日本乙型脑炎病毒小鼠脑内分布研究

为定位检测日本乙型脑炎病毒(JEV)在试验小鼠脑内分布情况,本研究建立了JEV的小鼠感染模型,取发病死亡小鼠的脑组织制作石蜡切片,利用抗JEV单克隆抗体,采用免疫酶组化方法对抗原进行组织学定位检测。试验结果表明,所建立的间接免疫酶组化方法灵敏度高,特异性好,证明了JEV选择性感染神经元,抗原阳性表达主要集中在脑干、神经节及大脑皮质。     

日本脑炎病毒NS3蛋白多克隆抗体的制备

日本脑炎(JE)是由日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)引起的一种中枢神经系统疾病。该病可以感染人和多种动物,并造成不可逆的神经损害。NS3蛋白在JEV多聚蛋白水解过程中起着重要的作用,是日本脑炎病毒复制所必需的。因此,NS3蛋白可能成为治疗日本脑炎的潜在药物靶标。研究成功构建了p ET-28a-NS3质粒,并在IPTG诱导下被大肠杆菌BL21(DE3)成功表达,表达的重组蛋白分子量为55 ku,与预测分子量相符;用NS3蛋白免疫BALB/c小鼠,制备阳性血清,经间接免疫荧光法(IFA)鉴定。结果表明:制备的NS3蛋白阳性血清可与感染JEV病毒的细胞产生荧光反应。     

家畜传染病学分会第十三次学术研讨会学术报告之四 近年来我国流行性乙型脑炎研究进展

流行性乙型脑炎又称日本乙型脑炎,简称乙脑,是由日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis Virus,JEV)引起的一种蚊媒性人兽共患传染病。多种动物易感,蚊是JEV的主要传播媒介,猪是该病毒在自然界最重要的贮存和增殖宿主,且可引起仔猪脑炎和种猪繁殖障碍,给养猪业造成巨大经济损失。人对JEV普遍易感,但大多数为隐性感染,少数青少年及儿童感染后发生病毒性脑炎,病死率高。     

日本乙型脑炎病毒感染中枢神经系统研究进展

日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)属于黄病毒科,黄病毒属,为单股正链RNA病毒.JEV可引起人畜共患的急性中枢神经系统传染病,威胁着人类健康和养殖业的发展.JEV最主要的致病机制是感染中枢神经系统,引起病毒性脑炎和神经元死亡.现就近年来关于JEV感染中枢神经系统过程中,病...     

日本乙型脑炎病毒感染宿主后引起相关信号通路变化的研究进展

日本乙型脑炎(JE)是一种神经性人畜共患传染病，主要症状表现为中枢性神经炎症，尚未完全了解其致病机制，且目前尚无有效的治疗药物。近年来人们对于日本乙型脑炎病毒(JEV)感染后引起的相关信号通路变化进行深入研究，许多信号通路传导机制不断被发现，但仍缺乏系统性的探究，本文就JEV感染后引起的相关信号通路变化研究做综述总结，为JEV研究提供新的思路。     

不同激活状态的巨噬细胞对流行性乙型脑炎病毒感染的影响

为了研究不同激活状态的巨噬细胞对流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染的影响,并明确NO的产生在此过程中的作用,利用细胞因子将小鼠巨噬细胞系RAW264.7诱导成不同激活状态的巨噬细细胞,通过TCID_(50)、免疫荧光技术和实时荧光定量PCR方法比较JEV强毒株NJ2008在不同激活状态的巨噬细胞上的感染情况,并利用实时荧光定量PCR方法分析了调控NO产生的关键分子(iNOS和Agr1)的变化。结果显示,相对于PBS处理组,M1型巨噬细胞显著地抑制JEV的感染并伴随明显增加的iNOS/Arg1比值;而M2型巨噬细胞虽伴随有显著降低的iNOS/Arg1比值,但JEV在M2型巨噬细胞上的感染与PBS组差异无显著统计学意义。结果表明NO的上调表达在M1型巨噬细胞抑制JEV感染中起着主导作用。本研究为进一步揭示巨噬细胞在JEV感染中作用奠定基础。     

近年来我国流行性乙型脑炎研究进展

流行性乙型脑炎又称日本乙型脑炎,简称乙脑,是由日本乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis Virus,JEV）引起的一种蚊媒性人兽共患传染病。多种动物易感,蚊是JEV的主要传播媒介,猪是该病毒在自然界最重要的贮存和增殖宿主,且可引起仔猪脑炎和种猪繁殖障碍,给养猪业造成巨大经济损失。人对JEV普遍易感,但大多数为隐性感染,少数青少年及儿童感染后发生病毒性脑炎,病死率高。     

日本脑炎病毒引起细胞凋亡的信号转导通路研究进展

日本脑炎病毒(JEV)是虫媒传染性病毒,感染动物后会产生严重的脑炎症状,严重威胁着公共卫生安全.病毒粒子主要通过胞吞作用进入宿主细胞,在细胞浆复制,在细胞内部膜结构上成熟.JEV侵入神经细胞引起脑炎症状,其机理可能与JEV诱导细胞凋亡有关.目前,研究人员就有关JEV诱导细胞凋亡信号转导途径方面做了大量研究工作.在被JE...     

乙型脑炎重组伪狂犬病病毒TK-/gG-/NS+1的安全性及免疫性

用含有日本乙型脑炎病毒 (SA14 - 14 - 2株 )非结构蛋白 NS1基因的重组伪狂犬病病毒 TK- / g G- / NS 1 免疫BAL B/ c小鼠和断奶仔猪。结果表明 ,该重组病毒对 BAL B/ c小鼠和断奶仔猪是安全的 ,免疫的 BAL B/ c小鼠能抵抗伪狂犬病病毒 (PRV )强毒 (Ea株 )的致死性攻击 ,免疫的断奶仔猪能产生乙型脑炎病毒 (JEV)特异性抗体和 JEV特异性 CTL 活性。     

乙型脑炎病毒毒力因子的新发现:E138酸碱性决定病毒毒力

正乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)自上世纪二十年代在日本发现以来,在亚洲地区流行近百年。JEV感染人,特别是14岁以下的儿童,引起致病毒性脑炎,发病后死亡率20%～30%,且高达50%的幸存者患有神经后遗症。JEV是一种自然疫源性人畜共患病病原,由蚊传播,除感染人外,还感染马、野生水禽和猪。猪不分大小均可感染JEV,妊娠母猪感染后可引致流产。因此,研究与控制猪群中的JEV,不仅具有极其重要的公共卫     

Vesicular stomatitis virus infection and neuropathogenesis in the murine model are associated with apoptosis

This study examines apoptosis and viral neuropathogenesis in a murine model infected with vesicular stomatitis virus (VSV). VSV induces apoptotic cell death in cultured cell lines, raising the possibility that apoptosis of infected neurons and other target cells may contribute to disease and mortality. To determine whether or not VSV induces apoptosis in neural tissues, mice were inoculated intranasally with VSV. At 24, 48, 72, 96, and 120 hours postinfection, brain tissues were assayed for the presence of viral RNA by in situ hybridization and viral antigen by immunohistochemistry. Apoptosis was identified by in situ terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxyuridine triphosphate nick end labeling and electron microscopy. Viral replication and lesions were observed predominantly in central nervous system neurons. Apoptotic cell death was restricted to the same regions of the brain in which infected cells and tissue injury were identified. Results suggest that VSV-induced apoptosis is a mechanism causing cell death, tissue injury, and mortality in VSV-infected mice.     

流行性乙型脑炎病毒GI型毒株SD12在C57BL/6小鼠体内的动态分布研究

为了解流行性乙型脑炎病毒基因I型毒株SD12在感染C57BL/6小鼠体内的病毒分布,应用qRT-PCR 方法检测该毒株在小鼠体内各组织的动态分布情况。结果显示腹腔感染组中2 dpi仅能在心脏和脾脏检测出病毒核酸,5～7 dpi能够在心脏、肝脏、脑部、盲肠和扁桃体检测到病毒核酸。血脑屏障受损的腹腔感染组中最早2 dpi在肠系膜淋巴结中检测到病毒核酸,3 dpi基本能在各组织中检测到病毒核酸,5～7 dpi在大脑中检测到大量病毒核酸。所有对照组没有检测到病毒阳性核酸。本研究表明基因I型流行性乙型脑炎病毒感染血脑屏障受损的C57BL/6小鼠后能迅速入侵各组织脏器,主要浸染肝脏、肺脏、肾脏、盲肠和大脑。拥有完整血脑屏障的小鼠对病毒具有一定抵抗能力,病毒在各组织中的含量相对比较低。     

雌激素调控奶牛乳腺上皮细胞凋亡及生长周期作用机制的研究

试验旨在研究雌激素对奶牛乳腺上皮细胞（BMECs）凋亡及生长周期的影响。通过添加MAPK/ERK信号通路阻断剂探索雌激素调控BMECs凋亡及生长周期具体的作用机制,采用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的变化情况,实时荧光定量PCR检测Bcl-2、Caspase3及CyclinD1基因mRNA的表达丰度。结果显示,对照组BMECs凋亡率极显著低于BMECs+PD98059、BMECs+E₂+PD98059组（P<0.01）,Bcl-2 mRNA表达丰度极显著高于BMECs+PD98059组（P<0.01）,Caspase3 mRNA表达丰度显著低于BMECs+PD98059组（P<0.05）;对照组细胞比例在G1期显著高于BMECs+E₂组（P<0.05）,极显著低于BMECs+E₂+PD98059组（P<0.01）,S期细胞比例极显著高于BMECs+PD98059、BMECs+E₂+PD98059组（P<0.01）,G2期细胞比例极显著低于BMECs+PD98059、BMECs+E₂+PD98059组（P<0.01）;对照组CyclinD1 mRNA的表达丰度极显著高于BMECs+PD98059组（P<0.01）;BMECs+E₂+PD98059组的Bcl-2 mRNA的表达量极显著高于BMECs+PD98059组（P<0.01）,Caspase3 mRNA的表达量显著低于BMECs+PD98059组（P<0.05）。结果表明,MAPK/ERK信号通路参与BMECs的增殖及细胞生长周期调节的过程,且雌激素可通过MAPK/ERK信号通路抑制BMECs的凋亡,MAPK/ERK信号通路可能参与由雌激素调控的细胞生长周期的进程。     

Nrf2通路对日本脑炎病毒感染小鼠神经瘤细胞引起氧化应激反应的影响

旨在研究Nrf2/HO-1通路在日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)感染引起神经细胞损伤中的作用机制,本试验建立Nrf2激动剂叔丁基对苯二酚(tert-butylhydroquinone, TBHQ)处理JEV感染的小鼠神经瘤母N2a细胞的体外感染模型。N2a细胞四种处理分别为空白DMEM对照组(Control)、JEV感染组(JEV)、TBHQ处理组(TBHQ)、JEV感染+TBHQ处理组(JEV+TBHQ)。不同处理后观察细胞病变,检测ROS水平及MDA、SOD、CAT含量变化,利用qPCR和WB技术检测Nrf2、HO-1的mRNA和蛋白的表达,并通过免疫荧光法检测各组细胞Nrf2蛋白表达情况,以及炎性因子及病毒含量。结果显示,JEV感染N2a细胞后随着时间延长ROS水平逐渐升高,且在36 h ROS水平最高。JEV感染后36 h Nrf2、HO-1的mRNA均升高,炎性因子水平升高。JEV感染N2a细胞后细胞皱缩,胞膜破裂,ROS、MDA水平升高,SOD、CAT水平降低;用40μmol·L^-1 TBHQ处理6 h后...     

禽网状内皮组织增生病病毒感染对SPF雏鸡法氏囊细胞Bcl-2和C-myc基因表达及凋亡的影响

【目的】 探究禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)感染禽类后导致免疫器官发生细胞凋亡的机理。【方法】 以1日龄SPF雏鸡为试验对象,将100只SPF雏鸡随机均分为REV感染组和未感染病毒的对照组,REV感染组雏鸡经腹腔感染500 μL REV稀释液,对照组雏鸡经相同途径注射等量灭菌生理盐水,于病毒感染后第1、7、14、21、28和42天,2组雏鸡随机各抽取5只,心脏采血处死雏鸡后快速摘取法氏囊。分别应用HE染色和病理切片成像系统测定分析法氏囊细胞核浆比,TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒测定凋亡细胞数,免疫组化法测定Bcl-2和C-myc阳性细胞数量,实时荧光定量PCR和ELISA法分别检测法氏囊Bcl-2和C-myc 基因mRNA表达和蛋白含量。【结果】 ①REV感染1日龄SPF雏鸡后21~42 d,其法氏囊淋巴细胞凋亡百分比显著或极显著高于对照组雏鸡(P<0.05;P<0.01);②SPF雏鸡感染REV后21和28 d,其法氏囊细胞核浆比显著低于对照组雏鸡(P<0.05);③REV感染SPF雏鸡法氏囊中Bcl-2和C-myc阳性细胞数在病毒感染后21和28 d显著高于对照组雏鸡(P<0.05);④REV感染SPF雏鸡后21 d,其法氏囊Bcl-2和C-myc 基因mRNA表达极显著高于对照组雏鸡(P<0.01)。⑤SPF雏鸡感染REV后,其法氏囊中Bcl-2蛋白含量较对照组雏鸡有不同程度的增加,其中21和28 d分别差异极显著(P<0.01)和显著(P<0.05),病毒感染组雏鸡的C-myc蛋白含量也始终高于对照组雏鸡,且21和28 d极显著增高(P<0.01)。【结论】 REV感染所致SPF雏鸡法氏囊细胞Bcl-2和C-myc的mRNA表达以及蛋白含量异常均与病毒感染导致的法氏囊细胞凋亡密切相关,而法氏囊细胞凋亡数量增加与REV感染引发的机体免疫机能抑制密切相关。     

Ghrelin对雌激素诱导小鼠胸腺细胞凋亡的抑制作用

6周龄BALB/c雌性小鼠80只,分为4组：雌激素＋Ghrelin组、雌激素＋生理盐水组、生理盐水组、空白对照组。雌激素＋Ghrelin组首先隔日腹腔注射苯甲酸雌二醇（0.1mg/只）2周,然后采用相同方法注射Ghrelin（120μg/只）2周;雌激素＋生理盐水组首先注射苯甲酸雌二醇2周,然后注射生理盐水2周;生理盐水组注射生理盐水4周;空白对照组不注射任何试剂。测量各组小鼠的胸腺指数,同时应用光镜、电镜和流式细胞术检测胸腺的显微结构、超微结构和胸腺细胞凋亡率。结果雌激素＋Ghrelin组的胸腺指数极显著大于雌激素＋生理盐水组,胸腺细胞凋亡率极显著小于雌激素＋生理盐水组（P〈0.01）,而二者与生理盐水组和空白对照组均差异不显著（P〉0.05）;雌激素＋Ghrelin组的胸腺显微结构和超微结构基本恢复正常,并与生理盐水组和空白对照组相似。结论得出Ghrelin可以通过抑制胸腺细胞凋亡和促进胸腺细胞增殖,从而逆转雌激素诱导的小鼠胸腺萎缩。     

小鼠感染猪圆环病毒2型的超微结构病变观察

为探讨猪圆环病毒2型（PCV2）对小鼠超微结构的病理损伤及其病毒在细胞内的复制,20只6周龄的昆明小鼠随机平均分成2组（即A组和B组）,A组小鼠经腹腔注射PCV2细胞培养物0.1mL/只（含病毒1 000TCID50）,B组以同样的方式和剂量注射无菌细胞培养液作为对照。于PCV2感染后14d,处死所有小鼠,取其组织做电镜观察和PCV2PCR检测。结果显示,在电镜下,所有PCV2感染鼠的超微结构病变基本一致,主要表现为淋巴器官、心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脑、肠等脏器实质细胞凋亡或坏死,细胞内线粒体水肿、内质网扩张,间质毛细血管淤血、炎症细胞浸润,并在脾脏、胸腺、淋巴结的淋巴细、巨噬细胞,以及肝细胞,肾足细胞,脑神经细胞的胞浆或胞核内发现病毒包涵体。同时通过PCR检测,所有PCV2感染鼠的组织均可检出PCV2DNA。B组（对照组）小鼠除在淋巴结可见极少数淋巴细胞凋亡外,其他组织均无任何超微结构病变;同时,所有组织也未检出PCV2DNA。由此说明PCV2可在昆明小鼠多脏器实质细胞内复制,并诱导细胞凋亡。     

冷、热应激对猪孤雌胚胎体外发育的影响

为研究持续不同时间的冷、热应激对猪孤雌胚胎体外发育的影响,本研究以猪孤雌胚胎为材料,采用免疫荧光染色、实时荧光定量PCR技术检测不同时间的冷（31℃）、热应激（41℃）处理对猪孤雌胚胎发育后囊胚发育率、细胞数、细胞凋亡率、自噬相关基因及细胞凋亡相关基因mRNA转录水平的影响。结果显示,热应激12 h后囊胚发育率显著低于对照组（P<0.05）,冷应激18 h后囊胚发育率显著低于对照组（P<0.05）,而冷应激组囊胚发育率高于热应激组。热应激12 h和冷应激18 h后均导致囊胚内细胞数显著低于对照组（P<0.05）,细胞凋亡率显著高于对照组（P<0.05）,且冷应激组的细胞凋亡率低于热应激组。冷、热应激组自噬相关蛋白LC3的表达均高于对照组;冷、热应激中自噬相关基因Atg6和Atg8的表达均极显著高于对照组（P<0.01）,Lamp2基因的表达均显著高于对照组（P<0.05）,热应激组中的Atg6和Atg8基因的表达高于冷应激组。通过检测细胞凋亡相关基因mRNA的转录水平发现,冷、热应激组中细胞凋亡相关基因Bak、Casp-3、Fas的表达均极显著高于对照组（P<0.01）,Bcl-xl基因的表达均显著低于对照组（P<0.05）。综上,猪孤雌胚胎对冷应激（31℃）的耐受性比对热应激（41℃）强,且热应激可诱导体外培养的猪孤雌胚胎自噬及凋亡相关基因的表达,从而降低孤雌胚胎发育的能力。     

利巴韦林对猫细小病毒感染诱导F81猫肾细胞中凋亡相关基因表达的影响

试验将F81猫肾细胞随机分为对照组、药物组(猫细小病毒(FPV)+利巴韦林)、病毒组(FPV感染),采用实时荧光定量PCR的方法,检测Bcl-2、Bcl-xl、Bax和Caspase 3等凋亡相关基因的相对表达量。结果显示,与对照组相比,病毒组细胞凋亡增加,抗凋亡基因Bcl-2 mRNA表达受到抑制,Bax mRNA和 Caspase 3 mRNA的相对表达量均有不同程度的上调。药物组细胞的抗凋亡基因Bcl-2和Bcl-xl的表达水平显著高于病毒组(P<0.05),且总体呈上调状态,但72 h时Bcl-xl表达量减少;而药物组的促凋亡基因Bax和Caspase 3的表达量显著低于病毒组(P<0.05),48 h前,Bax 的表达量呈递减状态,72 h时检测结果显示药物组Bax表达量相比对照组显著上调(P<0.05),但仍显著低于病毒组(P<0.05);与对照组相比,病毒组和药物组Caspase 3的表达量在72 h时显著上调(P<0.05)。综上所述,利巴韦林可在基因水平通过上调抗凋亡基因Bcl-2和Bcl-xl和下调促凋亡基因Bax和Caspase 3的表达来抑制FPV感染诱导的F81猫肾细胞凋亡发生。     

The effect of cordycepin on brain oxidative stress and protein expression in streptozotocin-induced diabetic mice

Diabetes mellitus (DM) is characterized by metabolic disorders and psychological deficits, including cognitive decline. Here, we investigated the effect of cordycepin on oxidative stress and protein expression in the brains of diabetic mice. Twenty-four mice were divided into four groups, one comprising untreated healthy mice (N); one comprising healthy mice treated with cordycepin (24 mg/kg body weight) (N+Cor); one comprising untreated DM mice; and one comprising DM mice treated with cordycepin (24 mg/kg body weight) (DM+Cor). After 14 days of treatment, cognitive behavior was assessed using the novel object recognition (NOR) test. The brain levels of oxidative stress markers (glutathione, catalase, and superoxide dismutase) were examined using the respective detection kits. Protein expression in brain tissues was assessed by liquid chromatography with tandem mass spectrometry (LC–MS/MS); the functions of the identified proteins were annotated by PANTHER, while major protein–protein interactions were assessed using STITCH. We found that cordycepin treatment significantly decreased body weight and food and water intake in the DM+Cor group compared with that in the DM group; however, no differences in blood glucose levels were found between the two groups. Cordycepin treatment significantly reversed cognitive decline in diabetic mice in the NOR test and ameliorated antioxidant defenses. Additionally, we identified ULK1 isoform 2, a protein associated with cognitive function via the activated AMPK and autophagic pathways, as being uniquely expressed in the DM+Cor group. Our findings provide novel insights into the cellular mechanisms underlying how cordycepin improves cognitive decline in diabetic mice.