸡胚成纤维细胞培养体系中的最大安全浓度,检测紫苏叶注射液的细胞毒性。结果表明,紫苏叶注射液对鸡胚成纤维细胞的最大安全浓度为488.281μg/mL。     

中药成分与新城疫病毒感作后对病毒感染活性的影响

将5种浓度的当归多糖、黄芪多糖、板蓝根多糖、淫羊藿多糖、蜂胶多糖、淫羊藿黄酮、蜂胶黄酮、黄芪皂苷和人参皂苷分别与新城疫病毒La Sota株混合感作144 h和272 h后,加到已培养36 h的鸡胚成纤维细胞(CEF)中，继续培养72h，采用中性红染料吸收法测定CEF增殖变化,判定中药成分对病毒感染活性的影响。结果表明，所有中药成分几乎所有浓度均影响或显抑制病毒的感染活性，且与感作时间有一定的相关性。     

中药成分复方的佐剂作用及其与中药复方的功效比较

分别用淫羊藿多糖（EPS）加蜂胶黄酮（PF）、黄芪多糖（APS）加入参皂甙（GS）制成2个中药成分复方（cCHMI1,cCHMI2）,同时用相应的淫羊藿、蜂胶、黄芪和人参的提取物制成相应成分含量相同的2个中药复方（cCHM1,cCHM2）。试验1用2个中药成分复方（对照组为生理盐水）分别配合兔瘟灭活苗免疫家兔,于免疫后第0、3、7、10、14、17、21、28、35、42天用血凝抑制试验法测定血清抗体效价的动态变化;试验2将4个复方分别与灭活的新城疫强毒混合制成疫苗免疫雏鸡,以油佐剂苗、无佐剂苗和生理盐水为对照,分别于免疫后第7、14、21、28、35、42天用MTT法和血凝抑制试验法检测外周血淋巴细胞增殖和血清抗体效价的动态变化。结果表明,2个中药成分复方能显著提高家兔血清的兔瘟抗体效价,cCHMI1的效果优于cCHMI2;4个复方均能显著促进雏鸡淋巴细胞增殖和提高血清抗体效价,效果与油佐剂苗相当,中药成分复方稍优于中药复方。     

9种中药成分对小鼠免疫细胞活性的影响

测定了淫羊藿多糖、黄芪多糖、当归多糖、蜂胶多糖、板蓝根多糖、淫羊藿黄酮、蜂胶黄酮、人参皂甙和黄芪皂甙9种中药成分对小鼠外周血和脾脏淋巴细胞增殖、腹腔巨噬细胞和脾脏NK细胞活性以及抗体生成细胞数量的影响。结果表明，黄芪多糖、淫羊藿多糖、当归多糖、板蓝根多糖、蜂胶黄酮、人参皂甙均能显著或极显著促进ConA(刀豆蛋白A)和LPS(脂多糖)诱导的小鼠外周血和脾脏淋巴细胞增殖，黄芪多糖、淫羊藿多糖、当归多糖、蜂胶黄酮、淫羊藿黄酮和人参皂甙均能极显著或显著提高小鼠腹腔巨噬细胞和NK细胞活性，黄芪多糖、蜂胶黄酮、淫羊藿黄酮、人参皂甙和淫羊藿多糖、黄芪皂甙极显著或显著增加小鼠的抗体生成细胞数。结果表明，9种中药成分对小鼠免疫细胞具有不同的刺激能力，这种刺激能力可以作为筛选免疫增强剂的指标。     

4种中药多糖对猪脾淋巴细胞增殖的影响

为筛选免疫活性较好的中药多糖和研制新型猪用免疫增强剂,用MTT比色法比较了不同浓度的板蓝根多糖(IRPS)、牛膝多糖(ABPS)、山药多糖(CYPS)和黄芪多糖(APS)等4种中药多糖对猪脾脏淋巴细胞增殖的影响。结果表明,IRPS,ABPS,CYPS,APS均能显著刺激ConA或LPS诱导的猪脾淋巴细胞增殖(P<0.05),且4种多糖促进猪脾淋巴细胞增殖的作用与多糖浓度有关。     

几种中药成分与IL-2免疫协同作用的比较

将420羽罗曼雏鸡随机均分为14组,14日龄时用新城疫Ⅳ系苗免疫,并分别肌肉注射当归多糖（CAPS）、黄芪多糖（APS）、板蓝根多糖（IRPS）、淫羊藿多糖（EPS）、蜂胶黄酮（PF）和人参皂苷（GS）6种中药成分加白介素2（IL-2）,每天1次,连用3d。分别在不同时间点检测新城疫病毒HI（NDV-HI）抗体效价,并计算免疫器官指数。结果表明,APS、IRPS、EPS、PF和GS加IL-2在免疫后7～14d都能显著提高抗体效价,APS、IRPS和EPS加IL-2在免疫后4周显著促进免疫器官发育。提示,中药成分与IL-2合用有一定的免疫协同作用。     

不同中药多糖体外对鸡外周血和脾脏淋巴细胞增殖能力的比较

为比较玉竹多糖、桑叶多糖、杜仲多糖、商陆多糖、淫羊藿多糖体外增强免疫活性,采用酶学检测法测定各中药多糖对鸡胚成纤维细胞的安全浓度,根据安全浓度测定结果,选择250.000μg/ml、125.000μg/ml、62.500μg/ml、31.250μg/ml、15.625μg/ml 5个浓度,用MTT法比较5种中药多糖单独和PHA协同刺激对外周血T淋巴细胞增殖指数的影响,以及比较5种中药多糖单独和LPS协同刺激对脾脏B淋巴细胞增殖率的影响。结果显示,玉竹多糖、桑叶多糖、杜仲多糖、商陆多糖、淫羊藿多糖对鸡胚成纤维细胞的安全浓度分别为1 250.0μg/ml、625.0μg/ml、625.0μg/ml、625.0μg/ml、312.5μg/ml。玉竹多糖、桑叶多糖、杜仲多糖和淫羊藿多糖无论是单独还是协同PHA刺激外周血T淋巴细胞,均不同程度地表现出增强T淋巴细胞的活性。桑叶多糖、杜仲多糖和淫羊藿多糖无论是单独还是协同LPS刺激脾脏B淋巴细胞,均不同程度地显示出良好的增强B淋巴细胞的活性。桑叶多糖和杜仲多糖体外增强免疫效果最佳,在62.500μg/ml和125.000μg/ml时,均显示出较强的增强外周血T淋巴细胞和脾脏B淋巴细胞增殖的能力。     

羊软骨II型胶原蛋白对鸡胚成纤维细胞生长的影响

采用体外细胞培养检测自制羊软骨II型胶原蛋白(Type II collagen from sheep,CII)的细胞毒性,将材料与鸡胚成纤维细胞(Chick embryo fibroblast,CEF)共同培养,观察其对生长的影响,确定鸡胚成纤维细胞对羊软骨CII的最大安全浓度,以及在安全浓度范围内有效促进鸡胚成纤维细胞生长的浓度。结果显示,羊软骨CII对鸡胚成纤维细胞的最大安全浓度为400μg/mL,当羊软骨CII浓度在25μg/mL时,可以极显著的促进鸡胚成纤维细胞的生长。     

中草药提取物对小鼠乳腺上皮细胞增殖的影响

【目的】研究中草药单味及复方提取物对原代培养的小鼠乳腺上皮细胞增殖的影响,旨在为探明中草药治疗奶牛乳腺疾病机制提供试验依据。【方法】采用组织块种植法培养3月龄、分娩后3~5 d的昆明种远交系小白鼠的乳腺组织,采用胰蛋白酶消化法获得相对纯化的小鼠乳腺上皮细胞,并运用SDS-PAGE法进行鉴定。制备5味中草药(重楼、紫花地丁、木芙蓉、半枝莲、泽兰叶)及治疗奶牛乳房炎用中草药复方提取物,分别作用于对数生长期的乳腺上皮细胞5 d,用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)分析细胞活力。【结果】将通过组织块种植法与胰蛋白酶消化法相结合,可得到纯化的有酪蛋白分泌功能的乳腺上皮细胞;中草药重楼、紫花地丁、木芙蓉、半枝莲、泽兰叶提取物在其质量浓度分别为8,40,40,1.6,8 mg/mL时,对小鼠乳腺上皮细胞增殖作用最强;除了紫花地丁,其他4种中草药提取物在其质量浓度为200 mg/mL时,对小鼠乳腺上皮细胞增殖的抑制作用最强。中草药复方提取物质量浓度为8~200mg/mL时,对小鼠乳腺细胞有显著促进作用,随着质量浓度的增加,促增殖作用减弱。【结论】中草药单味及复方提取物在一定质量浓度下对乳腺上皮细胞增殖产生了促进或抑制作用,且中草药复方提取物的适用质量浓度范围较广。     

中药复方抗鸡新城疫作用及其对雏鸡免疫内分泌调节的影响

为筛选抗鸡新城疫中药复方并观察中药复方对雏鸡免疫内分泌调节的影响,将152羽30日龄健康免疫雏鸡随机分为5组:3个中药复方组(方1、方2、方3)、病毒对照组和空白对照组.人工感染鸡新城疫病毒(NDV)后,观察鸡群的发病情况,并于试验各期随机心脏采血,测定外周血淋巴细胞转化和血清抗体、白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)、甲状腺素(T4)及胰高血糖素(Glu)的水平.结果表明:中药复方能延缓鸡新城疫的发病时间,减轻病理损伤,促进病鸡康复,有效降低鸡的死亡率,尤以方3效果最好.方1和方3能快速提高抗体水平;方1能提升血清IFN-γ和T4的水平,方2能提高血清IL-2的含量,方3则可提高血清IL-2、IL-6和T4的水平,3个中药复方都可降低鸡死亡高峰期血清IL-6和Glu的水平.研究表明,中药复方能快速刺激免疫鸡体内体液免疫应答,并通过免疫内分泌整体调节途径以抵抗NDV感染,不同组方原则的复方调节途径可能也不一致,但方3的效果整体上优于方1和方2.