H5型禽流感诊断试剂对肉、种鸡的免疫抗体效价比较

通过使用不同株型的诊断试剂检测免疫后的鸡体内禽流感抗体效价,确定最适合广德县境内的禽流感诊断试剂。在经禽流感H5N1亚型Re-5株疫苗免疫21d后,选用普通株、Re-4株和Re-5株3种H5亚型禽流感诊断试剂对肉鸡、种鸡养殖场随机抽样进行血凝抑制试验。结果表明：使用禽流感普通株、Re-4株和Re-5株诊断试荆检测结果均能达到国家防疫要求,其中肉鸡使用和疫苗同株型（Re-5株）的诊断试剂检测结果较好;种鸡使用禽流感普通株诊断试剂的检测结果高于其他2种,但差异不显著。     

重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗免疫抗体的效果比较

为了探索禽只免疫重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗(细胞源,Re-6株+Re-7株+Re-8株)后,Re-6、Re-7和Re-8不同株抗体的关系,采用血凝实验和血凝抑制试验的方法对免疫禽只免疫抗体水平进行检测,研究几种抗体的相关性。     

不同疫苗接种对鸡免疫学功能的影响试验

为验证不同疫苗免疫对鸡免疫学功能的影响,采用两批市售的鸡新城疫-传染性支气管炎-禽流感（H9亚型）三联灭活疫苗注射14日龄鸡,同时按0.3 mL·只-1注射重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（细胞源,Re-6株+Re-8株）,并同时设单独注射重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（细胞源,Re-6株+Re-8株）组和健康对照组,每组鸡各10只,分别于疫苗注射后14、21和28 d,对各组鸡采血,分离血清,进行H5亚型禽流感HI抗体效价测定。结果表明：注射后14、21和28 d,第1组（新支流三联180010900批）组鸡血清中H5亚型禽流感HI抗体效价分别为1:68.6、1:207.9和1:415.6,第2组（新支流三联180020900批）组鸡血清中H5亚型禽流感HI抗体效价分别为1:68.6、1:207.9和1:445.7;第三组单独注射重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（细胞源,Re-6株+Re-8株）组鸡血清中H5亚型禽流感抗体效价分别为1:64.0、1:194.0和1:388.0,健康对照组鸡血清中H5亚型禽流感HI抗体效价均不高于1:24.3。说明接种2种疫苗试验鸡血清H5亚型...     

H9亚型禽流感病毒的分离及初步鉴定

2011年从福建省2个肉鸡场分离到2株病毒,分别为FZ-04株和FZ-11株.血凝试验结果表明,分离株尿囊液可凝集1％鸡红细胞.血凝抑制试验结果表明,分离株尿囊液只被抗禽流感病毒H9亚型标准阳性血清特异性抑制.采用RT-PCR法对分离株M基因和H9亚型HA基因保守片段进行扩增,分别扩增出229 bp和732 bp特异性...     

一株鸭源H9亚型禽流感病毒的分离及鉴定

从发病雏鸭体内分离到1株具血凝活性病毒,并鉴定为H9亚型禽流感病毒。取发病鸭肺作为病毒分离病料,接种10日龄SPF鸡胚,死亡鸡胚尿囊液具血凝活性,且不能被已知鸡新城疫(ND)阳性血清、产蛋下降综合症EDS-76单克隆抗体、禽流感H5亚型阳性血清抑制,但能被禽流感H9亚型阳性血清抑制,血凝抑制价为211。该毒株经中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家禽流感参考实验室鉴定为H9N2亚型。对分离株进行的研究结果表明,该毒株为低致病力毒株,其ICPI为0.26,IVPI为0。用第三代鸡胚尿囊液原液0.5 m l静脉注射8日龄樱桃谷鸭,雏鸭死亡率达50%。     

悬浮MDCK细胞的驯化与H5亚型禽流感病毒的培养

【目的】为评估细胞源重组禽流感病毒H5亚型灭活疫苗的有效性提供数据支持。【方法】选取一株来源清楚的贴壁MDCK细胞,通过逐步降低培养基中血清含量及不断调整无血清培养基配方,将其驯化为悬浮MDCK细胞,并以此为基质增殖重组禽流感病毒H5N1 Re-6株、H5N1 Re-7株和H5N1 Re-8株;比较不同毒株在贴壁和悬浮MDCK细胞中增殖的差异。分别将经悬浮MDCK细胞增殖的病毒与经SPF鸡胚增殖的病毒制备成重组禽流感病毒(H5亚型)三价灭活疫苗,免疫商品蛋鸡和商品鸭,通过血清学方法比较细胞源与鸡胚源禽流感灭活疫苗的免疫效果。海兰褐商品蛋鸡:6 050只,分为3组,2组为免疫组,每组3 000只,28日龄免疫0.5 mL/只,80日龄免疫0.5 mL/只;不免疫对照组1组,50只,同等条件下隔离饲养。分别于蛋鸡日龄49、110、210 d(即首免后21 d、82 d、6个月)时采血分离血清,测定禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株的HI抗体效价,监测抗体消长。长白飞鸭:220只,分为3组,2组为免疫组,每组100只,10日龄免疫0.5 mL/只,24日龄免疫1.0 mL/只,不免疫对照组20只,同等条件下隔离饲养。分别于鸭日龄24、38、52 d(即首免后14、28、42 d)时采血分离血清,测定禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株的HI抗体效价,监测抗体消长。【结果】获得一株可在无血清培养基中悬浮生长的MDCK细胞,摇瓶、5L生物反应器中的培养数据及细胞状态显示,该细胞株适合放大生产。此悬浮MDCK细胞培养48 h细胞密度可由1.5×10~6 cells/mL左右增殖到1.0×10~7 cells/mL左右,状态良好、活率高、单个悬浮于培养基中。以此悬浮MDCK细胞为基质增殖重组禽流感病毒,H5N1 Re-6株的HA效价达1﹕512,TCID_(50) 10~(7.67)/mL,EID_(50) 10~(7.83)/0.1 mL;H5N1 Re-7株的HA效价达1﹕256,TCID_(50)达10~(7.33)/mL,EID_(50)10~(7.17)/0.1 mL;H5N1 Re-8株的HA效价达1﹕1024,TCID_(50) 10~(8.5)/mL,EID_(50) 10~(8.38)/0.1 mL,与经贴壁MDCK细胞增殖的病毒毒价相当。细胞源三价灭活疫苗免疫海兰褐商品蛋鸡,首免后21 d时,禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕446、1﹕111、1﹕416,二免后30 d时三者HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕588、1﹕362、1﹕776,6个月时分别为1﹕239、1﹕128、1﹕223,维持了较高的抗体水平;免疫长白飞鸭,首免后14 d时,禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕30、1﹕17、1﹕64,28 d时三者HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕194、1﹕91、1﹕137,42 d时分别为1﹕416、1﹕128、1﹕239;以上两组的试验结果与鸡胚源重组禽流感灭活疫苗免疫后诱导产生的HI抗体效价相当。【结论】经驯化获得的可在无血清培养基中悬浮生长的MDCK细胞株,其增殖重组禽流感病毒H5N1 Re-6株、H5N1 Re-7株、H5N1 Re-8株能力强,且病毒被制备成灭活疫苗免疫海兰褐商品蛋鸡和长白飞鸭可产生较高水平的抗体。为大规模工业化生产禽流感疫苗提供技术支持。     

重组禽流感病毒H5+H7亚型三价灭活疫苗（H5N1Re-11株、Re-12株+H7N9Re-2）对蛋鸡免疫效果抗体监测以及安全性试验评估

试验通过对重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1Re-11株+Re-12株+H7N9 H7Re2株)在接种蛋鸡后产生抗体效价值的情况,评价重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1Re-11株+Re-12株+H7N9 Re-2株)对蛋鸡预防高致病性禽流感疫病的效果。同时进行安全性试验。结果表明,蛋鸡在15日龄接种重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1Re-11株+Re-12株+H7N9 H7Re2株),45日龄进行二次免疫,75日龄进行三免,产生H5N1Re-11株抗体滴度、H5N1Re-12株抗体滴度、H7N9 Re-2株抗体滴度都较高,从抗体消长规律来看,对产蛋前的蛋鸡都有较好的保护力,疫苗接种后未对鸡群造成应激反应。通过本试验在蛋鸡上接种重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1Re-11株+Re-12株+H7N9 H7Re2株)首次免疫后14 d产生抗体有保护力,二免后14 d抗体滴度达到高峰,对蛋鸡有很好的保护力,为预防蛋鸡高致病性禽流感疫病提供临床依据。     

血凝和血凝抑制试验

血凝、血凝抑制试验是目前兽医实验室用于禽疫苗免疫抗体水平监测技术。试验通过首先制备红细胞沉降良好的分数为1%鸡红细胞悬液;其次抗原血凝效价准确;第三4HAU工作抗原配制;第四血凝抑制滴定读数准确。     

重组禽流感H5+H7亚型三价灭活苗(H5N1Re-11株、Re-12株+H7N9Re-2株)的免疫效果探究

为探究重组禽流感H5+H7亚型三价灭活苗(H5N1Re-11株、Re-12株+H7N9Re-2株)的免疫效果,分别对安徽省桐城市2019年、2020年春防集中免疫鸡群进行了禽流感病毒H5N1Re-11株、Re-12+H7N9Re-2株抗体水平的检测。结果显示,经重组禽流感三价灭活苗接种后,家禽体内产生H5免疫抗体的平均合格率为87.08%,产生H7免疫抗体的平均合格率为85.60%,均达到农业农村部对高致病性禽流感防疫的总体要求,免疫效果良好,且大部分家禽机体内能同时产生H5、H7免疫抗体。     

重组禽流感病毒H5+H7亚型三价灭活疫苗（H5 N1Re-11株、Re-12株+H7N9Re-2）对黄羽肉鸡免疫效果抗体监测试验

试验通过对重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1Re-11株+Re-12株+H7N9 H7Re-2株)在慢速型黄羽肉鸡上接种后产生抗体效价值的情况,来评价重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1Re-11株+Re-12株+H7N9 Re-2株)对黄羽肉鸡预防高致病性禽流感疫病的效果。结果表明黄羽肉鸡在15日龄接种重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1Re-11株+Re-12株+H7N9 H7Re2株),45日龄进行二次免疫,75日龄进行三免,产生H5N1Re-11株抗体滴度、H5N1Re-12株抗体滴度、H7N9 Re-2株抗体滴度都较高,从抗体消长规律来看对慢速型黄羽肉鸡出栏前都有很好的保护力。试验在黄羽肉鸡上接种重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1Re-11株+Re-12株+H7N9 H7Re2株)首次免疫后14 d产生抗体有保护力,二免后28日龄抗体滴度达到高峰,对慢速型黄羽肉鸡有很好的保护力。     

抗禽流感病毒H9亚型血凝素特异性单克隆抗体的研制

以H9亚型禽流感病毒免疫Balb／C小鼠，细胞融合后用血凝抑制试验检测细胞培养上清，结果获得3株阳性细胞株，分别命名为6E6、6B6、5B4。经2次亚克隆后，所有杂交瘤细胞保持了分泌抗禽流感H9亚型特异抗体的能力。特异性试验证明，3株单克隆抗体仅与试验的H9病毒株反应，与H5亚型禽流感病毒、鸡新城疫病毒和鹅源腺病毒等不反应。间接免疫荧光试验(IFA)结果表明，3株单克隆细胞的上清均能与感染H9亚型病毒的鸡成纤维细胞呈特异性绿色荧光反应。实验性病毒检测结果表明，IFA方法检测H9禽流感比鸡胚接种分离病毒的效果好、灵敏度高，是一种经济实用的方法。获得的单克隆抗体可在禽流感流行病学的监测及预警预报中发挥重要作用。     

H5亚型禽流感灭活疫苗的研制

以H5N1亚型禽流感病毒接种鸡胚，收取鸡胚液为抗原研制了禽流感灭活疫苗，并对制苗抗原以及疫苗的物理性状、安全性、免疫效力、免疫剂量和保护期等进行了试验。结果表明，获得了较高效价的制苗抗原．灭活前后HA分别为2^10.0-11.0和2^9.0-10.0。试制疫苗物理性状符合要求，安全性良好。试验鸡在免疫14d后血清抗体达到2^7.5，210d血清HI抗体仍维持在2^5.0左右；免疫后18d使用高致病性H5亚型禽流感病毒攻毒，获得100％的保护。分别使用0．1，0．3和0．5mL免疫鸡，发现0．3～0．5mL剂量组免疫后血清抗体达到2^7.4-8.0。疫苗在2～8℃保存540d，疫苗物理性状没有改变，免疫后血清HI抗体可以达到2^7.5。这提示研制的疫苗可以有效控制禽流感H5亚型的流行。     

鹅Ⅲ群腺病毒的分离与鉴定

采集无临床症状鹅的泄殖腔分泌物或病鹅的肠道、肝脏、脾脏，按常规方法制成接种液接种鸭胚，以血凝和血凝抑制的方法检测病毒。结果表明：从50多个样品中分离到2株腺病毒，分别命名为H5J24和N8J8。这2株病毒均能凝集鸡、鸭、鹅的红细胞，其凝集作用可被抗Y81G4株鹅腺病毒多抗血清所抑制，但不能被抗新城疫病毒单抗、抗H5和H9亚型禽流感病毒单抗所抑制。经形态学观察、理化特性测定和PCR检测，证明这2株病毒为Ⅲ群禽腺病毒成员。     

H9亚型禽流感病毒DJ15株的分离与鉴定

从临床发病鸡群中采集病料,进行了鸡胚接种、HA-HI试验以及RT-PCR鉴定。结果表明分离到的病毒能凝集鸡红细胞,但是该血凝性仅能被AIV H9阳性血清所抑制,不能被NDV、EDS76和AIVH5阳性血清所抑制;AIV H9特异性RT-PCR诊断结果为阳性,最终确定分离到H9亚型禽流感病毒,命名为DJ15株。     

黔东南州香炉山鸡H5和H7亚型禽流感流行病学调查

为科学制定香炉山鸡防控禽流感的措施提供依据,分别从散养户、商品鸡场、种鸡场采集香炉山鸡咽/泄殖腔拭子976份、958份和80份;采集相应鸡血清,利用H5和H7禽流感荧光RT-PCR、血凝及血凝抑制试验分别检测病毒核酸和免疫抗体。结果表明:散养户、商品鸡场、种鸡场H5亚型禽流感病毒核酸阳性率分别为0.51%、0.42%和0,免疫抗体合格率分别为65.78%、71.45%和86.25%;散养户、商品鸡场、种鸡场H7亚型禽流感病毒核酸阳性率分别为0.1%、0和0,免疫抗体合格率分别为63.29%、70.18%和83.75%。香炉山鸡禽流感病毒阳性群数量多,分布区域广,应加强散养鸡和商品鸡场的禽流感防控工作。     

蛋鸡禽流感（H5）免疫效果的跟踪调查

自2004年以来,邹城市对禽流感（H5）实行强制免疫,并且免疫率100%,使用疫苗是重组禽流感病毒H5亚型灭活疫苗（H5N1,Re-5＋Re-4）。为了追踪H5亚型禽流感疫苗的免疫效果及其免疫抗体（HI）消长规律,探索本辖区H5亚型禽流感灭活疫苗（H5N1,Re-5＋Re-4）的免疫程序,     

凌云乌鸡高致病性禽流感免疫抗体监测与效果分析

为了解凌云乌鸡高致病性禽流感免疫效果,分别对凌云乌鸡6个规模家禽养殖场和部分农村散养家禽户随机采集免疫后乌鸡血清样品,进行禽流感H5 Re-11株、H5 Re-12株、H7 Re-3株免疫抗体监测.检测结果显示,其抗体总体合格率分别为91％、93.23％、87.9％,H5亚型免疫效果优于H7亚型;凌云乌鸡规模场和农村散...     

山东省2016年H_5亚型禽流感抗体监测与分析

禽流感是危害养禽业的重要的传染性疫病之一,我国对H_5亚型禽流感实行强制免疫的防控策略,一旦发生必须报告。2016年山东省实行H_5亚型禽流感(Re-6+Re-7+Re-8)免疫,为了解疫苗的免疫效果,及时发现免疫中存在的问题,调整免疫策略,中心抽检了全省64个禽场的血清样品6105份,采用血凝抑制试验(HI)进行抗体检测,H_5亚型禽流感Re-6、Re-7、Re-8免疫合格率分别为98.83%、96.46%、93.38%。     

不同H9N2亚型禽流感病毒分离株致病力研究及HA抗原性变异分析

 【目的】了解近年来中国H9N2亚型禽流感病毒毒力变化和抗原性变异的特点,【方法】对分离于1998—2008年间的25株H9N2亚型禽流感病毒分离株进行了EID50、ELD50、MDT、ICPI、IVPI和8周龄SPF鸡人工感染排毒试验,测定了部分分离株与抗H9N2亚型禽流感病毒Hp参考株HA蛋白单抗2A4和F6的血凝抑制（HI）和中和反应特性,对具有不同反应特性分离株的HA基因进行了序列分析。【结果】不同分离株呈现致病力差异,具多态性特征,3#、12#和14#分离株致病力偏强,能引起部分SPF鸡发病和死亡,人工感染8周龄SPF鸡排毒时间更早,排毒期更长。3#和12#分离株与单抗2A4和F6呈现特殊的反应特性,单抗不能抑制3#和12#的血凝特性,也不能中和病毒感染CEF细胞。HA蛋白氨基酸序列分析表明,3#和12#分离株145位氨基酸发生漂变（S→N）,导致与单抗的血凝抑制反应特性丢失,说明该位点（S145）为H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白的一个抗原表位,是血凝抑制抗体结合位点。S145N的漂变导致在145—147位氨基酸多出一个糖基化位点NGT,可能是分离株毒力增强的原因。【结论】本研究结果表明,H9N2亚型禽流感病毒呈现变异趋势,出现了有致病力和抗原性变异流行毒株。S145为H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白的一个抗原表位,但有该位点漂变导致的抗原变异毒株出现,并可逃避免疫作用,对该病的防控提出了新的挑战。     

环洞庭湖区活禽批发市场和水禽场H6亚型禽流感监测

为了解环洞庭湖区活禽批发市场和水禽场H6亚型禽流感病毒的分布和流行情况,分别于2009—2011年对环洞庭湖地区活禽批发市场、2011—2013年对水禽场的H6亚型禽流感进行了系统监测。对在活禽批发市场上采集的拭子样品先由尿囊腔接种SPF鸡胚,然后用血凝试验(HA)测定所收集的尿囊液,对HA测定有滴度的再进行血凝抑制试验(HI),并与RT–PCT方法相结合鉴定病毒的亚型。检测结果显示:在环洞庭湖区的5个活禽批发市场上都分离到H6亚型禽流感,并且在鸡、鸭、鹅拭子中都分离到该病毒,总的分离率为6.49%;水禽场H6亚型禽流感病毒群体阳性率达3.6%,拭子的H6亚型病毒分离率为0.29%,活禽批发市场鸭拭子H6亚型禽流感病毒分离率为9.58%,表明市场环节水禽H6亚型禽流感的隐性带毒率比养殖环节高,在一定程度上说明禽流感在活禽批发市场存在水平传播的风险。